ĐẶT VẤN ĐỀBệnh Eczema hay còn được gọi là bệnh chàm là một bệnh khá phổ biến hiện nay. Có nhiều giả thuyết về nguyên nhân gây bệnh, do các yếu tố ngoại cảnh như hóa chất, môi trường sống, dị nguyên kết hợp với các yếu tố cơ địa như rối loạn về chức năng nội tạng, nội tiết, thần kinh, cơ địa dị ứng mà hình thành nên bệnh. Bệnh có đặc tính là kéo dài, khó điều trị, thường gây ảnh hưởng rất lớn đến chất lượng sống của bệnh nhân. Cùng với sự phát triển kinh tế, xã hội, sự phát triển của công nghiệp kèm theo là sự gia tăng khí thải, ô nhiễm môi trường thì tần suất và tỷ lệ xuất hiện bệnh ngày càng gia tăng.Các thuốc điều trị theo Tây y hiện nay chủ yếu là điều trị triệu chứng. Liệu pháp điều trị bằng corticoid thường được sử dụng trong phần lớn các trường hợp, tuy nhiên giá thành cao, nhiều tác dụng phụ và không thích hợp để điều trị kéo dài. Bên cạnh đó, giải pháp sử dụng các thuốc Đông dược có nguồn gốc thiên nhiên, được tổ hợp xây dựng dựa trên lý luận y học cổ truyềnvới lợi thế ít hoặc không có tác dụng phụ, an toàn nên thích hợp để điều trịkéo dài. Bài thuốc EZ là một trong số những giải pháp điều trị Eczema bằng thảo dược được sử dụng khá hiệu quả trên lâm sàng. Tuy nhiên việc sử dụng ở dạng thuốc thang thường bất tiện, hạn chế việc phát huy hiệu quả và tínhphổ cập của bài thuốc, không đáp ứng đủ nhu cầu người bệnh. Do vậy vấn đềchuyển dạng bào chế cho bài thuốc đã được chúng tôi đặt ra. Cao đặc là một dạng chế phẩm trung gian thường được dùng để bào chế các dạng chế phẩm rắn khác. Vì vậy chúng tôi đã tiến hành bào chế cao đặc bài thuốc EZ và đặt vấn đề: “Nghiên cứu thành phần hóa học của cao thuốc được bào chế từ bài thuốc EZ” với các mục tiêu sau:1. Định tính các nhóm chất chính và đối chiếu dịch chiết dược liệu với dịch chiết bài thuốc trên SKLM.
Trang 1TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
HÀ N ỘI - 2013
Trang 2BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
HÀ N ỘI - 2013
Trang 3L ỜI CẢM ƠN
Tôi xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển người thầy đã tận tình giúp đỡ, dìu dắt và hướng dẫn tôi hoàn thành tốt khóa luận này
Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn các anh chị kỹ thuật viên của
bô môn Dược học cổ truyền và bộ môn Hóa phân tích - Độc chất đã nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi hoàn thành khóa luận này
Tôi xin gửi tới các thầy cô và cán bộ Trường Đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn sâu sắc vì đã tận tình dạy dỗ, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian
học tập dưới mái trường Đại học Dược Hà Nội
Cuối cùng tôi xin tỏ lòng biết ơn tới gia đình và bạn bè, những người đã luôn động viên và khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu
Hà Nội, ngày 21 tháng 5 năm 2013
Sinh viên Nguyễn Thanh Tâm
Trang 5MỤC LỤC
ĐẶT VẤN ĐỀ 1
CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 3
1.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH ECZEMA 3
1.2 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC 6
1.3 TỔNG QUAN VỀ CAO THUỐC 18
CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20
2.1 ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 20
2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 20
2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21
CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23
3.1 KIỂM TRA MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CÁC VỊ THUỐC 23
3.2 ĐỊNH TÍNH CAO ĐẶC BÀI THUỐC EZ 24
3.2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ bằng các phản ứng thường quy 24
3.2.2 Đối chiếu dịch chiết dược liệu và dịch chiết bài thuốc trên SKLM 34
3.3 ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT, NHÓM CHẤT TRONG CAO ĐẶC BÀI THUỐC EZ 43
3.3.1 Độ ẩm 43
3.3.2 Định lượng cắn tan trong ethyl acetate 44
3.3.3 Định lượng flavonoid toàn phần bằng phương pháp đo quang 46 3.3.4 pH 49
3.3.5 Xác định độ tro toàn phần 50
3.4 BƯỚC ĐẦU ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN CAO ĐẶC 52
3.4.1 Cao c ồn bài thuốc EZ 52
3.4 2 Cao nước bài thuốc EZ 58
Trang 63.5 BÀN LUẬN 65
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 68
1.KẾT LUẬN 68
2.ĐỀ XUẤT 70
TÀI LIỆU THAM KHẢO 72
PHỤ LỤC: ẢNH VÀ BỘT DƯỢC LIỆU 75
Trang 7BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT
DĐVN Dược điển Việt Nam SKLM Sắc ký lớp mỏng HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao kl/tt Khối lượng/thể tích
STT Số thứ tự KNĐ Kim ngân đằng TNT Thương nhĩ tử
NN Núc nác
HH Hòe hoa
HB Hoàng bá ĐLĐ Đơn lá đỏ
BT Bài thuốc
CC Cao cồn
CN Cao nước
Trang 8DANH M ỤC BẢNG
Bảng 3.1.1 Kết quả kiểm tra một số chỉ tiêu chất lượng của các vị thuốc 23
Bảng 3.2.1.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ 34
Bảng 3.3.1.1 Kết quả xác định độ ẩm của cao cồn 44
Bảng 3.3.1.2 Kết quả xác định độ ẩm của cao nước 44
Bảng 3.3.2.1 Kết quả định lượng cắn tan trong ethyl acetat trong cao cồn tính trên cao khô tuyệt đối 45
Bảng 3.3.2.2 Kết quả đinh lượng cắn tan trong ethyl acetat trong cao nước tính trên cao khô tuyệt đối 45
Bảng 3.3.3.1 Kết quả đo mật độ quang và nồng độ dãy chuẩn 47
Bảng 3.3.3.2 Kết quả định lượng flavonoid toàn phần trong cao cồn 48
Bảng 3.3.3.3 Kết quả định lượng flavonoid toàn phần trong cao nước 49
Bảng 3.3.4.1 Kết quả đo pH của cao cồn 50
Bảng 3.3.4.2 Kết quả đo pH của cao nước 50
Bảng 3.3.5.1 Kết quả độ tro toàn phần trong mẫu cao cồn 51 Bảng 3.3.5.2 Kết quả độ tro toàn phần cao nước tính trên cao khô tuyệt đối 52
Trang 9DANH MỤC CÁC HÌNH
Hình 3.2.2.1 Sắc ký đồ dịch chiết kim ngân đằng và bài thuốc 35
Hình 3.2.2.2 Sắc ký đồ dịch chiết thương nhĩ tử và bài thuốc 37
Hình 3.2.2.3 Sắc ký đồ dịch chiết núc nác và bài thuốc 38
Hình 3.2.2.4 Sắc ký đồ dịch chiết hòe hoa, bài thuốc và rutin 40
Hình 3.2.2.5 Sắc ký đồ dịch chiết hoàng bá và cao đặc bài thuốc 41
Hình 3.2.2.6 Sắc ký đồ dịch chiết hoàng bá, bài thuốc, berberin 41
Hình 3.2.2.7 Sắc ký đồ dịch chiết đơn lá đỏ và bài thuốc 43
Hình 3.3.3.1 Đồ thị đường chuẩn 48
Trang 11ĐẶT VẤN ĐỀ
Bệnh Eczema hay còn được gọi là bệnh chàm là một bệnh khá phổ biến hiện nay Có nhiều giả thuyết về nguyên nhân gây bệnh, do các yếu tố ngoại cảnh như hóa chất, môi trường sống, dị nguyên kết hợp với các yếu tố cơ địa như rối loạn về chức năng nội tạng, nội tiết, thần kinh, cơ địa dị ứng mà hình thành nên bệnh Bệnh có đặc tính là kéo dài, khó điều trị, thường gây ảnh hưởng rất lớn đến chất lượng sống của bệnh nhân Cùng với sự phát triển kinh
tế, xã hội, sự phát triển của công nghiệp kèm theo là sự gia tăng khí thải, ô nhiễm môi trường thì tần suất và tỷ lệ xuất hiện bệnh ngày càng gia tăng
Các thuốc điều trị theo Tây y hiện nay chủ yếu là điều trị triệu chứng
Liệu pháp điều trị bằng corticoid thường được sử dụng trong phần lớn các trường hợp, tuy nhiên giá thành cao, nhiều tác dụng phụ và không thích hợp
để điều trị kéo dài Bên cạnh đó, giải pháp sử dụng các thuốc Đông dược có nguồn gốc thiên nhiên, được tổ hợp xây dựng dựa trên lý luận y học cổ truyền với lợi thế ít hoặc không có tác dụng phụ, an toàn nên thích hợp để điều trị kéo dài Bài thuốc EZ là một trong số những giải pháp điều trị Eczema bằng thảo dược được sử dụng khá hiệu quả trên lâm sàng Tuy nhiên việc sử dụng
ở dạng thuốc thang thường bất tiện, hạn chế việc phát huy hiệu quả và tính
phổ cập của bài thuốc, không đáp ứng đủ nhu cầu người bệnh Do vậy vấn đề chuyển dạng bào chế cho bài thuốc đã được chúng tôi đặt ra Cao đặc là một dạng chế phẩm trung gian thường được dùng để bào chế các dạng chế phẩm rắn khác Vì vậy chúng tôi đã tiến hành bào chế cao đặc bài thuốc EZ và đặt
vấn đề: “Nghiên cứu thành phần hóa học của cao thuốc được bào chế từ bài thuốc EZ” với các mục tiêu sau:
1 Định tính các nhóm chất chính và đối chiếu dịch chiết dược liệu với dịch chiết bài thuốc trên SKLM
Trang 122 Định lượng một số chất, nhóm chất trong cao đặc bài thuốc
Từ đó đề xuất dự thảo tiêu chuẩn chất lượng cho cao đặc bào chế được
ở dạng thuốc thang
Trang 13CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN
1.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH ECZEMA
1.1.1 Theo YHHĐ
Nguyên nhân gây bệnh: yếu tố bên ngoài và cơ địa kết hợp với nhau
chặt chẽ, tạo nên cơ chế dị ứng là cơ sở chủ yếu trong phát sinh và phát triển bệnh chàm
Các yếu tố bên ngoài như các hóa chất trong các ngành công, nông nghiệp; các loại thuốc dùng rộng rãi trong y học kết hợp với những yếu tố thuận lợi về cơ địa như rối loạn chức năng về nội tạng, nội tiết, thần kinh hoặc
do nhiễm độc mạn tính, nhất là nhiễm độc rượu
trên nền da bị viêm Các mụn nước vỡ ra tạo thành các vết trợt đóng vảy tiết,
rồi bong vảy và da trở lại bình thường Kèm theo đó là triệu chứng ngứa và hay tái phát
Trên một mảng chàm mới phát, cấp tính, mỗi đợt phát bệnh tiến triển theo 5 giai đoạn phản ảnh sự tiến triển của mụn nước
+ Giai đoạn đỏ da: Bắt đầu ngứa hay cảm giác nóng da rồi trở nên nóng
và phù
+ Giai đoạn mụn nước: xuất hiện sau vài giờ hoặc sau vài ngày trên mảng
da đỏ Với chàm khô thì bệnh chàm chỉ dừng lại ở giai đoạn mụn nước
+ Giai đoạn chảy nước: : các mụn nước vỡ ra, chảy nước trong hơi vàng, dính ướt cộm quần áo Nước chảy ra liên tục, khi thì chảy thành từng giọt, khi thì chảy giàn giụa, mặt da sũng nước Đến giai đoạn này mảng chàm lỗ chỗ nhiều vết trợt hình tròn, gọi là giếng chàm
Trang 14+ Giai đoạn đóng vảy tiết: Khi nước vàng bớt chảy, huyết thanh đọng trên mặt da tạo thành từng mảng vảy tiết màu vàng hoặc một vỏ bọc đồng đều, màu vàng trong suốt
+ Giai đoạn bong vảy: giai đoạn phục hồi
Điều trị:
Điều trị không dùng thuốc: phát hiện những dị nguyên trong sinh hoạt
và trong lao động Với những bệnh nhân bị chàm kèm theo sang chấn về thần kinh và tâm thần thì cần thay đổi chế độ sinh hoạt, chế độ làm việc, ổn định
về thần kinh Thay đổi chế độ ăn, hạn chế ăn uống những chất kích thích mạnh như gia vị, mỡ, rượu mạnh, café, chè đặc Nên tránh ánh sáng và không điều trị bằng tia tử ngoại Những trường hợp bội nhiễm, chàm do vi khuẩn, cần điều trị nhiễm khuẩn và nhiễm nấm trước
Điều trị dùng thuốc:
• Điều trị tại chỗ: càng sớm càng có kết quả tốt
− Giai đoạn sớm: khi da mới đỏ và ít chảy nước; Hồ nước: kẽm oxyd + bột hoạt thạch (talc) + glycerin + nước cất: lượng bằng nhau, lắc mạnh khi dùng
− Giai đoạn cấp tính: khi nước chảy nhiều
+ Dung dịch Jarish: acid boric 10g + glycerin 20g + nước cất 1000ml + Dung dịch Burow: nhôm acetat 5% trong nước Tiếp tục pha loãng lần
2 tỷ lệ 1/40 trong nước trước khi dùng
+ Nước muối sinh lý 0,9%
+ Dung dịch Vioform 1%
+ Dung dịch thuốc tím 1/10000
− Giai đoạn bán cấp: khi thương tổn bớt chảy nước, bớt viêm, có thể lần lượt áp dụng các loại thuốc hồ hoặc các thuốc kem có kẽm oxid hoặc có thêm các chất khử oxy như ichtyon, goudron tỷ lệ 2 - 5%
Trang 15− Giai đoạn mạn tính: dạng thuốc thích hợp thường dùng là thuốc mỡ, tỷ
lệ hoạt chất dưới 20% Thuốc mỡ thường dùng trong chàm mạn tính như mỡ ichtyon, mỡ goudron tỷ lệ 5-10%
− Sử dụng các dạng thuốc bôi corticoide: Kem (dạng nhũ dịch có nước)
áp dụng cho trường hợp chàm không chảy nước cấp hoặc bán cấp Thuốc mỡ dùng trong chàm mạn tính khi da khô, ráp, da dày có vảy Dung dịch cồn và nước trong chàm mạn tính, khu trú ở da đầu
• Điều trị toàn thân: thuốc an thần, chống ngứa, thuốc ngủ nếu cần thiết
1.1.2 Theo YHCT
Bệnh chàm theo y học cổ truyền, chia làm 2 loại cấp tính và mạn tính, còn gặp ở trẻ em còn bú và tùy theo vị trí cơ thể còn có các tên khác nhau
Nguyên nhân do phong, nhiệt và thấp kết hợp ra bệnh, nhưng do phong
là chủ yếu, ở thể mạn tính thường do phong gây ra huyết táo rồi phối hợp với nhau mà gây ra bệnh
1.1.2.1 Thể cấp tính
• Nguyên nhân: do phong phối hợp với nhiệt và thấp, lúc đầu thấy da
hơi đỏ, ngứa và sau một thời gian ngắn nổi cục, mụn nước, loét, chảy nước, đóng vảy và khỏi
• Chia làm 2 th ể nhỏ
a) Th ể thấp nhiệt: da hồng đỏ, nóng rát, có mụn nước, loét chảy nước vàng
− Phương pháp chữa: thanh nhiệt hóa thấp
− Châm cứu:
+ Tùy theo vị trí cơ thể, chọn huyệt tại chỗ và lân cận
+ Tay: khúc trì, hợp cốc
+ Chân: tam âm giao, dương lăng truyền
+ Toàn thân: trừ phong (hợp cốc), trừ thấp (túc tam lý), hoạt huyết (huyết hải)
Trang 16b) Th ể phong nhiệt: da hơi đỏ, có mụn nước, phát ra toàn thân, ngứa gãi chảy
nước, ít loét
− Phương pháp chữa: sơ phong thanh nhiệt, trừ thấp
1.1.2.2 Thể mạn tính
− Nguyên nhân: do phong và huyết táo gây nên bệnh
− Tri ệu chứng: da dày, thô, khô, ngứa, nổi cục có mụn nước hay gặp ở
đầu mặt, cổ chân, cổ tay, khuỷu tay đầu gối
− Phương pháp chữa: Khu phong, dưỡng huyết nhuận táo
1.1.2.3 Chàm bừu
− Nguyên nhân: do thấp nhiệt ở kinh can Có khi ở thể cấp và mạn
− Phương pháp chữa: thanh nhiệt trừ thấp ở kinh can Cấp tính dùng thuốc sắc, mạn tính dùng thuốc hoàn
1.1.2.4 Chàm ở trẻ em còn bú
− Có 2 thể khô và ướt
− Phương pháp chữa: sơ phong, lợi thấp, thanh nhiệt (liều dùng ít)
Kim ngân đằng 20g Thương nhĩ tử 7g Núc nác 15g Hòe hoa 10g Hoàng bá bắc 3g Đơn lá đỏ 5g Theo lý luận y học cổ truyền, bệnh Eczema do phong, nhiệt và thấp kết hợp mà ra bệnh, nhưng do phong là chủ yếu, ở thể mạn tính thường do phong gây ra huyết táo rồi phối hợp với nhau mà gây ra bệnh [9]
Trang 17Kim ngân đằng, núc nác, hòe hoa có công năng thanh nhiệt giải độc, có tác dụng chống viêm, chống dị ứng, dùng để giải quyết triệu chứng chính của bệnh là da đỏ, nóng rát, thường do nhiệt độc mà ra [2], [9]
Các nốt phỏng nước, phù nề, thấm dịch nước màu vàng thường do thấp gây ra, kết hợp với nhiệt gây mủ, chảy nước màu vàng.Nên kết hợp giữa các
vị thuốc thanh nhiệt giải độc với thanh nhiệt táo thấp là hoàng bá [2],[9]
Ngứa phần nhiều do phong gây ra, nên dùng thuốc trừ phong là đơn lá
đỏ, ké đầu ngựa [2], [9]
1.2.2 Tóm tắt đặc điểm các vị thuốc trong bài thuốc
1.2 2.1 Kim ngân đằng
• Tên khoa học vị thuốc: Caulis cum folium Lonicerae[7]
• Nguồn gốc: Dây cành lá phơi khô của cây kim ngân Lonicera
japonicavà m ột số loài khác cùng chi như L dasystylaRehd.;L confusa DC VàL cambodiana Pierre ex Danguy, họ Kim ngân (Caprifoliaceae) [2], [7],
[15]
• Thành phần hóa học:
Hơn 140 hợp chất đã được phân lập và xác định từ Lonicera japonica cho tới nay.Lonicera japonica có chứa rất nhiều tinh dầu, flavone, acid organic, saponin triterpenoid, và iridoid [15], [18]
+ Tinh dầu [18]
+ Acid organic: các acid organic cũng là thành phần chủ yếu của Lonicera japonica và chủ yếu gồm acid chlorogenic, acid isochloro-genic, acid caffeic, acid hexadecanoic Acid Chlorogenic có trong hoa, rễ, thân và lá với hàm lượng theo thứ tự 6%, 1,4%, 0,9%, và 2,6% [18]
+ Flavone: Cho tới nay, có khoảng 30 flavone được phân lập từ Lonicera japonica Các flavone đã được phân lập là quercetin-3-O-β-D-glucoside , luteolin-7-O-α-D-glucoside, luteolin-7-O-β-D-galactoside, hyperoside,
Trang 18Corymbosin, 5-hydroxy-3’,4’,7-trimethoxylflavone, 3’-O-methyl flavone [5,5”,7,7”-tetrahydroxy 3’-methoxy 4’,4”’-biflavonyl ether], và loniflavone [5,5”,7,7”,3’-pentahydroxy 4’,4”’-biflavonyl ether] Kết quả các nghiên cứu chỉ ra rằng, hàm lượng flavone trong lá là cao nhất, tiếp đến là hoa
loni-và thân cây [18]
+ Iridoid: Hơn 30 iridoid đã được tìm thấy từ lonicera japonica bằng HPLC Trong năm 2008, 9 iridoid được phân lập từ hoa là loganin, sweroside, sec-oxyloganin, secologanin, kingiside, ketologanin, 7-α-morroniside, 7-β-morroniside và secologanoside Sau đó 4 iridoid được phân lập từ thân và lá
là L-phenylalaninosecologanin, benzoyl) secologano-lic acid, 6’-O-(7α-hydroxyswerosyloxy) loganin và (Z)-aldsecologanin [18]
7-O-(4-β-D-glucopyranosyloxy-3-methoxy-+ Saponin: Phần trên mặt đất chứa saponin, trong đó hầu hết aglycon là acid oleanolic và hederagenic [15], [18]
+ Các hợp chất khác: từ Lonicera japonica, 15 nguyên tố đã được phát hiện như Fe, Mn, Cu, Zn, Ti, Sr, Mo, Ba, Ni, Cr, Pb, V, Co, Li, Ca [18]
• Tác dụng và sử dụng trong y học
Tác dụng dược lý
+ Tác dụng chống viêm: gần đây, càng nhiều thí nghiệm invivo và invitro
đã chỉ ra rằng các dịch chiết khác nhau của Lonicera japonica có thể ức chế nhiều phản ứng viêm khác nhau và ngăn chặn nhiều tác nhân gây viêm [18] + Tác dụng chống virus: Từ năm 1980, tác dụng chống virus của Lonicera japonica đã được nghiên cứu và chứng minh, ví dụ như virus hợp bào hô hấp (RSV), HIV, virus herpes (HSV)… Được dùng như một vị thuốc quan trọng ở Trung Quốc để chống H9N2, khống chế dịch SARS vào năm
Trang 192003, nghiên cứu điều trị cúm A H1N1 ở một bệnh viện ở Bắc Kinh với 113
ca bệnh [18]
+ Tác dụng kháng khuẩn: Nước sắc lá kim ngân với nồng độ 20-1,2% ức chế trực khuẩn Shiga, với nồng độ 20-5% ức chế trực khuẩn cận thương hàn, nồng độ 100% có tác dụng đối với tụ cầu khuẩn [15], [18]
+ Tác dụng chống oxy hóa: dịch chiết ethylacetat có tác dụng ức chế gốc DPPH, gốc oxy hoạt động (ROS), gốc hydroxyl ( ̄ OH) và gốc peroxynitrite (ONOO ̄ ) [18]
+ Tác dụng trên chuyển hóa chất béo: Kim ngân có tác dụng tăng cường chuyển hóa chất béo [15], [18]
+ Tác dụng chống choáng phản vệ: Nước sắc kim ngân cho uống có tác dụng ngăn chặn choáng phản vệ trên chuột lang Ở chuột lang uống kim ngân,
số lượng và tính chất các dưỡng bào ở mạc treo ruột ít thay đổi Lượng Histamin ở phổi chuột lang bị choáng phản vệ cao gấp rưỡi so với chuột lang bình thường và chuột lang uống kim ngân trước khi gây choáng [15]
+ Độc tính: Chuột nhắt trắng, sau khi được cho uống nước sắc kim ngân liên tục 7 ngày với liều gấp 150 lần liều điều trị cho người, vẫn sống bình thường, giải phẫu các bộ phận không có thay đổi gì đặc biệt [15]
Trang 20Thư kinh hoạt lạc: dùng trong các bệnh về gân, lạc, đau nhức; có thể phối hợp với ty qua lạc (xơ mướp), ý dĩ [2], [9], [10]
+ Kiêng kỵ: người thể hư hàn, hoặc những trường hợp mụn nhọt có mủ
vỡ loét, không nên dùng [9], [10]
+ Liều dùng: 15 – 30g dạng thuốc sắc [9]
1.2 2.2 Thương nhĩ tử
• Tên khoa học vị thuốc: Fructus Xanthii strumarii [7]
• Nguồn gốc: Dùng quả chín phơi khô của cây ké đầu ngựa Xanthium
Quả còn chứa tetrahydroxyflavon và stigmasterol [14]
Hạt ké đầu ngựa có chất béo 30 – 35% [14]
Trang 21Thành phần các acid béo không no gồm acid oleic 22,4-30,7, linoleic 51,9-67,1% Mẫu dầu điển hình có các thành phần acid oleic 22,4, linoleic 67,1, palmitic 4,2, stearic 5,2 và behenic 0,7% Trong dầu còn có khoảng 1,94% các phosphatide có thể so sánh tương tự như dầu ngô [14]
Hạt còn chứa một số chất gây độc cho gia súc, trong đó có hydroquinone, choline và một số chất độc hơn chưa xác định.Ngoài ra còn có xanthostrumarin và acid oxalic và một lượng iod đáng kể [14]
• Tác dụng và sử dụng trong y học
Tác dụng dược lý
+ Tác dụng giảm cường độ co bóp tim, giảm thân nhiệt và lợi tiểu [14] + Tác dụng chống dị ứng: tác dụng kháng histamine [14]
+ Tác dụng ức chế thần kinh trung ương: hoạt chất xanthumin [14]
+ Kháng khuẩn: xanthinin nồng độ 0,01 – 0,1% có hoạt tính kháng khuẩn mạnh với các vi khuẩn gram âm và nấm [14]
+ Chống viêm: β – sitosterol β-D glucosid [14]
Tiêu độc sát khuẩn, dùng trong các trường hợp phong ngứa, dị ứng, phối hợp với kim ngân hoa hoặc kim ngân cuộng, kinh giới tuệ Còn dùng để chữa phong hủi, dùng lá tươi giã nát đắp mụn nhọt, nấu nước rửa vết thương [9]
Trang 22Chống viêm, dùng trị bệnh viêm xoang hàm, xoang mũi mạn tính, có thể dùng thương nhĩ tử (sao vàng) 8g, tế tân, bạch chỉ 12g, bạc hà 4g Hoặc dùng thương nhĩ tử, bạc hà, tế tân cho vào nước, đun sôi rồi xông hơi vào mũi [9]
Tán kết: làm mềm các khối rắn, dùng với các bệnh bướu cổ, tràng nhạc [9]
+ Kiêng kỵ: người bị nhức đầu, tê tay do thiếu máu không được dùng Uống quả ké quá liều dễ bị ngộ độc, cần theo dõi [10]
+ Liều dùng: 3-10g sắc uống [10]
1.2.2.3.Núc nác
• Tên khoa học vị thuốc: Cortex Oroxyli [7]
• Nguồn gốc: Vỏ thân đã phơi hoặc sấy khô của cây núc nác Oroxylum
indicum (L.) Vent, họ Chùm ớt (Bignoniaceae) [7], [9], [15]
+ Vỏ thân cây núc nác chứa các flavonoid: oroxylin A 0,65%, baicalein 0,5% và chrysin (vỏ cành 0,35%) [15]
+ Tỷ lệ flavonoid khoảng 3-4% [15]
Trang 23+ Vỏ thân còn chứa acid p-coumaric 1,84% [15]
+ Chống viêm: dịch chiết của Oroxylum indicum có tác dụng ức chế hoạt tính của cả 2 enzym 5-lipoxygenase và cyclooxygenase Kết quả chỉ ra rằng dịch chiết O indicum có tác dụng đáng kể khi so sánh với các chất chuẩn (indomethacin 93,38% và piroxicam 88,24%) trong việc ức chế hoạt tính cyclooxygenase Núc nác có tác dụng ức chế giai đoạn cấp tính của phản ứng viêm, tác dụng này được thể hiện mạnh hơn ở động vật đã được gây mẫn cảm [16]
Tác dụng theo y học cổ truyền
+ Tính vị, quy kinh: vị đắng, tính mát [2], [10], [15], [9]
+ Công năng chủ trị [2]
Công năng : thanh can, giải nhiệt, tiêu độc, sát khuẩn, thanh phế
Chủ trị: vàng da, viêm họng, khô họng, ho, khản tiếng, trẻ em lên sởi, nổi ban, một số bệnh ngoài da
+ Kiêng kỵ: thể hư hàn, đầy bụng, ỉa chảy không dùng [2]
Trang 24+ Liều dùng: 6-15g sắc uống [2]
1.2.2.4.Hòe hoa
• Tên khoa học vị thuốc: Flos Styphnolobii japonici imaturi [7]
• Nguồn gốc: Là nụ hoa phơi khô của cây hòe Stypnolobium japonicum (L.) Schott, họ Đậu(Fabaceae) [14], [7]
• Thành phần hóa học:
Rutin: dược điển Việt Nam II (tập 2 và tập 3) quy định hàm lượng rutin phải đạt 20% Qua chế biến, hàm lượng rutin có thể thay đổi, đạt 34,7% ở dạng sống; 28,9% dạng sao vàng và 18,5% ở dạng sao cháy [14]
Ngoài ra nụ hòe còn chứa botulin, sophoradiol, sophorin A, sophorin B, sophorin C và sophorose [14]
+ Tác dụng bảo vệ cơ thể chống chiếu xạ [14]
+ Tác dụng hạ huyết áp, hạ cholesterol máu [14]
+ Tác dụng cầm máu [14]
+ Tác dụng chống kết tập tiểu cầu [14]
+ Tác dụng đối với tim: quercetin thể hiện tác dụng cường tim, giãn mạch vành, cải thiện tuần hoàn tim Ngoài ra nụ hòe còn có tác dụng làm giảm lượng tiêu thụ O2 của cơ tim [14]
Trang 25+ Các tác dụng khác: tác dụng chống phản ứng phản vệ, tác dụng bảo vệ gan, tác dụng giảm trương lực cơ đối với hệ cơ trơn của ruột và khí phế quản, tác dụng gây đột biến: rutin và quercetin [14]
Bình can hạ áp: dùng cho trường hợp cao huyết áp
Thanh phế chống viêm: dùng trong bệnh viêm thanh đới, nói không ra
tiếng
+ Kiêng kỵ: không dùng hòe hoa cho phụ nữ có thai, người thể hàn
+ Liều dùng: 4-12g
1.2.2.5.Hoàng bá b ắc
• Tên khoa học vị thuốc: Cortex Phellodendri [7]
• Nguồn gốc: là vỏ thân đã cạo bỏ lớp bần, phơi hoặc sấy khô của Hoàng
Bá(Phellodendron chinense Schneid hoặc Phellodendron amurense Rupr.),
họ Cam (Rutaceae) [7], [2], [9], [14]
• Thành phần hóa học:
Thành phần chủ yếu là các alkaloid như berberin, palmatin, jatrorrhizin, phellodedrin, magnoflorin, candicin.Ngoài ra còn có obacunon, obaculacton, limonin [14]
Các hợp chất phenolic [14]
• Tác dụng và sử dụng trong y học
Trang 26 Tác dụng dược lý
+ Tác dụng kháng khuẩn: với nhiều vi khuẩn gram dương và gram âm Staphylococcus aureus, Streptococcus hemolyticus, Bacillus diphtheria, Bacillus anthracis, Bacilus subtilis, Shigella shigae [14]
+ Tác dụng kháng nấm [14]
+ Tác dụng kháng roi trùng: nước sắc 10% có tác dụng ức chế trùng roi
âm đạo nhưng không mạnh [14]
+ Ngoài ra vị thuốc có tác dụng bảo vệ tiểu cầu, lợi niệu, hạ huyết áp [14]
Thanh nhiệt táo thấp: dùng khi hạ tiêu thấp nhiệt
Giải độc tiêu viêm: dùng khi cơ thể bị thấp chẩn, lở ngứa, mụn nhọt + Kiêng kỵ: những người tỳ hư, đại tiện lỏng, vị yếu, ăn uống không tiêu [2], [10], [9]
+ Liều dùng: 4-16g [2]
1.2 2.6.Đơn lá đỏ
• Tên khoa học vị thuốc: Folium Excoecariae [7]
• Nguồn gốc: Lá phơi hoặc sấy khô của cây đơn lá đỏ Excoecaria
cochinchinensis Lour, h ọ Thầu dầu (Euphobiaceae) [7], [14]
• Thành phần hóa học:
Trang 27Lá đơn lá đỏ chứa flavonoid 1,5%, saponin, coumarin, anthranoid, tanin, đường khử Sơ bộ xác định flavonoid có 6 chất trong đó 1 chất thuộc flavonol [20]
Monoterpen: Excoecarioside A, Excoecarioside B, Glochidionionoside
B [20]
Diterpen: Excolabdone A, Excolabdone B, Excolabdone C [20]
Flavonoid: β-D-galactopyranoside; β-D-glucopyranoside; 5,4’-Dihydroxy-7-methoxyflavone-3-O-β-D-glucopyranoside; Quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside; Kaempferol-3-O-α-L-arabinopyranoside; Kaempferol-3-O-α-L-rhamnosopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside; Kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside [20]
Kaempferol-3-O-Các hợp chất khác: (-)-Shikimic acid, p-Hydroxybenzoic acid, Tetracosanoic acid, Palmitic acid, Stearic acid [20]
• Tác dụng và sử dụng trong y học
Tác dụng dược lý:
Tác dụng chống viêm cấp so với aspirin thì yếu hơn và xuất hiện chậm hơn nhưng tác dụng kéo dài hơn.Tác dụng chống dị ứng khá tốt.Với nồng độ dịch sắc 0,306mg/ml ức chế 50% quá trình peroxy hóa lipid màng tế bào gan chuột nhắt trắng Tác dụng giảm co thắt cơ trơn hồi tràng chuột lang cô lập với tỷ lệ giảm co thắt là 45,31%, với dịch chiết flavonoid toàn phần là 66,67% Ngoài ra, Đơn lá đỏ còn thể hiện tác dụng chống khối u, trong các
dịch chiết thì dịch chiết tanin toàn phần thể hiện tác dụng mạnh nhất [1]
Trang 28Chủ trị: dị ứng, mày đay, mụn nhọt, lở ngứa, lỵ, ỉa chảy lâu ngày
+ Kiêng kỵ: người thuộc chứng hư hàn không dùng [9], [10]
+ Liều dùng: 10-15g (tươi thì dùng tăng 20-30g) [9]
1.3 TỔNG QUAN VỀ CAO THUỐC
1.3.1 Định nghĩa
Cao thuốc là những chế phẩm được điều chế bằng cách cô hoặc sấy đến thể chất quy định các dịch chiết thu được từ dược liệu thực vật hay động vật với dung môi thích hợp [3], [7], [8]
1.3.2 Đặc điểm
Cao thuốc thường tối màu (nâu đậm hoặc đen) [3], [7], [8]
Thành phần của cao thuốc rất phức tạp gồm nhiều nhóm chất khác nhau trong nhiều loại dược liệu, có cả thành phần vô cơ lẫn hữu cơ, các sản phẩm phân hủy của các chất trong quá trình nấu, cô cao và các thành phần đường, đạm, chất nhầy… làm cho việc bảo quản ca gặp nhiều khó khăn, dễ bị nhiễm khuẩn, nấm mốc Việc chuyển thành các dạng bào chế hiện đại để đảm bảo được các yêu cầu chất lượng như độ rã, tuổi thọ, màu sắc hấp dẫn [3], [8]
Cao thuốc thực chất là dịch chiết toàn phần của dược liệu, tác dụng của
nó là tác dụng tổng thể của các thành phần trong đó.Nó rất gần với dạng thuốc
sắc cổ truyền mà nhân dân ta vẫn dùng, hầu như rất ít tác dụng phụ độc hại nên khi chuyển thành dạng bào chế mới sẽ tiện sử dụng hơn [3], [8]
Điều chế cao thuốc không đòi hỏi trang thiết bị, dây chuyền công nghệ đắt tiền, nhiều cơ sở sản xuất có thể thực hiện được [8]
Điều chế cao thuốc là để giảm khối lượng dược liệu, giảm diện tích kho
và công bảo quản, tạo nguyên liệu để bào chế các dạng thuốc khác tiện sử dụng hơn [3], [8]
1.3.3 Phân lo ại
Trang 29Cao lỏng: có thể chất hơi sánh, có mùi vị đặc trưng của dược liệu điều chế cao, thường quy ước là cao lỏng 1:1, tức là 1ml cao lỏng tương ứng với 1g dược liệu dùng để điều chế cao
Cao đặc: là một khối đặc quánh, hàm lượng dung môi dùng để chiết xuất còn lại không quá 20%
Cao khô: là một khối hoặc bột khô, đồng nhất nhưng rất dễ hút ẩm, độ
ẩm không được quá 5%
Trang 30CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
C ỨU
Cao đặc bài thuốc: Cao đặc được điều chế theo hai phương pháp chiết, cao đặc chiết ethanol 70o và cao đặc chiết nước Dịch chiết được cô thành cao đến độ ẩm nhỏ hơn 20%
Các vị thuốc: 6 vị thuốc kim ngân đằng, thương nhĩ tử, hòe hoa, núc nác, đơn lá đỏ, hoàng bá Các vị thuốc được mua tại nhà thuốc Phùng y gia đường, địa chỉ 4/ngõ 99 – Trung Kính, Hà Nội
2.1.2 Thi ết bị
− Tủ sấy: Memmert, Shellab
− Cân phân tích Sartorius – TE214S, cân kỹ thuật Precisa – XB320C
− Kính hiển vi Labomed
− Máy cất quay: Buchi R – 200 (Germany)
− Đèn tử ngoại Vilber Lourmat
− Bếp cách thủy Baths
− Các dụng cụ thí nghiệm khác thuộc bộ môn Dược học cổ truyền trường Đại học Dược Hà Nội
Dung môi: chloroform, methanol, n-buthanol, ethyl acetate, ether dầu hỏa, cychlohexan, toluene, aceton, methanol, acid formic, acid acetic
Hóa chất: FeCl3, NaOH, Na2CO3… thuộc bộ môn Dược học cổ truyền – trường Đại học Dược Hà Nội
1 Kiểm tra một số chỉ tiêu chất lượng của các vị thuốc
Trang 312 Định tính thành phần hóa học cao đặc bài thuốc EZ
3 Định lượng một số chất, nhóm chất trong cao đặc bài thuốc EZ
4 Bước đầu đề xuất xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cao đặc bài thuốc
EZ
2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
1 Kiểm tra một số tiêu chí của các vị thuốc
Tiến hành kiểm tra các tiêu chí mô tả, soi bột, định tính, độ ẩm các vị thuốc theo chỉ dẫn DĐVN IV
2 Định tính thành phần hóa học cao đặc bài thuốc
Định tính các nhóm chất hữu cơ bằng các phản ứng thường quy: Căn
cứ vào các nhóm chất có trong các vị thuốc trong bài thuốc để định hướng định tính Tiến hành các phản ứng định tính với các thuốc thử chung, các thuốc thử đặc hiệu của từng nhóm chất theo các phương pháp thường quy được ghi trong các tài liệu hóa học thực vật
Đối chiếu dịch chiết dược liệu với dịch chiết bài thuốc trên SKLM: Triển khai trên một số hệ dung môi, chọn hệ có vết rõ, dễ nhận biết được vị thuốc trong cao đặc bài thuốc để ghi lại kết quả
3 Định lượng một số chất, nhóm chất trong cao đặc bài thuốc EZ
Độ ẩm: tiến hành theo phương pháp mất khối lượng do làm khô theo chỉ dẫn DĐVN IV (phụ lục 9.6)
Định lượng cắn tan trong ethyl acetat bằng phương pháp cân: tiến hành chiết bằng dung môi ethyl acetate, cô dịch chiết tới cắn và tính hàm lượng cắn trên khối lượng cao khô tuyệt đối
Định lượng flavonoid toàn phần bằng phương pháp đo quang dựa trên đường cong rutin chuẩn:
Trang 32+ Nguyên tắc: flavonoid trong methanol tác dụng với các thuốc thử natri nitrit 5% và nhôm nitrat 10% đem đo quang ở bước sóng 500nm rồi đối chiếu với đường cong rutin chuẩn
+ Cắn ethyl acetat thu được dùng để pha mẫu thử Quy trình pha mẫu thử, mẫu chuẩn và mẫu trắng được tiến hành theo quá trình định lượng rutin trong hòe bằng phương pháp đo quang ghi trong DĐVN IV Xây dựng đường chuẩn bằng Excel
pH: Đo pH của dung dịch cao 1% (kl/tt) bằng máy đo pH theo chỉ dẫn của DĐVN IV (phụ lục )
Xác định độ tro toàn phần: Tiến hành theo phương pháp ghi trong DĐVN IV
Trang 33CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Chúng tôi đã tiến hành kiểm nghiệm một số tiêu chí của các vị thuốc nghiên cứu theo DĐVN IV Kết quả thu được trình bày trong bảng 1 và phụ lục
Bảng 3.1.1 Kết quả kiểm tra một số chỉ tiêu chất lượng của các vị thuốc
Vị thuốc Kết quả kiểm tra
Mô tả, bột Định tính Độ ẩm Kim ngân đằng Đặc điểm thân,
lá, bột phù hợp với DĐVN IV
Có flavonoid
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
9.86%
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
Thương nhĩ tử Đặc điểm quả,
bột phù hợp với DĐVN IV
8,0%
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
Núc nác Đặc điểm vỏ
thân, bột phù hợp với DDVN IV
Có flavonoid, tanin và alcaloid
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
10,13%
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
Hòe hoa Đặc điểm nụ hoa,
mùi, vị, bột phù hợp với DĐVN
IV
Có flavonoid
Sắc ký đồ có vết
có Rf tương đương với sắc ký
đồ rutin chuẩn
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
11,1%
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
Hoàng bá Đặc điểm vỏ
thân, bột phù hợp với DĐVN IV
Trang 34sắc ký đồ berberin chuẩn
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
Đơn lá đỏ Đặc điểm lá, bột
phù hợp với DĐVN IV
Có flavonoid
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
12,0%
Đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
3.2 1.1 Định tính flavonoid
− Chiết xuất: hòa tan 0,5g cao đặc vào 10ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan hết, lọc (gấp nếp) Lắc ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần 10ml để loại tạp Lấy lớp nước, đem lắc với ethyl acetate, bốc hơi dung môi đến cắn, hòa tan cắn vào 10ml cồn 90o được dịch chiết để làm phản ứng định tính
− Định tính:
+ Phản ứng với dung dịch kiềm loãng:
Tiến hành: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 3 giọt NaOH 10% lắc kỹ Phản ứng dương tính khi màu vàng của dung dịch tăng lên rõ rệt.Tiến hành phép thử 2 lần
Kết quả: Cao cồn và cao nước, màu vàng của dung dịch tăng lên nhiều Phản ứng dương tính
+ Phản ứng với hơi NH3:
Tiến hành: Nhỏ 2 giọt dịch chiết lên 2 vị trí khác nhau của giấy lọc, để khô, 1 vết che kín, 1 vết hơ trên miệng lọ chứa NH3 đặc Phản ứng dương tính nếu có màu vàng, đỏ đến xanh lá.Tiến hành phép thử 1 lần
Kết quả
Trang 35Cao cồn:Vết hơ NH3 đặc có màu vàng đậm Phản ứng dương tính
Cao nước: Vết hơ NH3 đặc có màu vàng đậm Phản ứng dương tính
+ Phản ứng với dung dịch FeCl3:
Tiến hành: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt FeCl3 5%, lắc đều Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu xanh đen.Tiến hành phép thử
2 lần
Kết quả:
Cao cồn: Dung dịch có màu xanh đen Phản ứng dương tính Cao nước: Dung dịch có màu xanh đen Phản ứng dương tính + Phản ứng Diazo hóa:
Tiến hành: cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2ml dung dịch NaOH, thêm 3 giọt thuốc thử diazo, lắc đều, đun nóng cách thủy trong vài phút Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu hồng, đỏ, đỏ cam.Tiến hành phép thử 2 lần
Kết quả:
Cao cồn: dung dịch xuất hiện màu đỏ cam Phản ứng dương tính Cao nước: dung dịch xuất hiện màu đỏ cam Phản ứng dương tính
Nhận xét: Trong cao cồn và cao nước có chứa flavonoid
3.2 1.2 Định tính saponin
− Chiết xuất: hòa tan 0,5g cao đặc vào 10ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan hết, lọc Để nguội, lắc nhẹ với ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần 10ml để loại tạp, lấy lớp nước, đun nóng nhẹ để loại hết ether dầu hỏa Chiết với n-buthanol 3 lần, mỗi lần 10ml Gộp các dịch chiết n-buthanol lại, bốc hơi dung
Trang 36môi đến cắn, hòa tan cắn trong 10ml cồn 90ođược dịch chiết để làm phản ứng định tính
− Định tính:
+ Quan sát hiện tượng tạo bọt:
Tiến hành: lấy 5g cao đặc cho vào ống nghiệm lớn, thêm 10ml nước, lắc mạnh trong vòng 5ph Phản ứng dương tính nếu cột bọt bền vững sau 15ph Tiến hành phép thử 1 lần
Kết quả:
Cao cồn cho màu đỏ sẫm.Phản ứng dương tính
Cao nước có màu đỏ sẫm.Phản ứng dương tính
Cao cồn: dung dịch có màu đỏ thẫm Phản ứng dương tính
Cao nước: dung dịch có màu đỏ thẫm Phản ứng dương tính
Nhận xét: trong cao cồn và cao nước có chứa saponin
Trang 373.2.1 3 Định tính iridoid glycoside
− Chiết xuất: Hòa tan 0,5g cao đặc vào 10 ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan, lọc (gấp nếp) Lắc dịch lọc với ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần 10ml, lấy lớp nước, đun nóng để đuổi hết ether dầu hỏa Lắc 3 lần với n-buthanol, mỗi lần 15ml Gộp các dịch chiết n-buthanol, đem bốc hơi đến cắn Hòa tan cắn trong 5ml methanol để làm phản ứng
− Định tính:
+ Phản ứng Trim-Hill:
Pha thuốc thử Trim-Hill: cho vào bình nón 250ml 10ml CH3COOH, 1ml dung dịch CuSO4 0,2%, 0,5ml dung dịch HCl đặc Lắc đều, đậy kín, pha trước khi dùng
Tiến hành: cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 2ml dung dịch thử Thêm 2 giọt thuốc thử Trim-Hill vào ống 1, thêm 2 giọt nước cất vào ống 2, đun nhẹ 2 ống.Phản ứng dương tính nếu ống 1 đậm hơn ống 2.Tiến hành phép thử 2 lần
Kết quả: Cao cồn và cao nước đều thấy màu vàng của ống 1 đậm hơn ống 2 Cao cồn cho kết quả rõ hơn cao nước.Phản ứng dương tính
Nhận xét: trong cao cồn và cao nước đều có iridoid glycoside
Kết quả: Không thấy xuất hiện màu xanh đen Phản ứng âm tính
Nhận xét: Trong cao cồn và cao nước không có polysacharid
3.2.1 5 Định tính đường khử
Trang 38Chiết xuất: hòa tan 0,5g cao đặc trong 10ml nước nóng, lọc, để nguội, lấy dịch lọc làm thí nghiệm
Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch lọc trên và 1ml thuốc thử Feling A, 1ml thuốc thử Feling B, lắc đều, đun nóng cách thủy Phản ứng dương tính nếu xuất hiện kết tủa đỏ gạch.Tiến hành phép thử 2 lần
Kết quả: mẫu cao cồn và cao nước đều cho kết tủa đỏ gạch Phản ứng dương tính
Nhận xét: Cao cồn và cao nước đều có đường khử
3.2.1.6 Định tính acid hữu cơ
Tiến hành: lấy 0,5g cao đặc, thêm 5ml nước khuấy đều, lọc Thêm ít bột Na2CO3 lắc nhẹ.Phản ứng dương tính nếu xuất hiện bọt khí
Kết quả: Mẫu cao cồn và cao nước đều xuất hiện bọt khí nhưng rất ít Phản ứng dương tính.Tiến hành phép thử 3 lần
Nhận xét: Cao cồn và cao nước đều có acid hữu cơ
3.2.1 7 Định tính acid amin
Tiến hành: lấy 0,5g cao đặc hòa tan trong 10ml nước cất, đun nóng cho tan, lọc, để nguội Thêm vài giọt thuốc thử nihydrin Đun cách thủy trong 2-3 phút Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu tím.Tiến hành phép thử 2 lần
Kết quả: Mẫu cao cồn và cao nước đều xuất hiện màu tím Phản ứng dương tính
Nhận xét: Cao cồn và cao nước đều có acid amin
3.2.1.8 Định tính alcaloid
Chiết xuất: Lấy 5ml cao đặc hòa tan trong 20ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan hết, lọc Thêm NH3 đặc đến pH 8-9 Lắc tiếp với chloroform 3 lần, mỗi lần 10ml thu được dịch chiết chloroform Cô cách thủy đến cắn Hòa tan cắn trong 10ml H2SO4 1N được dịch chiết đem định tính
Tiến hành: Lấy 3 ống nghiệm
Trang 39Ống 1: 2ml dịch chiết + 3 giọt thuốc thử Mayer
Ống 2: 2ml dịch chiết + 3 giọt thuốc thử Dragendorff
Ống 3: 2ml dịch chiết + 3 giọt thuốc thử Bouchardat
Phản ứng dương tính nếu ống 1 xuất hiện kết tủa trắng hoặc vàng, ống
2 xuất hiện tủa đỏ cam, ống 3 xuất hiện tủa nâu Tiến hành phép thử 3 lần
Kết quả: Mẫu cao cồn và cao nước ống 1 cho kết tủa vàng, ống 2 kết tủa đỏ cam, ống 3 xuất hiện tủa nâu Để qua đêm thấy lượng tủa nhiều hơn
Nhận xét: Cao cồn và cao nước đều chứa alkaloid
3.2.1.9 Định tính tanin
− Chiết xuất: Lấy 0,5g cao đặc, thêm 10ml nước cất, đun nóng cho tan Lọc, dịch lọc làm phản ứng định tính
− Tiến hành
• Phản ứng tạo tủa với muối kim loại:
+ Phản ứng với FeCl3: lấy 1 ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm vài giọt FeCl3 Phản ứng dương tính nếu xuất hiện tủa màu xanh đen Tiến hành phép
Trang 40• Phản ứng tạo tủa với gelatin: cho 1ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm 1ml dung dịch gelatin 1% Phản ứng dương tính nếu xuất hiện tủa bông trắng
− Định tính
+ Phản ứng đóng mở vòng lacton: cho vào 1 ống nghiệm mỗi ống 1 ml
dịch chiết Thêm vào ống thứ nhất 0,5ml dung dịch NaOH 10%, ống thứ 2 để nguyên Đun cách thủy cả 2 ống nghiệm đến sôi, để nguội rồi quan sát Phản ứng dương tính khi Ống 1 có tủa đục, ống 2 trong Thêm cả 2 ống nghiệm mỗi ống 1ml nước cất, lắc đều và quan sát Ống 1 trong, ống 2 có tủa đục Thêm vào ống 1 vài giọt HCl đậm đặc lại trở nên đục như ống 2 Tiến hành phép thử 2 lần
Kết quả: Cả cao cồn và cao nước phản ứng dương tính
+ Phản ứng diazo hóa: Lấy 1ml dịch chiết vào ống nghiệm Thêm 1ml dung dịch NaOH 10%, lắc kỹ, nhỏ vài giọt thuốc thử diazo thấy xuất hiện màu đỏ gạch (đỏ tươi, đỏ thẫm) Tiến hành phép thử 2 lần