− Tiến hành
+ Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 0,0200g rutin chuẩn, cho vào bình định mức 10ml, hòa tan trong 7ml methanol (TT) bằng siêu âm. Để nguội, thêm methanol (TT) đủ 10ml. Lấy toàn bộ 10ml cho vào bình định mức 100ml, thêm nước tới vạch, lắc kỹ (mỗi ml chứa 0,2mg rutin khan).
+ Xây dựng đường cong chuẩn: Lấy chính xác 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 và 6,0ml dung dịch chuẩn cho vào bình định mức 25ml riêng biệt, thêm nước cho đủ 6ml ở mỗi bình rồi thêm 1ml dung dịch natri nitrit 5% (TT), trộn kỹ. Để yên 6 phút, thêm 1ml dung dịch nhôm nitrat 10% (TT), trộn kỹ, lại để yên 10 phút. Thêm 10ml dung dịch NaOH 10% (TT), thêm nước tới vạch, trộn kỹ và để yên trong 15 phút. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 500nm, vẽ đường cong chuẩn, lấy độ hấp thụ là trục tung, nồng độ là trục hoành.
+ Dung dịch thử: Cân chính xác 5,000g cao đặc, thêm 50ml nước cất, đun nóng cách thủy cho tan, lọc vào bình gạn, để nguội. Lắc 3 lần với ether dầu hỏa, mỗi lần 15ml để loại tạp. Đun dịch chiết nước trên bếp cách thủy để loại hết ether dầu hỏa. Cho vào bình gạn, để nguội, lắc 3 lần với ethyl acetat, mỗi lần 30ml trong 10 phút. Gộp toàn bộ dịch chiết vào cốc đã sấy khô, cân. Cô dịch chiết trên nồi cách thủy đến cắn. Cắn hòa tan trong 70ml methanol bằng siêu âm. Để nguội, cho vào bình định mức 100ml, thêm methanol tới vạch, lắc kỹ. Lấy 1ml dịch cho vào bình định mức 10ml, thêm nước tới vạch, lắc kỹ. Lấy chính xác 3ml cho vào bình định mức 25ml, thêm 3ml nước rồi thêm 1ml dung dịch natri nitrit 5% (TT) trộn kỹ. Để yên 6 phút, thêm 1ml nhôm nitrat 10% (TT), để
yên 6 phút. Thêm 10ml dung dịch NaOH 10% (TT), thêm nước tới vạch, trộn kỹ và để yên trong 15 phút. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 500nm.
+ Mẫu trắng: cho vào bình định mức 6ml nước cất rồi thêm 1ml dung dịch natri nitrit 5% (TT) trộn kỹ. Để yên 6 phút, thêm 1ml nhôm nitrat 10% (TT), để yên 6 phút. Thêm 10ml dung dịch NaOH 10% (TT), thêm nước tới vạch, trộn kỹ và để yên trong 15 phút.
+ Độ hấp thụ của mỗi mẫu là kết quả trung bình của 3 lần đo. + Lặp lại thí nghiệm 3 lần với mỗi loại cao.
Khối lượng rutin cân: 0,0220g Hàm lượng rutin: 84%
Khối lượng rutin khan: 0,01845g
Kết quả hàm lượng rutin trong cao cồn và cao nước được thể hiện ở bảng 7, 8.
Bảng 3.3.3.1. Kết quả đo mật độ quang và nồng độ dãy chuẩn
Chuẩn 1 Chuẩn 2 Chuẩn 3 Chuẩn 4 Chuẩn 5 Chuẩn 6 Nồng độ
(µg/ml)
7,39 14,78 22,18 29,57 36,96 44.35
Hình 3.3.3.1. Đồ thị đường chuẩn
Bảng 3.3.3.2. Kết quả định lượng flavonoid toàn phần trong cao cồn
STT Cao cồn Khối lượng (g) Mật độ quang Nồng độ dung dịch (µg/ml) Khối lượng rutin (g) Hàm lượng (%) Cao Cao khô
tuyệt đối
1 5,0665 4,2310 0,133 11,10 0,0278 0,66 2 5,0898 4,2505 0,136 11,33 0,0283 0,67 3 5,0020 4,1772 0,128 10,64 0,0266 0,64
Bảng 3.3.3.3. Kết quả định lượng flavonoid toàn phần trong cao nước STT Cao nước Khối lượng (g) Mật độ quang Nồng độ dung dịch (µg/ml) Khối lượng rutin (g) Hàm lượng (%) Cao Cao khô
tuyệt đối 1 5,0801 4,1380 0,107 8,84 0,0221 0,53 2 5,0178 4,0865 0,095 7,81 0,0195 0,48 3 4,9899 4,0638 0,103 8,48 0,0212 0,52 Trung bình 0,51 Kết luận:
Hàm lượng flavonoid toàn phần trong cao cồn tính trên cao khô tuyệt đối là 0,65%.
Hàm lượng flavonoid toàn phần trong cao nước tính trên cao khô tuyệt đối là 0,51%.
3.3.4. pH
− Tiến hành: Pha thành dung dịch cao đặc 1% (kl/tt): cân chính xác 1g cao đặc bài thuốc cho vào cốc có mỏ, thêm 50ml nước cất, hòa tan, chuyển dần cao đã hòa tan vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch. Hiệu chuẩn máy đo pH lần lượt bằng các dung dịch đệm chuẩn có pH =7, pH= 10, pH=4. Nhúng điện cực vào dung dịch cao đặc 1% và đo trị số pH ở cùng điều kiện đo của các dung dịch đệm chuẩn khi hiệu chuẩn máy. Lặp lại thí nghiệm 3 lần với mỗi loại cao, lấy giá trị trung bình.
− Kết quả đo pH dung dịch 1% cao cồn và cao nước được thể hiện ở bảng 9, 10.
Bảng 3.3.4.1. Kết quả đo pH của cao cồn
Mẫu Khối lượng cao (g) pH
1 1,0046 4,28
2 1,0032 4,27
3 1,0049 4,29
Trung bình 4,28
Bảng 3.3.4.2. Kết quả đo pH của cao nước
Mẫu Khối lượng cao (g) pH
1 1,0192 4,57
2 1,1033 4,55
3 1,0178 4,58
Trung bình 4.57
Kết quả:
pH dung dịch 1% của cao cồn là 4,28%. pH dung dịch 1% của cao nước là 4,57%.