Luận văn Thạc sĩ Hoá học: Nghiên cứu thành phần hóa học của cao ethyl acetate cây Đại cán bidoup (Macrosolen bidoupensis Tagane & V.S.DANG)

Mục tiêu nghiên cứu của Luận văn nhằm làm sáng tỏ thành phần hóa học của các hợp chất tạo nên dược tính của cây, tạo cơ sở đánh giá được giá trị ứng dụng của cây trong việc chữa bệnh theo y học cổ truyền mà nhân gian đã sử dụng. Mời các bạn cùng tham khảo!

LỜI CAM ĐOAN

Tôi tên Nguyễn Trần Cảnh học viên cao học chuyên ngành Hóa hữu cơ, khóa

2018B của Học Viện Khoa học và Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam

Cam đoan rằng:

- Những kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là công trình của

tôi dưới sự hướng dẫn của TS Nguyễn Tấn Phát – Học Viện Khoa học và

Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam

- Những kết quả nghiên cứu của các tác giả khác và các số liệu được sử dụng trong luận văn đều có trích dẫn đầy đủ

- Một phần hay toàn bộ nội dung chưa được trình trước đây

Hồ Chí Minh, tháng 10 năm 2020

Học viên

LỜI CẢM ƠN

Thực tế luôn cho thấy, sự thành công nào cũng đều gắn liền với những sự

hỗ trợ, giúp đỡ của những người xung quanh dù cho sự giúp đỡ đó là ít hay nhiều,

trực tiếp hay gián tiếp Trong suốt thời gian từ khi bắt đầu làm luận văn đến nay,

em đã nhận được sự quan tâm, chỉ bảo, giúp đỡ của thầy cô, gia đình và bạn bè xung quanh

Với tấm lòng biết ơn vô cùng sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất từ đáy lòng đến quý Thầy Cô của Học Viện Khoa Học và Công Nghệ đã dùng những tri thức và tâm huyết của mình để có thể truyền đạt cho chúng em vốn kiến thức quý báu trong suốt thời gian học tập tại học viện

Để thực hiện được đề tài này, em đã nhận được sự hướng dẫn tận tình của thầy TS NGUYỄN TẤN PHÁT, Phòng Các chất có hoạt tính sinh học, Viện Công nghệ Hóa học, đã tận tâm chỉ bảo hướng dẫn em trong suốt quá trình em thực hiện luận văn cũng như từng buổi nói chuyện, thảo luận về đề tài nghiên cứu Nhờ có những lời hướng dẫn, dạy bảo đó, bài luận văn này của em đã hoàn thành một cách suất sắc nhất Một lần nữa, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy

Em xin chân thành cảm ơn Cha, Mẹ, gia đình và Th.S NCS Lê Kiều Hưng, Trường THPT chuyên Lê Quý Đôn, Tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu, Nguyễn Thế Anh, Trường THPT Bùi Thị Xuân, Tp Hồ Chí Minh đã luôn bên cạnh hỗ trợ, động viên khuyến khích và tạo mọi điều kiện thuận lợi để em có thể hoàn thành tốt luận văn

Do thời gian thực hiện hạn chế, nguồn tài liệu thu thập chưa đầy đủ cùng với sự hiểu biết hạn hẹp nên khó tránh khỏi nhiều sai sót về mặt nội dung lẫn hình thức trình bày Kính mong được sự cảm thông và đóng góp ý kiến của quý Thầy

Cô cùng các bạn Em xin chân thành cảm ơn

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU

13C-NMR

Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

1H-NMR Proton Nuclear Magnetic

DANH MỤC BẢNG , SƠ ĐỒ

Trang

Bảng 1 Dữ liệu phổ 13C và 1H của MB01 và

Bảng 2 Dữ liệu phổ 13C, 1H-NMR của MB02 và

3,3′-di-O-methyl-4-O-β-D-xylopyranosylellagic acid đo trong

MB06 và chất Loliolide đo trong DMSO-d6 49

Sơ đồ 1: Quá trình chiết thu phân đoạn Ethyl Acetate và

Sơ đồ 3: Phân lập hợp chất từ phân đoạn MBEI 25

Sơ đồ 4 Phân lập hợp chất từ phân đoạn MBEII 26

Sơ đồ 5 Phân lập hợp chất từ phân đoạn MBEIII 28

DANH MỤC HÌNH

Trang

Hình 1.3: Cây Macrosolen bibracteolatus 9

Hình 1.4: Cây Macrosolen cochinchinensis 10

Hình 1.6: Cây Macrosolen avenis (Đại cán núi Ave) 12

Hình 1.7: Hình ảnh về cây Macrosolen annamicus (Đại

Hình 1.9: Hoa và quả của Macrosolen bidoupensis 14

Hình 1.10: Minh họa của Macrosolen bidoupensis 15

Hình 3.2 Cấu trúc hoá học và các tương tác HMBC

Hình 3.6 Cấu trúc hoá học và các tương tác HMBC

Mục lục

MỞ ĐẦU 3

LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI 3

MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU 4

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 4

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 4

PHẠM VI NGHIÊN CỨU 5

Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 5

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 6

1.1 Tổng quan về họ Loranthaceae và chi Macrosolen 6

1.1.1 Macrosolen paraciticus (L.) Danser 6

1.1.2 Macrosolen tricolor (Lecomte) Danser 7

1.1.3 Macrosolen bibracteolatus (Hance) Danser 8

1.1.4 Macrosolen cochinchinensis (Lour.) Tiegh 9

1.1.5 Macrosolen robinsonii (Gamble) Danser 10

1.1.6 Macrosolen avenis (B1.) Dans (Đại cán núi Ave) 11

1.1.7 Macrosolen annamicus Dans ( Đại cán Việt) 12

1.2 Cây Đại cán Bidoup 13

1.2.1 Nghiên cứu thành phần hóa học các loài cùng chi Macrosolen 16

1.2.2 Hoạt tính sinh học của các loài cùng chi Macrosolen 18

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19

2.1 Thiết bị và dụng cụ 19

2.2 Hóa chất 19

2.3 Nguyên liệu 20

2.4 Phương pháp phân lập các hợp chất 20

2.4.1 Sắc ký cột 20

2.4.2 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 21

2.5 Xác định cấu trúc các hợp chất đã cô lập 21

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22

3.1 Kết quả phân lập các hợp chất từ cao MBE 22

3.1.1 Khảo sát phân đoạn MBEI 24

3.1.2 Khảo sát phân đoạn MBEII 25

3.1.3 Khảo sát phân đoạn MBEIII 27

3.2 Xác định cấu trúc các hợp chất 29

3.2.1 Xác định cấu trúc MB01 29

3.2.2 Xác định cấu trúc MB02 32

3.2.3 Xác định cấu trúc MB03 35

3.2.4 Xác định cấu trúc MB04 39

3.2.5 Xác định cấu trúc MB05 43

3.2.6 Xác định cấu trúc MB06 47

CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50

4.1 Kết luận 50

4.2 Kiến nghị 52

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Khuynh hướng nghiên cứu cây thuốc và những sản phẩm chiết xuất từ thiên nhiên ngày càng được ưa chuộng Do vậy hóa học các hợp chất thiên nhiên vì thế cũng được quan tâm hơn Các nhà khoa học đã tiến hành tách chiết, cô lập những hợp chất có hoạt tính sinh học để tạo ra những sản phẩm hữu ích từ cây cỏ thiên nhiên để phục vụ cho cuộc sống

Họ Tầm gửi là một họ lớn gồm khoảng 40 chi, 1400 loài phân bố chủ yếu

ở vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới, một số ít ở vùng ôn đới Thành phần hóa học của

họ Tầm gửi có nhiều lớp chất có hoạt tính sinh học như: các flavonoid, các hợp chất phenolic, pentacyclic triterpen, chất béo, đường khử, steroid, polysaccharide, coumarin, saponin, acid hữu cơ… [1,2,3,4] Cho đến nay những công bố về thành phần hóa học và tác dụng sinh học của các loài Tầm Gửi trên thế giới còn khá ít Vì thế việc thực hiện đề tài “NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CAO ETHYL ACETATE CÂY ĐẠI CÁN BIDOUP

(MACROSOLEN BIDOUPENSIS TAGANE & V.S DANG)” sẽ góp phần làm

sáng tỏ thành phần hóa học của các hợp chất tạo nên dược tính của cây, tạo cơ sở đánh giá được giá trị ứng dụng của cây trong việc chữa bệnh theo y học cổ truyền

mà nhân gian đã sử dụng

MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU

Từ những ngày xa xưa con người đã sử dụng các loại thảo mộc để chữa các bệnh lý thông thường như cảm, sốt, viêm nhiễm, Khi đời sống vật chất và tinh thần của con người ngày càng tốt hơn, tiên tiến hơn thì con người càng có xu hướng muốn tìm ra những loại biệt dược để chữa bệnh có nguồn gốc từ thiên nhiên Việc nghiên cứu các hợp chất có nguồn gốc tự nhiên này đã và đang trở thành xu hướng mới trong công nghệ y dược nhờ thể hiện được nhiều tính năng ưu việt như khả năng tác dụng tốt, tính kinh tế và đặc biệt là ít gây tác dụng phụ không mong

muốn lên người bệnh

Trước đây, trên thế giới cũng có một vài nghiên cứu về cây đại cán (tầm gửi) Cho đến nay những công bố về thành phần hóa học cũng như tác dụng sinh học của các loài tầm gửi còn rất ít như khả năng giảm phong thấp, giảm đau nhức xương khớp, cơ nhục do phong thấp hoặc do chấn thương, té ngã, tăng huyết áp, rối loạn tâm thần Tại một số vùng ở Việt Nam thì con người đang sử dụng tầm gửi để làm thuốc chữa bệnh vì thế để góp phần tìm hiểu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của một số loài tầm gửi nên tôi thực hiện đề tài:

“NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CAO ETHYL ACETATE

CÂY ĐẠI CÁN BIDOUP (MACROSOLEN BIDOUPENSIS TAGANE & V.S

DANG)”

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Cây đại cán Bidoup

Cây được các nhà khoa học Đại học Kyushu, Viện Sinh học Nhiệt đới, Đại học quốc lập Đài Loan, đại học Ryukyus, Đại học Kyoto phát hiện ở khu vực Vườn quốc gia Bidoup Núi Bà, tỉnh Lâm Đồng, miền nam Việt Nam trong chương trình hợp tác nghiên cứu giữa Viện Sinh học nhiệt đới thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam và Trung tâm Bảo tồn sinh thái châu Á thuộc Đại học Kyushu, Nhật Bản, công bố trên tạp chí PhytoKeys ngày 5/6/2017

Mẫu cây Đại cán Bidoup được thu hái tại Vườn quốc gia Bidoup Núi Bà, tỉnh Lâm Đồng, Miền Nam Việt Nam vào tháng 12 năm 2018

Tên loài được đặt theo tên của nơi thu thập mẫu vật

PHẠM VI NGHIÊN CỨU

Khảo sát thành phần hóa học cây Đại Cán Bidoup Phạm vi nghiên cứu của

đề tài là tập trung nghiên cứu thành phần hóa học trên cao Ethyl Acetate của cây Đại Cán Bidoup họ Tầm gửi (Loranthaceae) được thu hái tại Vườn quốc gia Bidoup Núi Bà, tỉnh Lâm Đồng, miền nam Việt Nam vào tháng 12 năm 2018.[5]

Nhiệm vụ nghiên cứu của đề tài: cô lập và xác định cấu trúc các hợp chất trong cây Đại Cán Bidoup họ Tầm gửi (Loranthaceae) nhằm đóng góp thêm vào danh mục các hợp chất được nghiên cứu từ loài này

Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI

Việc nghiên cứu này với mong muốn tìm hiểu thành phần hóa học có trong

cây Đại Cán Bidoup Nhằm đóng góp thêm vào danh mục các hợp chất được

nghiên cứu từ loài này, mà trước đây ở Việt Nam chưa có một công trình nghiên cứu nào

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Tổng quan về họ Loranthaceae và chi Macrosolen

Loranthaceae (còn gọi là họ Tầm gửi) là một họ thực vật có hoa, được các nhà phân loại học công nhận rộng khắp Nó chứa khoảng 66-67 chi và 950-1.000 loài phân bố chủ yếu ở vùng Nhiệt đới, ít ở vùng Ôn đới, phần nhiều trong số đó

là các cây bán ký sinh trên các loài khác, ngoại trừ ba loài sinh sống trên mặt đất:

Nuytsia floribunda, Atkinsonia ligustrina, Gaiadendron punctatum, còn lại đều có

cách mọc và phát triển trên các cây khác Chúng có lá xanh để tự quang hợp và bộ

rễ sống bám chặt vào vỏ thân cây chủ để cố định sinh trưởng Tại Việt Nam có 5 chi và gần 35 loài phân bố rộng khắp từ Bắc vào Nam, trong đó có nhiều loài có giá trị làm thuốc.[6]

Chi Đại cán (Macrosolen) thuộc họ Tầm gửi (Loranthaceae) có dạng cây

bụi nhỏ sống ký sinh, có tất cả 40 loài phân bố rộng rãi ở nhiệt đới Nam và Đông

Nam Á, ở Việt Nam có 7 loài Chi Macrosolen gồm một số loài tiêu biểu như:

Macrosolen bibracteolatus (Hance) Danser; Macrosolen cochinchinensis (Lour.)

Tiegh.; Macrosolen robinsonii (Gamble) Danser; Macrosolen tricolor (Lecomte) Danser; Macrosolen paraciticus (L.) Danser.[6]

1.1.1 Macrosolen paraciticus (L.) Danser

Macrosolen paraciticus được mô tả lần đầu tiên vào năm 1929 bởi (L.)

Danser

Macrosolen paraciticus là loài cây bụi thường sống ký sinh trên các loài

cây nhiệt đới như xoài, mít, cây đa,… Cành nhánh, nhẵn Lá hình elip hoặc hình trái xoan, tròn ở gốc; cuống lá dài 1,5 cm Cuống dài 1 cm, có 1 đến 6 hoa, đài hoa dài 5 mm, hình ống, nhẵn, trơn láng, tràng hoa màu đỏ ở phía dưới, màu trắng hoặc xanh ở trên đỉnh, hơi cong, thùy phản xạ, chia ra phía trên giữa, sợi tơ màu xanh lá cây, nhụy hình bán cầu Quả mọng hình elip, nhẵn, có đài hoa hình ống

Loài phân bố rộng rãi ở các vùng nhiệt đới Nam và Tây Nam Ấn Độ, đặc biệt là ở Tây Ghats Ấn Độ

Macrosolen paraciticus có tác dụng trong việc chữa trị ung thư.[7]

Hình 1.1: Cây Macrosolen paraciticus

1.1.2 Macrosolen tricolor (Lecomte) Danser

Macrosolen tricolor được mô tả lần đầu tiên vào năm 1929 bởi (Lecomte)

Danser

Macrosolen tricolor có tên gọi tiếng Việt là Đại cán Tam sắc, là loài cây

bụi bám ký sinh, cao khoảng 30 cm, không lông, láng , vỏ có màu xám Lá mọc đối, phiến lá bầu dục, dài 4-6 cm, rộng 1,5-2,5 cm, dai, đầu tròn, cuống 2-3 mm Hoa mọc thành từng cặp, lá bắc 1,5 mm, đài cao 4 mm, tràng hình ống dài 3-4

mm, chia thành 6 thuỳ có màu đỏ, có 5 nhị Quả mọng tròn, đường kính 5-6 mm, hạt gần hình cầu, có một phần phụ dài, hơi nhớt Thường ra hoa vào mùa thu

Loài phân bố ở Trung Quốc (Quảng Ðông), Lào, Campuchia và Việt Nam

Ở nước ta, cây phân bố từ Quảng Ninh, Hải Phòng, Hà Tây, Ninh Bình, Khánh Hoà, Ninh Thuận, Bình Thuận Ở Hà Nội, thường gặp ký sinh trên cây sấu

Công dụng của Macrosolen tricolor: Lá giã nát dùng để bó nơi gẫy xương chân,

tay Cây được dùng làm thuốc uống gây xổ.[7]

Hình 1.2: Cây Macrosolen tricolor

1.1.3 Macrosolen bibracteolatus (Hance) Danser

Macrosolen bibracteolatus được mô tả lần đầu tiên vào năm 1929 bởi

(Hance) Danser

Macrosolen bibracteolatus (Hance) Dans có tên tiếng Việt là Đại cán 2 tiền

diệp, lá mọc đối nhau, hình ovan,chiều dài khoảng 10-12 cm, rộng từ 2-6 cm, hoa

dài, thường có màu đỏ, hơi cong

Cây được phân bố ở Lào Cai (Sa Pa), Lạng Sơn (Khao Sơn), Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Lâm Đồng (Đà Lạt) Cây mọc tự nhiên bán ký sinh,

ở độ cao 700 m trở lên Dùng chữa mất ngủ, phong thấp, đau xương, sa tinh hoàn (cả cây).[7]

Hình 1.3: Cây Macrosolen bibracteolatus

1.1.4 Macrosolen cochinchinensis (Lour.) Tiegh

Macrosolen cochinchinensis được mô tả lần đầu tiên vào năm 1929 bởi

(Lour.) Tiegh

Macrosolen cochinchinensis (Lour.) Tiegh có tên tiếng Việt là Đại cán

Nam bộ Đây là loại cây bụi bám ký sinh có chồi cao từ 0,5-1,3 m, cành cây màu xám, không có lông Lá mọc đối, cuống lá dài 3-10 mm, phiến lá rộng và mỏng,

lá có hình trứng hoặc hình elip, dài từ 2,5-6 cm, mặt lá láng nhẵn, không lông Cụm hoa đơn cao 2-3 cm, hoa màu lục ở gốc, lục vàng ở giữa, đỏ ở đỉnh, có 2-3 hoa mọc thành chùm ở nách lá, có khoảng 4-8 cụm hoc trên cùng 1 cành Tràng hình túi, hơi phình, cao từ 25-40 mm có 6 tai và 6 nhị Quả mọng có hình trứng, màu vàng

Loài phân bố ở Ấn Độ, Nam Trung Quốc, Lào, Campuchia, Thái Lan, Malaysia, Indonesia, Philippin và Việt Nam Ở nước ta, cây mọc ở Bắc Thái, Vĩnh Phú, Hoà Bình, Hà Tây, Hà Nội, Quảng Trị, Thừa Thiên - Huế, Lâm Ðồng, Bình Dương, Ðồng Nai, thành phố Hồ Chí Minh Ở Lạng Sơn, cây này thường mọc trên

cây Hồi, cũng gặp mọc ở những loài cây khác, như nhót, cây vừng, cây long não

Macrosolen cochinchinensis thường được dùng để chữa ho, tê thấp nếu nó

mọc trên cây hồi, nhưng lại dùng chữa ỉa chảy nếu nó mọc trên cây nhót, nếu nó

mọc trên cây chanh lại dùng chữa ho, hen Ở Quảng Trị, lá được dùng nấu nước uống thay trà, ở Huế, quả vàng của cây được dùng làm thuốc trị ho.[7]

Hình 1.4: Cây Macrosolen cochinchinensis

1.1.5 Macrosolen robinsonii (Gamble) Danser

Macrosolen robinsonii được mô tả lần đầu tiên vào năm 1929 bởi (Gamble)

Danser

Macrosolen robinsonii có tên gọi tiếng Việt là Đại cán Robinson, là loài

bán ký sinh không lông, láng tròn Lá mọc đối, có phiến bầu dục, thuôn, hình trái xoan nhiều hay ít, dài từ 5-7,5 cm, rộng 2-3,5 cm, lá hơi dai và mỏng Cụm hoa ở mắt không lá, cuống dài 1-2,5 mm, mang tán 2-4 hoa, cuống hoa dài từ 2-2,5 mm, ống đài 3 mm, tràng dài 12-15 mm, phần gốc hơi phình, có 6 tai Quả mọng hình trái xoan

Loài phân bố ở Trung Quốc (Vân Nam), Thái Lan, Malaysia, Việt Nam (ở Quảng Trị và Khánh Hòa) Ở Quảng Trị, lá cây Đại cán Robinson được dùng nấu nước uống thay trà, có tác dụng lợi tiểu và làm xẹp bụng trướng.[7]

Hình 1.5: Cây Macrosolen robinsonii

1.1.6 Macrosolen avenis (B1.) Dans (Đại cán núi Ave)

Là loại tầm gửi bán ký sinh Lá có phiến bầu dục, to 3 - 7,5 x 1 - 3,5

cm, đầu thon, đáy tù, dai, gân phụ 4 cặp; cuống 2 - 3 mm Tán hoa có cuộng ngắn, 2-4 hoa; cuộng hoa ngắn; vành lưỡng trắc, hoa dài 3,2 - 4,5 cm[9]

Phân bố ở rừng từ độ cao 1200m - 2100m, Phú Khánh, Lâm Đồng

Hình 1.6: Cây Macrosolen avenis (Đại cán núi Ave)

1.1.7 Macrosolen annamicus Dans ( Đại cán Việt)

Bụi to, không lông Lá mọc đối, có phiến hình bầu dục, dài khoảng 10 - 18

cm, rộng 4 - 7 cm, dai, gân phụ rất mảnh, cuống rất ngắn một tán có 2 - 4 hoa, hoa dài 3,2 - 4,5 cm[9]

Phân bố ở rừng trung nguyên, độ cao 1.100 m

Hình 1.7: Cây Macrosolen annamicus (Đại cán Việt)

1.2 Cây Đại cán Bidoup[5]

Tên khoa học: Macrosolen bidoupensis Tagane & V.S Dang

Loài (species): Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis Tagane & V.S

Dang)

Chi (genus): Đại cán (Macrosolen)

Họ (familia): Tầm gửi (Loranthaceae)

Bộ (ordo): Đàn hương (Santalales)

Giới (regnum): Thực vật (Plantae)

Nơi phát hiện: Vườn Quốc gia Bidoup Núi Bà, tỉnh Lâm Đồng, Việt Nam

Người phát hiện: Shuichiro Tagane, Đặng Văn Sơn

Đại cán Bidoup được các nhà khoa học Đại học Kyushu, Viện Sinh học Nhiệt đới, Đại học quốc lập Đài Loan, đại học Ryukyus, Đại học Kyoto phát hiện

ở khu vực Vườn quốc gia Bidoup Núi Bà, tỉnh Lâm Đồng, Miền Nam Việt Nam trong chương trình hợp tác nghiên cứu giữa Viện Sinh học nhiệt đới thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam và Trung tâm Bảo tồn sinh thái châu

Á thuộc Đại học Kyushu, Nhật Bản, công bố trên tạp chí PhytoKeys ngày 5/6/2017 Tên loài được đặt theo tên của nơi thu thập mẫu vật

Macrosolen bidoupensis tương tự như Macrosolen tricolor ở Trung Quốc,

Thái Lan, Việt Nam ở đặc điểm hình dạng và kích thước lá và hoa mọc thành từng

cặp, nhưng khác với M tricolor vì khoảng cách từ cuối thân lá đến cuống lá ngắn hơn (khoảng dài đến 0,7 mm ở M bidoupensis so với khoảng cách 3 mm ở M

tricolor), lá có nhiều gân (4 hoặc 5 đôi so với 2 hoặc 3 đôi gân ở M tricolor) Hình

dạng lá khá giống với M platyphyllus ở Thái Lan, nhưng dễ phân biệt vì M

bidoupensis có nhiều lá, hoa nhỏ hơn và cuống lá ngắn hơn lá của loài M platyphyllus

Hình 1.8: Cây Macrosolen bidoupensis

Mô tả: Là cây bụi, bán ký sinh không lông, cao từ 25-40 cm Lá mọc đối, dạng xoan hay xoan bầu dục hay tròn, kích thước 1,2-4,8 x 1,2-3,5 cm; đầu tà đến tròn, đáy hình tim đến hình tròn, gân lá nổi rõ khoảng 1/3 đến 1/2 lá Cuống lá dài khoảng 0,7 mm

Cụm hoa dạng tán, mỗi cụm thường có 2 hoa, dài khoảng 0,9 mm mọc ở nách lá; cuống hoa nhỏ, dài khoảng 1 mm đến 1,5 mm; hoa có màu xanh nhạt với màu đỏ ở đỉnh Tràng hoa màu xanh lá cây có màu đỏ ở đầu ống và thùy

Quả hình cầu, khi quả khô có hình trứng, quả có màu cam đỏ, kích thước 0,8 x 0,6 cm; có 1 hạt, hạt có hình elip, kích thước khoảng 5 x 3 mm

Hình 1.9: Hoa và quả của Macrosolen bidoupensis

Hình 1.10: Minh họa của Macrosolen bidoupensis

A Lá và hoa trên cùng một nhánh E Quả khô

C Mặt cắt dọc của hoa và tràng hoa G Hạt và mặt cắt của hạt

D Quả

1.2.1 Nghiên cứu thành phần hóa học các loài cùng chi Macrosolen

Tuy chi Macrosolen có nhiều loài nhưng việc nghiên cứu thành phần hóa học

ở các loài còn nhiều hạn chế Hiện nay, các nghiên cứu chỉ tập trung chủ yếu ở hai

loài là Macrosolen tricolor và Macrosolen cochinchinensis

Năm 2014, Nguyễn Thị Mai Hương đã phân lập từ tầm gửi ký sinh trên cây

Bưởi – Macrosolen tricolor 1 hợp chất flavonoid là quercetin 3– rhamnoside

(1).[18]

Năm 2006, Nguyễn Thị Huệ đã phân lập 1 hợp chất phenolic là methyl

brevifolin carboxylate (7) từ Macrosolen tricolor.[17]

Năm 2013, Vũ Xuân Giang và cộng sự đã phân lập từ tầm gửi ký sinh trên cây

Na – Macrosolen tricolor 3 hợp chất triterpenoid là 20(29)–lupene–3β–

nonadecanoyl–7α–ol (4), 20(29)–lupene–3β–nonadecanoyl–7β,15α–diol (5), lupeol (6). [16]

Năm 2006, Hoàng Văn Võ và cộng sự đã phân lập 2 hợp chất flavonoid 7,3´,4´–

trihydroxyflavone (2), 5,7,4'–trihydroxyflavanone 3–rhamnoside (3) và một hợp

chất phenolic 5,5'–dimethoxylariciresinol (8) từ loài Macrosolen cochinchinensis.[19]

Cây Đại cán Bidoup là một loài mới trong chi Macrosolen nên chưa có công

bố gì về thành phần hóa học cũng như hoạt tính sinh học của cây

CÁC HỢP CHẤT CÔ LẬP ĐƯỢC TỪ CHI ĐẠI CÁN

Hợp chất flavonoid

Quercetin 3–rhamnoside (1) 5,6–dimethoxy–7,3′,4′–trihydroxyflavone (2)

5,7,4'–trihydroxyflavanone 3–rhamnoside (3)

Hợp chất triterpenoid

20(29)–lupene–3β–nonadecanoyl–7α–ol (4)

Lupeol (5) 20(29)–lupene–3β–nonadecanoyl–7β,15α–diol (6)

Hợp chất phenoic

Methyl brevifolin carboxylate (7) 5,5'–dimethoxylariciresinol (8)

1.2.2 Hoạt tính sinh học của các loài cùng chi Macrosolen

Các nghiên cứu trước đây cho thấy Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans có

nhiều hoạt tính sinh học tốt như tác dụng bảo vệ gan trên tế bào gan chuột dòng Balb/c gây ung thư gan bằng 7,12–dimethoxylariciresinol dimethylbenz[a]anthracene, mô hình gây độc gan chuột bằng CCl4,[18] mô hình gây tổn thương gan bằng paracetamol;[21] chống viêm cấp trên mô hình gây phù

chân chuột bằng carrageenin và gây viêm màng bụng chuột bằng carrageenin và formaldehyde.[20]

Tương tự như Macrosolen tricolor, Macrosolen cochinchinensis cũng có tác

dụng bảo vệ gan trên tế bào chuột dòng Balb/c.[24, 26] Ngoài ra, Macrosolen

cochinchinensis còn có các tác dụng như hạ đường huyết trên chuột nhắt đái tháo

đường type II;[23] tác dụng chống oxy hóa trên mô hình gây tăng quá trình oxy hoá bằng CCl4,[22, 19] phương pháp giảm năng lượng tiêu thụ,[28] gây độc với các dòng

tế bào như tế bào u ác tính B16,[25] tế bào ung thư vú MCF–7[30] và tác dụng giảm đau trên các mô hình gây đau quặn bụng bằng acid acetic, bằng formalin, bằng nhiệt.[28]

Các phương pháp như dọn gốc tự do DPPH của loài Macrosolen parasiticus,[31]

Macrosolen capitellatus,[27] Macrosolen cochinchinensis,[28] dọn gốc tự do nitric

oxid của loài Macrosolen parasiticus,[31] Macrosolen capitellatus,[27] dọn gốc tự

do superoxid, O–phenanthrolin của loài Macrosolen parasiticus[31] hay khả năng

gây độc tế bào đối với dòng tế bào ung thư EAC của loài Macrosolen

capitellatus.[29]

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thiết bị và dụng cụ

Máy cô quay chân không thu hồi dung môi

Cân phân tích AND HR – 200

Cột sắc ký đường kính 2 – 5,5 cm

Giá sắt, kẹp sắt dùng để treo cột

Cốc thủy tinh 50 mL, 100 mL, 200 mL

Ly thủy tinh, nắp thủy tinh dùng để giải ly

Ống nhỏ giọt, lọ thủy tinh không màu nhỏ và lớn

Bình cầu 500 mL, 250 mL, 50 mL

Ống nghiệm, khay đựng ống nghiệm, ống đong 10 mL, 100 mL

Cối và chày, muỗng niken, Becher 50 mL, 100 mL

Quả bóp cao su, phễu, giấy lọc

Bếp điện hồng ngoại dùng để nướng bản mỏng

Kẹp giữ giấy sắc ký, ống thủy tinh mao quản để chấm mẫu

Silica gel hạt cỡ 0,04 – 0,06 mm đối với pha thường

Sắc ký bản mỏng tiến hành trên bản mỏng tráng sẵn TLC Silica gel F254 hiệu Merck đối với pha thường

Silica gel pha thường có cỡ hạt là 0,040 – 0,063 mm (240-430 mesh) Silica gel pha động ODS hoặc YMC (30 – 50 µm, FuJsilisa Chemical Ltd)

2.4.1.1 Nhồi cột

Chọn cột phù hợp với cao, làm khô cột và cân silica gel cần dùng, pha dung môi chạy hệ rồi cho silica gel với dung môi đó trong 1 cốc thủy tinh Nhồi một ít bông gòn dưới đáy cột để silica gel không chảy ra ngoài Sau đó khuyết salica gel trong dung môi rồi rót nhẹ vào cột Để một cốc thủy tinh nhỏ (50 mL) phía dưới cột, sau khi rót hết silica gel vào thì xả cột để cố định silica gel, rót thêm dung môi vào cột để ổn định hệ

2.4.1.2 Nạp cao vào cột

Hòa mẫu vào dung môi chạy cột trong cốc thủy tinh lớn 500 mL sau đó dùng một lượng silica gel cho vào cốc thủy tinh để hấp thụ mẫu, trộn mẫu và silica gel cho đến khi được một hỗn hợp khô Cho hết hỗn hợp đó vào cột và rót dung

môi chạy cột vào Sau khi hoàn tất việc nạp mẫu cho một ít bông gòn ở bên trên mẫu chất để ổn định hệ rồi tiếp tục châm dung môi vào

Sử dụng phương pháp sắc ký cột kết hợp với sắc ký bản mỏng (thuốc thử hiện hình là dung dịch H2SO4 10% trong dung môi ethanol, dung dịch vanillin 2,5% trong dung môi ethanol) đối với các cao phân đoạn

để phân lập một số hợp chất

2.4.2 Sắc ký lớp mỏng (TLC)

Sắc ký lớp mỏng là kỹ thuật phân bố rắn – lỏng Pha động là chất lỏng đi xuyên qua 1 lớp chết hấp thụ trợ (silica gel hay nhôm oxit) Và chất hấp thụ được tráng thành lớp mỏng, đều phủ lên một nền phẳng (tấm plastic, tấm kính hay tấm nhôm)

Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DCAlufolien 60

F254 (Merck 1,05715), RP18 F254s (Merck) Phát hiện chất bằng đền tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 368 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% 2.5 Xác định cấu trúc các hợp chất đã cô lập

• Khảo sát cấu trúc hóa học các hợp chất tinh khiết cô lập được bằng các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H, 13C, HSQC, HMBC) và phổ khối lượng MS

• Các phổ cộng hưởng từ hạt nhân được ghi trên máy BRUKER AVANCE

500 MHz tại Viện Hóa học thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, số 18, Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội

• Phổ MS được ghi trên máy Thermo Scientific – MSQ PLUS tại Viện công nghệ hóa học, số 1, Mạc Đĩnh Chi, Phường Bến Nghé, Quận 1, TP HCM

• Sử dụng các phương pháp hóa lý hiện đại để xác định cấu trúc các hợp chất

cô lập được: MS, 1H NMR, 13C NMR, HMBC, HSQC, COSY…

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết quả phân lập các hợp chất từ cao MBE

Bột cây Đại cán Bidoup khô (khối lượng 8,0 kg) được chiết kiệt với dung môi ethanol 96 o trong bình thủy tinh được đậy kín trong nhiều giờ với sự hỗ trợ của máy đánh siêu âm (30 ph/lần) và gia nhiệt nhỏ hơn 50oC Việc này giúp dung môi có thể xuyên thấm vào cấu trúc tế bào thực vật làm hòa tan các hợp chất hữu

cơ tự nhiên có trong cây Tiến hành đảo bột trong bình nhiều lần để tăng hiệu quả chiết kiệt

Sau đó tiến hành thu dịch chiết qua giấy lọc, tiếp tục mang dịch chiết đi cô quay để thu hồi dung môi và thu cao chiết Tiếp tục chiết phần bã bằng dung môi ethanol 96o đến khi dịch chiết trong, việc này giúp hòa tan hoàn toàn các chất còn sót lại trong bã Các dịch chiết được gom chung cô quay để thu cao ethanol tổng (1,0 kg) và thu hồi dung môi

Bước tiếp theo, cao Ethanol tổng được thêm một lượng nước cất vừa đủ và

tiếp tục chiết lỏng – lỏng với dung môi được sử dụng là n-Hexane, quá trình chiết

được tiến hành lặp lại từ 5 đến 7 lần sử dụng kĩ thuật chiết lỏng – lỏng để thu lấy

pha n-Hexane phía trên Dịch chiết được gom lại, lọc qua giấy lọc và cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm kết quả thu được cặn chiết phân đoạn n-Hexane, ký hiệu là

MBH (98 g)

Phần cao Ethanol tổng sau khi chiết với dung môi n-Hexane, tiếp tục chiết

lỏng – lỏng với dung môi được sử dụng là Ethyl Acetate, quá trình chiết được tiến hành lặp lại từ 5 đến 7 lần sử dụng kĩ thuật chiết lỏng – lỏng để thu lấy pha Ethyl Acetate phía trên Dịch chiết được gom lại, lọc qua giấy lọc và cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm kết quả thu được cặn chiết phân đoạn Ethyl Acetate, ký hiệu MBE (33 g) và phần dịch nước còn lại, ký hiệu là MBW (850 g)

Sơ đồ 1: Quá trình chiết thu phân đoạn Ethyl Acetate và dịch nước từ mẫu cây

Đại cán Bidoup

Cao n-Hexane

MBH 98 g

Chiết lỏng – lỏng với Ethyl Acetate

Lọc, cô quay thu hồi dung môi

Dịch nước 850 g

Cao EA MBE 33 g

Lọc, cô quay thu hồi dung môi

Từ cao EA ban đầu phân ra được 5 phân đoạn nhỏ, đặt tên lần lượt như sau: MBEI (7 g), MBEII (6 g), MBEIII (5 g), MBEIV (6 g), MBEV (7 g)

Sơ đồ 2: Tách các phân đoạn từ cao EA 3.1.1 Khảo sát phân đoạn MBEI

Thực hiện sắc ký cột với phân đoạn MBEI để phân lập các hợp chất với hệ dung môi H: EA tăng dần (40:60, 30:70, 20:80,10:90, 100% EA), kiểm tra bằng cách chấm sắc ký bản mỏng, giải ly bằng hệ cloroform:methanol thích hợp, và sau

đó dùng thuốc thử H2SO4 10% nhận biết các vết màu và gom lại, thu được 5 phân đoạn Kí hiệu các phân đoạn thu được lần lượt từ MBEI.1 đến MBEI.5

Tiếp tục kiểm tra 5 phân đoạn trên bằng phương pháp sắc ký bản mỏng với hệ giải ly thích hợp, nhận thấy MBEI.2 có khả năng thích hợp cho việc tách chiết Thực hiện sắc ký cột với phân đoạn MBEI.2 thu được 5 phân đoạn nhỏ kí hiệu từ MBEI.2.1 đến MBEI.2.5 Kiểm tra 5 phân đoạn bằng phương pháp sắc ký bản mỏng TLC, giải ly bằng hệ cloroform:methanol thích hợp nhận thấy MBEI.2.2 và MBEI.2.3 xuất hiện 2 vết nên quyết định khảo sát MBEI.2.2 và MBEI.2.3

Phân đoạn MBEI.2.2 và MBEI.2.3 thực hiện sắc ký cột Silica gel với hệ dung

môi có độ phân cực tăng dần n-Hexane:Ethyl Acetate (40:60, 35:65, 30:70) Theo

dõi trên sắc ký bản mỏng, hệ giải ly cloroform:methanol 99:1, khi sắc ký bản mỏng hiện ra những vết sạch thì thu được 2 chất ký hiệu MB01 và MB02

Cao Ethyl Acetate MBE 33g

Sơ đồ 3: Phân lập hợp chất từ phân đoạn MBEI 3.1.2 Khảo sát phân đoạn MBEII

Phân đoạn MBE.II (6,0 g) được tiến hành sắc ký cột silica gel pha thường

với hệ dung môi có độ phân cực tăng dần n-Hexane – Ethyl Acetate, theo tỉ lệ nhất

định Trong quá trình chạy sắc ký cột, sử dụng sắc ký lớp mỏng, giải ly bằng hệ

dung môi cloroform:methanol thích hợp và thuốc thử H2SO4 10% để hiện các vết

màu và gom các phân đoạn có các vết giống nhau, thu được 6 phân đoạn nhỏ, ký

hiệu lần lượt MBE.II.1 (0,5 g), MBE.II.2 (1,5 g), MBE.II.3 (2,0 g), MBE.II.4 (1,0

g), MBE.II.5 (1,5 g) và MBE.II.6 (0,5 g)

Phân đoạn nhỏ MBE.II.2 (2,0 g) tiếp tục thực hiện sắp ký cột với hệ

n-Hexane – Ethyl Acetate (99-1→70-30, v/v) thu 02 hợp chất tinh khiết, ký hiệu

MBE.III (2 g)

MBE.IV (1 g)

MBE.V (2 g)

CC H-EA (40:60, 30:70, 20:80,10:90,

100:0)

Cao MBE 33g

CC H-EA-MeOH (75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:90:10)

CC H-EA (40:60, 35:65, 30:70) MB01 (20 mg)

MB02 (7 mg)

Sơ đồ 4 Phân lập hợp chất từ phân đoạn MBEII

MBE.II.1 MBE.II.2 MBE.II.3 MBE.II.4 MBE.II.5 MBE.II.6

CC H-EA (40:60, 30:70, 20:80,10:90, 100:0)

Cao MBE 33g

CC H-EA-MeOH (75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:90:10)

CC H-EA (99-1→70-30, v/v) MB03 (20 mg)

MB04 (7 mg)

3.1.3 Khảo sát phân đoạn MBEIII

Thực hiện sắc ký cột với phân đoạn MBEIII để phân lập các hợp chất với hệ dung môi H: EA tăng dần (40:60, 30:70, 20:80,10:90, 100% Ethyl Acetate), kiểm tra bằng cách chấm sắc ký bản mỏng, giải ly bằng hệ cloroform:methanol thích hợp, và sau đó dùng thuốc thử H2SO4 10% nhận biết các vết màu và gom lại, thu được 4 phân đoạn Kí hiệu các phân đoạn thu được lần lượt từ MBEIII.1 đến MBEIII.4

Tiếp tục kiểm tra 4 phân đoạn trên bằng phương pháp sắc ký bản mỏng với hệ giải ly thích hợp, nhận thấy MBEIII.1 có khả năng thích hợp cho việc tách chiết Thực hiện sắc ký cột với phân đoạn MBEIII.1 thu được 4 phân đoạn nhỏ kí hiệu

từ MBEIII.1.1 đến MBEIII.1.4 Kiểm tra 4 phân đoạn bằng phương pháp sắc ký bản mỏng TLC, giải ly bằng hệ cloroform:methanol thích hợp nhận thấy MBEIII.1.3 và MBEIII.1.4 xuất hiện 2 vết nên quyết định khảo sát MBEIII.1.3 và MBEIII.1.4

Phân đoạn MBEIII.1.3 và MBEIII.1.4 thực hiện sắc ký cột Silica gel với hệ dung

môi có độ phân cực tăng dần n-Hexane:Ethyl Acetate (40:60, 35:65, 30:70) Theo

dõi trên sắc ký bản mỏng, hệ giải ly cloroform:methanol 99:1, khi sắc ký bản mỏng hiện ra những vết sạch thì thu được 2 chất ký hiệu MB05 và MB06

Sơ đồ 5 Phân lập hợp chất từ phân đoạn MBEIII

MBEIII.1

MBE.I

(19 g)

MBE.II (8 g)

MBE.III (2 g)

MBE.IV (1 g)

MBE.V (2 g)

CC H-EA (40:60, 30:70, 20:80,10:90, 100:0)

Cao MBE 33g

CC H-EA-MeOH (75:25:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0,

MB05 (20 mg) MB06 (7 mg)

MBEIII.4 MBEIII.3

MBEIII.2

3.2 Xác định cấu trúc các hợp chất

3.2.1 Xác định cấu trúc MB01

Hợp chất MB01 thu được dạng bột màu trắng

Phổ HR-ESI-MS cho mũi ion phân tử giả với m/z: [M-H]- = 417,1550 (C22H25O8, lý thuyết 417,1550), [M-CH3]- = 403,1394 (C21H23O8, lý thuyết 403,1393),giúp xác định CTPT là C22H26O8

Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD,  ppm) của MB01 cho các tín hiệu: 4

proton methin vòng thơm ở δH 6,68 (4H, s, H-2, H-6, H-2’, H-6’); 2 proton oxymethin ở δH 4,74 (2H, d, J = 4,5 Hz, H-7, H-7’), 2 proton methin ở δH 3,16

(2H, m, H-8, H-8’), 4 proton oxymethylen ở δH 4,29 (2H, ddd, J = 9,0 & 7,0 Hz, H-9a, H-9’a), 3,91 (2H, dd, J = 9,0 & 3,5 Hz, H-9b, H-9’b), proton của 4 nhóm oxymethyl ở δH 3,87 (12H, s, 3-OCH3, 5-OCH3,3’-OCH3, 5’-OCH3)

Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD,  ppm) của MB01 cho tín hiệu của 6

carbon vòng thơm mang oxy ở δC 149,4 (C-3, C-5, C-3’, C-5’), 136,3 (C-4, C-4’);

4 carbon methin vòng thơm ở δC 104,6 (C-2, C-6, C-2’, C-6’); 2 carbon bậc bốn

vòng thơm ở δC 133,2 (C-1, C-1’), 4 carbon oxymethyl ở δC 56,9 (3-OCH3,OCH3,3’-OCH3, 5’-OCH3,), 2 carbon oxymethin ở δC 87,6 (C-7, C-7’), 2 carbon

5-methin ở δC 55,5 (C-8, C-8’) và 2 carbon oxymethylen ở δC 72,8 (C-9, C-9’) Từ

tín hiệu trên và dữ liệu HRMS giúp xác định MB01 là một furofuran lignan mang

4 nhóm methoxy đối xứng

Mặt khác, dựa vào hằng số ghép J của proton H-7 hoặc H-7’ là 4,5 Hz, giúp xác định vị trí của 2 proton H-7 và H-8 hoặc H-7’ và H-8’ ở vị trí trans với nhau (hay 7α, 8α, và 7’α, 8’α)[8]

Từ các dữ liệu phổ HR-ESI-MS, NMR và so sánh với tài liệu[9]; MB01 được xác định là Syringaresinol

Hình 3.1 Cấu trúc hóa học của MB01

Bảng 1 Dữ liệu phổ 13C và 1H của MB01 và Syringaresinol đo trong CD3OD

3.2.2 Xác định cấu trúc MB02

MB02 có dạng bột, màu trắng

Phổ HR-ESI-MS cho mũi ion phân tử giả với m/z: [M-H]- = 461,0736 (C21H17O12, lý thuyết 461,0720), [2*M-H]- = 923,1563 (C42H35O24, lý thuyết 923,1518), giúp xác định CTPT là C21H18O12

Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6,  ppm) của MB02 cho thấy có 21

carbon, trong đó phần aglycon có 14 carbon gồm 2 carbon carbonyl của vòng 

-lacton ở δC 158,4 (C-7) và 158,3 (C-7’), 6 carbon vòng thơm kề oxy, 4 carbon bậc

bốn vòng thơm và 2 carbon methine vòng thơm ở δC 111,9 (C-5) và 111,6 (C-5’)

tương quan với 2 proton ở δH 7,76 (1H, s, H-5); 7,54 (1H, s, H-5’) trong HSQC,

giúp xác định MB02 có aglycon là ellagic acid; phần đường 5 carbon của 1 đơn vị

đường β-D-xylopyranose (Xyl) gồm 1 carbon anomer ở δC 101,8 (C-1’’) tương

quan với 1 proton anomer ở δH 5,16 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1’’), 3 oxymethin ở δC

73,0 (C-2’’), 76,1 (C-3’’), 69,2 (C-4’’) và 1 carbon oxymethylen ở δC 65,8 (C-5’’)

Ngoài ra, MB02 còn có 2 nhóm methoxy ở δC 61,6 (3-OCH3)/δH 4,08 (3H, s,

3-OCH3) và δC 61,0 (3’-OCH3)/δH 4,06 (3H, s, 3’-OCH3)

Phổ HMBC cho thấy các proton methoxy này ở δH 4,08 (3-OCH3) và 4,06 (3’-OCH3) cùng cho tương tác với 2 carbon bậc bốn vòng thơm kề oxy ở δC 141,9 (C-3) và 140,2 (C-3’), giúp xác định aglycon đã bị methyl hoá ở vị trí C-3 và C-

3’ Mặt khác, proton anomer ở δH 5,16 (H-1’’) tương tác với carbon vòng thơm kề

oxy ở δC 151,2 (C-4), giúp xác định đơn vị đường Xyl gắn vào khung ellagic acid

vị trí C-4

Từ các dữ liệu phổ NMR và so sánh với tài liệu[10], MB02 được xác định

là 3,3′-di-O-methyl-4-O-β-D-xylopyranosylellagic acid

Hình 3.2 Cấu trúc hoá học và các tương tác HMBC chính của MB02

Bảng 2 Dữ liệu phổ C, H-NMR của MB02 và

3,3′-di-O-methyl-4-O-β-D-xylopyranosylellagic acid đo trong DMSO-d 6