Luận văn Thạc sĩ Hoá học: Nghiên cứu thành phần hóa học của cây Cối xay

Mục tiêu nghiên cứu của luận văn nhằm xác định rõ cấu trúc của một số hợp chất có trong thân cây Cối xay (Abutilon indicum (L) sweet) nhằm góp phần hiểu biết thêm về thành phần hoá học của cây thuốc dân gian. Mời các bạn cùng tham khảo!

Trang 1

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

NGÔ XUÂN QUANG

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC

CÂY CỐI XAY (ABUTILON INDICUM (L) SWEET)

Trang 2

NGÔ XUÂN QUANG

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC

CÂY CỐI XAY (ABUTILON INDICUM (L) SWEET)

Trang 3

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu, kết quả nêu trong luận văn này là trung thực và chưa từng được ai công

bố trong bất kỳ công trình nào khác

Tác giả

NGÔ XUÂN QUANG

Trang 4

Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Phạm Văn Thỉnh - Người thầy khoa học, mẫu mực đã hết lòng tận tình hướng dẫn, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện luận văn

Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Quyết Tiến, TS Phạm Thị Hồng Minh, Th.S Vũ Anh Tuấn những người thầy đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tôi nhiều kiến thức bổ ích và những kinh nghiệm quý báu trong nghiên cứu khoa học

Xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong khoa Hoá - Trường Đại học

Sư phạm Thái Nguyên, các thầy của Trường Đại học Sư phạm Hà Nội đã tận tình giảng dạy, giúp đỡ và đưa ra nhiều ý kiến quý báu về mặt chuyên môn trong quá trình tôi nghiên cứu và hoàn thành luận văn

Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu cùng toàn thể các thầy cô trường trung học phổ thong Hòa Phú và gia đình tôi đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và làm luận văn

Thái nguyên, tháng 4 năm 2012

Tác giả

Ngô Xuân Quang

Trang 5

(Phổ hồng ngoại biến đổi Fourie)

(Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) 1

H-NMR : Proton Magnetic Resonance Spectrometry

(Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton)

13

C-NMR : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer

HSQC : Heteronuclear Single - Quantum Coherence

HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation

Các lĩnh vực khác

Trang 6

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 2.1 Khối lượng chất tổng số được chiết từng phân đoạn thân cây Cối

xay(Abutilon indicum(L)Sweet) 20 Bảng 2.2 Phát hiện các nhóm chất trong thân cây Cối xay (Abutilon

indicum(L) Sweet) 24

Bảng 3.1: Hàm lượng chất hoà tan trong cây Cối xay 32Bảng 3.2 : Một số nhóm chất hữu cơ trong cây Cối xay 33

Bảng 3.3 Số liệu phổ 13

C-NMR (MeOD, 500MHz) của chất HA-1 và

EA-1 trong lá và thân cây Cối xay Abutilon indicum 35

Trang 7

DANH MỤC CÁC HÌNH

Trang

Hình 1.1: Hình ảnh về cây Cối xay 4

Hình 3.1 : Phổ FT-IR của HA2 38

Hình 3.2 : Phổ 1 H-NMR của HA2 39

Hình 3.3: Phổ 13 C-NMR của HA2 39

Hình 3.4 : Phổ DEPT của HA2 40

Hình 3.5: Phổ HMBC của HA2 40

Hình 3.6 : Phổ HSQC của HA2 41

Hình 3.7: Phổ FT-IR của HA3 44

Hình 3.8: Phổ 1 H-NMR của HA3 45

Hình 3.9: Phổ 13 C-NMR của HA3 45

Hình 3.10: Phổ DEPT của HA3 46

Hình 3.11: Phổ HMBC của HA3 46

Hình 3.12: Phổ HSQC của HA3 47

Hình 3.13: Phổ FT-IR của EA2 51

Hình 3.14: Phổ 1H của EA2 51

Hình 3.15: Phổ 13C của EA2 52

Hình 3.16: Phổ DEPT của EA2 52

Hình 3.17: Phổ HMBC của EA2 53

Hình 3.18: Phổ HSQC của EA2 53

Trang 8

MỤC LỤC

Trang

Trang bìa phụ

Lời cảm ơn

Lời cam đoan

Danh mục từ viết tắt i

Danh mục các bảng ii

Danh mục các hình iii

Mục lục iv

MỞ ĐẦU 1

Chương 1 TỔNG QUAN 2

1.1 Đặc điểm thực vật của cây Cối xay 2

1.2 Công dụng của cây Cối xay 4

1.3 Tình hình nghiên cứu hóa học cây Cối xay ở nước ngoài và ở Việt Nam 8

1.3.1 Những hợp chất tecpenoit 9

1.3.2 Những hợp chất steroid 11

1.3.3 Các hợp chất flavonoit 11

1.3.4 Các hợp chất poliphenol 14

1.3.5 Các hợp chất Ancaloit 15

1.3.6 Các hợp chất khác 16

Chương 2 PHẦN THỰC NGHIỆM 17

2.1 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 17

2.1.1 Thu mẫu lá cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lí mẫu 17

2.1.2 Phương pháp phân lập các hợp chất từ các dịch chiết 17

2.1.3 Phương pháp khảo sát và xác định cấu trúc hoá học các hợp chất 18

2.2 Dụng cụ, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 18

2.2.1 Dụng cụ và hoá chất 18

2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 19

Trang 9

2.3 Các dịch chiết từ thân cây Cối xay (Abutilon indicum (L) Sweet) 19

2.3.1 Các dịch chiết 19

2.3.2 Khảo sát định tính các dịch chiết 20

2.3.4 Thử hoạt tính sinh học 25

2.4 Chiết suất, phân lập và tinh chế các chất từ thân cây Cối xay 26

2.4.1 Cặn dịch chiết n-hexan 26

2.4.2 Cặn dịch chiết etyl axetat 29

Chương 3 THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31

3.1 Nguyên tắc chung 31

3.2 Xác định hàm lượng chất hoà tan trong cây Cối xay trong dung môi nước 31

3.3 Xác định định tính các nhóm chất thiên nhiên 32

3.4 Phân lập và nhận dạng các hợp chất có trong các dịch chiết khác nhau của lá và thân cây Cối xay 34

3.4.1 Chất HA-1: -sitosterol 34

3.4.2 Chất HA-2 36

3.4.3 Chất HA-3 41

3.4.4 Chất EA-1 : β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosit 47

3.4.5 Chất EA-2 48

3.5 Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của dịch chiết tổng số 54

KẾT LUẬN 55

TÀI LIỆU THAM KHẢO 56

PHỤ LỤC 60

Trang 10

-Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

MỞ ĐẦU

Việt nam là nước có hệ thực vật rất phong phú và đa dạng Tổng số loài thực vật đã ghi nhận cho Việt Nam là 10500 loài, ước đoán hệ thực vật Việt Nam có khoảng 12000 loài Trong số này, nguồn tài nguyên cây làm thuốc chiếm khoảng 30% Kết quả điều tra nguồn tài nguyên dược liệu ở Việt Nam giai đoạn 2001-2005 của viện Dược liệu (2006) cho biết ở Việt Nam có 3.948 loài thực vật bậc cao, bậc thấp và nấm lớn được dùng làm thuốc Những cây thuốc có giá trị sử dụng cao, có khả năng khai thác trong tự nhiên là những cây thuốc nằm trong danh mục 185 cây thuốc và vị thuốc thiết yếu của Bộ Y

tế cũng như những cây thuốc đang được thị trường dược liệu quan tâm gồm

206 loài cây thuốc có khả năng khai thác

Hiện nay người ta có xu hướng quay trở về với cây thuốc và thuốc có nguồn gốc thiên nhiên tạo ra hơn là hóa chất làm thuốc Xu hướng này đã tác động đến việc sản xuất, thu hái, chế biến, lưu thông, tiêu thụ và sử dụng dược liệu thảo mộc Để phù hợp với xu hướng cần thiết ấy các nhà khoa học đã và đang đẩy nhanh các nghiên cứu hoá học thực vật Ở nước ta, rất nhiều các dược phẩm có nguồn gốc từ thảo dược đã được nhiều người ưa chuộng bởi nó đem lại hiệu quả trị bệnh cao và hầu như không gây ra tác dụng phụ Chính vì vậy nhiều loài cây có giá trị sử dụng đã được khai thác và mang lại nguồn lợi kinh tế đáng kể

Cây cối xay là một loại thực vật có nhiều ứng dụng được nhân dân dùng với các mục đích phòng và chữa bệnh, nhưng số đề tài hóa học nghiên cứu về cây Cối xay chưa nhiều Để góp phần nghiên cứu thành phần hoá học

của cây cối xay ở Việt Nam chúng tôi chọn đề tài: ―Nghiên cứu thành phần

hóa học của cây Cối xay ‖ Nội dung chính của luận văn là xác định rõ cấu

trúc của một số hợp chất có trong thân cây Cối xay (Abutilon indicum (L)

sweet) nhằm góp phần hiểu biết thêm về thành phần hoá học của cây thuốc dân gian

Trang 11

Chương 1 TỔNG QUAN

1.1 Đặc điểm thực vật của cây Cối xay

Cây Cối xay hay còn gọi Nhĩ hương thảo, Ma mảnh [6, 10, 14], Giăng xay, Quýnh ma, Kim hoa thảo, Ma mảnh thảo, Ma bản thảo giàng xay, Co tó

ép (Thái), Phao tôn (Tày) [3], Cữu ma [6] , tên khoa học Abutilon indicum (L) Sweet hay Sida indica L [4] thuộc họ bông (Malvaceae ) [15], tên nước

ngoài: Indian abutilonn, Indian mallow, Twelve oclock flower [8],

Flowering maple, Country mallow, Moon flower [10, 11]

Phân bố, sinh học và sinh thái:

Là loại cây thấy mọc hoang khắp các tỉnh đồng bằng và Trung bộ trên các đồi núi thấp Cây mọc hoang ở khắp nơi trong cả nước, là loài cây của vùng Ấn Độ, Malaysia Cây ưa ẩm, ưa ánh sáng, chịu được bóng ở thời kì cây còn nhỏ Cây ra hoa quả nhiều hàng năm, lá rụng vào mùa đông hoặc mùa khô Mỗi quả có nhiều hạt, khi chín tự mở ra, hạt phát tán xung quanh, mùa xuân hạt nảy mầm, cây con mọc xung quanh gốc cây mẹ (thường thấy nhiều vào tháng 3–5) Người ta trồng làm thuốc bằng cách nhân giống từ hạt, gieo vào đầu mùa mưa Sau khi chặt, phần còn lại của cây vẫn có khả năng tái sinh [3, 7, 10] Mùa hoa: tháng 2-3, mùa quả: tháng 4-6 [3, 4, 6, 8, 14]

Cây Cối xay là loại cây gỗ nhỏ, thân non màu xanh, có nhiều lông mịn, một bên thân có màu tím, một bên màu xanh Lá đơn, mọc cách, dài 8-9 cm, rộng 8-11 cm Phiến lá hình tim mũi nhọn, mép lá răng cưa không đều, màu xanh đậm ở mặt trên và nhạt hơn ở mặt dưới, có lông mịn ở cả hai mặt, gân chân vịt có 8- 9 gân chính, có lông mịn Cuống lá hình trụ, dài 8-9 cm, màu xanh ở mặt lưng và màu tím ở mặt bụng, có nhiều lông mịn, lông dài hơn ở nơi giáp giữa cuống và phiến lá, gốc cuống hơi phình, dài 3-5 mm, có màu xanh;

Trang 12

có đốt gần ngọn cuống Lá kèm: có lông, hình chỉ dài 3-5 mm, màu xanh, hơi tím ở gốc, đỉnh có chấm màu tím đen Hoa đơn độc ở nách lá gần ngọn, đều, lưỡng tính Cuống hoa hình trụ dài 5-7 cm, màu xanh, có lông mịn, có đốt gần ngọn Đế hoa màu xanh, lồi hình chén, dài 1,5-2 mm, mặt ngoài có lông mịn Đài hoa: 5 lá đài đều, màu xanh, dính nhau ở phần dưới tạo thành ống hình chén cao 2-3 mm, trên chia 5 thùy hình tam giác dài 2-3 mm, đỉnh có mũi nhọn dài 0,2-0,5 mm; nhiều lông mịn ngắn ở mặt ngoài và dài ở mặt trong; có 1 gân kéo dài từ gốc tới đỉnh lá đài; tiền khai van Tràng hoa: 5 cánh hoa màu vàng tươi, đều, rời, hình nêm thuôn nhỏ về phía gốc, móng ngắn hình tam giác dính vào đáy ống chỉ nhị; nhiều gân dọc màu vàng; tiền khai vặn theo chiều kim đồng hồ Bộ nhị: nhiều, chỉ nhị có lông, màu vàng, dính nhau ở phần dưới thành ống hình trụ dài 4,5-5,5 mm, bao lấy bầu và vòi nhụy, bên trên rời hình sợi dài 2,5-3 mm; bao phấn màu vàng, hình thận, dài 0,5-1 mm, rộng 0,3-0,5

mm, 1 ô, nứt dọc, hướng ngoại, đính giữa; hạt phấn rời, màu vàng, hình cầu gai, đường kính 40-60 µm Bộ nhụy: 16-20 lá noãn rời xếp cạnh nhau, 16-20 ô mỗi ô có 3 noãn, bầu trên dài 3-4 mm, có lông màu trắng phủ kín mặt ngoài; 16-20 vòi nhụy đính đỉnh bầu, màu xanh nhạt, dài 4-5 mm, phía dưới dính nhau thành 1 ống dài 1,5-2 mm nằm trong ống chỉ nhị, bên trên rời choãi ra mọi hướng xen lẫn bao phấn; đầu nhụy hình khối tròn, màu trắng Quả bé màu xanh khi non, già có màu đen, gồm nhiều quả hình thận có một gai nhọn ở đỉnh, dài 8-10 mm Hạt màu đen, dài 3-4 mm [19]

Bộ phận dùng, chế biến, bảo quản:

Toàn cây (rễ, thân, lá, hoa, quả) được dùng làm thuốc

Vỏ thân cây cho một thứ sợi trắng bóng, có thể dùng làm dây buộc hoặc bện thừng, làm giấy…[4, 12, 14]

Thu hái toàn cây vào hè thu, đem rửa sạch đất, cắt khúc ngắn, dùng

tươi hoặc phơi sấy khô để dùng dần [18]

Trang 13

Bảo quản: Để nơi khô ráo, tránh mốc

Hình 1.1: Hình ảnh về cây Cối xay 1.2 Công dụng của cây Cối xay

Nghiên cứu hoạt tính sinh học của cây Cối xay, các nhà khoa học trên thế giới đã phát hiện được nhiều đặc tính quý giá từ cây này:

Dịch chiết nước của cây Cối xay có tác dụng tăng cường khả năng hấp thụ glucozo, kích thích tiết insulin trên các loài gặm nhấm [29, 38], bảo vệ tế bào gan [33], tác dụng giảm đau [22]

Nghiên cứu khả năng làm giảm hàm lượng glucozo trong huyết tương sau ăn trong một mô hình động vật mắc bệnh tiểu đường, tăng đường huyết sau khi ăn kể từ khi là một trong những biến chứng ở bệnh nhân tiểu đường cho thấy cây cối xay kháng isnulin thông qua PPAR kích hoạt và tăng cường hấp thụ glucozo [23]

Trang 14

Dịch chiết metanol từ lá cây Cối xay có tác động hạ glucozo máu ở chuột mắc bệnh tiểu đường một cách hiệu quả do hiêu lực ức chế tăng đường huyết sau khi ăn thông qua một glucosidasa ức chế [21]

Dịch chiết metanol các bộ phận khác nhau của cây Cối xay đã được thử nghiệm cho khả năng ức chế tác nhân gây nấm da ở người Việc sàng lọc cho các hoạt đông kháng nấm được thực hiện bằng cách kiểm tra nồng độ tối thiểu

và phương pháp khuyếch tán đĩa Dịch cây Cối xay có khả năng chống lại

C.utilis và A.fumigatus đặc biệt hiệu quả [35]

Dịch chiết thô của lá cây Cối xay trong metanol có tác dụng chống lại các vi khuẩn gram dương, vi khuẩn gram âm và nấm [32]

Dịch chiết cồn – nước của cây Cối xay có lợi trong điều trị miễn dịch kém và có thể kiểm soát hiệu quả hàm lượng mỡ trong máu bằng cách can thiệp vào quá trình sinh tổng hợp của các cholesterol và sử dụng của lipit [36]

Dich chiết etanol của lá cây Cối xay có tác dụng hiệu quả trong hoạt động chống co giật trên động vật thí nghiệm [24]

Dịch chiết từ cây Cối xay có khả năng diệt các ấu trùng gây bênh sốt rét [20]

Dịch chiết bằng cồn của cây Cối xay có ảnh hưởng đến hệ thần kinh trung ương, có tác dụng hạ nhiệt trên súc vật thí nghiệm [3, 8]

Hoạt chất gosypin có tác dụng ức chế phù bàn chân chuột do caragenin gây nên, đồng thời ức chế sự thẩm thấu của protein huyết tương ra ngoài thành mạch [3]

Ở Việt Nam trong những năm kháng chiến chống Mỹ, cán bộ quân dân y Nghĩa Bình phát hiện cây Cối xay có tác dụng chống viêm mạnh và dùng chữa đau khớp Thử nghiệm trên chuột nhắt trắng gây viêm bằng tiêm dịch treo kaolin vào gan bàn chân, thuốc đã ức chế phù nề được 84,4% sau 5h [3, 8]

Trang 15

Theo các nghiên cứu hiện đại cho thấy cây Cối xay có tác dụng tốt trong việc điều trị các bệnh về nội khoa, nó có tác dụng lớn trong chữa trị bệnh viêm khớp do cây Cối xay có khả năng kiểm soát việc sản xuất tự động kháng nguyên do biến tính của protein trong các bệnh thấp khớp, đồng thời có tác dung khống chế các yếu tố gây ra ức chế hồng cầu được biết đến là một chỉ số rất tốt chống viêm hoạt động của bất kì tác nhân nào [34]

Trong đông y, nó là một vị thuốc quý, có vị hơi ngọt, tính mát, có công hiệu giảm đau do cảm gió, thanh huyết nhiệt, giải độc lọc máu, khai khiếu, hoạt huyết, chữa mụn nhọt, thông tiểu tiện, chữa sốt, chữa tiểu đỏ… Thường dùng chữa sổ mũi, sốt cao, nhức đầu do phong nhiệt, viêm tuyến mang tai truyền nhiễm, đau tai, ù tai, giảm thính lực, tiểu tiện ít, nước tiểu vàng, tiểu rắt, tiểu buốt [1]

Theo tài liệu Ấn Độ, Đằng xay được sử dụng làm giảm đau, kích thích tình dục, nhuận tràng, lợi tiểu, tăng lực, chống viêm…: Vỏ cây có chất làm se

và lợi tiểu được dùng để giả nhiệt [4, 10] ; hạt có tác dụng kích dục, nhuận tràng, tiêu viêm và làm bớt đau, hạt chữ xích bạch lỵ, mụn nhọt mắt có mộng ,viêm bàng quang mãn tính và bệnh lậu [3, 4, 8, 11, 28] ; lá Cối xay có chất nhầy nên có tác dụng làm dịu kích thích, hạ sốt, thông tiểu tiện, thường dùng chữa cảm sốt phong nhiệt, nhức đầu, bí tiểu, hạt có tác dụng làm dịu và nhuận trường [4, 8, 10]; hoa được dùng để làm tăng tinh dịch ở nam giới [1] Rễ giúp hạ sốt, nhức đầu, ho, viêm cuống phổi, bạch đới, kiết, di tinh, băng huyết, trấn tĩnh tinh thần, trừ phong [10]

Kiêng kị: Người có thận hư hàn, tiểu tiện nhiều và trong, ỉa chạy thì không nên dùng; phụ nữ có thai phải dùng cẩn thận

Một số bài thuốc của cây cối xay

Theo lương y Phạm Ngọc (52_Hải Thượng lãn Ông_thị xã Ninh Bình) thì cây Cối xay được dùng để chữa một số loại bệnh sau:

Trang 16

Chữa cảm sốt (kể cả đau đầu, ù tai, bí tiểu tiện), bạch đới: Rễ hoặc lá

cây Đằng xay 4 - 8g, sắc uống ngày 1 thang, chia 2 lần

Chữa mụn nhọt, rắn cắn: Dùng lá tươi và hạt cây Đằng xay từ 8 - 12g,

giã nhỏ, thêm nước vắt lấy nước cốt uống (dùng trị cả lỵ), bã đắp lên mụn nhọt hoặc nơi vết rắn cắn

Chữa vàng da hậu sản: Lá Đằng xay 12 - 16g, nhân trần 15g, sắc lấy

nước uống thay nước trong ngày Cần uống 5 - 7 ngày liền

Làm tăng lƣợng tinh dịch: Hoa Đằng xay 15 - 20g, sắc hãm lấy nước

uống hằng ngày (theo tài liệu của Ấn Độ) [15]

Làm thông sữa, nhuận tràng (chữa phụ nữ tắc sữa, thiếu sữa, bệnh

đường niệu, ung nhọt): Dùng đông quỳ tử 10 - 15g, sắc uống, ngày 1 thang; (đông quỳ tử tức là hạt già đã chế biến khô của cây Cối xay của Trung Quốc, còn gọi là cây Thương ma tên khoa học Abutilon avicenae Gaertn, họ bông Malvaceae, có vị ngọt, tính hàn, đi vào kinh đại tràng và tiểu tràng có công năng lợi tiểu, thông sữa, nhuận tràng) [15]

Chữa cảm sốt, nhức đầu do phong nhiệt: Cây Cối xay 12-16g, lá tre

8g, bạc hà 6g, kinh giới 8g, kim ngân hoa 12g Nấu với 750ml nước sắc còn 250ml, chia 2 lần, uống trước bữa ăn [1]

Chữa sốt vàng da, phụ nữ sau khi sinh bị cảm phong nhiệt: Lá Cối

xay 12-16g, lá cách 16g, nhân trần 12-16g, nấu với 500ml nước Sắc còn 250ml, chia 2 lần, uống trước bữa ăn [1]

Chữa đau tai, ù tai, thính lực giảm: Quả Cối xay 30g (hoặc toàn cây)

tươi 60g, nấu canh với thịt heo nạc để ăn trong bữa cơm [1]

Chữa phụ nữ sau khi sinh bị phù thũng: Lá Cối xay 20-30g, ích mẫu

12-16g, nấu với 300ml nước Sắc còn 150ml, chia 2 lần, uống trước bữa ăn [1]

Kiết lỵ hay mắt cá màng mộng: Quả Cối xay, hoa Mào gà mỗi vị 30g,

sắc uống [1]

Trang 17

Chữa tiểu tiện bí, tiểu rắt, tiểu buốt: Cây Cối xay 30g, bông mã đề

20g, rễ tranh 20g, râu bắp 12g, cỏ màn trầu 8g, rau má12g Nấu với 650ml nước sắc còn 250ml, chia 2 lần, uống trước bữa ăn [1]

Chữa đái tháo đường: Cây Cối xay 20g, râu dê 20g, mua lông 20g, cây

đuôi chó 20g Dùng tươi thái nhỏ, ngày 1 thân, sắc chia 3 – 4 lần uống trong ngày Thời gian dùng thuốc tùy theo bệnh nặng hay nhẹ [12]

Chữa đau viêm khớp: Lá và thân cây Cối xay 3g, trinh nữ 10g, rau

muống biển 3g, lá lạc tiêu 3g, rễ cỏ xước 3g, lá vòi voi 3g, lá lốt 3g, hãm uống như nước chè trong ngày [3]

Chữa phong thấp, thấp khớp: Rễ đinh lăng 12g, Cối xay, hà thủ ô,

huyết rong, rễ cỏ xước 3g, thiên niên liện tất cả 8g, vỏ quýt, quế chi 4g (riêng

vị quế chi bỏ vào sau cùng khi sắc) Đổ 600ml nước, sắc còn 250ml chia làn 2 lần uống trong ngày, uống khi thuốc còn nóng [7]

Chữa mụn nhọt ngoài da, rắn cắn: Lá tươi và hạt giã, thêm nước

uống, bã dùng để đắp vào chỗ mụn nhọt, rắn cắn [3, 4]

Đau tai, tật điếc: Cối xay 60g hoặc 20- 30 g quả, nấu với thịt lợn

ăn Đối với tật điếc, dung rễ Cối xay, mộc hương, vong giang nam, mỗi vị 60g, nấu với đuôi lợn ăn [4]

Kiết lị, mắt đỏ có màng mộng: Quả Cối xay, hoa mào gà mỗi vị 30g

sắc uống [3, 9]

Chữa mẩn ngứa: Lá đơn đỏ, lá xấu hổ, lá Cối xay mỗi vị 12g, rửa sạch

cho vào nồi đổ nửa lít nước, sắc còn 2/3 bát ăn cơm, ngày uống 1 đến 2 lần [7]

Kinh phong: Rễ ngâm giấm uống (40g rễ trong 1 lít giấm thành, mỗi

lần dùng 1 thìa xúp) [4]

1.3 Tình hình nghiên cứu hóa học cây Cối xay ở nước ngoài và ở Việt Nam

Các công trình nghiên cứu về thực vật nói chung và thực vật Abutilon indicum L nói riêng với mục đích chủ yếu là làm rõ về thành phần hóa học, để

Trang 18

hiểu rõ các ứng dụng của nó nhằm phục vụ cho lợi ích của con người Trên

thế giới cũng đã có nhiều công trình ghiên cứu về thực vật Abutilon indicum

L Như là: Người ta đã phân lập và nhận dạng được chất thuộc các nhóm chất khác nhau như tritecpenoit, flavonoit, chalcon, steroit, poliphenol, hợp chất acid, amin…các đường glucozo, fructozo, glactozo [23, 28, 36, 37, 34]

1.3.1 Những hợp chất tecpenoit

Năm 1989, hai nhà khoa học Prem Vrata Shama và Ahmad Zafarul đã xác

định được 2 sesquiterpene lactones trong Abutilon indicum phân tích chi tiết các

phổ UV, IV, NMR và phổ MS của các chất được phân lập, các tác giả đã đưa ra cấu trúc hóa học của chúng đó là Alantolactone và isoalantolactone [34]

Elemen

OH

Farnesol

Trang 19

Jain PK còn tìm thấy trong cây Cối xay có chứa monotecpen, một chất khá

phổ biến là geraniol, geranylaxetat [27]

OH

Geraniol

O O

Ganylaxetat

Không chỉ phát hiện được các mono, serquitecpen mà các tác giả trên còn nhận biết sự có mặt của các tritecpen có trong thành phần hóa học của cây Cối xay Tại trường đại học Dược Thẩm Dương (Trung Quốc) 3 nhà khoa học là Liu

Na, jia Ling-yun và Sun Qi-shi [27] đã phân lập được hai tritecpen từ cây Cối xay, các ông đã xác định được cấu trúc hóa học của nó là: Urenol và axit Oleanolic

Trang 20

1.3.2 Những hợp chất steroid

Khi nghiên cứu về cây Cối xay tiến sĩ Trần Đình Thắng cũng đã tìm thấy được các hợp chất steroit và xác lập được công thức hóa học của nó là: β – sitosterol, stigmasterol [16]

3 5

15 17 12

HO

H

Stigamasterol

10 1.3.3 Các hợp chất flavonoit

Trong những nghiên cứu về cây thuốc, các tác giả Liu Na, Jia yun, Sun Qi-shi( đại học Dược Thẩm Dương Trung Quốc) đã phân lập được

Ling-bảy hợp chất flavonoid: Từ hoa của loài Abutilon indicum, các chất này đã

được các tác giả khảo sát chi tiết các đặc trưng phổ của chúng và quy kết công thức cấu tạo của chúng là các chất: luteolin, chrysoeriol, luteolin 7-O-β-D -

Trang 21

7-O-β-Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn

3-O-α-rhamnopyranosyl (1.6)-β-glucopyranoside [27]

OH

OH O

HO

O OH

OH

OH O

OH OH

HO

O OH

Luteolin-7-O-β-D-glucoside

13

O O

O OH

OH

O CH

Chrysoeriol-O-β-D-glucoside

14

Trang 22

O O

O OH O

OH OH

Bên cạnh các chất ở trên thì nhóm tác giả xác định Kaushik P., Kuashik D.,

Khokra S., Chaudhary B tìm thấy trong Anbutilon indicum có chứa gosypetin –

7-O-β-D – glucosit, gossypetin – 8 – glucosit, cyanidin – 3 rutinosit, tocpherol và một số flavonoit [28]

O

OH

OH O

OH

OH O

OH HO

Trang 23

O

O HO

OH

rurin O

OH OH

HO

Apigetrin

20

1.3.4 Các hợp chất poliphenol

Năm 2000, M Ahed, S Amin, Takahashi M, Okuvama E, Cf Hossain ở Ấn

Độ trong quá trình nghiên cứu Abutilon indicum đã phân lập được eugenol [31]

OH

OMe

21

Trang 24

Năm 2009 Ravi Rajurkar và các cộng sự khi nghiên cứu Abutilon indicum đã chứng minh được: Rễ cây có chứa nhiều axit béo khác nhau như:

axit linoleic, stearic, panmitic, galic, methylparaben và một số ancaloit [37]

OH OH

OH

Catechin

24

1.3.5 Các hợp chất Ancaloit

Khi nghiên cứu về Abutilon indicum rất nhiều tác giả cũng đã phân lập được

các ancaloit khác nhau như 1-mettetoxycacbonyl, N-feruloyltyrosin [16, 27, 28, 30]

N

N COOCH

3 H

1-mettoxycacbonyl-cacbonin

25

Trang 25

N H

OH OH

HO

O O

Trang 26

Chương 2 PHẦN THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

2.1.1 Thu mẫu lá cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lí mẫu

Đối tượng nghiên cứu là than và lá cây Cối xay được thu hái vào tháng

7 năm 2011 tại xã Mỹ Bằng, huyện Yên Sơn , tỉnh Tuyên Quang

Mẫu cây đem nghiên cứu hoá thực vật được PGS.TS Lê Ngọc Công (Khoa Sinh- KTNN trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên) giám định tên

khoa học là Abutilon indicum(L) Sweet thuộc họ bông Malvaceeae Ngoài ra

còn có tên là còn gọi nhĩ hương thảo, giăng xay, quýnh ma, kim hoa thảo, ma mảnh thảo, ma bản thảo giàng xay, co tó ép (Thái), phao tôn (Tày) Mẫu thân cây tươi sau khi thu hái được sấy ở 1100C để diệt men, sau đó sấy khô ở

nhiều lần trong dung môi metanol ở nhiệt độ phòng

Sau khi cất thu hồi dung môi, cặn cô thu được dưới dạng siro lại được hoà với nước cất rồi đem lắc chiết lần lượt với các loại dung môi tinh khiết có

độ phân cực tăng dần: n-hexan, clorofom, etyl axetat, metanol, các dịch chiết được làm khan bằng Na2SO4 rồi đem cất thu hồi dung môi bằng thiết bị cất

phân chia bằng sắc kí cột với các hệ dung môi rửa giải có độ phân cực tăng dần để phân lập chất có độ phân cực gần giống nhau, tinh chế các chất chúng tôi dùng phương pháp rửa nhanh, kết tinh phân đoạn và kết tinh lại trong hệ dung môi thích hợp

2.1.2 Phương pháp phân lập các hợp chất từ các dịch chiết

Để phát hiện, phân lập được những hợp chất sạch từ các dịch thô khác nhau của cây Cối xay, chúng tôi đã phối hợp sử dụng các phương pháp sắc kí

và kết tinh lại trong dung môi thích hợp, các phương pháp gồm:

Trang 27

- Sắc kí lớp mỏng (SKLM)

- Sắc kí cột silicagel pha thường với chất hấp phụ silicagel 63- 200nm

- Kết tinh phân đoạn và kết tinh lại

2.1.3 Phương pháp khảo sát và xác định cấu trúc hoá học các hợp chất

Sau khi làm sạch các chất kết tinh, xác định được những tính chất vật lý đặc trưng: màu sắc, mùi vị, hệ số Rf, điểm nóng chảy, ghi các loại phổ như: phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H- NMR, phổ 13C- NMR, tuỳ theo từng loại chất Các số liệu phổ thực nghiệm của các chất sạch được dùng để nhận dạng cấu trúc hoá học của chúng

2.2 Dụng cụ, hoá chất và thiết bị nghiên cứu

2.2.1 Dụng cụ và hoá chất

Các loại dung môi dùng để ngâm, chiết mẫu là các loại tinh khiết (pure) Còn các loại dung môi dùng để sắc kí cột, sắc kí lớp mỏng hay dùng trong phân tích là loại tinh khiết phân tích (PA)

Sắc kí lớp mỏng dùng tấm mỏng đế nhôm DC-Alufolien Kiesegel 60

F254 Art.5554 tráng sẵn, độ dày 0,2mm được sử dụng để xác định sơ bộ số thành phần có trong các dịch chiết, các phân đoạn chạy cột và kiểm tra sơ bộ

độ sạch của sản phẩm thu được

Các hệ dung môi khai triển SKLM:

Các tấm SKLM sau khi đã bay hết dung môi được soi dưới đèn tử

Trang 28

thuốc thử là vanilin 1% trong dung dịch metanol-H2SO4, sau đó sấy ở nhiệt

độ trên 1000

C

Các giá trị Rf trong hệ dung môi triển khai có biểu thức:

2.2.2 Thiết bị nghiên cứu

- Nhiệt độ nóng chảy đo trên máy Boetus (Đức) hoặc trên máy Eletronthermal IA - 9200

- Phổ hồng ngoại ghi trên máy SHIMADZU

- Phổ 1H-NMR và 13C-NMR ghi trên máy Bruker Advance 500MHz

2.3 Các dịch chiết từ thân cây Cối xay ( Abutilon indicum (L) Sweet)

2.3.1 Các dịch chiết

Thân và lá cây Cối xay đã sấy khô cân lấy 2kg và được nghiền nhỏ ngâm chiết kiệt bằng dung môi metanol ở nhiệt độ phòng nhiều lần cho đến khi thu được dịch không màu Dịch chiết được cất loại hết dung môi ở áp suất giảm cho đến dạng cao lỏng, sau đó thêm nước vào cặn và lần lượt chiết với các loại dung môi n-hexan, etyl axetat, n-butanol Cuối cùng đuổi hết nước và hoà tan bằng dung môi metanol

Các dịch chiết trên được làm khan bằng Na2SO4 lọc và cất dung môi bằng thiết bị cất quay dưới áp suất giảm ở nhiệt độ 500C Cặn được sấy khô

và cân để xác định trọng lượng theo sơ đồ 2.1

Như vậy cây Cối xay đã thu nhận được 03 phân đoạn cặn là: cặn trong n-hexan (HA), cặn trong etyl axetat (EA) và cặn trong n-butanol (BuA)

chiều dài di chuyển của chất thử chiều dài di chuyển của dung môi

Rf =

Trang 29

Sơ đồ 2.1 Quy trình ngâm chiết và phân lập chất từ thân và lá

Bảng 2.1 Khối lƣợng chất tổng số đƣợc chiết từng phân đoạn thân cây

Cối xay(Abutilon indicum(L)Sweet)

2.3.2 Khảo sát định tính các dịch chiết

2.3.2.1 Phát hiện các flavonoit

Cân 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 10ml metanol, đun nóng cho

tan rồi lọc qua giấy lọc Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ít bột

magie (Mg), sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bình cách thuỷ vài

phút Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hoặc màu hồng là phản ứng dương tính

với các flavonoit

Mẫu lá khô nghiền 2kg nhỏ

n-butanol (BuA)

Cặn tổng Metanol

1 MeOH

2 Cất thu hồi dung môi áp suất thấp

Etyl axetat (EA)

Trang 30

Lấy 2 ống nghiệm mỗi ống cho 2ml dịch thử Ống 1 cho 1ml HCl loãng,

ống 2 cho 1ml NaOH loãng rồi bịt miệng ống nghiệm, lắc trong vòng 5 phút theo chiều dọc, quan sát sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt Nếu bọt cao quá 3 - 4cm và bền trên 15 phút là phản ứng dương tính

2.3.2.4 Phát hiện các cumarin

Cân 0,01g cặn của các phân đoạn Hoà tan cặn trong 5ml clorofom, lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính

Lấy vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml dịch thử cho vào một trong 2 ống

đó 0,5ml dung dịch NaOH 10% Đun cách thuỷ cả hai ống trên đến sôi, để nguội rồi mỗi ống cho thêm 4ml nước cất Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm có thể xem là phản ứng dương tính Nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong mất màu vàng sau đó xuất hiện vẩn đục và có thể tạo ra kết tủa là phản ứng dương tính

Ngoài ra, có thể làm phản ứng điazo hoá với axit sulfanilic trong môi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, sẽ là dương tính cho cumarin

Trang 31

2.3.2.5 Định tính các glucosit tim

Chuẩn bị dịch thử định tính cũng làm như mục 2.3.2.4

+ Phản ứng Legal: cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch thử, thêm vào 1 giọt dung dịch natri prussiat 0,5% và 2 giọt NaOH 10% nếu xuất hiện màu đỏ là phản ứng dương tính với vòng butenolit

+ Phản ứng Keller-Kilian: Thuốc thử gồm 2 dung dịch

Dung dịch 1: 100ml axit H2SO4 đậm đặc+1ml FeCl3 5%

Dung dịch 2: 100ml axit axetic loãng+1ml FeCl3 5%

Cách tiến hành: cân 0,01g cặn các dịch chiết cho vào ống nghiệm thêm

vào 1ml dung dịch 1, lắc đều cho tan hết, nghiêng ống nghiệm và cho từ từ 1ml dung dịch 2 theo thành ống nghiệm, quan sát sự xuất hiện của màu đỏ hay nâu đỏ, giữa hai lớp chất lỏng Nếu không xuất hiện màu là phản ứng âm tính với các glucosit tim

2.3.2.6 Phát hiện các hợp chất steroit

Cân 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 2ml dung dịch NaOH 10% đun cách thuỷ đến khô Hoà tan cặn trong 3ml clorofom, lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính các steroit và thuốc thử Lieberman-Bourchardt (gồm hỗn hợp 1ml anhydrit axetic+1ml clorofom để lạnh ở 00C, sau đó cho thêm 1 giọt

H2SO4 đậm đặc) Lấy 1ml dịch clorofom rồi thêm 1 giọt thuốc thử, dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tính

Kết quả phân tích định tính các nhóm chất trong lá cây Cối xay được nêu trong bảng 2.2

2.3.2.7 Phát hiện các hợp chất đường khử

Cân 0,01g cặn hòa vào 5ml etanol, lắc đều, lấy dịch etanol làm dịch thử Lấy 2ml dịch thử vào ống nghiệm và cho thêm vào đó 2ml thuốc thử Felinh, đun sôi 2-3 phút Nếu có kết tủa đỏ gạch của Cu2O thì chứng tỏ có mặt của đường

Trang 32

24h rồi lọc lấy dung dịch nghiên cứu

Lấy 1ml dung dịch nghiên cứu cho vào ống nghiệm, thêm vào đó 2ml nước

và một giọt dung dịch FeCl3 Nếu có màu xanh đến xanh đen thì chứng tỏ có poliphenol

2.3.2.10 Xác định catechin

Lấy 5 gam nguyên liệu thực vật nghiền nhỏ ngâm trong 15ml dung dịch C2H5OH Lắc đều và để yên trong 24h, lọc lấy dung dịch nghiên cứu Lấy 1ml dung dịch nghiên cứu cho vào ống nghiệm, thêm vào đó vài giọt vanilin 2% trong axit HCl đặc Nếu có màu đỏ xuất hiện thì chứng tỏ có catechin

2.3.3 Kết quả khảo sát định tính các dịch chiết

Dùng các thuốc thử đặc hiệu để phát hiện các nhóm hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh lí cao trong than và lá cây Cối xay, chúng tôi thu được kết quả thử định tính với các nhóm chất, kết quả được chỉ ra ở bảng 2.2

Trang 33

Bảng 2.2 Phát hiện các nhóm chất trong thân cây Cối xay

(Abutilon indicum(L) Sweet)

STT Tên nhóm

Kết quả

Dung dịch Đragendooc Dung dịch axit picric 10%

Kết tủa vàng da cam Kết tủa màu vàng ( Tinh thể hình kim)

+++ +++

tim Phản ứng Keller- Kilian Vành đỏ hay đỏ nâu giữa hai lớp +++

Đỏ tím

+++ +++ +++ ++

Ghi chú: Dấu (+) là có phản ứng dương tính, (-) là không có phản ứng

Trang 34

2.3.4 Thử hoạt tính sinh học

Thử hoạt tính vi sinh vật kiểm định bằng định tính theo phương pháp khuếch tán trên thạch, sử dụng khoang giấy lọc tẩm chất thử theo nồng độ tiêu chuẩn tại bộ môn Vi sinh trường Đại học Y Thái Nguyên

Các chủng vi sinh vật thử gồm đại diện các nhóm:

Salmonella spp

Shigella spp

Hình 2.2 Ảnh được gây ức chế xung quanh giếng thạch

Trang 35

Bảng 2.3 Kết quả thử hoạt tính sinh học của cặn chiết thô

từ than và lá cây Cối xay (Abutilon indicum)

Tên/kí hiệu mẫu

2.4 Chiết suất, phân lập và tinh chế các chất từ thân cây Cối xay

Từ 2kg thân và lá cây Cối xay khô chiết nhiều lần bằng dung môi metanol đến khi dịch chiết trong suốt không màu Loại bỏ dung môi rượu bằng máy cất quay ở nhiệt độ 500C đến khi dịch chiết còn lại ở dạng siro đặc, thêm 500 ml nước, lắc cặn tổng số này với n-hexan đến khi thu được tất cả các chất có thể tan được trong n-hexan đều được lấy ra hết Làm khô dung dịch n-hexan bằng Na2SO4 sau đó cô cạn dung dịch n-hexan bằng thiết bị cất quay ở nhiệt độ thấp thu được 30,475g chất (kí hiệu các chất HA)

Phần dung dịch không tan trong n-hexan được lắc nhiều lần với etyl axetat cho đến khi dịch chiết etyl axetat hoàn toàn không màu và trong suốt Làm khô dung dịch này bằng Na2SO4 khan sau đó Cô cạn dịch etyl axetat trong máy cất quay thu được 45,846g chất tổng số (kí hiệu là các chất EA)

Các chất cặn còn lại không tan trong các dung môi trên được chiết bằng n-butanol, làm khô và cô cạn thu được 88,737g chất (kí hiệu là các chất BuD)

2.4.1 Cặn dịch chiết n-hexan

Lấy 10g cặn thân và lá cây Cối xay từ dịch n-hexan kí hiệu (HA) được phân chia trên sắc kí cột silicagel với các hệ dung môi n-hexan-etyl axetat với

Trang 36

các tỷ lệ tăng dần axetat từ 0% đến 100% Dịch rửa giải ra từ cột được thu ở những thể tích nhỏ (5-10ml/phân đoạn) Kiểm tra các phân đoạn trên sắc kí lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin-H2SO4 5%, các phân đoạn giống nhau đem gộp lại và cất loại dung môi thu được ba chất HA-1, HA-2 và HA-3

2.4.1.1 β- Sitosterol (HA-1)

Tiến hành phân chia nhờ sắc kí cột bằng hệ dung môi n-hexan:etyl axetat (95:05) Sau khi cất loại dung môi, cặn thu kiểm tra bằng sắc kí lớp mỏng trong hệ dung môi A, phát hiện nó bằng vanilin 1% trong dung dịch metanol-H2SO4 5%, kết tinh lại trong n-hexan thu được 16mg chất rắn, tinh

C, Rf=0,71 (trong

hệ dung môi A)

Tiến hành đo phổ chất HA-1 thu được các thông tin phổ như sau:

IR(ν max , cm-1): 3431,5 ( dao động hóa trị OH), 2931,3 ( dao động hóa trị CH); 1647,2 ( C=C);

Phổ 1

(3H, s, CH3-19); 0,81 (3H, d, j, 7Hz, CH3-26); 0,88 (3H, d, j, 7Hz, CH3-27); 0,83 (3H, t, 7,32Hz, CH3-29); 0,92 (3H, d, j, 10Hz, CH3-21); 3,52 (1H, m, H-

3); 5,42 (1H, d, j, 5Hz, H-6)

Phổ 13

71,8 (d, C-3); 42,3(t, C-4); 140,8 (s, C-5); 121,7 (d, C-6); 31,9 (t, C-7); 31,9 (d, C-8); 50,2 (d, C-9); 36,5 (s, C-10); 21,1 (t, C-11); 39,8 (t, C-12); 42,3 (s, C-13); 56,8 (d, C-14); 24,3 (t, C-15); 28,3 (t, C-16); 56,1 (d, C-17); 11,9 (q, C-18); 19,4 (q, C-19); 36,2 (d, C-20); 18,8 (q, C-21); 33,9 (t, C-22); 26,1 (t, C-23); 45,9 (d, C-24); 29,2 (d, C-25); 19,1 (q, C-26); 19,4 (q, C-27); 23,13 (t, C-28); 11,99 (q, C-29)

2.4.1.2- Chất HA-2

Tiếp tục rửa giải cột bằng bằng hệ dung môi n-hexan-etylaxetat (80:20)

n-hexan-etylaxetat tỉ lệ ( 7:3)

Trang 37

Trên phổ FT-IR chất HA-2 cho vân hấp thụ mạnh ở 1757,89 cm-1

và 1208,17 cm-1 đặc trưng cho dao động hoá trị của este, cho vân hấp thụ ở 1599

cm-1 đặc trưng cho dao động của vòng benzen

Phổ 13

1,5,H-3); 7,58 (1H,m, H-4); 7,37 (1H,m, H-5); 7,16 (1H,dd, j=8 và 8,5,H-6); 2,54 (3H,s, CH3-8); 2,30 (3H,s, CH3- 2’);

Phổ 13

C-NMR (125MHz,MeOD);  (ppm): 150,32 (t, C-1); 132,62 (t, C-2); 131,40(t, C-3); 134,62 (t, C-4); 127,21 (t, C-5); 124,91 (t, C-6); 199,76 (t, C-7); 20,03 (t, C-8); 171,13 (t, C’-1); 29,43 (t, C’-2);

2.4.1.3- Chất HA-3

Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan : etyl axetat (7:3) cặn thu được kiểm tra bằng sắc kí lớp mỏng trong cho Rf = 0,87, loại bỏ dung môi thu được 12mg chất rắn là những tinh thể màu trắng

Đo phổ chất HA-3 thu được các thông tin phổ như sau:

Trong phổ hồng ngoại FT-IR (KBr): max ở 3322,16 cm-1 (OH hoặc NH) 1634,44 cm-1 ( CC ) 1632 cm-1 ( CO amit bậc I (CONH)); 1563,08

cm-1 (NH)

Phổ1

H-NMR (500MHz,DMSO-d6); δ(ppm):7,44(1H,s,H-2); 7,45(1H,m,H-3); 7,12(1H,m,H-4); 7,45 (1H,m,H-5); 7,44 (1H,m,H-6); 3,12(1H,dd,j=13,5 và 5,9,H-7); 3,06(1H,dd,j=13,5 và 8,4,H-7); 4,82(1H,dd,j=6,0, H-8); 7,12 (1H,m,H-2’); 7,44 (1H,m,H-3’); 7,10 (1H,m,H-4’); 7,44(1H,m,H-5’); 7,12 (1H,m,H-6’); 2,85 (1H,dd, J=7,0 và 7,5,H-7’); 2,88(1H,dd,J=8,0 và 8,5,H-7’); 4,36 (1H,m,H-8’); 4,01 (1H,dd, j=6,3 và 4,9,H-9’); 3,92(1H,dd,j=6,5 và 4,3,H-9’); 2,02 (3H,s,CH3-10’); 7,25 (1H,m,H-2’’.); 7,30 (1H,m,H-3’’.); 7,54 (1H,m,H-4’’.); 7,30 (1H,m,H-5’’.); 7,25(1H,m,H-6’’.);

Trang 38

Phổ 13

C –NMR (125 MHz, DMSO-d6); δ (ppm): 139,89 (s,C-1); 129,49

(d,C-2); 128,45 (d,C-3); 127,80 (d,C-4); 128,45 (d,C-5); 129,49 (d,C-6); 38,97 (t,C-7); 56,62 (d,C-8); 172,58 (s,C-9); 138,47 (s, C-1’); 127,55 (d, C-2’); 129,46 (d, C-3’); 127,53 (d, C-4’); 129,46 (d, C-5’); 127,55 (d, C-6’); 38,09 (d, C-7’); 55,15 (d, C-8’); 66,14 (d, C-9’); 173,27 (s, C-10’); 135,27 (s,C-1’’); 130,34 (d,C-2’’); 130,28 (d,C-3’’); 132, 83 (d,C-4’’); 130,28 (d,C-5’’); 130,34 (d,C-6’’); 169,89 (s,C-7’’);

2.4.2 Cặn dịch chiết etyl axetat

Dịch chiết etyl axetat làm khan bằng Na2SO4, sau đó cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cặn thô Lấy 10g cặn thô EtOAc đem tách trên cột silicagel Rửa giải cột bằng hệ dung môi clorofom:metanol tăng dần theo độ phân cực (0:100%), dịch rửa giải thoát ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (510ml/phân đoạn) Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin - H2SO4 5% sau đó các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung môi thu được hai chất sạch là EA-1, và EA-2

H-NMR (500MHz, DMSO-d6); δ (ppm): 0,65(3H,s,Me-18); 0,93(3H,s,Me-19)

Phổ 13C –NMR (125 MHz, DMSO-d6); δ (ppm): phần genin 37,6 (t, C-1); 28,5(t, C-2);79,5(d, C-3); 39,1(t, C-4); 140,8 (s, C-5); 122,3 (d, C-6);

Trang 39

Thay đổi dung môi rửa giải cột bằng hệ chlorofom : metanol tỉ lệ (8:2)

thu được một chất tinh khiết khác chúng tôi kí hiệu là EA-2 Chất EA-2 sau

khi được rửa nhiều lần bằng Clorofom thu được 11 mg chất rắn màu trắng,

cho Rf = 0,72 trong hệ dung môi clorofom-metanol tỷ lệ 7:3

đến 3333,7 cm-1 ( OH ); 1642,16 cm-1( axit cacboxylic thơm)

Phổ 1

H-NMR (500MHz, DMSO-d6); δ (ppm): 5,45(1H,dd, j=3,0 và 3,5,H-1); 3,09 (1H,dd,j=3,0 và 3,5,H-2); 3,5 (1H,m, H-2); 6,81 (1H,m, H-4’);

Trang 40

Chương 3 THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 Nguyên tắc chung

Để phân lập được các hợp chất trong bất kỳ một thực vật nào mà không làm ảnh hưởng tới thành phần hoá học có trong nó thì trước khi ngâm chiết bằng dung môi hữu cơ, mẫu thực vật phải được đưa đi khử men ngay sau khi thu mẫu và sấy khô ở điều kiện thích hợp

Về nguyên tắc việc ngâm chiết mẫu thực vật có thể tiến hành theo 2 cách phổ biến sau

1 Chiết và phân lập các hợp chất từ mẫu thực vật bằng các loại dung môi có độ phân cực tăng dần: ete dầu hỏa hoặc n-hexan, cloroform, etylaxetat, metanol hoặc etanol v.v

2 Chiết tổng bằng các ancol (metanol, etanol) hay hệ dung môi ancol : nước Sau đó sàng lọc các hợp chất bằng các loại dung môi có độ phân cực tăng dần như phương pháp 1 để thu được các dịch chiết có chứa các hợp chất

có độ phân cực tương đối giống nhau

Việc chiết mẫu cây Cối xay- Abutilon indicum được thực hiện theo

cách 2 (Sơ đồ 2.1)

Các dịch chiết thô đem thử hoạt tính sinh học Điều đó giúp cho việc

định hướng tìm kiếm các hoạt chất trong những dịch chiết có hoạt tính mạnh với các chủng vi khuẩn đã thử nghiệm

3.2 Xác định hàm lượng chất hoà tan trong cây Cối xay trong dung môi nước

Bằng phương pháp đã nêu ở phần 2.4.1, sau khi tiến hành thí nghiệm chúng tôi thu được kết quả như sau:

Định dạng
Số trang	117
Dung lượng	2,63 MB