Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết trên động vật thực nghiệm của phân đoạn chiết chloroform từ thân cây ý dĩ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ ĐÔNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE HUYẾT TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM CỦA PHÂN ĐOẠN CHIẾT CHLOROFORM TỪ THÂN CÂY Ý DĨ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ ĐÔNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE HUYẾT TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM CỦA PHÂN ĐOẠN CHIẾT CHLOROFORM TỪ THÂN CÂY Ý DĨ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH MÃ SỐ: 60 72 04 08 Người hướng dẫn khoa học: TS. Phùng Thanh Hương HÀ NỘI 2013 Lời cảm ơn Trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn này, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, giúp đỡ quý báu của các thầy cô, các anh chị, các em và các bạn. Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc nhất tôi xin được bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới Ts. Phùng Thanh Hương, người thày luôn sát cánh tận tình hướng dẫn, quan tâm giúp đỡ cũng như động viên tôi trong suốt thời gian qua. Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu trường Trường đại học Dược Hà Nội, trường Cao đẳng Dược Trung ương Hải Dương, đã tạo điều kiện cho tôi được học tập và nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn Bộ môn Hóa sinh, Bộ môn Dược lý, Phòng sau đại học trường Đại Học Dược Hà Nội, Bộ môn Hóa dược trường Cao đẳng Dược Trung ương Hải Dương, đã tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và hoàn thành luận văn. Tôi xin cảm ơn các thày cô giáo, anh, chị, em kỹ thuật viên Bộ môn Hóa sinh, Bộ môn Dược lý trường Đại Học Dược Hà Nội, Bộ môn Hóa dược trường Cao đẳng Dược Trung ương Hải Dương, đã giúp đỡ tôi trong quá trình làm thực nghiệm tại Bộ môn Xin gửi lới cảm ơn tới bạn bè, các anh chị em đồng nghiệp trường Cao đẳng Dược trung ương Hải Dương, các bạn trong lớp Cao học 16 đã động viên và giúp đỡ tôi trong những lúc tôi gặp khó khăn. Lời cảm ơn cuối cùng tôi muốn giành tặng cho những người thân trong gia đình đã luôn ở bên cạnh động viên, giúp đỡ và giành mọi thời gian để tôi học tập làm việc và hoàn thành luận văn này. HV. Nguyễn Thị Đông MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH TRANG ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1 3 TỔNG QUAN 3 1.1. BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 3 1.1.1. Định nghĩa, phân loại và tiêu chuẩn chẩn đoán 3 1.1.2. Cơ chế bệnh sinh 4 1.1.2.1. Bệnh sinh đái tháo đường typ 1 4 1.1.2.2. Bệnh sinh đái tháo đường typ 2 6 1.1.3. Hướng tác dụng của thuốc điều trị đái tháo đường 9 1.1.3.1. Insulin [1] 9 1.1.3.2. Các thuốc làm tăng cường lượng insulin 9 1.1.3.3. Các thuốc tăng cường tác dụng của insulin ở mô đích 11 1.1.3.3. Các thuốc làm ức chế tiêu hóa hấp thu glucid 13 1.1.3.4. Các thuốc có tác dụng tương tự insulin trong điều hòa chuyển hóa glucid 13 1.2. CÁC MÔ HÌNH GÂY TĂNG GLUCOSE HUYẾT THỰC NGHIỆM.14 1.2.2. Đái tháo đường do di truyền 15 1.2.3. Động vật đái tháo đường typ 2 do chế độ dinh dưỡng 15 1.3. CÂY Ý DĨ 16 1.3.1. Đặc điểm hình thái 17 1.3.2. Phân bố 17 1.3.3. Thu hái 18 1.3.4. Bộ phận dùng 18 1.3.5. Thành phần hóa học 18 1.3.6. Các nghiên cứu về tác dụng dược lý 18 1.3.6.1. Các nghiên cứu trên thế giới về tác dụng dược lý của cây Ý dĩ 18 1.3.6.2. Các nghiên cứu trong nước liên quan đến tác dụng hạ glucose huyết của thân cây Ý dĩ 19 Chương 2 21 ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1. ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 22 2.1.1. Dược liệu nghiên cứu 22 2.1.2. Động vật thí nghiệm 22 2.1.3. Dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 23 2.1.3.1. Thiết bị, dụng cụ 23 2.1.3.2. Hóa chất nghiên cứu 23 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1. Phương pháp chiết xuất dược liệu và điều chế mẫu thử 24 2.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của HDCL trên chuột thực nghiệm 26 2.2.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của HDCL trên chuột nhắt trắng bình thường 27 2.2.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của HDCL trên chuột nhắt trắng tăng glucose huyết thực nghiệm bằng STZ 27 2.2.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của HDCL trên chuột cống trắng gây ĐTĐ typ 2 thực nghiệm 28 2.2.3. Các kỹ thuật định lượng hóa sinh 30 2.2.3.1. Định lượng glucose huyết 30 2.2.3.2. Định lượng insulin huyết thanh 31 2.2.3.3. Xác định hoạt độ enzym G6Pase gan 32 2.2.3.4. Đánh giá khả năng ức chế protein tyrosin phosphatase 1B in vitro của HDCL 34 2.2.4. Kỹ thuật xét nghiệm mô bệnh học 36 2.2.5. Xử lý số liệu 36 Chương 3 37 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1. Tác dụng của phân đoạn chiết chloroform thân cây Ý dĩ trên chuột nhắt trắng bình thường 37_Toc371443689 3.2. Tác dụng của phân đoạn chiết chloroform thân cây Ý dĩ trên chuột nhắt trắng tăng glucose huyết bằng streptozocin 38 3.2.1. Tác dụng trên mô hình tăng glucose huyết bởi STZ liều 200mg/kg 38 3.2.2. Tác dụng trên mô hình tăng glucose huyết bởi STZ liều 150mg/kg 39 3.2.2.1. Kết quả định lượng glucose huyết 40 3.2.2.2. Kết quả định lượng insulin huyết thanh 41 3.3. Kết quả ảnh hưởng của HDCL trên chuột cống trắng gây ĐTĐ typ 2 thực nghiệm 45 3.3.1. Kết quả về glucose huyết 45 3.3.2. Kết quả định lượng insulin huyết thanh 46 3.3.3. Kết quả hoạt độ enzym G6Pase gan 47 3.3.4. Kết quả trên mô bệnh học tụy 48 3.4. Kết quả ảnh hưởng của HDCL trên khả năng dung nạp glucose của chuột cống ĐTĐ typ 2 51 3.5. Kết quả đánh giá khả năng ức chế PTP1B in vitro 53 Chương 4 55 BÀN LUẬN 55 4.1. VỀ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE HUYẾT CỦA PHÂN ĐOẠN CHIẾT CHLOROFORM THÂN CÂY Ý DĨ 55 4.2. VỀ CƠ CHẾ TÁC DỤNG CỦA PHÂN ĐOẠN CHIẾT CHLOROFORM THÂN CÂY Ý DĨ 59 ĐỀ XUẤT 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1 PHỤ LỤC 2 DANH MỤC CÁC CHỮ KÝ HIỆU VIẾT TẮT CTLA-4 Cytotoxic T lymphocyte antigen-4 DM: Dung môi DPP4 Dipeptidyl-peptidase-4) ĐTĐ: Đái tháo đường FFA: Free fatty acid (acid béo tự do) GLP: Glucagon like peptide GLUT: Glucose transporter (yếu tố vận chuyển glucose) HDCL: Hỗn dịch pha từ cắn phân đoạn chiết chloroform IR: Insulin receptor IRS: Insulin receptor substrate LHA: Human leucocyte antigen (kháng nguyên bạch cầu người) PĐC: Cắn phân đoạn chiết chloroform thân cây Ý dĩ PEPCK: Phosphoenol pyruvate carboxykinase pHPS: Para hydroxybenzen sulfonic acid PPAR: Peroxisome proliferator activator receptor PTP1B: Protein tyrosine phosphatase 1B SGLT1: Sodium-glucose linked transporter STZ: Streptozocin TNF: Tumor necrosis factor DANH MỤC BẢNG TRANG Bảng 2.1. Thành phần dinh dưỡng trong khẩu phần ăn của chuột thí nghiệm.29 Bảng 2.2. Thành phần của các dung dịch insulin chuẩn……………… ………31 Bảng 2.3. Thành phần phản ứng đánh giá tác dụng trên PTP1B 35 Bảng 3.1. Ảnh hưởng của HDCL đến glucose huyết của chuột nhắt trắng bình thường 37 Bảng 3.2. Nồng độ glucose huyết của chuột nhắt trắng tăng glucose huyết bởi STZ liều 200 mg/kg 38 Bảng 3.3. Nồng độ glucose huyết của chuột nhắt trắng tăng glucose huyết bởi STZ liều 150 mg/kg…………………………………………………………………….40 Bảng 3.4. Nồng độ insulin huyết thanh của chuột nhắt trắng tăng glucose huyết bởi STZ liều 150mg/kg…………………………………………………………………42 Bảng 3.5. Hoạt độ enzym G6Pase của chuột gây tăng glucose huyết bởi STZ liều 150 mg/kg………………………………………………………………………………44 Bảng 3.6. Nồng độ glucose huyết của chuột cống ĐTĐ typ 2 sau 15 ngày uống mẫu thử…………………………………………………………………………………45 Bảng 3.7. Hoạt độ G6Pase gan của chuột ĐTĐ typ 2 sau 15 ngày uống mẫu thử…………………………………………….…………… ……………………… 48 Bảng 3.8. Mức độ ức chế PTP1B của các nồng độ cắn phân đoạn chiết chloroform thân cây Ý dĩ 54 DANH MỤC HÌNH TRANG Hình 1.1. Con đường truyền tin nội bào của insulin…………………………….… 7 Hình 1.2. Hình ảnh cây Ý dĩ (Coix lachryma-jobi (L). var. ma-yuen Stapf……17 Hình 2.1. Hình ảnh thân cây Ý dĩ (Coix lachryma-jobi (L). var. ma-yuen Stapf)22 Hình 2.2. Sơ đồ quy trình chiết xuất phân đoạn chloroform thân cây Ý dĩ… 25 Hình 2.3. Tóm tắt quy trình định lượng insulin……………………… ………….32 Hình 3.1. Mức độ hạ glucose huyết của các lô chuột trên mô hình tăng glucose huyết bởi STZ liều 200 mg/kg………………………………………………………39 Hình 3.2. Mức độ hạ glucose huyết của các lô chuột nhắt trắng trên mô hình gây tăng glucose huyết bởi STZ liều 150 mg/kg……………………………….…….…41 Hình 3.3. Đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa mật độ quang và nồng độ insulin……………………………………………….……………… 42 Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa mật độ quang và lượng phospho vô cơ…………………………………… ………………………………… …… 43 Hình 3.5. Nồng độ insulin huyết thanh của chuột cống bị ĐTĐ typ 2 sau 15 ngày uống mẫu thử………………………….……………………………………… ….….46 Hình 3.6. Ảnh vi thể tụy của chuột ở lô chứng âm, ( nhuộm HE x 400 lần)…………………………………………………………………………………… 48 Hình 3.7. Ảnh vi thể tụy của lô thử (nhuộm HE x 400 lần)………………. ….…49 Hình 3.8. Ảnh vi thể tụy của chuột ở lô chứng dương (nhuộm HE x 400 lần).50 Hình 3.9. Ảnh vi thể tụy của chuột ở lô 4 (chuột bình thường ăn chế độ bình thường (nhuộm HE x 400 lần)……………………… …………………………… 51 Hình 3.10. Sự thay đổi nồng độ glucose huyết của chuột cống ĐTĐ typ 2 trong test dung nạp glucose…………………………………………………………………52 Hình 3.11. Khả năng dung nạp glucose của chuột cống ĐTĐ typ 2 sau 2 giờ uống mẫu thử 53 Hình 4.1. Tiêu bản mô học tiểu đảo tụy của người bình thường, người bệnh béo phì không ĐTĐ, người bệnh ĐTĐ typ 2……………… ………………………….61 [...]... tài "Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết trên động vật thực nghiệm của phân đoạn chiết chloroform từ thân cây Ý dĩ" với 2 mục tiêu: 1 Đánh giá tác dụng hạ glucose huyết của phân đoạn chiết chloroform thân cây Ý dĩ trên động vật thực nghiệm 2 Bước đầu tìm hiểu cơ chế hạ glucose huyết của phân đoạn chiết chloroform từ thân cây Ý dĩ 2 Chương 1 TỔNG QUAN 1.1 BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.1.1 Định nghĩa, phân. .. các hướng nghiên cứu như sau: Thân cây Ý dĩ Phân đoạn chiết chloroform Thân cây Ý dĩ Tìm hiểu cơ chế hạ glucose huyết của phân đoạn chiết chloroform thân cây Ý dĩ Đánh giá tác dụng hạ glucose huyết của PĐC Trên glucose huyết của chuột nhắt bình thường Trên glucose chuột nhắt trắng gây tăng glucose huyết bằng STZ Trên chuột cống gây ĐTĐ typ 2 Trên các chỉ số hóa sinh Hoạt độ enzym G6Pas e gan, Trên khả... nước và dịch chiết ethanol không có sự khác biệt Từ dịch chiết ethanol, chúng tôi tiến hành chiết xuất và thử tác dụng hạ glucose huyết của các phân đoạn dịch chiết trên một mô hình thực nghiệm Kết quả sơ bộ cho thấy phân đoạn chloroform có tác dụng hạ glucose huyết tốt nhất Để tiếp tục nghiên cứu về tác dụng hạ glucose huyết và tìm hiểu cơ chế tác dụng hạ glucose huyết của thân cây Ý dĩ chúng tôi... cứu tác dụng chữa bệnh ở các mức độ khác nhau Cho đến nay, chưa có công bố nào về nghiên cứu trên thân cây Ý dĩ ở các nước khác trên thế giới Trong khi đó, rễ cây Ý dĩ đã được nghiên cứu với tác dụng chống viêm, đặc biệt, hạt cây Ý dĩ đã được nghiên cứu theo nhiều định hướng sinh học khác nhau - Tác dụng trên chuyển hóa glucose và lipid của nhân hạt Ý dĩ Dịch chiết nước hạt Ý dĩ có tác dụng hạ glucose. .. của hạt Ý dĩ : tác dụng chống dị ứng, tác dụng trên nội tiết: làm giảm sản xuất progesteron và estradiol [22] - Tác dụng chống viêm của rễ cây Ý dĩ : các hợp chất benzoxazinon được phân lập từ rễ cây Ý dĩ có tác dụng chống viêm thông qua cơ chế ức chế tế bào mast giải phóng histamin [33] 1.3.6.2 Các nghiên cứu trong nước liên quan đến tác dụng hạ glucose huyết của thân cây Ý dĩ Như đã trình bày ở trên, ... truyền, Ý dĩ có nhiều công dụng như: lợi sữa, kích thích tiêu hoá, chữa lỵ, viêm khớp, bồi bổ cơ thể [21] Các nghiên cứu về tác dụng sinh học của Ý dĩ chủ yếu tập trung vào hạt [22] Năm 2009, chúng tôi đã chứng minh được tác dụng hạ glucose huyết của dịch chiết nước của thân cây Ý dĩ trên chuột bị tăng glucose huyết thực nghiệm [3] Khảo sát tiếp theo cho thấy tác dụng hạ glucose huyết của dịch chiết nước... - Tác dụng chống ung thư của hạt Ý dĩ: nghiên cứu của Lee M.Y và cộng sự đã cho thấy dịch chiết hạt Ý dĩ có tác dụng ức chế khối u trên chuột, ức chế proteinkinase C và từ đó đã phân lập được coixenolid từ hạt Ý dĩ là chất có tác dụng mạnh nhất Một số hợp chất khác được phân lập từ hạt Ý dĩ cho thấy có tác dụng ức chế một số dòng tế bào ung thư như ung thư phổi, ung thư đại tràng [43] - Một số tác dụng. .. các nghiên cứu trên thế giới về cây Ý dĩ mới chỉ tập trung vào phần hạt và rễ, chưa có nghiên cứu nào được công bố về thành phần hóa học cũng như tác dụng dược lý của thân Trên thực tế, nước sắc từ thân cây Ý dĩ đã được nhân dân một số vùng sử dụng để điều trị đái tháo đường rất hiệu quả theo kinh nghiệm cổ truyền Do đó nhóm nghiên cứu của chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đánh giá tác dụng hạ glucose. .. tác dụng hạ glucose huyết cũng như thành phần hóa học của dịch chiết toàn phần thân cây Ý dĩ Một số kết quả ban đầu thu được như sau : - Dịch chiết nước thân cây Ý dĩ ở liều 20g/ kg thể trọng chuột không làm thay đổi đáng kể glucose huyết trên chuột nhắt trắng bình thường nhưng có tác 19 dụng hạn chế sự tăng glucose huyết trên chuột nhắt trắng gây tăng glucose huyết thực nghiệm bởi glucose ngoại sinh... này, dịch chiết nước thân cây Ý dĩ có tác dụng hạ glucose huyết trên chuột gây đái tháo đường bằng streptozocin [3] - Trên mô hình chuột nhắt trắng gây đái tháo đường bằng streptozocin, tiếp tục so sánh kết quả tác dụng của dịch chiết nước và dịch chiết ethanol cho thấy tác dụng hạ glucose huyết của hai loại dịch chiết là tương đương nhau Từ kết quả này, ethanol đã được lựa chọn làm dung môi chiết xuất . " ;Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết trên động vật thực nghiệm của phân đoạn chiết chloroform từ thân cây Ý dĩ& quot; với 2 mục tiêu: 1. Đánh giá tác dụng hạ glucose huyết của phân đoạn chiết. cho thấy phân đoạn chloroform có tác dụng hạ glucose huyết tốt nhất. Để tiếp tục nghiên cứu về tác dụng hạ glucose huyết và tìm hiểu cơ chế tác dụng hạ glucose huyết của thân cây Ý dĩ chúng. 55 BÀN LUẬN 55 4.1. VỀ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE HUYẾT CỦA PHÂN ĐOẠN CHIẾT CHLOROFORM THÂN CÂY Ý DĨ 55 4.2. VỀ CƠ CHẾ TÁC DỤNG CỦA PHÂN ĐOẠN CHIẾT CHLOROFORM THÂN CÂY Ý DĨ 59 ĐỀ XUẤT 68 TÀI LIỆU