2 thực nghiệm
a) Gây mô hình ĐTĐ typ 2 thực nghiệm
Sử dụng mô hình gây ĐTĐ thực nghiệm kiểu ĐTĐ typ 2 dựa trên chế độ ăn giàu chất béo kết hợp với STZ liều thấp của Leelavinothan, Vicker S.P, [44], [68]. Mô hình này đã được triển khai tại Việt Nam bởi Phùng Thanh Hương và Đỗ Thị Nguyệt Quế [4], [8] gồm hai bước:
- Bước 1: Gây kháng insulin bằng chế độ ăn giàu chất béo
Chuột cống đực trắng chưa trưởng thành có cân nặng trung bình 80g được nuôi bằng chế độ ăn giàu lipid với 60% tổng số calo của khẩu phần ăn là chất béo được tính theo bảng thành phần dinh dưỡng thực phẩm Việt Nam của Viện Dinh Dưỡng [11]. Tiến hành trong cùng điều kiện 1 lô đối chứng là chuột bình thường được ăn chế độ ăn chứa 12% tổng số calo của khẩu phần ăn là chất béo (bảng 2.1). Cả hai lô chuột được cho ăn với hai loại thức ăn tương ứng trong vòng 60 ngày.
29
Bảng 2.1. Thành phần dinh dưỡng trong khẩu phần ăn của chuột thí nghiệm [4], [8]
Carbohydrat Protein Chất béo Các thành phần khác Thức ăn của lô chuột
thường 60% 20% 12% 8%
Thức ăn giàu chất béo 20% 19% 60% 1%
(Tỷ lệ % tính theo calo tổng số)
- Bước 2: Gây ĐTĐ cho chuột đã bị kháng insulin
Tiêm màng bụng dung dịch STZ với liều 50mg/kg (pha trong đệm citrat pH=4,5) cho nhóm chuột ăn chế độ ăn giàu chất béo. Sau 72 giờ lấy máu định lượng glucose huyết lúc đói của chuột (chuột đã nhịn đói 10 giờ). Những chuột có glucose huyết trên 11 mmol/L được lựa chọn vào nghiên cứu tiếp theo.
b) Bố trí thí nghiệm
- Ảnh hưởng của HDCL trên các chỉ số hóa sinh và tình trạng mô bệnh học của chuột cống trắng gây ĐTĐ typ 2
Bố trí thí nghiệm với 4 lô chuột trong đó:
+ Lô 1: Chứng bệnh (n=8): chuột ĐTĐ typ 2 được cho uống dung môi pha HDCL
+ Lô 2: Lô thử (n=8): chuột ĐTĐ typ 2 được cho uống HDCL (16,5 mg/kg) + Lô 3: Chứng dương (n=8): chuột ĐTĐ typ 2 được cho uống cho uống metformin với liều 120mg/kg
+ Lô 4: Chứng thường (n=8): chuột bình thường, ăn thức ăn bình thường được cho uống dung môi pha HDCL
Cho chuột uống mẫu thử tương ứng liên tục trong 15 ngày. Sau 15 ngày, cho chuột nhịn đói 10 giờ, cân chuột, lấy máu toàn phần từ đuôi chuột để định lượng
30
glucose huyết, lấy máu mắt ly tâm thu huyết thanh để định lượng insulin. Sau cùng mổ chuột lấy gan và tụy để xác định hoạt độ enzym G6Pase gan và kiểm tra đại thể, vi thể tụy của tất cả các chuột trong mỗi lô.
2.2.2.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của HDCL trên khả năng dung nạp glucose của chuột cống trắng gây ĐTĐ typ 2
Chuột bị ĐTĐ typ 2 thực nghiệm được chia thành 3 lô:
- Lô 1: Lô chứng bệnh (n=8) Cho uống dung môi pha HDCL - Lô 2: Lô thử (n=8): Cho uống HDCL với liều 16,5 mg/kg - Lô 3: Lô chứng dương uống metformin với liều 120mg/kg
Cho chuột uống mẫu thử liên tục trong 7 ngày, ngày thứ 8, cho chuột nhịn đói 10 giờ, sau đó cho uống mẫu thử bình thường. 2h sau tiếp tục cho uống dung dịch glucose 30% liều 3g/kg thể trọng (glucose pha dung dịch ở dạng khan, thể tích cho uống là 0,2mL/ 50g chuột). Định lượng glucose huyết sau khi uống dung dịch glucose ở các thời điểm 0 phút; 30 phút; 60 phút, 90 phút và 120 phút. Ảnh hưởng của HDCL lên sự dung nạp glucose của chuột ĐTĐ typ 2 được đánh giá bằng diện tích dưới đường cong (AUC) glucose trong vòng 120 phút thí nghiệm [37], [53], [61].