Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm

Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm Tổng quan về một số mô hình nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của thuốc trên thực nghiệm

NGUYÊN TUYẾT NHUNG

TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ MÔ HÌNH NGHIÊN

CỨU TÁC DỤNG HA GLUCOSE HUYẾT CỦA

THUỐC TRÊN THỰC NGHIÊM

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

KHOÁ 2003 - 2008

Người hướng dân : TS ĐÀO THỊ VUI

Nơi thực hiên đề tài : Bộ món Dược lý-Trường

LỜI CẢM ƠN

0 tit ed st beirele trorg, t0é win biy te long bd} ov sii siie tees

Fite 1i Bao Thi Oni - Bb man Dive ti tad tadn tin tink

gitip dé (i, ding atén hehuyén bhiich (Ai oa ete (66 nhiéa (ft lhitte

gud biiu dé hoan thant hhod lads nay

Tol easing xtn chin think edu en ete thiiy 6 gtie hd mon Due li, cette trdy eb yltio tredng Dab hee Duwe Ha Hei, ntriing

uguaot da tragén dit che (0é ken tiie trowg Midd gian te; hee tat

: Cohen diabetic resistant

: Cohen diabetic sensitive

: Dung nap glucose

DANH MUC CAC BANG

Bảng I: Tiêu chuẩn chấn đoán ĐT theo WHO năm 2001 5

DANH MUC CAC HINH

Hinh 1: Co ché kích thích bài tiết insulin của sulfonylurea - 10

Hình 2: Sơ đồ biểu diễn cơ chế gây tăng glucose huyết của adrenalin 19 Hình 3: Công thức cấu tạo của streptozotocin và alloxan « «««- 2I

Hinh 4: Co ché phan tir cla streptozotocin va aÌ Ïoxan - < s5 <<<<52 23 Hinh 5: Co ché gay pha huỷ tế bào beta của virus EMC - D liều nhỏ với vai

to riny Tà cua dạ ĐC ĐO cccasdnrcnnneccotannesihennsnss ainsasionaséneesnstbinatesenkssmnes 42

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN

DAT VAN DE

PHAN 1: BENH DAI THAO ĐƯỜNG VÀ THUỐC ĐIỀU TRỊ 2

1.1 Bệnh đái tháo đường I406y0270102254421535210444000s6si10640055367474(024x6204 a6 we

BRK FRR I HN GA 060142022020 yáii c0 6006002260 02446642%6642Ga02Gux4 2

1.12 TIÊN ĐK 24426426 6640640 6á 22à0012200620140404624i02146ax4 2

#.1¿A- Tiên:chng MÀ: ĐÀN tán cá s06 tusheemmcnotaupd boonies ca b0 s66 4

1.175 Ee Reis Clr DAI NET: tác n2 026 sev00 22v edn noonmedbmanasainge 5

Be Ian nN RN -ằhhh—-ằRR << 6

X2) Các thi: điều ca caren b2o0seniiiiexkccabviicscecekckere x

1 TL TH MÀ: (g2 622122122162 2L22544:200122x622200/222L212422202424ay06222662240142290AGy3)6-4642C10L4062314662G6 8

1.2.2 Thuốc kích thích tế bào B tiết insulin - -QQ SẰĂ Sex ọ

I.2.3 Thuốc tăng nhạy cảm của mô đích với insulin - <5 <5<2 lI

1.2.4 Thuốc giảm hấp thu gÌucose <2 1121 1e 12

L2 T1 0c X0 0U VÔ Lái 0092044624422 s22222621220220 256 12

PHẦN 3: MỘT SỐ MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ

GLUCOSE HUYET CUA THUỐC TRÊN THỰC NGHIỆM 16

2.1 Mô hình nghiên cứu trên động vật có glucose huyết bình thường 16

32:1 Tiên G009 VÀ CHỦ DI IN đỔIi sueeesreiiseseeeeieeeeserieeesiEeoesEoiageesdeee 16

2.1.2 Trén dong vat arn udng bin thuWing crrrecsrorreresenesaceeeresssescereeeeeeeaens 17

2.2 Mo hinh nghién citu trên động vật tăng glucose huyết không đo ton

TM SOE TIS Th TO WON CIN niesconscaseseeisiencatsimsnsh esieoseipeeieharmiemeniarniiomrenres i8

2.2.1 Gay tang glucose huyét bing glucose ngoại sinh -<- 18

2.2.2 Gay tăng glucose huyết bằng adrenalin Sen 19

2.3 Mô hình gây tang ølucose huyết theo kiểu đái tháo đường typ l 20

2.3.1 Gay tăng glucose huyết bảng hoá chất si 20

2.3.2 Gay tang glucose huyết bằng virus .o ccseĂ se neeeeereie 25

2.3.3 Gây tăng ølucose huyết bằng cát bỏ tuyến tụy -. - << ccceee 27

2.3.4 Gay dong vat dai thao duGng typ FE tif phat cece ee tect ceeeeteeeeeeeeeenes 28

2.4 Mô hình gây tang glucose huyết theo kiểu đái tháo đường typ 2 29

2.4.1 Gây tăng gÏucose huyết bằng chế độ ăn - s55 sess-<~s.s -.~ 3Ô

242 Gây động vật đái tháo đường bằng lai giống và chọn lọc 33

2.4.3 Gây động vật đái tháo đường typ 2 tự phát 2 36

PHẦN 3: BÀN LUẬN VỀ CÁC MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU 38

3.1 Mô hình nghiên cứu trên động vật có glucose huyết bình thường 38 3.2 Mô hình nghiên cứu trên đông vật tăng glucose huyết không do tổn

(ng Đề nào ten hae LỤ ái 49

3.3 Mô hình nghiên cứu trên déng vat tang glucose huyét theo kiểu đái

ĐẶT VẤN ĐỀ

Dai tháo đường là mội bệnh mãn tính đang có xu hướng ngày càng phát

triển trên thế giới, là nguyên nhân tử vong đứng hàng thứ tư hoặc thứ năm ở

các nước phát triển Bệnh cũng được coi là “đại dịch ” ở các nước đang phát

triển Theo tổ chức Y tế thế giới (WHO), năm 2000 đã có khoảng 151 triệu

người mắc bệnh Dự đoán đến năm 2010 sé c6 221 tri¢u ngudi mac, nam 2025

sẽ có khoảng 300 — 330 triệu người mắc chiếm 5,6 % dân số thế giới Sự bùng

nổ của bệnh và những biến chứng nghiêm trọng của nó đang là thách thức lớn

của toàn ngành Y tế và cả xã hội

Do đố việc nghiên cứu thuốc điều trị đái tháo đường là cần thiết và cấp

bách Tuy nhiên một thuốc muốn sử dụng được trên lâm sang thì phải có các chứng minh về tác dụng trên các mô hình động vật thực nghiệm Điều này đòi

hỏi phải có những mô hình gây tăng đường huyết và mô hình đái tháo đường thực nghiệm Hiện nay đã cố rất nhiều phương pháp gây đái tháo đường thực nghiệm dùng trong nghiên cứu nhưng chưa có một quy trình thực hiện thống

nhất nào và chưa có đề tài nào tổng kết một cách có hệ thống các mô hình

thực nghiệm nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của thuốc Trên yêu cầu ấy chúng tôi tiến hành để tài : *?ổng quan về ruột số mô hình nghiên cứu tác

dụng hạ đường huyết của (huốc trên thực nghiệm °

Mục tiêu:

-_ Tống quan về một số mÕ hình nghiên cứu tác dung hạ đường huyết

của thuốc

- Đánh giá các mô hình nghiên cứu

- _ Bước đầu lựa chọn một số mô hình phù hợp với thực tế ở Việt Nam

PHAN 1: BENH DAI THAO DUONG VA THUOC DIEU TRL

1.1 BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG

1d Khai niêm

Đái tháo đường (ĐTĐ) là một bệnh mạn tính gây ra do thiếu hụt tương đối hoặc tuyết đối insulin hoặc đo khiếm khuyết chức năng hoạt động của

insulin dan đến tình trạng tăng glucose huyét man tinh và có đường niệu Nếu

không kiểm soát tốt thì sau một thời gian tiến triển kéo dài có thể gây ra

nhiều biến chứng, đặc biệt trên mắt, thận, thần kinh, tìm và mạch máu

š.1.2 Phản loại

Dựa theo bệnh cãn có thể chia làm hai typ chính:

e DTD typ |: cdn gọi là ĐTĐ phụ thuộc insulin, DTD tudi vi thanh

niên là hậu quả của quá trình huỷ hoại tế bào [ của đảo tụy gây ra thiếu hụt

tuyệt đối insulin dẫn tới tăng glucose máu Nguyên nhân do miễn địch qua

trung gian tế bào hoặc chưa 1õ

e DTD typ 2: hay con goi 1A DTD không phụ thuộc insulin, thường gặp

ở người trưởng thành trên 40 tuổi, béo bệu, thiếu hụt tương déi insulin do tinh

kháng insulin ở tế bào đích và rối loạn bài tiết insulin

Ngoài ra còn có một số thể ĐTĐ đặc biệt khác như :

- Khiếm khuyết chức năng tế bào B do gen

- Giảm hoạt tính của nsulin do khiếm khuyết gen

- Bệnh lý của tụy ngoại tiết

- Do các bệnh nội tiết khác

- Nguyên nhân đo thuốc hoặc hoá chất

- Nguyên nhân do nhiễm trùng

- Các thể ít gặp của đái tháo đường qua trung gian miễn dịch

- Các hội chứng về gen khác

s* Cơ ché bénh sinh cua bénh PTD typ I

DTD typ | 1a một bệnh tự miễn mãn tính, đo tác dung hiệp đồng của 3

yếu tố: hệ gen nhạy cảm, môi trường và miễn dịch Dưới tác động của các yếu

tố môi trường trên hệ gen nhạy cảm, khởi động hệ thống miễn dịch của cơ thể

làm sản sinh ra một loạt các kháng thể chống lại và phá huy tế bào 8 gây thiếu

hut insulin lam tang glucose mau va nhitng bién ching lau dai

Cho đến nay tuy vẫn còn nhiều chi tiết chưa rõ ràng nhưng quá trình sinh bệnh của ĐTĐ typ ¡ thường bắt đầu với những cá thế có tính mắn cam di

truyền với bệnh Các yếu tố môi trường đóng vai trò khởi phất bệnh Các tác

nhân môi trường thường để cặp nhat 14 virus (Cøxsackie B, Rubella,

Cytomegalovirus, Epstein-barr, Vdaricella Zoxiar, ), thứ đến là các chất độc (streptozotocin, alloxan, ), thiic an, (sifa bd, cafein) va stress Sau d6 1a giai

đoạn tự miễn dịch với diễn biến lâm sàng thầm lặng nhưng bên trong cơ thể

những tiểu đảo B đã bị thâm nhiễm các bạch cầu đơn nhân, các đại thực bào và

cdc té bio lympho T độc hoạt hoá Quá trình thâm nhiễm này dẫn tới viêm

tiểu đảo tự miễn gây tổn thương rồi huỷ hoại tế bào 8 Tuỳ theo mức độ tổn

thương tế bào mà có những ảnh hưởng tương ứng đến chức năng bài tiết

Insulin Khi các tế bào jÿ tuyến tụy chưa bị phá huỷ nhiếu thì lượng insulin

máu vẫn đủ cho nhu cầu hoạt động cơ thể, lâm sàng chưa biểu hiện gì, đây là

giai đoạn tiền ĐTĐ Khi tế bào j bị phá huỷ ngày càng nhiều (trên 85%) thì lượng insulin được bài tiết không đủ cho nhu cầu của cơ thể, glucosc huyết sẽ

tăng lên, lúc này biểu hiện lâm sàng sẽ rõ và có thể được chẩn đoán là ĐTĐ.

** Cơ chế bệnh sinh của bệnh ĐT) typ 2

So voi DTD typ | thi DTD typ 2 thudng gap hon, chiếm tới 80 - 95%

sé bénh nhan bi mac DTD va cé tinh quy tw gia dinh rõ Sinh bệnh học của ĐTĐ typ 2 cho tới nay chưa được hiểu một cách đầy đủ, nhưng 2 yếu tố đóng vai trò quan trọng là tình trạng khang insulin ở mô ngoại vi và rối loạn bài tiết insulin từ tế bào B của tuyến tụy Ngoài ra, yếu tố môi trường và hệ gen nhạy cảm cũng liên quan nhiều đến cơ chế bệnh sinh của bệnh

Hiện tượng kháng insulina thường có trước các triệu chứng lâm sằng của DTP, dan đến tuyến tụy phải tăng bài tiết insulin bù trừ Đến một lúc nào đó

tụy tạng cạn kiệt khả năng bai tiét insulin lam cho lượng insulin tiết ra không

đủ để vượt qua tình trạng kháng insulin thì sẽ có hiện tượng tăng đường huyết mạn tính, lúc đó là ĐT thực sự

Hiện tượng kháng insulin làm rối loạn khả năng dưng nạp glucose ở các

mô ngoại vì Có thể do giảm số lượng receptor gắn insulin hoặc do giảm khả

ning gan ctta insulin vao receptor Co thé béo phì, chế độ ăn uống và lối sống

ít hoạt động thể lực làm tăng nguy cơ kháng insulin

l.L4 Triệu chứng lâm sàng

s DTP typ I: đái nhiều, uống nhiều, gây nhiều, đị cảm, có khi nhiễm toan ceton nang nhu mất nước, chán ãn, buồn nôn; khi áp lực thẩm thấu > 330

mOsm/1 sẽ mất ý thức; khi pH < 7, I có rối loạn hô hấp

¢ DTD typ 2: triéu chimg lam sàng mờ nhạt, trong khi đó triệu chứng của

các biến chứng lại chiếm ưu thế Điển hình là triệu chứng của nhiễm trùng

mạn hoặc cấp tính, viêm nhiễm phụ khoa ở nữ giới, cấc tổn thương ở mắt,

rang, thận.

1.15, Xét nghiêm can lam sàng

s* Glucose huyết

Glucose huyết (GH) thường được định lượng bàng phương pháp enzym

Dùng enzym glucose oxydase dé oxy hod glucose thanh acid gluconic và

hydropeoxid (H,Q,) Chat này sẽ phan ứng với một chat trén kit, tao mau, DO

dam nhạt của màu sẽ cho nồng đó GH

Bảng I: Tiêu chuẩn chẩn đoản DTP theo WHO nam 2001 |I)

Trạng thái GH GH 2 h sau nghi¢m pháp

lúc đói dung map glucose bang

đường udng 75mg glucose

Dai th4o dung | >7 mmol/l > 11,1 mmol/l

hiện glucose trong nước tiểu Hàm lượng glucose trong nước tiểu thường khác

nhau giữa các cá thể và chịu ảnh hưởng của một số bệnh lý thận Do đó phải

kết hợp với xét nghiệm GH mới có ý nghĩa chẩn đoán bệnh

trước tình trạng hôn mé có thể đẫn đến tử vong nếu không chân đoán và điều

+> Insulin va peptid C trong huyết thanh

Insulin và peptid C thường được định lượng bảng phương pháp miền

dịch phóng xạ hay miễn dịch enzym

Hàm lượng insulin có ý nghĩa trong chấn đoán phân biệt typ ĐTĐ Đối

voi DTD typ | néng d6 ¡nsulin huyết thường rất thấp cố khi không đo được,

còn ĐTĐ tvp 2 insulin huyết có thể bình thường đôi khi tăng cao Vì vậy xét

nghiệm này đặc biệt có giá trị để chẩn đoán ĐTĐ typ 2 và phân biệt giữa ĐTĐ

typl và typ 2

Peptid €C được bài tiết cùng với pro-insulin từ tiểu đảo tụy và được bài

tiết qua thận đưới dạng nguyên vẹn không chuyển hoá Do đó định lượng

peptid C sẽ đánh giá chính xác khả năng bài tiết insulin của tế bào B đảo tụy

s* Các xét nghiệm khác

- Glucohernoglobin A Ic (HbA Ic) thường sử dụng để đánh giá kết quả

điều trị và theo dõi tiến triển của bệnh

- Protein niéu

- Albumin va protein huyét thanh

-_ a - mieroglobulin có giá trị đánh giá mức độ tốn thương thận

!.1.6 Các biến chứng

s> Hiến chứng cấp lính

e Nhiém toan ceton

Thường xảy ra ở bệnh nhân DTD typ I1, đo thiếu hụt insulin tuyệt đối

gây tăng glucose máu Khi tế bào không được cung cap du glucose thi nang

lượng sẽ được lấy từ việc đốt cháy lipid dự trữ Quá trình chuyển hoá lipid

sinh ra các thể ceton, vào máu và nước tiểu, gây rối loạn điện giải và có thể

dẫn đến hôn mê và tử vong

® Hôn mề do tăng áp lực thẩm thấu máu.?

Hay gap & bénh nhén DTD typ 2, do glucose mau tăng cao gây tăng áp lực thẩm thấu máu gây mất nước nặng, tụt huyết ấp và hôn mê

Xo vila dong mach tiến triển nhanh va tram trong Gay ra suy mach

vành, thiếu máu cơ tim, nhồi máu cơ tim; viêm động mạch chỉ đưới; tổn

thương các động mạch khác, tăng nguy cơ tai biến mạch máu não và tăng

huyết áp

e_ Biến chứng mạch máu nhỏ

- Biến chứng về mắt: gây tăng tính thấm mao mạch mắt dẫn đến phù võng mạc, xuất huyết, thiếu máu, có thể gây mù loà nếu không điều trị kịp thời

- Biến chứng về thận: dày màng đáy mao mạch câu thận, gây xơ tiểu

cầu thận, giảm sức lọc cầu thận có thể gây suy thận

- Bệnh lý thần kinh: viêm nhiều đây thần kinh

- Bệnh lý bàn chân: tốn thương bàn chân (đo tổn thương mạch máu và

day thần kinh) có khi phải cat cut timg phan

Ngoài ra còn có thể nhiễm khuẩn, nhiễm nãm cơ hội, tổn thương đa gây loét bàn chân cảng chân, khó cứng khớp dẫn đến hạn chế vận động

12 CÁC THUỐC ĐIỂU TRE

T.21 Insulin

© Negudn géc

Do té bao f cha ti¢u dao Langerhans tiết ra hoặc phân lập và điều chế từ

tuyển tụy của bò, lợn hoặc tổng hợp bằng công nghệ tái tổ hợp ADN

e® Tác dụng và cơ chế

Insulin là hormon chính kiểm soát chuyển hoá glucid tức thời trên gan,

co van va mé mG, lam ha glucose mau

- Tăng tính thấm của glucosc vào tế bào, đặc biệt là tế bào gan, co và

mô mỡ bảng cách làm giàu chất vận chuyến øglucose ở màng tế bào

- Tăng vận chuyển glucose đến gan do hoạt hóa gÌlucosetranferase,

#Ìucokinase

- Trên gan, insulin thúc đẩy tổng hợp và ức chế phân huỷ glycogen bang cách kích thích cenzym glycogen synthetase và ức chế enzym glycogen

phosphorylase

- Tăng phân huỷ glucose thành Acetyl-CoA do hoạt hoá

phosphofructokinase va pyruvat dehydrogenase

- Trên cơ và mô mỡ cũng có tác dụng giống ở gan nhưng chậm hơn,

tăng vận chuyển glucose từ máu vào mô qua kênh vận chuyển glucose (GLUT

- DTD typ 1 (DTD phu thudc insulin)

- PTD typ 2 khi các thuốc hạ đường huyết dạng uống kém hiệu quả

- Gay con shock insulin dé diéu tri bénh tam thần

e Tac dung khong mong mudn cia insulin

- Thường gặp và nguy hiểm nhất là hạ đường huyết quá mức, triệu

chứng gồm toát mồ hôi, run, đói, rối loạn thị giác, mất ý thức

- Có thể gây dị ứng tại chỗ hoặc toàn thân (thường gập khi dùng insulin

có nguồn gốc từ động vật)

- Ngoài ra tco mô mỡ hoặc phì đại mô mỡ chỗ tiêm, hạ kali huyết do

kích thích bơm Na*/K* - ATPase

L2.2 Thuốc kích thích tế bào B tiét insulin

* Cac sulfonylurea

Thé hé 1: tolbutamid, chlopropamid, acetohexamid, tolazamid

Thế hệ 2: glybernclamid, glyclazid, giypizid, glymepirid, có tác dụng manh hon thế hệ I

Đo độc tính cao trên than nén caéc thudc thude thé hé | hién nay ít được

sử dụng

e© Tác dung và cơ chế

- Tác dụng quan trọng nhất của các sulfonylurea là kích thích tế bao B của tuyến tụy tăng sản xuất ¡nsulin làn giảm nồng độ giucose máu Thuốc

làm chen kênh K* nhạy cảm với ATP cua tế bào B gây tảng khử cực màng, tăng lượng ion Ca*™ noi bao, kích thích giải phóng insulin nên gây hạ đường huyét Vi vay thuốc chỉ có tác dụng khi tuyến tụy còn khả năng bài tiết insulin

Hình 1: Cơ chế kích thích bài tiết insulin của sulfonylurea

- Ngoài ra đã cố những nghiên cứu cho rằng các thuốc này ức chế nhẹ

tác dụng của gÌucagon nên cũng gây hạ glucose huyết và làm tăng số lượng,

Lñng tính nhạy cảm của receptor với insulin của bạch cầu đơn nhân to, tế bào

mỡ, hồng cầu làm tăng tấc dụng của insulin

e Chi dinh: DTD typ 2 hoặc ĐTĐ ở người béo phì > 40 tuổi có insulin

huyết < 4QU1/ngày

e© Tác dụng không mong muốn: gây hạ dường huyết nhanh và mạnh, dị

ứng trên da hoặc rối loạn tiêu hoá, vàng da ứ mật,

e Chống chỉ định: ĐYTĐ tvp I, phụ nữ có thai, người suy gan thận

“> Cac meglitinid

Gốm repaglinid (Prandin) va nateglinid (Stalix)

¢ Tdc dung: thudc lam giam GH bang cach kích thích tế bào tiết insulin

(tương tự nhóm sulfonylurea) Tac dung ha GH nhanh va thoi gian tác dụng

ngan hon sulfonylurea Thude lam ha GH sau an c6 hiéu qua nhung GH lic

đói có thể cao hơn các thuốc có tác dụng kéo dài khác

10

s® Chỉ định: ĐTĐ typ 2, có thể phối hợp metformin Phải uống trước bữa

ăn khoảng 1Š -30 phút

1.2.3 Thude tang nhay cam của tô đích với insulin

s* Nhóm biguanitd

Các thuốc thuộc nhốm này gồm: metformin, phenfomnin và buformin

Hiện nay chỉ còn rnetformin được sử đụng vì ít gáy tang acid lactic mau

® Cơ chế tác dụng

Metformin chong tang GH do:

- Lam tang tic dung và sự nhạy cảm cilia insulin tai thu thé va hau thụ

thé

- Uc ché tan tao glucose & gan, tảng tổng hợp glycogen do tang hoat

tinh enzym glycogen synthetase

- Tang st dung glucose ở ngoại vi đặc biệt là ở cơ

- Giảm hấp thu glucose ở ruội

- Ngoài ra còn giảm LDL, VLDL., cholesterol, triglycerid máu

¢ Chidinh.- DTD typ 2 thể trạng trung bình và béo phì

- Phòng ĐTĐ ở người béo phì

© Tác đụng không mong muốn: trên đường tiêu hod như chắn ăn, rốt loạn

tiêu hoá, tăng nguy co toan hod mau do tang acid lactic

e Chéng chi dink: phụ nữ có thai người suy gan, suy thận, suy hô hấp

* Nhóm glytazon ( thiazolidindion)

Gém pioglytazon và rosiglytazon

® Cơ chế tác dụng

Thuốc làm tăng nhạy cảm của cơ và tổ chức mỡ với insulin bằng cách

hoạt hoá PPAR-y (peroxisome prolierator activated receptor gama), là một

loại thụ thể nằm trong nhân của tế bào nhạy cảm với insulin đặc biệt là mô

mỡ, gan và cơ, qua đó thúc đẩy điều hoà sao chép gen giúp tổng hợp một số

protein cần cho tế bào đán ứng với hoạt tính insulin Đồng thời tăng chuyển

dịch các receptor vận chuyển glucose (GLUT 4) tới bể mặt tế bào đế tăng

nhạy cảm vGi insulin, như vậy giúp té bao tang dung nap glucose từ máu

e Chi dinh: DTD typ 2 béo phì hoặc không béo phì

® Tác dụng không mong muôn: tăng cân, giữ nước gây phù nhẹ, rối loạn

chức năng gan

e Chống chỉ định: người suy gan, phù do suy tim độ 2, 3 phụ nữ có thai

và cho con bú

1.2.4 Thuốc giảm háp thu gÌucose

Bao gồm : acarbose, voglybose

® Coché tac dung

Thuốc có tác dụng ức chế cạnh tranh enzym a-glucosidase ở ruột non

(1a enzym có tác dung phân giải các disaccharid và polysacchand thành

glucose) Do đó làm giảm va làm châm hấp thu glucose nên có tác dụng

chong tang glucose mau sau 4n

Khác với sulfonylure, các thuốc này khong lam tang tiét insulin va

khong lam ha glucose mau

© Chỉ định: đơn trị liệu hoặc phối hợp thuốc khác dé diéu wri DTD typ 2

® Tác dụng khóng mong muốn: đây chướng, đau bụng, tiêu chảy, buôn

nôn, rối loạn chức năng gan, ngứa, phát ban

1.2.5 Thuốc Y học cổ truyền (YHCT)

¢ Quan niém cua VYHCT về bệnh ĐT)

Bệnh ĐTĐ hay bệnh tiểu đường còn gọi là chứng tiêu khát Nguyên

nhân do ăn uống không điều độ các chất cay, nóng, béo, ngọt; do lao lực, căng

thắng thần kinh tạo thành hoả nhiệt, uất nhiệt làm phần âm của các phủ tạng

như phế, thận, vị bị hao tổn Phế hư gây chứng tiêu khát, vị âm hư gây chứng

12

gầy đói, thận âm hư không tàng trữ tỉnh hoa của ngũ cốc, gây chứng tiểu nhiều

và tiểu ra đường [28]

Phương phấp chữa trị: lây dưỡng âm, thanh nhiệt, sinh tân dịch là chính

s«_ Một số vị thuốc chữa bệnh tiéu đường

Thuốc Đông y chữa bệnh tiểu đường rất phong phú, theo thống kẽ cho

thấy có đến 85 dược liệu được sử dụng trên thế giới cũng như ở Việt Nam|{ 15]

[24] [28] Có nhiều cây được sử dụng theo kinh nghiệm ciân gian để làm giảm

triệu chứng như: Cải xoong, Bồ công anh, Ñâu mèo, Cam thảo nam, Hoàng

liên, Hoàng tinh, Ké đầu ngựa, Kỷ tử, Lưu, Ma hoàng, Mạch môn, Ngũ gia bì,

Ngũ vị tử, OL và một số cây đã và đang được nghiên cứu tác dung ha GH

như: Mướp đắng, Thổ phục linh, Tri mẫu, Sinh địa, Có ngọt, Hoàng kỳ, Huyền

sâm, Nhân sâm, Bach truat, Cau ky, [5] [9] [10] [11] [15] [17] [18] [23] [28]

*? Sinh dia ( Rehmannia glutinosa G, Scrophulariaceae)[ 15] [28]

- Bộ phận đùng : củ sấy khô có vị ngọt đắng, tính hàn

- Cách dùng : sắc thuốc uống

- Tác dụng : bổ âm, sinh tân huyết dịch, thanh nhiệt, hạ glucose huyết

tốt Các nghiên cứu đã chứng minh tác dụng hạ đường huyết của sinh địa chủ

yếu là đo catalpol và mannozid

Phối hợp với Huyền sâm, Cát cánh, Hoài sơn, Tang điệp dưới dạng

thích bài tiết insulin qua tac dung trực tiếp lên tế bào ð Dùng thay thế đường

và làm thuốc hạ đường huyết cho bệnh nhân tiểu đường typ 2

13

s* M ướp đăng (Momordica charantia L Cucurbitaceac )(Š] [ 10] [1$] [23]

- Bộ phận dùng : cả quả và thân

- Thành phần chính : glycosid, saponin, alcaloid, momordicin, đường

khử, nhựa, hợp chất phenol

- Tác dụng: tấn hàn, lắc còn xanh có tính giải nhiệt, tiêu đờm, bô thận,

chống đau xương khớp, khi chín có tinh bé than, kiện tỳ, dưỡng huyết

- Tác dụng hạ glucose huyết trên động vật thực nghiệm: Cho chó bình

thường bị gây đái tháo đường bằng alloxan uống cao quả mướp đắng nhận thấy hàm lượng đường máu giảm đi Nước ép quả mướp đắng cải thiên có y

nghĩa sự dung nạp glucose ở bệnh nhân với tỷ lệ 73% Hoạt chất là protein

tinh khiết gọi là P insulin, polypeptid P là charatin

Tại Việt Nam đã có nhiều công trình nghiên cứu về mướp đẳng Đoàn Thị Nhu và cs (1993) chứng minh với thỏ gây ĐTĐ bằng alloxan, cao cồn 40

độ quả mướp đắng với liều 1Og/kg thể trọng làm hạ đường huyết 25 — 45% so

với trước khi uống thuốc

- Cơ chế có lẽ do tang hấp thu glucose vào mô, do hoat hod G,DP nên tăng oxy hóa glueose, ức chế G,P, F, ,DP nên ức chế tổng hợp glucose

* Hoang ky (Astragalus membranaceus Bunge Eabaceae )

- Bộ phận dùng : rễ phơi khô, sắc nước uống

- Thành phần chính : saccharose, tinh bot, glucose, chất nhầy Ngoài ra còn có betain, nhiều acid amin

- Là vị thuốc trị bệnh tiểu đường diều hoà glucose máu theo 2 chiều:

tăng glucose máu ở động vật hoặc người bị hạ đường huyết lên bình thường và

hạ một cách có ý nghĩa glucose mấu, trielycerid ở chuột cống và chuột nhát bị

tiểu đường Hoàng kỳ còn có tác dụng tốt trong việc điều trị các biến chứng của bệnh như bảo vệ tim bệnh lý thần kinh

% Huyền sâm ( Šcrophularia ningpoensis Hems| Scrophulariaceae )

- Bộ phận dùng : củ phơi khô, sắc nước

l4

L.Sinh dia 155g 6 Don bi 6g

2 Hoadi son 155g 7 Trach ta lŨg

3 Phục linh lS5,5g 8 Quế chỉ 10g

4, Son thù 10g 9.Phu tu 155g

Š Xa tiền tử 6g L0 Ngưu tất 10g

Sác lấy 450 mnl từ 800ml rồi chia ra uống 3 lần trong ngày Có thể chế

viên hoàn uống

lầ

PHẦN 2: MỘT SỐ MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ

GLUCOSE HUYET CỦA THUỐC TREN THUC NGHIEM

Trong hoàn cảnh bệnh đái tháo đường đang là bệnh được quan tâm

hàng đầu bởi những biến chứng nặng nẻ và tiến triển nhanh chóng thì ngày

càng có nhiều nghiên cứu về thuốc chống ĐTĐ (thuốc hạ đường huyết) Nói

chung một thuốc muốn sử dụng được trên lâm sàng thì trước hết phải có các

bằng chứng chứng minh tác dụng trên động vật thực nghiệm Dựa vào cơ chế

bénh sinh của bệnh ĐTĐ người ta có thế tạo ra các mô hình tăng đường huyết

(mô hình ĐTĐ) thực nghiệm Trên thế giới cũng như ở Việt Nam đã có rất

nhiều mô hình dùng cho nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của thuốc Dưới

đây là một số mô hình hay được sử dụng

e Mô hình nghiên cứu trên động vật có glucose huyết bình thường

e Mô hình nghiên cứu trên động vật tăng glucose huyết không do tổn

thương tế bào j3 tuyến tuy

e Mô hình nghiên cứu trên động vật tăng glucose huyết theo kiểu

Glucose huyết là đại lượng thay đổi tuỳ thuộc vào nhiều yếu tố đặc biệt

là thời điểm trước hoặc sau khi ãn & chất lượng thức an.Vi vay, dé két qua

đánh giá tác dụng lên GH của thuốc ổn đỉnh hơn một số tác giả cho rằng nên

để con vật nhịn đói trong thời gian nghiên cứu (8](1 1](74]

16

® Cách tiến hành:

Động vật: thường dùng chuột cống, chuột nhất, mới trưởng thành, khoẻ

mạnh, cả 2 giống, không có thai Chia ngẫu nhiên làm các lô

- Lô chứng : dùng dung địch NaCl 0,9% (hoặc nước hoặc dung môi

pha thuốc)

- - Lô thử: dùng thuốc nghiên cưu

- _ Lô so sánh: dùng thuốc có tác dụng hạ đường huyết đã biết rõ cơ chế

tác dung (Vi du nhu tol butamid, insulin)

Các chuột sau khi để nhịn đói 16 tiếng (từ 16h chiều hôm trước tới 8h sáng hôm sau) Vào lúc 8h sấng, lẫy máu con vật đề định lượng glueose huyết

Ngay sau đó cho chuột dùng thuốc nghiên cứu rồi định lượng GH ở các thời

điểm 30phút, !h, 2h, 3h 4h

2.1.2 Trén động vát ăn uông bùui thường

Trên động vật nhịn đói kết quả tuy tương đối ồn định song không sinh

lý Vì vậy nhiều tác giả lại cho rằng nên nghiên cứu trên chuột ăn uống bình

thường thì phản ánh chính xác hơn tác dụng của thuốc

e Tiến hành: mô hình này chỉ khác mô hình trên là vẫn cho con vật ăn uống bình thường suốt thời gian thí nghiệm

© Đánh giá &ết quả cả 2 mô hình trén

Tỉ lệ phần trăm hạ glucose huyết sau khi dùng thuốc so với trước khi đùng thuốc:

Œ-G

X% = —xi00 (1)

0

G, là nồng độ GH đo lúc ngay trước khi dùng thuốc

G, là nồng độ GHI đo lúc sau khi dùng thuốc t giờ

So sánh mức ha glucose huyết giữa lô thử với lô chứng và

Hai mô hình động vật có glucose huyết bình thường trên chủ yếu được

sử dụng để nghiên cứu sàng lọc ban đầu và để đánh giá tác đụng phụ của một

thuốc trên đường huyết

2.1 Mô hình nghiên cứu trên động vật tăng glucose huyét khong do ton

thương tế bào j? tuyên tuy

2.2.1 Gay tang glucose huyết bang glucose ngoai sinh

© Neuyén tdc

Bằng cách đưa glucose liều cao vào cơ thể lúc đói gây giảm dung nạp

glucose do đó gây tình trạng quá tải glucose đắn đến tăng elucose huyết và có

thể có glucose niệu Đây cũng chính là nghiệm pháp tăng glucose huyết, một

xét nghiệm kinh điển và thường được tiến hành đầu tiên trong chẩn đoán ĐTĐ

ở người [7] [9] [10] [11] {12] [14] [24]

s Cách tiến hành

- Động vật: chuột nhất trắng thuần chủng, nặng 204 2g, chia lam cae 16

+ Lô chứng: cho con vật dùng nước muiối sinh lý

+ Lô thử: đùng thuốc nghiên cứu

+ Lô so sánh: dùng insulin (3 Ul/kg ) hoae gliclazid ( 20mg/kg ) [12]

- Chuột sau khi nhịn đói 12h được cho dùng thuốc, Sau 4 giờ cho chuột

uống dung dịch glucose 30%( 3g/kg) Định lượng GH huyết vào các thời điểm trước khi uống glucosc và sau khi uống 30 phút, 60 phúi

2.2.2 Gáy tăng glucose huyét bang adrenalin

Adrenalin 14 horrnon đo tuỷ thượng thận bài tiết Trong điều kiện cơ thể

đứng trước trạng thái stress, adrcnalin nhanh chóng được bài tiết để đáp ứng nhu cầu tăng sử dụng GH của cơ thể Mặt khác adrenalin cũng là túc nhân gây

tăng mức độ trầm trọng cha bénh DTD Vi vay adrenalin có thể được dùng

làm tác nhân gây ĐTĐ trên thực nghiệm [10] [11] [12] [14] [18] [28] Tác

đụng gây tăng glucose huyết do

- Tang phan huy glycogen & tang tân tao glucose 6 gan bảng hoạt hoá

phosphorylase & bat hoat glucogen synthetase lA caéc enzym phosphoryl hoa

& khử phosphoryl của các phản ứng giáng hoá & tổng hợp glycogen

- Mặt khắc adrenalin còn ức chế tuyến tụy bài tiết insulin thông qua tắc

đụng lên receptor a va f adrenergic & kích thích bài tiết corticosteroid thông qua kích thích trục dưới đổi tuyến yên tuyến thượng thận

Adrenalin

Glycogen Phosphorylase Glycogen synthetase

Glucose 1-P

Hình 2: sơ đó biểu dién cơ ché gay tang GH cia adrenalin

© Céach tién hanh:

Chuột được chia làm 3 ló,

- Lô chứng: dùng dung môi với cùng một thể tích

~ Lô thử: dùng thuốc nghiên cứu

- Lô so sánh: tiêm ràng bụng insulin hoặc uống gliclazid

Chuột nhịn đói 12h được cho dùng thuốc nghiên cứu, sau 4h tiêm bắp dung dịch adrenalin với liều 0,5 - 0,6 mg/kg [12] [2§] Định lượng GH vào

19

các thời điểm trước tiêm và sau khi tiêm 30 phút, 1h, I,$%h Riêng lô tiêm

insulin thi sau |,5h sau tiém insulin thi ém adrenalin

© Ddanh giá kết quá: Tinh ty lệ phan trăm tăng glucose huyết so với trước khi

tiêm adrenalin: theo công thức (2)

So sánh mức tang glucose huyết giữa lò thử với lô chứng và lô so sánh

2.3 Mô hình gay tang glucose huyét theo kiéu dai thao đường typ 1

DTP typ | Gngudi duwe dac tring bdi tinh trang 16n thuong 1€ bao B

của tiểu đảo tụy gây thiếu hụt hoàn toàn insulin Thông thường điều này liên

quan đến sự phá huỷ qua trung gian miễn dịch Bệnh tiến triển thầm lặng qua nhiều năm, chỉ biểu hiện triệu chứng lâm sàng khi số lượng tế bào B còn lại ít

và bài tiết insulin không đủ nhu cầu cơ thể và khi đó là tình trạng tăng GH

man tinh [1] [19] [21] [22] [50]

Có nhiều phương pháp gây phá hủy tế bào tuyến tuy gây tăng GH :

bảng hoá chất, bàng virus, bàng cắt bỏ tuyến tụy, bằng gay déng vat DTD typ

1 tu phat

2.3.1, Gay tang glucose huyét bang hod chat

Các chất độc có thể gây pha huy té bao B gém alloxan, streptozotocin,

N-ethyl nitrosourea, vacor, dithizone, 8-hydroxyquinolon Cơ chế gây đái tháo đường của các chất này là do tác dụng gây độc đặc hiệu không hồi phục lên tế

bào j tuyến tụy, gây phá huỷ một phần hoặc hoàn toàn tiểu đảo tụy, do đó dẫn

đến tình trạng thiếu insulin va gay tăng đường huyết [46] [S3] [60]

20

Hình 3: Công thức hoá học của STZ va Alloxan

2.3.1.1 Gây tăng giuecose huyết bằng alloxean

Alloxan từ lâu đã được sử dụng làm tác nhân gây tang glucose huyét trên thực nghiệm là do khả năng gây độc tê bào [) một cách đặc hiệu [41] [46] Đầu tiên alloxan qua mang bang kénh wan chuyén glucose (GLUT 2) Sau đó alloxan và các sản phẩm khử hóa của nố (acid dialuric) vào chu trình oxy hóa khử hình thành nên các gốc tự do Phản ứng này điền ra mãnh liệt gọi là phản

ứng Fenton Gốc tự do này tắn công ADN, cắt hoặc phá vỡ cấu trúc sợi của ADN Đồng thời làm tăng ổ ạt Ca?* trong bào tương gây phá hủy tế bao B

Acid đialuric——+ O°*, + H ,O, —>OH"

© Cách tiến hành

- Động vát: có thể dùng chuột, chó, mèo, thỏ, khỉ, cừu, cá, chim;

nhưng hiện nay chủ yếu dùng chuột nhất, chuột cống, chÕ hoặc thỏ

- Gdady DTD

+ Với chuột céng: ching Sprague — Dawley hoac chủng Wistar, giống

duc, can nang 200 — 250 gam Gay tang GH bang cach tiêm đưới đa dung dịch

alloxan pha trong dém citrat 0,05M (PH = 4,5 - 5,5) hoặc trong dung dịch

NaCl 0,9%, liéu tir 100 dén 200 mg/kg thể trọng [41] Sau khi tiém alloxan

21

khoảng 72h, định lượng GH, những con có GH > 250 mg/dl được coi là tăng

đường huyết [4l] {[42| [62] [67] hoặc có glucose niệu dương tính [30] được

đưa vào nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của thuốc

Để giảm tỷ lệ chết, ngay sau khi gây ĐTĐ bằng alloxan những con

chuột này được tiêm màng bụng dung dich NaCl 0,9 % [67], hoặc uống dd

glucose 10 ®¿ [42], hoặc tiêm màng bung insulin cham (2 UI/kg) liên tục trong

Chia những con bị coi là mắc bệnh ĐT làm các lõ:

+ Lô chứng bénh: ding dung môi đồng thể tích với lô thử

+ Lô thử dùng thuốc nghiên cứu

+ Lô so sánh: dùng thuốc có tác dụng hạ GH đã rõ cơ chế tắc dụng (ví

du insulin, gliclazid)

Sau đó định lượng GH ở các thời điểm 0h (ngay trước thí nghiệm) và 2h, 4h, 6h, 8h sau đùng thuốc

© Đánh giá kết quả:

Tinh ty lé phan tram ha GH sau khi dùng thuốc so với trước khi dùng

thuốc Theo công thức (l)

So sánh mức hạ GH giữa ló thử với lô chứng và lô so sánh

Ngoài ra còn so sánh sự biến đổi của nồng đệ insulin huyết, cân nặng giữa các lô

22

2.3.1.2 Gáy tăng glueose huyét bang streptozotocin

Streptozotocin (STZ) 1A mot din xuất của nitrosourea, chiết xuất từ

Streptomyces achromo,gene, là một kháng sinh phổ rộng và có tác dụng chống

khối u tuyến tụy|66] Giống với cấc tác nhân alkyl hod khác của nhốm nổ gây phá huỷ cấu trúc sợi của ADN của tế bào j [36] [39] [40] [601] [77] Mặt khác

nó có ái lực cao với kênh vận chuyén glucose GLUT 2 cố mặt nhiều ở màng tế

bào beta, do đó gây độc đặc hiệu cho tế bào B Pha huy té bao nay do dé gay

thiếu insulin và gây tăng GH Hiện nay, SIZ được sử đụng phố biến để gây

Catalase s xid — ribose synthetase

đo dong Nicotinamid

Alloxan ADN Hoat hoa :

®> O;`, H;O›>OH° Độ CA * Poly(ADP-ribosc)

Hình 4 : Cơ chế phản tử của STZ va alloxan

Cơ chế phân tử gây ĐTĐÐ của streptozotocin là khá giống với alloxan

Cả hai đều qua trung gian phản ứng oxy hóa và hình thành nên các gốc tự

dof 40] [60] [64] [67] [75] Ca hai thuốc này đều tác dụng chọn lọc trên tế bào

do liên quan đến việc chỉ và ở tế bào J tập trung nhiều GLUT 2 Chí khác là

STZ còn alkyl hóa ADN phá vỡ cấu trúc sợi, đồng thời các đoạn gãy ADN này

23

hoat héa poly (ADP -ribose) synthetase gay mat NAD” 1a coenzym quan trọng trong rất nhiều phản ứng chuyển hóa trong tế bào của các đông vật có

vú,

- Cách hiến hành

- Động vật: chuột cống, cả 2 giống, khoẻ manh, năng khoảng 100 -

120 g, hoặc chuột nhất 18 - 22 g Ngoài ra có thể dùng thỏ, chó, khi, chuột

hamster, lợn

- Gây lăng glucose huyét

Chuột cống được gây ĐTĐ bằng tiêm mang bung dung dich STZ pha

trong đệm citrat 0.01M (pH = 4.5) với liều đơn tir 70 — 150 mg/kg can nang

{12} [13] [14] [16] [25] [26] [27] [28] (liều gây ĐTĐ ở chuột nhất thường gấp

đôi liều gây bệnh ở chuột cống) [28]

Sau 72 giờ, định lượng nồng độ glucose huyết lúc đói Những con có

GH từ 200 — 500 mg/dI thì được xem là bị ĐTĐ và được dùng để đánh giá tác

đụng hạ GH của thuốc

~ Tiến hành thử thuốc

Chia ngdu nhiên chuột đã bạ tăng GH thành các lô:

+ Lô chứng: dùng lượng nước muối sinh lý đồng thể tích với lô thử

+ Lô thử : đùng thuốc nghiên cứu

+Lô đối chiếu: dùng thuốc chống ĐTĐ đã biết rõ cơ chế tác dụng như

insulin, glyclazid, metformin

Lấy máu toàn phần và định lượng GH ở các thời diém: Oh (ngay trước

thời điểm dùng thuốc) và 2h, 4h, 6h, 8h sau điều trị (riêng insulin lấy máu và

định lượng lúc 0h, 30phút, Lh, I.5h, 2h)

© Danh gid két qua:

Tính tỷ lệ phần trăm hạ GH sau khi dùng thuốc so với trước khi dùng

thuốc Theo công thức (l)

So sánh mức hạ GH giữa lô thử với lô chứng và lô so sánh

24

Ngoài ra còn so sánh sự biến đổi của nồng độ insulin huyết, cân nặng

của lô thử với lô chứng và lô so sánh

2.3.1.3 Gay tang giucose huyết bằng STZ đa liều nhỏ

Nam 1976, Rosini và Like đã chia STZ với liều 200mg/kẹ thành 5 liều (môi liều là 40 mg/kg) gây tăng GH cho chuột trong vòng 1-2 tuần Điều này

liên quan đến sự gián đoạn sản Xuất insulin và tình trạng viêm đảo tụy tự

miễn Đến khi không còn khả năng bai tiét insulin bi trừ của tế bào § thì cuối cùng dẫn tới ĐTĐ thực sự [35] [40] [46] [63] [65] [73] [78]

© Cách tiến hành:

- Động vật: Chuột cống Wistar, nang từ 200-250g

- Gây ĐTP) bàng cách con vật được nhịn đối qua đêm, sau đố tiêm

mang bụng dung dịch STZ pha trong dung dịch nước muối sinh lý với liều 35

= 60 mg/ke [28] [33] [37] 151] 152] 1651 [731

Sau khi tiêm ŠT“ khoảng 2 -5 ngày tiền hành thử glucose niệu Hai tuần sau, những con cố ølucose niệu đương tính được sứ dụng cho các thí nghiệm sau đó [65]

© Dduh gid kết quả: TỶ lệ phan tram ha GH sau khi dùng thuốc sơ với trước khi dùng thuốc Theo CT (1)

2.3.2 Gay tang glucose huyét bang virus

Qua các nghiên cứu, cho đến nay có 6 loại virus được cho là có liên

quan đến tiến triển bệnh ĐTĐ tvp 1 ở người (Coxsackie B, Rubella, Mumps,

Cytomegalo, Epstein-bar, Varicella Zostar), va cG 9 loai virus cé lién quan dén DTD @ dong vat (virus Encephalomyocarditis, Mengovirus, Reovirus,

Retrovirus, Coxackie B4, virus miéng va thifc an, virus Rubella, virus Kilham) [49] Virus dong vai tro la mot tac nhan gay DTD typ | trén thuc nghiém với nhiều cơ chế còn tranh cãi nhưng nói chung có 2 cơ chế chính được thừa nhận

[12] [40] [46] [53]:

25

- Virus thâm nhập trực tiếp vào các tế bào của tiểu đảo tụy, dẫn tới

phá huỷ tế bao, làm triệt tiêu bộ máy bài tiết insulin

- Virus thâm nhập vào cơ thể, khởi phát hệ thống miễn dịch gây ra tình

trạng tự miễn sinh kháng thể và phá huỷ tế bào ƒ

Trong các loại virus trên thà điển hình là virus màng não - cơ tìm dạng

D cephalo-myocarditis D (EMC-D) gay DTD trên chuột nhất và virus Kiliham

gây ĐTĐ trên chuột cống (KRV)

2.3.2.1 (Gây tăng glueose huyết bằng virus EMC — D

Virus EMC-D thudc ho Piconaviridae, vat chat di truyền chỉ gồm một

sợi ADN đơm, chủng này gây nhiễm một cách chọn lọc và gây viêm đảo tụy tự

miễn ở chuột nhắt có tính nhạy cảm đi truyền Có 2 cơ chế : thứ nhất tấn công

trực tiếp vào tế bào (gắn ADN của nó với ADN của tế bào j gây giảm gen

chủ) ; thứ hai gián tiếp phá huỷ tế bào beta thông qua việc khởi phát hệ thống

miễn dịch của cơ thể thâm nhiềm các tế bào rmiễn dịch và sinh ra các chất độc

gây hoại tử tế bào B Do đó cuối cùng gáy ĐTĐ typ l tự miễn mạn tính

e Cách tiến hành

- Động vật ; chuột nhất chủng Swiss, giống đực, cân năng 18-22g

- Gây ĐTĐÐ cho chuột bằng cách tiêm chủng virus EMC - Ð với một

Liều cao duy nhất là 5.1 0° PEU/con

Sau 3 ngày tức là sau 72h định lượng GH của mỗi con chuột Những

con có GH > 250mg/dl được coi là ĐTĐ và đưa vào thử tác dụng của thuốc

~- Tiền hành thử thuốc

Chia ngắu nhiên chuột nhất bị ĐTÐ trên thành các lô :

Lô chứng : không dùng thuốc

Lô thử : dùng thuốc nghiên cứu

Lô sơ sánh : dùng insulin hoặc gliclazid

Các lô đều được định lượng GH ngay trước thời điểm dùng thuốc, và

sau khi dùng thuốc 30phút, Lh, 2h, 4h, &h

20

© Dénh gic két qua ‘Ty \¢ phan trăm hạ GH sau khi dùng thuốc sơ với trước

khi dùng thuốc Theo công thức (I) So sánh mức hạ GH giữa các lô

2.3.2.2 Gây tăng glueose huyết bằng virus Killham

Virus Kilham cũng là tác nhân gay DTD typ | khae 6 chung EMC-D 6 ché chiing khéng gay nhiém cho té bao j mà phá vỡ su cân bằng miễn địch giữa dòng tế bào Iympho T,+„, và Tc„y¿, hoạt hoá các lympho T độc hoạt hoá rồi mới gây phá huỷ tế bào ñ [49]

® Cách tiến hành

Chuột BB đã kháng bệnh, 21-25 ngày tuổi, được êm virus KRV, Trong

2-4 tuần sau gây nhiễm những con phát triển thanh bénh DTD (GH = 250 mg/dl) duoc dùng để nghiên cứu tác dung của thuốc hoặc nghiên cứu tương

tac giữa các yếu tố môi trường trong cơ chế bệnh sinh của bénh DTD typ |

2.3.3 Gây tăng giucose huyết bằng cắt bỏ tu yến tụy

Tuyến tuy là bộ máy đuy nhất bài tiết insulin để điều hoà GH của cơ thể Vì vậy khi loại bỏ bộ máy này sẽ gây thiếu insulin tuyệt đối, do đó gây

tăng GH và ĐTĐ Múc độ trầm trọng của bệnh phụ thuộc vào việc cát bỏ một

phần hay hoàn toàn tuyến tụy Để gây ĐTĐ ngay lập tức và không phục hồi,

phần nhu mô tụy phải < 1/30 so với trước khi cắt Trong trường hợp đó sẽ xuất

hiện tình trạng ĐTĐ với đầy đủ các triệu chứng kính điển như: tăng glucose

huyết cao (>l6mmol/) tiểu nhiều, khát nhiều trọng lượng giảm 30-50% [33]