Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế viên venlafaxin dạng cốt giải phóng kéo dài

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THỦY NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG CÔNG THỨC BÀO CHẾ VIÊN VENLAFAXIN DẠNG CỐT GIẢI PHÓNG KÉO DÀI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: 1. TS. Vũ Thị Thu Giang 2. Ds. Lê Văn Lâm Nơi thực hiện: Bộ môn Bào chế Đại học Dược Hà Nội

Với sự kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn tới:

TS Vũ Thị Thu Giang

là người thầy đã luôn quan tâm, tận tình hướng dẫn, giúp tôi có những định hướng

chính xác trong quá trình làm nghiên cứu

Tôi cũng xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới:

ThS Nguyễn Văn Hà

DS Lê Văn Lâm

là người đã luôn hỗ trợ và đưa ra những ý kiến thiết thực cho tôi trong thời gia làm thực nghiệm

Trong thời gian làm khóa luận tốt nghiệp tại bộ môn Bào chế - Trường Đại học Dược Hà Nội tôi đã may mắn nhận được rất nhiều sự giúp đỡ của các thầy cô, anh

chị kỹ thuật viên ở bộ môn, nếu không có sự giúp đỡ đó khóa luận của tôi sẽ rất khó

có thể hoàn thành được Vì vậy qua khóa luận này tôi muốn gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới các thầy cô và các anh chị đã tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp đỡ tôi

trong thời gian vừa qua

Và tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn của mình đến toàn thể thầy cô trong ban giám

hiệu nhà trường, các phòng ban và cán bộ nhân viên trong trường đã đã dạy dỗ, dìu

dắt tôi trong suốt 5 năm học tại trường

Cuối cùng, cho tôi gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới gia đình, bạn bè, những người thân thiết đã luôn động viên và là chỗ dựa tinh thần cho tôi từ những ngày đầu tiên cho đến khi tôi hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp dược sĩ như ngày hôm

nay

Hà Nội, tháng 5 năm 2014 Sinh viên

Nguyễn Thị Thủy

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 2

1.1 Venlafaxin 2

1.1.1 Tính chất lý hóa 2

1.1.2 Công thức cấu tạo 2

1.1.3 Tác dụng dược lý 2

1.1.4 Dược động học 3

1.1.5 Chỉ định, dạng dùng và liều dùng 3

1.1.6 Phương pháp định lượng 4

1.1.7 Một số chế phẩm venlafaxin trên thị trường 4

1.2 Thuốc giải phóng kéo dài 5

1.2.1 Khái niệm 5

1.2.2 Phân loại thuốc giải phóng kéo dài 5

1.2.3 Ưu nhược điểm của thuốc giải phóng kéo dài 5

1.2.4 Một số yêu cầu về dược chất bào chế dạng giải phóng kéo dài 6

1.2.5 Hệ giải phóng kéo dài theo cơ chế trương nở / ăn mòn 7

1.2.6 Đánh giá chất lượng thuốc giải phóng kéo dài 8

1.3 Tối ưu hóa 8

1.3.1 Khái niệm 8

1.3.2 Biến đầu vào và biến đầu ra 9

1.3.3 Thiết kế thí nghiệm 9

1.3.4 Trình tự thiết kế thí nghiệm và tối ưu hóa 9

1.4 Một số nghiên cứu về thuốc venlafaxin giải phóng kéo dài 10

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.1 Nguyên liệu và thiết bị 16

2.1.1 Nguyên liệu 16

2.3 Phương pháp nghiên cứu 17

2.3.1 Phương pháp bào chế viên nén venlafaxin 75mg giải phóng kéo dài cốt thân nước 17

2.3.2 Phương pháp đánh giá 18

2.3.3 Phương pháp thiết kế thí nghiệm và tối ưu hóa công thức 22

CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 24

3.1 Xây dựng đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa mật độ quang và nồng độ dung dịch venlafaxin hydroclorid trong môi trường nước 24

3.2 Khảo sát một số chỉ tiêu chất lượng của viên đối chiếu 25

3.3 Khảo sát ảnh hưởng của một số tá dược tới khả năng giải phóng dược chất 26 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng của từng tá dược 26

3.3.2 Khảo sát sự kết hợp của các tá dược kiểm soát giải phóng 30

3.4 Thiết kế nghiên cứu và tối ưu hóa viên nén venlafaxin giải phóng kéo dài 35

3.4.1 Lựa chọn biến công thức và thiết kế, tiến hành thí nghiệm 35

3.4.2 Ảnh hưởng của các biến độc lập đến khả năng giải phóng dược chất 39

3.4.3 Lựa chọn công thức tối ưu 42

3.5 Đánh giá viên nén venlafaxin giải phóng kéo dài 24 giờ bào chế theo công thức tối ưu 43

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46

TÀI LIỆU THAM KHẢO 47

Ký hiệu Nội dung

ANOVA Phân tích phương sai (Analysis of Variance)

BP Dược điển Anh (The British Pharmacopoeia)

CA Cellulose acetat

DCP Dicalxi phosphat

EP Dược điển châu Âu (European Pharmacopoeia)

GPKD Giải phóng kéo dài

HPMC Hydroxy propyl methyl cellulose

Mg stearat Magnesi stearat

NaCMC Natri carboxy methyl cellulose

ODV O-desmethylvenlafaxin

PVP Polyvinyl pyrolidon

TCCS Tiêu chuẩn cơ sở

TCNSX Tiêu chuẩn nhà sản xuất

USP Dược điển Mỹ (The United States Pharmacopoeia) WHO Tổ chức y tế thế giới (World Health Organization) HEC Hydroxy ethyl cellulose

PEG Poly (ethylen glycol)

Bảng 2: Nguyên liệu, tá dược dùng trong bào chế viên nén venlafaxin giải phóng

kéo dài 16

Bảng 3: Yêu cầu về độ hòa tan theo tiêu chuẩn cơ sở của viên đối chiếu 21

Bảng 4: Nồng độ và mật độ quang đo được của dung dịch venlafaxin tại bước sóng λ = 235 nm 24

Bảng 5: Kết quả thử hòa tan viên đối chiếu (n=6) 25

Bảng 6: Thành phần các mẫu viên nghiên cứu chứa các loại tá dược kiểm soát giải phóng khác nhau 27

Bảng 7: Kết quả thử hòa tan các mẫu viên nghiên cứu chứa các loại tá dược kiểm soát giải phóng khác nhau 28

Bảng 8: Thành phần các mẫu viên có sự kết hợp các tá dược kiểm soát giải phóng 31

Bảng 9: Kết quả thử hòa tan các mẫu viên có sự kết hợp các tá dược kiểm soát giải phóng 31

Bảng 10: Biến đầu vào và các khoảng biến thiên 35

Bảng 11: Tỷ lệ của các tá dược kiểm soát giải phóng trong 17 công thức thực nghiệm 36

Bảng 12: Kết quả đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng bột và chất lượng viên của 17 công thức thực nghiệm 37

Bảng 13: Kết quả thử hòa tan của 17 mẫu viên thực nghiệm (n=6) 38

Bảng 14: Giá trị R2 39

Bảng 15: Ảnh hưởng của các yếu tố đến sự giải phóng dược chất 39

Bảng 16: Đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của công thức tối ưu 43

Bảng 17: Kết quả thử hòa tan của các mẻ tối ưu và viên đối chiếu 44

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 1: Các bước bào chế viên nén venlafaxin giải phóng kéo dài 18

Hình 2: Đường chuẩn của dung dịch venlafaxin hydroclorid trong môi trường nước ở bước sóng λ=235 nm 24

Hình 3: Đồ thị giải phóng venlafaxin của viên đối chiếu 26

Hình 4: Đồ thị giải phóng dược chất của các mẫu viên nghiên cứu chứa các loại tá dược kiểm soát giải phóng khác nhau 29

Hình 5: Ảnh hưởng của tỷ lệ HPMC K100M đến giải phóng dược chất 32

Hình 6: Ảnh hưởng của tỷ lệ NaCMC tới giải phóng dược chất 33

Hình 7: Ảnh hưởng của tỷ lệ DCP tới giải phóng dược chất 34

Hình 8: Mặt đáp ảnh hưởng của HPMC K100M và NaCMC đến giải phóng dược chất của viên venlafaxin 400 mg (tỷ lệ DCP là 18 %) 41

Hình 9: Mặt đáp ảnh hưởng của NaCMC và DCP đến giải phóng dược chất của viên venlafaxin 400 mg (tỷ lệ HPMC K100M là 20 %) 41

Hình 10: Mặt đáp ảnh hưởng của DCP và HPMC K100M đến giải phóng dược chất của viên venlafaxin 400 mg ( tỷ lệ NaCMC là 10 %) 42

Hình 11: Đồ thị giải phóng venlafaxin của 3 mẻ viên tối ưu 45

ĐẶT VẤN ĐỀ

Hiện nay trên thế giới trầm cảm là một căn bệnh vô cùng phổ biến, theo tổ chức

y tế thế giới (WHO), ước tính có khoảng 350 triệu người (tương ứng 5% dân số thế giới) bị mắc chứng bệnh này, tại Việt Nam con số này là 3 – 5% [9] Bệnh thường xuất hiện với các triệu chứng như âu lo, chán nản sâu sắc, mất hứng thú, xa lánh các hoạt động, luôn trong trạng thái tuyệt vọng và rối loạn bữa ăn, giấc ngủ [5]

Trầm cảm nếu không được điều trị kịp thời sẽ làm giảm chất lượng cuộc sống của cá nhân, gia đình, xã hội và xấu nhất là tự sát Cũng theo WHO, bệnh trầm cảm cướp đi mỗi năm trung bình 850.000 mạng người [10]

Venlafaxin là một chất thuộc nhóm các thuốc ức chế chọn lọc Serotonin và nonepinephrin (SNRIs) Xét về tác dụng chống trầm cảm của venlafaxin, một số công trình nghiên cứu đã cho thấy venlafaxin có tác dụng tương đương với các thuốc chống trầm cảm như các thuốc chống trầm cảm 3 vòng (TCAs), các thuốc ức chế chọn lọc tái hấp thu serotonin (SSRIs) Bên cạnh đó venlafaxin cũng gây ít tác dụng phụ lên người sử dụng hơn so với các thuốc chống trầm cảm khác [3], [16], [17]

Venlafaxin có thời gian bán thải khoảng 5 giờ, khi sử dụng thuốc ở dạng thuốc quy ước mỗi ngày bệnh nhân phải dùng từ 2 đến 3 lần Dạng bào chế GPKD có ưu điểm là giảm số lần dùng thuốc trong ngày, giúp duy trì ổn định nồng độ thuốc trong vùng điều trị, do đó giảm được tác dụng không mong muốn của thuốc Ở Việt Nam hiện nay chúng tôi chưa thấy công trình nghiên cứu nào về kỹ thuật bào chế dạng thuốc GPKD chứa venlafaxin được công bố Vì lý do đó chúng tôi thực hiện

đề tài “Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế viên venlafaxin dạng cốt giải phóng kéo dài” với mục tiêu:

Xây dựng được công thức bào chế tối ưu cho viên nén venlafaxin giải phóng kéo dài 24 giờ với tá dược cốt thân nước

CHƯƠNG I : TỔNG QUAN 1.1 Venlafaxin

1.1.1 Tính chất lý hóa

Bột kết tinh màu trắng hoặc trắng ngà, tan tốt trong nước, metanol Độ hòa tan trong nước là 572 mg/ml Ít tan hoặc không tan trong aceton Khoảng nhiệt độ nóng chảy từ 115 đến 1170C [14], [29]

1.1.2 Công thức cấu tạo

Venlafaxin khác với các thuốc chống trầm cảm 3 vòng (TCAs), nó ít hoặc không có tác dụng lên neuroreceptor khác nhau Do đó, nó không tương tác với các thụ thể α hoặc β-adrenergic, muscarinic cholinergic, histaminergic hoặc serotoninergic Venlafaxin không có tác dụng lên kênh natri nhanh của tế bào timvà

do vậy có thể tránh được độc tính lên tim như khi sử dụng các TCAs Venlafaxin không ức chế hoạt động của monoamine oxidase Nhiều thuốc chống trầm cảm sau khi dùng trường diễn mới làm giảm đáp ứng của thụ thể β-adrenergic Venlafaxin là thuốc duy nhất trong các loại thuốc chống trầm cảm làm giảm đáp ứng của thụ thể β-adrenergic sau khi điều trị với chỉ một liều đơn, đây là đặc tính mà venlafaxin được cho là có thời gian khởi đầu chống trầm cảm nhanh hơn các thuốc khác [15], [20], [22]

1.1.4 Dƣợc động học

Venlafaxin được hấp thu tốt qua đường uống, ít nhất 92% của liều dùng được hấp thu Venlafaxin và ODV được bài tiết qua đường nước tiểu venlafaxin bị chuyển hóa ở gan bởi CYP2D6, chất chuyển hóa chính của nó là o-desmethylvenlafaxin (ODV) là chất cũng có tác dụng ức chế tái hấp thu serotonin

và norepinephrin như venlafaxin Liên kết protein huyết tương của venlafaxin và ODV lần lượt là 27% và 30% Nồng độ đỉnh trong huyết tương của venlafaxin và ODV tương ứng là từ 33 đến 172 ng/ml và từ 61 đến 325 ng/ml Thời gian bán thải của venlafaxin và ODV lần lượt là 5 và 11 tiếng, vì vậy cần thiết phải sử dụng thuốc

từ 2 đến 3 lần/ngày để duy trì nồng độ thuốc trong máu phù hợp [16], [18]

1.1.5 Chỉ định, dạng dùng và liều dùng

 Chỉ định: Chống trầm cảm, không dùng cho những người gầy yếu do có thể làm

giảm thể trọng [10]

 Dạng dùng:

- Viên nén 25 mg, 37,5 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg venlafaxin hydroclorid

- Viên nang 37,5 mg, 75 mg, 150 mg venlafaxin hydroclorid [3], [10]

 Liều dùng: người lớn 100 – 150 mg/24 giờ, tối đa 375 mg/ngày[27]

1.1.6 Phương pháp định lượng

Theo Dược điển Mỹ 37 (2014), định lượng venlafaxin hydroclorid theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC):

Pha động: Dung dịch đệm phosphat pH 3,0 – acetonitril = 70 : 30, mẫu

chuẩn và mẫu thử được pha trong methanol Dựa vào pic đáp ứng của mẫu chuẩn và mẫu thử tính toán ra hàm lượng venlafaxin hydroclorid trong mẫu thử từ đó suy ra hàm lượng venlafaxin hydroclorid trong viên [29]

Theo Dược điển Anh (2010) định lượng venlafaxin hydroclorid bằng phương pháp chuẩn độ đo thế: hòa tan 0,25 mg hoạt chất trong dung dịch bao gồm 5 ml acid hydroclorid 0,01M và 50 ml ethanol (96%), dung dịch thêm vào là NaOH 0,1 M Đọc thể tích dung dịch NaOH đã thêm vào khi xuất hiện bước nhảy

1ml dung dịch NaOH tương đương 31,39 mg C17H28ClNO2 [14]

1.1.7 Một số chế phẩm venlafaxin trên thị trường

Bảng 1: Một số chế phẩm venlafaxin trên thị trường

Dạng bào chế Tên biệt dược Hàm lượng Hãng sản xuất

Intas pharmaceuticals Pvt.ltd

1.2 Thuốc giải phóng kéo dài

1.2.1 Khái niệm

Thuốc GPKD là những chế phẩm có khả năng kéo dài quá trình giải phóng

và hấp thu dược chất từ dạng thuốc nhằm duy trì nồng độ dược chất trong máu trong vùng điều trị một thời gian dài với mục đích kéo dài thời gian điều trị, giảm số lần dùng thuốc cho người bệnh, giảm số lần dùng thuốc cho người bệnh, giảm tác dụng không mong muốn, nâng cao hiệu quả điều trị của thuốc

Theo dược điển Mỹ, thuốc GPKD ít nhất phải giảm được một nửa số lần dùng thuốc cho người bệnh [1]

1.2.2 Phân loại thuốc giải phóng kéo dài

Hiện nay chưa có cách phân loại rõ ràng

Theo các tài liệu chính thống có thể chia thành các loại sau: thuốc giải phóng kéo dài, thuốc giải phóng có kiểm soát, thuốc giải phóng theo chương trình, thuốc giải phóng nhắc lại, thuốc giải phóng tại đích [1]

1.2.3 Ƣu nhƣợc điểm của thuốc giải phóng kéo dài

1.2.3.1 Ưu điểm

 Duy trì được nồng độ dược chất trong máu trong vùng điều trị, giảm được dao động nồng độ máu của thuốc (tránh được hiện tượng đỉnh – đáy), do đó giảm được tác dụng không mong muốn của thuốc

 Giảm được số lần dùng thuốc cho người bệnh, tránh quên thuốc, bỏ thuốc, thức dậy giữa đêm để uống thuốc… Từ đó đảm bảo được sự tuân thủ của người bệnh

 Nâng cao được sinh khả dụng (SKD) của thuốc do thuốc được hấp thu đều đặn, triệt để hơn

 Giảm được lượng thuốc dùng cho cả đợt điều trị, do đó giảm giá thành của một liệu trình điều trị [1]

1.2.3.2 Nhược điểm

 Nếu có hiện tượng ngộ độc, tác dụng không mong muốn hay không chịu thuốc thì không thải trừ ngay thuốc ra khỏi cơ thể được

 Tác dụng lâm sàng của thuốc phụ thuộc nhiều vào kỹ thuật bào chế và những thay đổi sinh học trong cơ thể người bệnh

 Chỉ có một số rất ít dược chất chế được dưới dạng GPKD [1]

1.2.4 Một số yêu cầu về dƣợc chất bào chế dạng giải phóng kéo dài

1.2.4.1 Độ tan

Độ tan của dược chất ảnh hưởng trực tiếp đến quá trình hấp thu dược chất Mối quan hệ giữa tốc độ hấp thu và độ tan được thể hiện qua phương trình Noyes- Withney:

dt

dC

= KD.A.Cs Trong đó:

KD: hằng số tốc độ hòa tan

A: tổng diện tích bề mặt tiếp xúc của dược chất với môi trường hòa tan

Cs: nồng độ bão hòa của dược chất

Như vậy, tốc độ hấp thu tỷ lệ thuận với giới hạn hòa tan dược chất Nếu dược chất

có độ tan nhỏ sẽ hạn chế tốc độ hấp thu, do đó không cần chế dưới dạng GPKD Ngược lại với dược chất quá dễ tan trong nước thường hấp thu nhanh và dễ gây hiện tượng đỉnh nồng độ trong máu vượt quá giới hạn an toàn tối thiểu

Do vậy, thuốc GPKD thường chứa dược chất tương đối dễ tan trong nước (> 0,1 mg/ml)

1.2.4.2 Hệ số phân bố dầu nước

Dược chất sau khi được đưa vào cơ thể phải khuếch tán qua nhiều loại màng sinh học khác nhau Phần lớn màng sinh học có bản chất là lipoprotein, do đó dược chất phải có một hệ số phân bố thích hợp mới thấm được qua màng Các dược chất

có hệ số phân bố D/N khoảng 1000 thích hợp để bào chế dạng GPKD

Ngoài ra một số đặc điểm về độ ổn định, liên kết protein huyết tương, các yếu tố sinh học của dược chất cũng liên quan đến tác dụng kéo dài của thuốc

1.2.5 Hệ giải phóng kéo dài theo cơ chế trương nở / ăn mòn

Có nhiều cách để kiểm soát giải phóng dược chất từ dạng thuốc GPKD như

sử dụng hệ màng bao khuếch tán, hệ cốt trơ khuếch tán, hệ màng bao hòa tan, hệ cốt trương nở/ ăn mòn, hệ giải phóng dược chất theo cơ chế áp suất thẩm thấu, trao đổi ion…Nhưng trong phạm vi đề tài này, chúng tôi chỉ đề cập đến hệ cốt trương nở/ ăn mòn

1.2.5.1 Nguyên tắc cấu tạo của hệ cốt

Dược chất được phối hợp với một polyme thân nước hoặc với sáp hay chất béo, đóng vai trò cốt mang thuốc Sau khi uống, cốt sẽ hòa tan hoặc ăn mòn từ từ trong đường tiêu hóa để kéo dài sự giải phóng dược chất

1.2.5.2 Quá trình giải phóng dược chất từ hệ cốt

 Cốt thấm nước và hòa tan lớp dược chất ở bề mặt cốt

 Polyme trương nở tạo thành hàng rào gel kiểm soát quá trình giải phóng dược chất

 Môi trường hòa tan khuếch tán qua lớp gel thấm vào trong cốt hòa tan dược chất

và cốt

 Dung dịch dược chất khuếch tán qua lớp gel ra môi trường bên ngoài

Như vậy quá trình giải phóng dược chất của hệ không chỉ phụ thuộc vào sự hòa tan của cốt mà còn phụ thuộc rất nhiều vào sự khuếch tán dược chất qua lớp gel Sự khuếch tán dược chất biểu thị theo phương trình Noyes- Withney:

H: bề dày khuếch tán

A: tổng diện tích bề mặt tiếp xúc của dược chất với môi trường hòa tan

Cs: nồng độ bão hòa của dược chất

C: nồng độ dược chất trong môi trường hòa tan

Ưu điểm của hệ cốt trương nở/ ăn mòn là kỹ thuật bào chế đơn giản, áp dụng

được với nhiều loại dược chất Nguyên liệu tạo cốt thường rẻ tiền, không độc và dễ

kiếm Một số nguyên liệu tạo cốt hay dùng là alginat, gôm adragant, gôm Xanthan, CMC, HPMC…

Nhược điểm của hệ là khó đạt được sự giải phóng theo động học bậc không

Bên cạnh đó sự phân hủy của cốt phụ thuộc nhiều vào các yếu tố ngoại môi như pH

và hệ enzym trong đường tiêu hóa [1]

1.2.6 Đánh giá chất lƣợng thuốc giải phóng kéo dài

Chất lượng thuốc GPKD thường được đánh giá theo hai tiêu chí quan trọng nhất là: tính an toàn – hiệu quả và khả năng kéo dài tác dụng

1.2.6.1 Đánh giá tính an toàn và hiệu quả

Yêu cầu đánh giá tính an toàn và hiệu quả tùy thuộc vào loại thuốc GPKD:

 Với thuốc GPKD chứa dược chất đã có dạng quy ước được phép lưu hành trên thị trường thì phải đánh giá sinh khả dụng (SKD) của thuốc GPKD so với dạng quy ước: nồng độ dược chất trong máu hoặc dược chất bài tiết trong nước tiểu ở trạng thái cân bằng phải tương đương với chế độ nhiều liều của dạng qui ước

 Với thuốc GPKD chứa dược chất đã có dạng GPKD được phép sản xuất lưu hành trên thị trường thì phải đánh giá SKD tương đối của thuốc nghiên cứu so với dạng GPKD đã có: chế phẩm nghiên cứu phải tương đương sinh học với chế phẩm đối chiếu

1.2.6.2 Đánh giá tính chất kéo dài:

Thuốc GPKD phải thể hiện đúng mô hình kéo dài như đã thiết kế Muốn vậy trước hết phải kéo dài quá trình giải phóng dược chất khỏi dạng thuốc Do đó tính

chất kéo dài của thuốc được đánh giá về giải phóng dược chất in vitro, và sinh khả dụng in vivo [1]

1.3 Tối ƣu hóa

1.3.1 Khái niệm

Tối ưu hóa một công thức hay một quy trình bào chế là việc tìm công thức, thông số (hay điều kiện tiến hành) của quy trình để sản phẩm làm ra đạt kết quả tốt nhất trong giới hạn mong muốn của người làm thí nghiệm

1.3.2 Biến đầu vào và biến đầu ra

 Biến đầu ra (còn gọi là biến phụ thuộc hay đáp ứng): là các kết quả của thí nghiệm mà người làm thí nghiệm thấy cần phải đo đạc và đánh giá Ví dụ: độ rã,

độ hòa tan, độ đồng đều khối lượng…

 Biến đầu vào (còn gọi là biến độc lập hay yếu tố): là những biến mà người làm thí nghiệm có thể thay đổi giá trị của nó khi tiến hành thí nghiệm và sự thay đổi này sẽ kéo theo sự thay đổi giá trị của biến đầu ra Ví dụ: lực dập, tá dược, nhiệt

độ sấy,…

1.3.3 Thiết kế thí nghiệm

Thiết kế thí nghiệm là phương pháp lập kế hoạch và tiến hành thực nghiệm để thu nhận được thông tin tối đa từ tập hợp các dữ liệu thí nghiệm trong sự có mặt của nhiều yếu tố có thể làm biến đổi kết quả thí nghiệm với số thí nghiệm tối thiểu

1.3.4 Trình tự thiết kế thí nghiệm và tối ƣu hóa

 Xác định biến đầu ra cần tối ưu hóa và yêu cầu của chúng

 Xác định các biến đầu vào có khả năng ảnh hưởng đến biến đầu ra

 Sàng lọc: thiết kế các thí nghiệm sơ bộ nhằm phân tích ảnh hưởng của các biến đầu vào lên các biến đầu ra để loại bỏ các biến đầu vào không hoặc ít ảnh hưởng

 Thiết kế và tiến hành thí nghiệm để phân tích ảnh hưởng của các biến đầu vào còn lại lên các biến đầu ra Từ các kết quả thí nghiệm, xây dựng mối quan hệ giữa các biến đầu ra và các biến đầu vào

 Tối ưu hóa các biến đầu ra dựa trên các mối quan hệ đã xây dựng để tìm các giá trị tối ưu của các biến đầu vào

 Làm thí nghiệm theo các giá trị tối ưu của các biến đầu vào vừa tìm được để kiểm tra và điều chỉnh nếu cần

 Triển khai sản xuất trên quy mô bán công nghiệp và công nghiệp [7], [8], [11], [13]

1.4 Một số nghiên cứu về thuốc venlafaxin giải phóng kéo dài

 Bagdiya Omprakash và các cộng sự đã nghiên cứu và đánh giá khả năng

kiểm soát giải phóng venlafaxin của các polyme như HPMC K4M, HPMC K100M, Novocoat K100M, gôm xanthan, Polyox, Carbopol Viên nén được bào chế bằng phương pháp dập thẳng Tiến hành thử hòa tan viên với các điều kiện: tốc độ khuấy 50 vòng /phút, 900 ml nước cất, nhiệt độ 37±0,5ºC, viên đối chiếu là VENTAB XL 75 Mô hình động học giải phóng phù hợp nhất là phương trình Korsmeyer – Peppas Kết quả thử giải phóng cho thấy mẫu viên bao gồm Novocoat K100M, gôm xan than không đạt tiêu chuẩn kiểm soát giải phóng của viên GPKD Mẫu viên gồm HPMC K4M và các loại Carbopol khác nhau kiểm soát giải phóng khá tốt những giờ đầu do khả năng trương nở và tạo gel nhanh (trong 5 h đầu chỉ giải phóng 24%) nhưng sau 24h chỉ giải phóng tối đa 66 % Công thức kết hợp HPMC K100M với Starch 1500 tạo ra viên có kết quả giải phóng tương đương viên chuẩn nhưng khối bột không đạt về khả năng chịu nén Tiếp tục khảo sát sự kết hợp giữa HPMC K100M và carbopol 71G tác giả nhận thấy thấy khả năng giải phóng dược chất tăng đều đặn, sau 24 giờ dược chất trong viên đã được giải phóng hoàn toàn Công thức được chọn để tối ưu hóa là công thức kết hợp giữa Methocel K100M và Polyox WSR 303 Phần trăm giải phóng ở 5h, 10h, 15h, 24h lần lượt là 39,07 %; 59,12%; 70,16%; 79,42% Chỉ số f2 = 61,48 cho thấy khả năng giải phóng của viên tối ưu tương đương với viên chuẩn [22]

 Panmu Sandhya và cộng sự đã khảo sát và xây dựng công thức viên nén

venlafaxin kéo dài theo cơ chế áp xuất thẩm thấu Các nguyên liệu được sử dụng

để khảo sát, xây dựng công thức bao gồm: venlafaxin HCl, HPMC K4M, K15M, E15M, cellulose acetat, NaCMC, mannitol, lactose, PEG-400, magnesi stearat và

talc Tạo viên nén lõi: Tất cả các thành phần được cân và rây qua rây số 85 Ngoại

trừ tá dược trơn (magnesi stearat, talc), tá dược dính polyvinylpyrrolidon (PVP), các thành phần còn lại được trộn đều và làm ẩm với dung dịch PVP 10 % sau đó tạo cốm bằng cách cho khối bột tạo thành qua rây số 18 Làm khô bằng cách sấy ở

600C trong 3-4 giờ, hàm lượng ẩm còn lại khoảng 2-4% Cốm khô được rây qua

rây số 26 và trộn với bột talc, magnesi stearat, tạo thành viên nén có đường kính 9

mm và lực nén khoảng 4,5-5 kg/cm2 Bao viên nén lõi: Viên nén lõi sẽ được bao

bởi màng bao bán thấm là dung dịch cellulose acetat (CA) cùng với dầu thầu dầu (tổng CA là 20%) như là chất hóa dẻo Sử dụng nồi bao vách ngăn, hình quả lê,

bằng thép không gỉ Chuẩn bị dung dịch bao: CA được cân, hòa tan trong cốc

đang có sẵn aceton và khuấy Tiếp tục khuấy cho đến khi thu được dung dịch trong PEG 400 được hòa tan trong một cốc khác với lượng nước đã được xác định trước Chuyển từ từ dung dịch PEG 400 sang cốc đang có dung dịch AC và khuấy

Quy trình bao: Viên nén lõi được đặt cùng với viên nén giả dược, nồi bao được

quay với tốc độ 60 vòng/phút Quá trình bao được bắt đầu với nhiệt độ khí đầu ra

280C Dung dịch bao được phun với tốc độ 12-14 ml/phút và áp suất không khí được giữ ở 30-35lb/in2 Nhiệt độ khí đầu ra được duy trì là 280C bằng cách duy trì nhiệt độ khí đầu vào là 45-500C Viên nén thu được sau khi bao được làm khô ở

600C trong 16 giờ Đánh giá độ hòa tan in vitro in môi trường acid HCl pH 1,2 trong 2 giờ và trong môi trường đệm pH 6,8 trong 6 giờ tiếp theo đó, thể tích môi trường 900 ml, thiết bị cánh quấy và tốc độ quay là 50 vòng/phút Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng: Các công thức chứa venlafaxin HCl và HPMC K4M với các tỷ lệ 1:1, 1:2 và 1:0,5 không giải phóng được tối đa hoạt chất tại thời điểm 8 giờ Với các công thức chứa venlafaxin HCl và HPMC K15M với các tỷ lệ khác nhau, công thức có tỷ lệ venlafaxin HCl và HPMC K15M 1:1 cho thấy giải phóng 98,7% hoạt chất tại thời điểm 8 giờ Các công thức chứa venlafaxin HCl và NaCMC với các tỷ

lệ khác nhau cho thấy hoạt chất giải phóng hoàn toàn sau 6 giờ Các công thức chứa venlafaxin HCl, HPMC K15M và manitol được bào chế bằng kỹ thuật dập thẳng thì giải phóng hoạt chất hoàn toàn sau 2 giờ [23]

 Sapna N Makhija và các cộng sự đã nghiên cứu khả năng kiểm soát giải

phóng dược chất của các polyme khác nhau như HPMC (K100M và K15M), cellulose acetat (CA), eudragit RSPO (E-RS), ethylcellulose (EC) Sự ảnh hưởng của tỷ lệ các polyme đến khả năng giải phóng dược chất cũng được đưa vào nghiên cứu Tác giả đã tiến hành khảo sát một số công thức và chọn ra polyme

thích hợp nhất để cấu tạo nên hệ cốt cho viên giải phóng kéo dài venlafaxin là HPMC K100M kết hợp với một tỷ lệ tối ưu ethylcellulose / eudragit Điều kiện thử hòa tan là: tốc độ khuấy 50 vòng /phút, 900 ml nước cất, nhiệt độ 37±0,5ºC Viên chuẩn là viên nang chứa pellets GPKD của venlafaxine HCl tương đương 75 mg venlafaxin Phương trình động học được dùng để phân tích số liệu là Higuchi [20]

 Shital Bhavin Butani và cộng sự đã nghiên cứu bào chế ra viên nén

venlafaxin GPKD 3 lớp sử dụng gôm xanthan và polyethylen oxid Phương pháp: viên nén venlafaxin HCl 150 mg GPKD được tạo ra bằng phương pháp xát hạt ướt, dược chất được cho vào lớp giữa với một lượng polyme Hai lớp ngoài cùng được tạo bởi lượng polyme còn lại và các tá dược khác Hạt và viên nén tạo ra đều được đánh giá theo tiêu chuẩn Viên tối ưu được đánh giá khả năng giải phóng

trong các môi trường pH khác nhau với sự có mặt của ethanol Kết quả: hạt trơn

chảy tốt Khả năng giải phóng của viên thử cũng tương đương với viên chuẩn Effexor khi thay đổi tỷ lệ polyme trong lớp giữa cũng như hai lớp ngoài Cần tăng thêm lượng polyethylen oxid lên so với gôm xanthan vì Polyethylen oxid có khả năng hút nước cao và tạo ra hàng rào gel yếu Mẫu viên tối ưu có khả năng giải phóng dược chất không phụ thuộc vào pH môi trường cũng như sự có mặt của ethanol Sự hòa tan của viên chuẩn và viên thử tuân theo phương trình động học

Weibull Kết luận: Viên nén nhiều lớp cấu tạo từ các polyme thân nước, gôm

xanthan hoặc polyethylen oxid có khả năng kéo dài giải phóng dược chất venlafaxin [26]

 Nguyễn Văn Hà đã nghiên cứu bào chế viên nén venlaffaxin GPKD bằng

phương pháp dập thẳng với các tác nhân kiểm soát giải phóng như HPMC K100M, Precirol, Compritol, NaCMC, HPC Điều kiện thử hòa tan như sau: tốc độ khuấy 50 vòng /phút, 900 ml nước cất, nhiệt độ 37±0,5ºC Viên đối chiếu là Effexor XR 75 mg Kết quả thu được là các mẫu viên sử dụng Precirol và Compritol đều giải phóng nhanh, sau 4h đã cho kết quả giải phóng lần lượt là 83 –

95 % và 89,5 – 100,6% Do đó các tá dược béo chỉ được dùng kết hợp với các tá dược kiểm soát giải phóng khác để bào chế viên GPKD Hệ cốt GPKD bao gồm

HPMC và các tá dược béo chỉ có khả năng kiểm soát giải phóng trong một giới hạn nhất định Mẫu viên cho thấy khả năng giải phóng phù hợp với viên chuẩn nhất là mẫu có sự kết hợp giữa NaCMC – H, HPC – M và tá dược béo Việc sử dụng các tá dược độn khác nhau cũng không có ảnh hưởng đáng kể tới khả năng giải phóng của viên Công thức viên nén venlafaxin tối ưu bao gồm: Precirol, NaCMC-H, HPC-M, Avicel và Magnesi stearat [21]

 Yang Liu cùng cộng sự đã nghiên cứu bào chế pellet chứa venlafaxin HCl

giải phóng kéo dài và được đóng vào nang cứng Nhân thuốc được chuẩn bị bằng phương pháp đùn-tạo cầu, gồm các thành phần: venlafaxin HCl - microcrystalline cellulose - silic oxid (42,5 : 45,5 : 2) Nhân thuốc sẽ được bao bởi các màng bao có công thức như sau:

Công thức 1: Công thức của lớp bao gồm Eudragit NE30D có chứa một lượng nhỏ

PEG 6000, nhân thuốc được bao bởi thiết bị bao tầng sôi Chuẩn bị dung dịch bao: Eudragit NE30D được pha loãng để có hàm lượng 10% (khối lượng/khối lượng), thêm dung dịch PEG 6000, trộn và khuấy 30 phút trước khi bao Quy trình bao: Nhiệt độ đầu vào 200C, nhiệt độ bao 20±20C, tốc độ phun 1 ml/phút, áp suất phun 0,2 Mpa, áp suất khí thổi 0,3 Mpa Làm khô pellet thu được ở 600C trong 24 giờ Nhân thuốc được bao bằng thiết bị bao tầng sôi, loại có vòi phun từ đáy, quá trình bao kết thúc khi khối lượng lớp bao đạt 12% (khối lượng /khối lượng tính dựa trên khối lượng nhân thuốc)

Công thức 2: Công thức của lớp bao gồm ethylcellulose có chứa một lượng nhỏ

PEG 6000 Nhân thuốc được bao bằng thiết bị bao tầng sôi, loại có vòi phun từ đáy, quá trình bao kết thúc khi khối lượng lớp bao đạt 9% (tính dựa trên khối lượng nhân thuốc) Dung dịch bao được chuẩn bị như sau: ethylcellulose được hòa tan trong ethanol 95%, làm mềm hóa qua đêm cùng với dibutyl sebacat, thêm PEG

6000, trộn và khuấy 30 phút trước khi bao Quy trình bao: Nhiệt độ đầu vào 500C, nhiệt độ bao 50±20C, tốc độ phun 1 ml/phút, áp suất phun 0,2 Mpa, áp suất khí thổi 0,3 Mpa Làm khô pellet thu được tại 400C trong 24 giờ Pellet thu được được khảo sát, đánh giá in vitro và in vivo và so sánh với một thuốc khác đang lưu hành

trên thị trường là viên GPKD Effexor XR Phép thử in vitro được thực hiện trên thiết bị thử độ hòa tan với các điều kiện: kiểu quay là giỏ quay, tốc độ quay 100 vòng/phút, thể tích môi trường 900 ml, được thử với 6 môi trường hòa tan khác nhau Các môi trường hòa tan: Nước, đệm phosphat pH 6,8, đệm phosphat pH 7,2, acid HCl 0,1 M, dung dịch đệm NaAc-HAc pH 4,5 và môi trường có pH thay đổi Kết quả khảo sát độ hòa tan in vitro đã được so sánh và đánh giá Công thức 1, được bao bởi Eudragit NE30D, thể hiện đặc tính phóng thích hoạt chất tương tự trong các môi trường hòa tan khác nhau Trong khi đó thuốc từ công thức 2 và viên Effexor XR thể hiện tốc độ hòa tan chậm hơn trong môi trường HCl 0,1M và dung dịch đệm NaAc-HAc pH4,5 so với các môi trường có pH cao hơn Tốc độ phóng thích của thuốc từ công thức 2 và từ viên Effexor XR trong 4 giờ đầu là chậm hơn nhiều so với từ công thức 1, điều này có thể liên quan đến kỹ thuật bao Tốc độ phóng thích của thuốc từ công thức 1 gần như không khác nhau trong các môi trường hòa tan khác nhau có thể do đặc tính của Eudragit NE30D là trung tính

và không nhạy cảm với pH [32]

 Prakrash Katakam và cộng sự đã nghiên cứu bào chế viên nén venlafaxin

giải phóng kéo dài với sự kết hợp các tá dược thân nước, sơ nước bằng phương pháp tạo cốm đun chảy Các polyme được chọn đều có đặc tính tạo hệ cốt, kết quả

đo nhiệt vi sai chỉ ra rằng không có tương tác nào giữa các polyme được chọn với dược chất venlafaxin Thiết kế các mẫu viên khảo sát với thành phần bao gồm sự kết hợp giữa các loại tá dược thân nước, sơ nước như sau: Carbopol 71G, HPMC K15M, PEO, NaCMC, Eudragit RS100 và precirol Khảo sát bột trước khi dập cho thấy khả năng trơn chảy tốt Đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của viên tạo ra cho thấy đều đạt tiêu chuẩn Dược điển, cụ thể là đường kính: 9,0 ± 0,0 mm, độ cứng: 4,08 ± 0,20 – 5,5 ± 0,31 kg/cm2, khối lượng viên dao động trong khoảng 0 – 1,15%, hàm lượng là 98,17 ± 0,68 – 101,89 ±0,73% Kết quả thử độ hòa tan cho mẫu viên mà thành phần viên bao gồm: Carbopol 71 G (50 mg), gôm xanthan (75 mg), MCC (50 mg) có khả năng giải phóng kéo dài Sau 16 giờ viên đã giải phóng

95,2% Chỉ số f2 = 68,46 Dữ liệu nghiên cứu được phân tích bằng phương trình động học Higuchi và Korsmeyer – peppas [23]

Tổng kết: Quá trình tham khảo một số nghiên cứu trên cho thấy rằng có

nhiều phương pháp để bào chế thuốc venlafaxin giải phóng kéo dài như: tạo pellets bằng phương pháp đùn tạo cầu, tạo viên nén 3 lớp, tạo viên nén theo phương pháp tạo cốm đun chảy, xát hạt ướt hay phương pháp dập thẳng Trong đó phương pháp dập thẳng là phương pháp ít công đoạn nhất, dễ thực hiện, không đòi hỏi trang thiết bị đắt tiền và đem lại nhiều thuận lợi khi phát triển quy mô nghiên cứu Điều đó đã được chứng minh trong nghiên cứu của Nguyễn Văn Hà và Bagdiya Omprakash ở trên Ngoài ra các nghiên cứu trên còn cho thấy một số tá dược có khả năng tạo hệ cốt kiểm soát giải phóng dược chất như HPMC (K100M, K4M, K15M), Carbopol, NaCMC và các tá dược béo như Precirol, Compritol Tỷ

lệ giữa các tá dược kiểm soát giải phóng được kết hợp trong viên cũng như tỷ lệ giữa hoạt chất và các tá dược kiểm soát giải phóng đều ảnh hưởng tới khả năng giải phóng của viên Những thông tin trên góp phần định hướng cho quá trình nghiên cứu của đề tài này

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu và thiết bị

2.1.1 Nguyên liệu

Bảng 2: Nguyên liệu, tá dược dùng trong bào chế viên nén venlafaxin giải phóng

kéo dài

2 Hydroxy propyl methyl cellulose

3 Natri carboxy methyl cellulose – M Nhật TCNSX

Viên đối chiếu: Viên nang Effexor XR (chứa venlafaxin 75mg) do công ty Wyeth

Medica Ireland sản xuất

Lô sản xuất: 69145H

Ngày sản xuất: 1/8/2012

Hạn sử dụng: 1/8/2015

2.1.2 Thiết bị

1 Máy dập viên tâm sai KORSCH (Đức)

2 Máy đo lực gây vỡ viên ERWEKA TBH 200 (Đức)

3 Hệ thống thử hòa tan tự động VANKEL- VARIAN (Mỹ- Austalia)

4 Máy đo quang phổ UV- VIS HITACHI (Nhật)

5 Cân xác định độ ẩm của hạt và bột SARTORIUS MA30 (Đức)

6 Cân phân tích PRECISA XB220 CA, cân kỹ thuật, tủ sấy

7 Bình định mức, cốc có mỏ và các dụng cụ thủy tinh khác

2.2 Nội dung nghiên cứu

 Khảo sát ảnh hưởng của các polyme đến khả năng giải phóng venlafaxin từ viên nén GPKD

 Thiết kế thí nghiệm và tối ưu hóa để lựa chọn công thức tối ưu cho viên nén venlafaxin 75 mg GPKD 24 giờ dựa vào tiêu chuẩn viên đối chiếu Effexor

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp bào chế viên nén venlafaxin 75mg giải phóng kéo dài cốt thân nước

Bào chế viên nén venlafaxin bằng phương pháp dập thẳng bằng máy dập viên tâm sai KORSCH (Đức) [2], [6] Các bước tiến hành bào chế viên nén venlafaxin như Hình 1

Hình 1: Các bước bào chế viên nén venlafaxin giải phóng kéo dài

2.3.2 Phương pháp đánh giá

2.3.2.1 Xây dựng đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa mật độ quang và nồng độ dung dịch venlafaxin hydroclorid trong môi trường nước

 Venlafaxin HCl 100mg hòa tan trong 100ml nước cất được dung dịch có nồng độ

1000 µg/ml Từ dung dịch gốc 1000µg/ml pha loãng với nước cất để thu được dãy

dung dịch có nồng độ 20, 30, 40, 60, 80, 100 µg/ml

 Đo mât độ quang của các dung dịch trên ở bước sóng 235 nm

 Vẽ đồ thị tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dược chất

2.3.2.2 Phương pháp đánh giá chất lượng bột trước khi dập viên

 Xác định chỉ số nén Carr của khối bột

Một lượng bột có khối lượng xác định (m) được cho vào ống đong thể tích hình trụ Thể tích khối bột ban đầu là V0 Sau đó ống đong được gõ cho đến khi thể tích không thay đổi thì đọc thể tích cuối cùng là V

Chỉ số nén của khối bột: CI = V 0 - V

V 0 × 100 (%)

 Xác định hàm ẩm: theo phương pháp mất khối lượng do sấy khô

Tiến hành trên cân xác định độ ẩm nhanh SARTORIUS Cân chính xác khoảng 1g bột, rải đều vào đĩa cân, đặt nhiệt độ 105ºC, theo dõi và đọc kết quả

 Định lƣợng hàm lƣợng bột: tiến hành như phương pháp định lượng hàm

lượng venlafaxin trong viên được mô tả trong mục 2.3.2.3 dưới đây

2.3.2.3 Phương pháp đánh giá một số tiêu chuẩn viên nén venlafaxin

 Định lƣợng hàm lƣợng venlafaxin trong viên: Sử dụng phương pháp sắc

ký lỏng hiệu năng cao theo dược điển Mỹ USP 37 với các điều kiện như sau:

 Mẫu thử: Cân 10 viên đem nghiền thành bột, cân chính xác một lượng bột

tương ứng với 50 mg venlafaxin HCl vào bình định mức 100 ml, thêm một lượng methanol rồi đem lắc siêu âm 30 phút, để nguội rồi thêm methanol đến vạch, ly tâm 15 phút với tốc độ 6000 vòng/phút, lọc lấy dịch, hút 10ml dịch lọc cho vào pha bình định mức 50 ml, thêm methanol đến vạch rồi lọc qua màng 0,45µm Tiến hành làm 3 mẫu

 Mẫu chuẩn: Cân chính xác 50 mg venlafaxin HCl cho vào bình định mức

100 ml, thêm một lượng methanol rồi lắc siêu âm 30 phút, để nguội, thêm

methanol đến vạch, hút 10 ml vào bình định mức 50 ml, thêm methanol đến

M = 86,1 mg là hàm lượng venlafaxin hydroclorid ứng với hàm lượng

venlafaxin 75mg ghi trên nhãn

St, Sc: Tương ứng là diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn

mt, mc: tương ứng là khối lượng bột cân trong mẫu thử và trong mẫu chuẩn

(mg)

mtb: khối lượng trung bình của 10 viên (mg)

 Yêu cầu: hàm lượng venlafaxin phải nằm trong khoảng từ 90 – 110% so với

hàm lượng ghi trên nhãn

 Thử độ hòa tan

Tiến hành thử trên Hệ thống thử hòa tan tự động VANKEL - VARIAN (Mỹ- Austalia), mỗi công thức viên tiến hành thử 6 viên (n=6)

Điều kiện thử: tiến hành theo tiêu chuẩn cơ sở của viên đối chiếu Effexor XR

- Thiết bị: giỏ quay

- Tốc độ quay: 100 vòng/phút

- Môi trường: 900 ml nước

- Nhiệt độ: 37 ± 0,5ºC

- Thời điểm lấy mẫu: Cách 1 giờ lấy mẫu 1 lần trong 24 giờ

- Phương pháp định lượng dược chất giải phóng : phương pháp đo quang

Mẫu trắng: Nước RO

Mẫu chuẩn: Dung dịch venlafaxin HCl 100µg/ml trong nước RO