CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.2. Phương pháp đánh giá
2.3.2.1. Xây dựng đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ giữa mật độ quang và nồng độ dung dịch venlafaxin hydroclorid trong môi trường nước
Venlafaxin HCl 100mg hòa tan trong 100ml nước cất được dung dịch có nồng độ 1000 àg/ml. Từ dung dịch gốc 1000àg/ml pha loóng với nước cất để thu được dóy dung dịch cú nồng độ 20, 30, 40, 60, 80, 100 àg/ml.
Đo mât độ quang của các dung dịch trên ở bước sóng 235 nm.
Vẽ đồ thị tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dược chất.
2.3.2.2. Phương pháp đánh giá chất lượng bột trước khi dập viên
Xác định chỉ số nén Carr của khối bột Chuẩn bị dược chất,
tá dược
Rây # 350, cân
Trộn bột kép
Phối hợp
Dập viên Chuẩn bị tá dược
trơn
Nghiền, rây # 180,
cân Khối lượng viên: 400 mg
Lực gây vỡ viên: 5 – 8 kp Chày cối: Φ 10
Một lượng bột có khối lượng xác định (m) được cho vào ống đong thể tích hình trụ. Thể tích khối bột ban đầu là V0. Sau đó ống đong được gõ cho đến khi thể tích không thay đổi thì đọc thể tích cuối cùng là V.
Chỉ số nén của khối bột: CI = V0 - V
V0 × 100 (%)
Xác định hàm ẩm: theo phương pháp mất khối lượng do sấy khô.
Tiến hành trên cân xác định độ ẩm nhanh SARTORIUS. Cân chính xác khoảng 1g bột, rải đều vào đĩa cân, đặt nhiệt độ 105ºC, theo dõi và đọc kết quả.
Định lƣợng hàm lƣợng bột: tiến hành như phương pháp định lượng hàm lượng venlafaxin trong viên được mô tả trong mục 2.3.2.3 dưới đây.
2.3.2.3. Phương pháp đánh giá một số tiêu chuẩn viên nén venlafaxin
Định lƣợng hàm lƣợng venlafaxin trong viên: Sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao theo dược điển Mỹ USP 37 với các điều kiện như sau:
Điều kiện sắc kí:
- Pha tĩnh: Cột Phenomenex C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 àm).
- Pha động: acetonitril : đệm ( 30 : 70) (dung dịch đệm phosphat pH 3: hòa tan 3,4 g KH2PO4 trong 700 ml nước, thêm 5 ml Triethylamin rồi điều chỉnh pH về 3,0 bằng acid phosphoric, lọc qua màng lọc 0,45àm).
- Tốc độ dòng pha động: 1ml/phút.
- Thể tớch tiờm mẫu: 20 àl.
- Detector UV bước sóng: 225nm - Nhiệt độ: nhiệt độ phòng.
Mẫu thử: Cân 10 viên đem nghiền thành bột, cân chính xác một lượng bột tương ứng với 50 mg venlafaxin HCl vào bình định mức 100 ml, thêm một lượng methanol rồi đem lắc siêu âm 30 phút, để nguội rồi thêm methanol đến vạch, ly tâm 15 phút với tốc độ 6000 vòng/phút, lọc lấy dịch, hút 10ml dịch lọc cho vào pha bình định mức 50 ml, thêm methanol đến vạch rồi lọc qua màng 0,45àm. Tiến hành làm 3 mẫu.
Mẫu chuẩn: Cân chính xác 50 mg venlafaxin HCl cho vào bình định mức 100 ml, thêm một lượng methanol rồi lắc siêu âm 30 phút, để nguội, thêm methanol đến vạch, hút 10 ml vào bình định mức 50 ml, thêm methanol đến vạch rồi lọc qua màng 0,45àm .
Cách tính kết quả:
Hàm lượng % dược chất trong viên so với hàm lượng ghi trên nhãn được tính theo công thức:
Trong đó:
M = 86,1 mg là hàm lượng venlafaxin hydroclorid ứng với hàm lượng venlafaxin 75mg ghi trên nhãn.
St, Sc: Tương ứng là diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn
mt, mc: tương ứng là khối lượng bột cân trong mẫu thử và trong mẫu chuẩn (mg).
mtb: khối lượng trung bình của 10 viên (mg).
Yêu cầu: hàm lượng venlafaxin phải nằm trong khoảng từ 90 – 110% so với hàm lượng ghi trên nhãn.
Thử độ hòa tan
Tiến hành thử trên Hệ thống thử hòa tan tự động VANKEL - VARIAN (Mỹ- Austalia), mỗi công thức viên tiến hành thử 6 viên (n=6).
Điều kiện thử: tiến hành theo tiêu chuẩn cơ sở của viên đối chiếu Effexor XR - Thiết bị: giỏ quay
- Tốc độ quay: 100 vòng/phút - Môi trường: 900 ml nước - Nhiệt độ: 37 ± 0,5ºC
- Thời điểm lấy mẫu: Cách 1 giờ lấy mẫu 1 lần trong 24 giờ
- Phương pháp định lượng dược chất giải phóng : phương pháp đo quang.
Mẫu trắng: Nước RO
Mẫu chuẩn: Dung dịch venlafaxin HCl 100àg/ml trong nước RO.
Yêu cầu: Phần trăm dược chất giải phóng tại các thời điểm 2 giờ, 4 giờ, 8 giờ, 12 giờ, 24 giờ của viên nén venlafaxin phải nằm trong tiêu chuẩn cơ sở của viên đối chiếu Effexor XR 75 mg như sau:
Bảng 3: Yêu cầu về độ hòa tan theo tiêu chuẩn cơ sở của viên đối chiếu Thời gian (giờ) % giải phóng venlafaxin
2 < 30%
4 30 – 55%
8 55 – 80%
12 65 – 90%
24 ≥ 80%
Tính kết quả: Nồng độ venlafaxin của các mẫu thử trong dung dịch thử tại thời điểm t (Ct) tính theo công thức:
Ct = Cc. Dt/Dc Trong đó:
Dc, Dt: độ hấp thụ mật độ quang của mẫu chuẩn, mẫu thử tại thời điểm t Cc: nồng độ venlafaxin của mẫu chuẩn.
Khối lượng dược chất hòa tan ở thời điểm t của mẫu thử được tính theo công thức:
Mt = Ct × 900
Phần trăm dược chất giải phóng đến thời điểm t (Ht) được tính theo công thức:
Ht = Trong đó:
M là khối lượng dược chất có trong 1 viên.
Đánh giá sự tương đồng đường cong hòa tan giữa viên nghiên cứu và viên đối chiếu:
Chỉ số f2 thể hiện sự giống nhau giữa 2 đồ thị giải phóng dược chất, được quy định bởi cơ quan quản lý thuốc và thực phẩm Mỹ (FDA) và cơ quan đánh giá các sản phẩm y học Châu Âu (The Europaen Agency for the Evaluation of Medicinal Products – EMEA) đưa ra như sau :
Trong đó :
n: số điểm lấy mẫu
Ri, Ti: % giải phóng dược chất tại thời điểm i của mẫu đối chiếu và mẫu thử.
Giá trị f2 càng gần 100 thì 2 đồ thị càng giống nhau, f2 = 100 khi 2 đồ thị giống nhau hoàn toàn, f2 = 50 thì sự sai khác trung bình tại mỗi điểm là 10%, f2 nằm trong khoảng 50 – 100 thì 2 đồ thị được coi là giống nhau [12], [19], [31].
Đánh giá lực gây vỡ viên
Tiến hành: Đo lực gây vỡ viên trên máy đo độ cứng ERWEKA TBH 200 (Đức), tiến hành thử 10 viên / 1 công thức.
Yêu cầu: Độ cứng của viên phải nằm trong khoảng từ 5 – 8 kp.
Đánh giá độ đồng đều khối lƣợng
Tiến hành: cân 20 viên, tính khối lượng trung bình. Sau đó cân từng viên, so sánh với khối lượng trung bình.
Tiêu chuẩn: không quá 2 viên có khối lượng lệch quá 5 % khối lượng trung bình và không có viên nào lệch quá 10 % khối lượng trung bình [4].