Đề Tài: Sắc ký lớp mỏng Điều chế Giáo viên hướng dẫn Giáo viên hướng dẫn : : Sinh viên thực hiện Sinh viên thực hiện : : Lớp Lớp : : , ngày tháng năm I. SẮC KÝ LỚP MỎNG ĐIỀU CHẾ Nguyên tắc – yêu cầu: Sắc ký lớp mỏng điều chế (Preparative thin layer chromatography – PTLC) là một phương pháp sắc ký được sử dụng để tách một lượng nhỏ đơn chất (10 – 1000 mg) từ một hỗn hợp đơn giản (chỉ gồm vài cấu tử). Trong PTLC, một dung dịch mẫu thử được chấm trên một lớp chất hấp phụ (thường là silica gel, nhôm oxyd) có độ dày từ 0,5 – 2,0 mm tráng trên nền phẳng (kính, kim loại, chất dẻo) đóng vai trò là một pha tĩnh. Một dung môi khai triển (pha động) di chuyển dọc theo bản mỏng sẽ làm di chuyển các cấu tử của mẫu thử theo một vận Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 1 tốc khác nhau tạo thành một sắc ký đồ gồm nhiều vết có Rf khác nhau. Sau khi khai triển, ta có thể thu được những cấu tử đặc trưng bằng cách cạo vùng chất hấp phụ chứa vết ra khỏi bản và phản hấp phụ chất ra khỏi giá hấp phụ bằng một dung môi thích hợp. Hợp chất thu được từ bản mỏng có thể được tinh khiết hóa tiếp tục bằng sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography – TLC) hay các phương pháp sắc ký khác hoặc hợp chất này đã đạt độ tinh khiết để tiến hành định tính, xác định cấu trúc bằng các phương pháp phân tích cơ bản hay bằng phép đo quang phổ, nghiên cứu hoạt tính sinh học, nghiên cứu tổng hợp hóa học, sử dụng như chất chuẩn đối chiếu. 1. Ưu nhược điểm của PTLC: Ưu điểm: Phương pháp tiến hành của PTLC nhìn chung tương tự như TLC chỉ khác ở việc sử dụng những bản mỏng dày hơn so với TLC: PTLC 0,5 – 2 mm, có thể dày đến 10 mm tùy yêu cầu sử dụng; TLC 0,2 – 0,25 mm. So với sắc ký cột: Nhanh và thuận tiện hơn so với sắc ký cột cổ điển. Dễ tìm được dung môi thích hợp để tách các chất. Vùng chứa chất tụ thành lớp mỏng dễ phát hiện, dễ cô lập Tỉ lệ giữa silicagel và chất tách cao nên tách tốt hơn Rẻ, đơn giản hơn so với HPLC. Thiết bị, thao tác đơn giản dễ nắm bắt và áp dụng. Sử dụng một lượng nhỏ dung môi → có thể triển khai nhiều lần để thu được kết quả phân tách tốt hơn, dễ dàng tách các vùng chứa chất hấp phụ ra khỏi bản mỏng, có thể triển khai đồng thời các chất chuẩn đối chiếu trong cùng một điều kiện xác định giúp tạo thuận lợi cho việc xác định hợp chất mong muốn. Nhược điểm: Các hợp chất kém bền chấm trên bề mặt bản mỏng có thể bị phân hủy khi tiếp xúc với không khí và ánh sáng. Sự hiện diện đồng thời của tạp chất khi phản hấp phụ chất mong muốn ra khỏi giá hấp phụ. 2. Ứng dụng: Dùng để tách các chất với hàm lượng nhỏ (10 – 1000 mg) trong trường hợp không thể tách bằng các phương pháp khác. Có thể phân lập được các đơn chất tinh khiết với khối lượng đủ từ các polymer tổng hợp, các sản phẩm tự nhiên từ nuôi cấy mô hay từ dược liệu, các sản phẩm chuyển hóa từ dịch Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 2 sinh học, phân biệt cấu hình hoá học của các sản phẩm thiên nhiên hay tổng hợp.để khảo sát điểm chảy, phổ UV, IR, khảo sát cấu trúc và làm chất chuẩn. 3. Pha tĩnh: Pha tĩnh hay sử dụng trong PTLC là các chất hấp phụ, các chất hấp phụ này phần lớn có trộn thêm chất kết dính như CaSO4 5 – 15 %, tinh bột 2 – 5 %, dextran, nhưng cũng có trường hợp không dùng chất kết dính. 3.1. Silica gel: Là một chất phân cực, hoạt động chủ yếu theo cơ chế hấp phụ, trung tâm hấp phụ là các nhóm – OH silanol → hấp phụ các chất có tính kiềm (alkaloid base ) hơn là các chất có tính acid (polyphenol ) Mật độ nhóm silanol càng cao (VD: hạt càng mịn), khả năng hấp phụ của silica gel sẽ càng lớn. Khả năng hấp phụ của silica gel phụ thuộc vào phụ thuộc vào tình trạng ngậm nước của hệ thống → khi dùng silica gel làm chất hấp phụ thì nên sấy silica gel ở 1050C trong 2h là đủ, đừng nung quá 4500C 3.2. Nhôm oxyd: Có 3 dạng: oxyd nhôm kiềm, trung tính, acid. Là một chất hấp phụ phân cực mạnh, có tính trao đổi ion lưỡng tính Trung tâm hấp phụ là các nhóm OH, khi các trung tâm hoạt động này bị hút ẩm, oxyd nhôm sẽ giảm hoạt tính. Muốn hoạt hóa nó, người ta sấy để loại bỏ lượng nước hấp phụ này đi. Nhiệt độ sấy càng cao, lượng nước hấp phụ càng giảm đi, oxyd nhôm càng hoạt động. Oxyd nhôm có nhiều cỡ hạt, hạt càng bé khả năng hấp phụ càng cao. 3.3. Cellulose: Cellulose chủ yếu có cơ chế phân bố, thường được dùng để tách những chất phân cực mà khó tách hoặc không thể tách được bằng cơ chế hấp phụ. Là chất cao phân tử thiên nhiên được dùng dưới dạng bột mịn và thường không cần chất kết dính. 3.4. Silica gel ghép: Là silica gel mà nhiều nhóm Si-OH silanol được biến đổi thành nhóm Si-R, Si-O-R hay Si- O-Si-R Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 3 Khi –R là mạch hydrocarbon kém phân cực (2C, 6C, 8C, 18C) ta có silica gel ghép pha đảo, đây là các chất phân bố không phân cực. Khi –R là mạch phân cực ta có silica gel ghép pha thuận, đây là các chất hấp phụ yếu nếu so với các silica gel không ghép. 3.5. Các pha tĩnh khác: Polyamid, nhựa trao đổi ion loại ionit vô cơ – hữu cơ, Kieselguhr. 4. Dung môi: Chọn dung môi: Có độ tinh khiết cao, tránh chứa các vết kim loại Dung môi không quá dễ bay hơi Thay đổi dung môi: Khả năng tách riêng các hợp chất bằng PTLC tùy thuộc tỉ lệ phân phối của các hợp chất này giữa chất hấp phụ và dung môi ly giải Thường ly giải với hỗn hợp dung môi nhưng tránh sử dụng hỗn hợp dung môi có nhiều hơn 2 cấu tử (vì hỗn hợp phức tạp dễ dẫn đến việc thay đổi pha khi thay đổi nhiệt độ) Để thay đổi khả năng tách có thể thay đổi dung môi hoặc thành phần dung môi 5. Chuẩn bị mẫu sắc ký: Chuẩn bị lớp mỏng chế hóa: Các bản mỏng chế hóa có thể tự làm trong phòng thí nghiệm (bản mỏng tự tráng) hoặc sử dụng những bản mỏng tráng sẵn. Độ dày của bản mỏng PTLC thường sử dụng là 0,5 – 2,0 mm, kích thước bản mỏng thường là 5 × 20, 10 × 20, 20 × 20, 20 × 40 hay có thể đến 20 × 100 cm tùy yêu cầu sử dụng. Dùng các chất hấp phụ tạo hỗn dịch bền trong nước (có thể thêm một lượng nhỏ chất trơ như thạch cao để kết dính nếu cần) rồi tráng lên tấm kính phẳng thành các bản có độ dày 0,5 – 2,0 mm (có thể dày đến 10 mm) tùy yêu cầu sử dụng. Để khô bản ở nhiệt độ phòng trong 2 ngày, sau đó sấy sơ bộ 600C trong 2h rồi mới sấy hoạt hóa ở 1200C trong 2h. Chuẩn bị mẫu thử (dịch chấm): Mẫu thử (đã được sơ bộ loại tạp) được cô ở áp suất giảm đến khô, sau đó hòa vào trong một lượng vừa đủ dung môi (phải hòa tan tốt mẫu thử và dễ bay hơi) rồi chấm lên bản mỏng. Chấm mẫu thử: Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 4 Đánh dấu đường xuất phát cách mép dưới 1 – 2 cm. Dùng ống mao quản hay micropipette chấm dung dịch mẫu thử lên bản mỏng thành băng liên tục, băng có thể dày từ 1 – 2 mm, cách mép bản 1,5 – 2 cm. Khi chấm không được làm thủng lớp mỏng, vết chấm phải gọn (nên chấm dưới một nguồn nhiệt), chứa lượng chất thử khoảng 1 – 10 µg. Khai triển sắc ký: Đặt bản mỏng đã chấm vào bình, đậy nắp bình. Sau khi dung môi chạy đến cách đầu trên của bản khoảng 1 – 2 cm thì lấy ra, đánh dấu mức dung môi trên kính, để khô. Lưu ý: Cấu tử nghiên cứu phải dễ phát hiện (tốt nhất là phát hiện được bằng đèn UV) Những điều kiện để phân tách thành công trên bản mỏng chế hóa: Bản mỏng phải đồng nhất. Lượng mẫu chấm trên bản mỏng phù hợp. Bình triển khai sắc ký được bão hòa tốt: quan trọng nhất vì một hợp chất di chuyển trên bản mỏng với sự thay đổi vận tốc phụ thuộc vào tỷ lệ bay hơi của dung môi, nó di chuyển nhanh hơn trên bề mặt của bản mỏng và chậm hơn ở phần bản mỏng gần với giá mang, hiện tượng này được giảm thiểu tối đa trong một bình sắc ký đã được bão hòa hoàn toàn. Lượng chất hấp phụ trên bản mỏng thay đổi tùy theo từng trường hợp, đối với silica gel cần 20 – 25 g/ bản mỏng kích thước 20 × 20 cm, dày 1mm, những bản mỏng dày có thể bị nứt trong quá trình sấy do đó phải giảm lượng nước trong hỗn dịch hay hỗn hợp bột nhão của chất hấp phụ, tăng lượng chất kết dính (thạch cao CaSO4), tăng thời gian sấy hoặc có thể sấy bằng tia hồng ngoại. Vết chấm phải thẳng, hẹp và phải cách 2 mép hai bên của bản mỏng ít nhất 1 – 3 cm để tránh hiệu ứng viền thường làm dung môi chuyển động nhanh hơn hoặc chậm hơn bình thường ở hai mép của bản mỏng hơn là ở trung tâm của bản mỏng. Mẫu thử được hòa tan trong một dung môi không phân cực, dễ bay hơi ở một nồng độ mà tất cả các cấu tử của mẫu thử được hấp phụ không chỉ trên bề mặt mà phải xuyên suốt chiều dày của bản mỏng. Có thể chấm bằng tay bằng cách sử dụng micropipette hay syringe và thước kẻ hoặc có thể sử dụng những dụng cụ được thương mại hóa phục vụ cho việc chấm mẫu. Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 5 6. Cách phát hiện trong sắc ký lớp mỏng điều chế: 6.1. Soi UV: Ưu điểm: Nhanh, tiện lợi Không bị hao hụt mẫu như phun xịt bản Nhược điểm: Mắt nhìn thấy vị trí biểu kiến khác vị trí thực của vết → đánh dấu trật vết và không thu được chất khi cạo rồi ly giải Phun xịt bản với thuốc thử đặc trưng: Tiến hành: Dùng tấm kiếng hoặc tấm nilon che 1 phần bản 6.2. Phun thuốc thử lên phần không bị che Dựa vào những vết hiện trên bản, dùng spatule cạo phần silicagel để thu hợp chất Ưu điểm: Biết chính xác vị trí vết Nhược điểm: Thuốc thử tạo phức với hợp chất không thể sử dụng để cạo bản, cô lập hợp chất 6.3. Sử dụng hơi iod: Tiến hành: Đặt bản trong buồng hơi iod Khi thấy vết lấy bản ra khỏi buồng Đánh dấu vị trí vết Phơi bản ngoài quạt gió để bay hơi iod Cạo bản để thu chất II. SẮC KÝ CỘT ĐIỀU CHẾ Phương pháp sắc ký dựa vào sự phân bố khác nhau của các chất giữa hai pha động và tĩnh. Có nhiều nguyên nhân đưa đến sự phân bố khác nhau của các chất, nhưng chính sự lặp đi lặp lại hiện tượng hấp phụ - phản hấp phụ của các chất khi dòng pha động chuyển động qua pha tĩnh là nguyên nhân chủ yếu của việc tách sắc ký. Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 6 1. CÁC CÁCH TIẾN HÀNH PHÂN TÍCH SẮC KÝ Tuỳ thuộc chế độ đưa mẫu vào hệ thống sắc ký cũng như các thao tác tiến hành sắc ký, người ta chia cách tiến hành sắc ký thành ba loại: 1.1. Phương pháp tiền lưu Đây là phương pháp sắc ký đơn giản nhất. người ta cho hỗn hợp, ví dụ, hai chất A và B liên tục chảy qua cột có nạp sẵn các các chất hấp phụ. Người ta xác định nồng độ các cấu tử trong dung dịch chảy ra khỏi cột và xây dựng đồ thị theo hệ toạ độ: nồng độ cấu tử- thể tích dung dịch chảy qua cột. đồ thị này thường gọi là sắc ký đồ hay đường cong thoát (có tác giả gọi là đường cong xuất). Do các cấu tử bị hấp phụ lên cột, nên trước hết từ cột chỉ chảy ra dung môi. Sau đó trong dung dịch thoát sẽ có cấu tử bị hấp phụ yến hơn trên cột, ví dụ cấu tử A, sau đó đến phần dung dịch chứa hỗn hợp A+B, đường cong thoát theo phương pháp tiền lưu cho trên hình dưới. Trong phương pháp tiền lưu, ta chỉ thu được dung dịch thoát có cấu tử A tinh khiết ở lúc đầu, sau đó là hỗn hợp A+B. Phương pháp tiền lưu không cho phép tách hoàn toàn các cấu tử ra khỏi nhau nên thực tế ít được dùng vào mục đích phân tích các chất. 1.2. Phương pháp rửa giải Trong phương pháp rửa giải, đầu tiên người ta cho Vml dung dịch chứa hỗn hợp các cấu tử (ví dụ, hỗn hợp hai cấu tử A và B, trong đó A có ái lực với cột nhỏ hơn B) chạy qua cột. Các cấu tử A, B chứa trong Vml trước hết sẽ bị giữ lại ở phần trên của cột. Sau đó cho dung dịch rửa (thường là dung môi hoà tan các cấu tử) chảy qua cột. Lúc đó các cấu tử bị giữ ở phần trên của cột sẽ bị dung môi “rửa” và đưa dẫn xuống phía dưới. Cấu tử A có ái lực với cột nhỏ hơn B nên chuyển động xuống phía dưới nhanh hơn B. Nếu cột đủ dài và chế độ chảy của dung dịch rửa thích hợp thì sau một thời gian cho chảy dung dịch rửa, các cấu tử tách ra thành từng vùng. Các vùng này sẽ tuần tự thoát ra khỏi cột, mỗi vùng lại được cách nhau bằng một phần dung môi. Hình bên dưới biểu diễn đường cong thoát của quá trình rửa giải. Trong phương pháp rửa giải, người ta cũng hay dùng những dung dịch chứa một cấu tử có ái lực với cột nhưng phải nhỏ hơn ái lực của các cấu tử cần tách với cột. Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 7 1.3. Phương pháp rửa đẩy Trong phương pháp rửa đẩy, sau khi đưa mẫu vào cột, ta cho chảy qua cột một dung dịch rửa chứa chất có ái lực với pha tĩnh lớn hơn các cấu tử cần tách. Các cấu tử cần tách sẽ bị chuyển dần xuống phía dưới khi ta tiến hành quá trình rửa cột và tuần tự thoát ra khỏi cột. Cấu tử thoát ra khỏi cột đầu tiên là cấu tử tương tác với pha tĩnh yếu nhất, sau đó dần dần đến các cấu tử có ái lực với cột mạnh dần. Khác với phương pháp rửa giải, nồng độ các cấu tử không giảm qua quá trình sắc ký. Một nhược điểm quan trọng của phương pháp rửa đẩy là rất khó phân biệt các phần riêng của các cấu tử trong dung dịch thoát vì ở đây giữa các phần dung dịch thoát chứa các cấu tử không tách nhau bằng các thể tích dung dịch rửa. 2. Cột sắc ký Cột sắc ký làm bằng thép không rỉ , thủy tinh đặc biệt hoặc chất dẻo 2.1. Cột phân tích Dài: 10-30cm Đường kính trong: 4-10mm Cỡ hạt pha tĩnh: 5-10µm N=40.000-60.000 đĩa /met Cột nhỏ (microcolumn): 3-7.5cm, 1-2mm, 3-5µm, N=100.000 đĩa/mét 2.2. Chất nhồi cột: Silica (silic dioxyd) kết tụ thành silicagel Silicagel bao lớp mỏng hữu cơ liên kết ( hóa học hoặc vật lý) với bề mặt Nhôm oxyd, polymer, nhựa trao đổi ion 2.3. Cột chế hóa Dài 25-100cm Đường kính trong 6-50mm, tránh được hiệu ứng thành của cột. Tốc độ dòng lớn hơn cột phân tích Sử dụng trong dược liệu để sơ bộ tách các nhóm hợp chất 3. Pha tĩnh 3.1. Silicagel(hay kieselgel của acid silicic) pha thuận - Chất hấp phụ được sử dụng rộng rãi hiện nay. Là một chất phân cực, thường được dùng làm pha tĩnh để phân tách các chất. phù hợp với hầu hết các pha động. nó có thể chạy với những lượng mẫu rất nhỏ như trong sắc ký lớp mỏng. Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 8 - Ngày nay, Silicagel có kích thước các lỗ là 40,60 và 100Å(Si-40, Si-60, Si-100) được dùng tron sắc ký điều chế . Si-60 thường được sử dụng nhất. Trong một vài trường hợp, kích thước hạt quá nhỏ làm giảm hiệu quả của sự chiết tách. - Silicagel có diện tích bề mặt từ 0.4-0.6g/cm3, và nhiều nhất là 2.2g/cm3. Có nhiều kích cỡ silicagel khác nhau phụ thuộc vào nhà sản xuất. Đối với sắc ký chế hóa sử dụng cho những lượng mẫu trong phòng thí nghiệm thường sử dụng loại có kích thước 15- 25µm,25-40µmhay 40-63µm. - Tính hấp phụ của silicagel do các nhóm OH trên bề mặt quyết định. Nhóm OH là các trung tâm hấp phụ - Để Silicagel hấp phụ được tốt thì cần hoạt hóa trước khi sử dụng: Sắt kim loại được loại bỏ bằng cách đun sôi với HCl đặc, dùng nước rửa sạch ion clorid và lắng gan loại các hạt nhỏ lơ lửng, sau đó sấy 120oC trong 48 giờ.( đối với các bảng tráng sẵn thì không cần hoạt hóa) . Không sấy quá lâu tránh làm mất nhóm silanol→bất hoạt. - Tùy chất cần phân tích mà hoạt hóa silicagel khác nhau. Ví dụ : khi chạy tịnh dầu thì sấy silicagel cần lâu càng tốt. còn đối với các chất phân cực mạnh thì sấy hoạt hóa ít đi, them một ít nước để giảm hoạt tăng Rf. - Tuỳ theo việc chọn các dung môi thích hợp cá thể dùng silicagel để tách các hợp chất base(alkaloid) hay các hợp chất ưa dầu. Phân tách các chất có độ phân cực gần với nó. Silicagel là sự lựa chọn tốt nhất làm pha tĩnh khi phân tách cá chất có khối lượng phân tử nhỏ(<2000Da) - Khả năng tách của silicagel tốt hơn khi tẩm nó bằng dung dịch bạc nitrat10-12%, dung dịch acid boric , ammoniac, dung dịch đệm phosphate 3.2. Nhôm oxyd - Ít được sử dụng hơn silicagel. Thường được dùng trong sắc ký hấp phụ - Là chất hấp phụ phân cực. - Trong sắc ký có 3 dạng nhôm oxyd: nhôm trung tính, acid, base.Tùy vào chất cần tách mà lựa chọn loại oxyd nhôm sử dụng cho phù hợp(chiết các acid amin có tính base cần dùng oxyd nhôm base, khi cần tách các chất trung tính thì dùng oxyd nhôm trung bình) - Để tách tốt hơn người ta xử lý nhôm với các dung dịch acid hoặc base. Hoạt tính của nhôm oxyd tùy thuộc lượng nước nó chứa, hoạt tính sẽ giảm đi khi lượng nước gia tăng. Trước khi dùng cần hoạt hóa ở 120oC trong 1 giờ.Bậc hoạt tính của nhôm được chia làm 5 bậc: Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 9 Bậc hoạt tính I II III IV V % nước 0 3 6 10 15 - Diện tích bề mặt của oxyd nhôm khoảng 0.9g/cm3 đến khoảng 4.0g/cm3. - Oxyd nhôm phân tách tốt các chất phân cực yếu đến trung bình, thường dùng để phân tách các hợp chất thơm( có ái lực mạnh với OH phenol) và các hợp chất đồng phân của nó. Oxyd nhôm còn được dùng để tách các chất : hydrocacbon, alkaloid, chất màu thực phẩm, lipid. 3.3. Kieselguhr - Ở dạng bột , chứa khoảng 70-95% SiO2 phần còn lại là các oxyd kim loại. - Là một chất phân cực yếu, dùng để tách các chất phân cực như đường, các triglyceric, các acid béo bậc cao, cetoacid, lacton. Nhưng thường được dùng chủ yếu làm giá mang cho pha tĩnh trong sắc ký phân bố. 3.4. Polyamide - Ít được dùng làm chất hấp phụ , chủ yếu được dùng để tách các chất có chứa nhóm chức phenol( flavon) , đường. 3.5. Silicagel pha đảo - Có nhiều loại mẫu kị nước như các peptid, thì sắc ký pha đảo thường là phương pháp được lựa chọn sử dụng cột silicagel C-18. - Trong sắc ký pha đảo thì pha tĩnh có bản chất khác với pha động(pha tĩnh không phân cực , phân động phân cực) - Đây là silicagel có gắn một chuỗi carbon dài thường là 18C(c-18) hay 8C(C-8) :Si-O-Si- nối Carbon. - Các hợp chất được rửa giải ra khỏi theo thứ tự: hợp chất chứa nhóm _COOH→ alcol/phenol →amin→ eter/aldehyd→ cetone→hợp chất halogen→alkan - Mặc dù sắc ký pha đảo có mắc tiền hơn sắc ký pha thuận nhưng nó có nhiều ưu điểm hơn như: Không cần phải hoạt hóa trước khi dùng. Hệ được thiết thiết lập cân bằng nhanh chóng Dung dịch thân nước có thể đi qua Tách tốt đối với các chất phân cực - Thường được áp dụng trong HPLC Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 10 [...]... ký hiện đại cho phép chuyển đổi nhanh chóng và dễ dàng các thông số hoạt động của cắc ký lớp mỏng phân tích ( TLC) sang sắc ký cột chế hóa ( CC) Sắc ký cột khô khắc phục được nhược điểm của 2 phương pháp sắc ký lớp mỏng phân tích và sắc ký cột chế hóa Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 26 Sắc ký lớp mỏng là một kỹ thuật quan trọng sử dụng trong phòng thí nghiệm,vì nó cho phép xác định... dụng sắc ký cột, vì khi đó dùng sắc ký lớp mỏng tốn nhiều thời gian và giá thành cao Trong một số trường hợp, thậm chí những phương pháp gọi là lớp dày hay lớp chế hóa cũng là lựa chọn cuối cùng vì các yếu tố thời gian, giá thành, và thiếu hụt sự chuyển đổi các thông số của kỹ thuật phân tích Bên cạnh đó, sự chuyển đổi từ sắc ký lớp mỏng sang sắc ký cột thì khó khăn hơn vì chất hấp phụ của sắc ký lớp mỏng. .. có thể chuyển đổi những kết quả của sắc ký lớp mỏng sang sắc ký cột rửa giải một cách nhanh chóng, tiết kiệm thời gian và tiền bạc Những chất liệu cho sắc ký cột hấp phụ tương ứng với những chất liệu của lớp mỏng thông dụng nhất, như chì DDC, nhôm DDC Những chất hấp thụ sắc ký cột khô này được sử dụng rộng rãi khi cần phải tăng lên một cách tương xứng với sắc ký lớp mỏng, để chuẩn bị đủ số lượng các... ester Cucurbitacins Sắc ký cột khô silicagel được sử dụng trong suốt quá trình phân lập chất độc 11deoxycucurbitacin từ Desfontainia spinosa, triển khai với ethyl acetate- nước 9:1 và hexanedichloromethane 7:3 Giai đoạn tinh chế cuối cùng được thực hiện với sắc ký lớp mỏng chế hóa và ly tâm Lignans Cả lignans và neolignans đều thu được bằng cách kết hợp sắc ký cột khô và sắc ký lớp mỏng chế hóa Depside... 11.1 Nguyên tắc: Kỹ thuật này có thể được xem như sắc ký lỏng chế hóa, hoạt động như một cột, dùng chân không để tăng tốc độ chảy của chất rửa giải Kỹ thuật này khác với sắc ký cột nhanh là cột được chạy khô sau khi thu mỗi phân đoạn Điều này giống sắc ký lớp mỏng chế hóa vì các đĩa được làm khô sau khi chạy và sau đó được rửa giải lại Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 29 11.2 Quy trình:... kẽ của các phân tử hấp phụ Chất hấp phụ sắc ký cột khô có sẵn trên thị trường được điều chỉnh phù hợp với đặc tính lý hóa của sắc ký lớp mỏng, trong suốt chu trình sản xuất Với những đặc tính lý hóa tương tự, các giá trị Rf của các chất phân tích bằng sắc ký lớp mỏng thì hầu như đúng với các giá trị thu được từ sắc ký cột khô Việc sử dụng những chất hấp phụ được điều chỉnh một cách đặc biệt này, có thể... hẹp tối thiểu, hiệu năng tách sẽ cao Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 24 9.6 Rửa giải theo gradient Khảo sát pha động và ghi nhận sự phân tách các pic theo mỗi pha Chia phân đoạn để thay đổi dung môi nhằm tách tốt hơn Ví dụ các kết quả: Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 25 10 SẮC KÝ CỘT KHÔ Sắc ký cột khô ( DDC) là một kỹ thuật sắc ký hiện đại cho phép chuyển đổi nhanh... ký cột thì khó khăn hơn vì chất hấp phụ của sắc ký lớp mỏng không giống sắc ký cột Trong sắc ký lớp mỏng lớp silic và nhôm thì khô trước khi sử dụng và chỉ tiếp xúc với dung môi sau khi được đặt vào bình khai triển Đó là lý do tại sao trong sắc ký cột khô thì mẫu được nạp vào cột khô Trái ngược với sắc ký cột thông thường, sắc ký cột khô là kỹ thuật không rửa giải được Vì thế chỉ một lượng giới hạn... phải có sự điều chỉnh khi áp dụng từ TLC đến FC Thể tích cột CV = 1/Rf Rf nằm trong khoảng từ 0.15 – 0.4 sẽ tương ứng với thể tích cột 2.5 -6.6 9.5 Nạp mẫu lên cột Việc nạp mẫu đối với sắc ký cột bình thường là một công việc đơn giản trong phân tích sắc ký, tuy nhiên trong sắc ký điều chế, cột thường được triển khai quá tải và việc nạp mẫu là rất quan trọng Lúc trước, quy định chung cho sắc ký chế hóa... dung môi Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 14 Độ phân cực của dung môi có thể lựa chọn dựa trên tam giác chọn lọc được xây dựng bởi Snyder: Độ tinh khiết của pha động: Không có hoạt chất nào 100% tinh khiết Độ tinh khiết càng cao, giá càng cao Cần phù hợp yếu tố chi phí với độ tinh khiết nhằm đưa các ảnh hưởng của nó về giới hạn phù hợp 5.2 Dung môi cho sắc ký pha thuận: Sắc ký điều chế - . Tài: Sắc ký lớp mỏng Điều chế Giáo viên hướng dẫn Giáo viên hướng dẫn : : Sinh viên thực hiện Sinh viên thực hiện : : Lớp Lớp : : , ngày tháng năm I. SẮC KÝ LỚP MỎNG ĐIỀU. việc tách sắc ký. Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 6 1. CÁC CÁCH TIẾN HÀNH PHÂN TÍCH SẮC KÝ Tuỳ thuộc chế độ đưa mẫu vào hệ thống sắc ký cũng như các thao tác tiến hành sắc ký, người. như trong sắc ký lớp mỏng. Sắc ký điều chế - Nhóm 2 – TT DL chiều T3 Trang 8 - Ngày nay, Silicagel có kích thước các lỗ là 40,60 và 100Å(Si-40, Si-60, Si-100) được dùng tron sắc ký điều chế . Si-60