1. Nguyên tắc của phương pháp:[7]
Là 1 phương pháp sử dụng chất lỏng hoàn toàn, không có sự tham gia của giá mang phase rắn dựa vào sự phân bố của mẫu giữa 2 chất lỏng không hỗn hòa để có thể tiến hành tách. Hệ số phân bố giúp xác định tỉ lệ của mẫu giữa 2 phase.
Cột CCC gồm một ống hình xoắn ốc bằng Teflon được độn vào pha tĩnh lỏng, Pha động sẽ được cho chảy qua từ từ qua, và thay thế dần pha tĩnh. Để tránh hiện tượng pha động chảy qua và chỉ đơn thuần đẩy toàn bộ pha tĩnh ra ngoài, người ta thêm tác động trọng trường bằng cách dùng lực ly tâm, lực này có thể thay đổi được bởi chuyển động quay tròn của hai trục.[6]
2. Ưu nhược điểm của phương pháp:[9]Ưu điểm: Ưu điểm:
So với phương pháp phân tích rắn lỏng truyền thống thì CCC có nhiều ưu điểm nổi trội: có sự hấp phụ đảo ngược
hồi phục hoàn toàn được mẫu bơm ít kéo vệt nhất trong sắc ký đồ
ít rủi ro nhất về khả năng mẫu bị phá hủy
tiết kiệm dung môi và rất kinh tế ( không cần cột đắt tiền, dung môi thông thường…) Trong HPLC pha tĩnh chiếm 29% thể tích, trong khi đó trong CCC con số này là 80% Có thể nội chuyển đổi giữa phase động và phase tĩnh
1 sự thay thế tuyệt vời cho những quy trình gặp phải sự hấp phụ phase rắn
Nhược điểm:
Số đĩa lý thuyết CCC ít hơn HPLC.
Thời gian sắc ký kéo dài và phải giữ nhiệt độ cố định trong suốt quá trình.
3. Pha tĩnh:
Cellulose: tách những chất phân cực mà không tách được bằng cơ chế hấp phụ. Cấu tạo là một polysacccharid ở dạng polymer (C6H10O5)n.
Đối với sắc ký cột, dùng dạng cellulose vi tinh thể được làm ẩm với một lượng pha tĩnh vừa đủ, hoà vào pha động tạo thành hỗn dịch.
Polyamid: là chất phân bố hơn là chất hấp phụ, cơ chế phân bố là nhớ các xoang rỗng của polyamid. Polyamid thông dụng là loại polyamid 6 (polycaprolactam) và polyamid 11 (polyundecanamid).
Silica gel ghép: là silica gel (Si-OH) ghép với mạch hydrocarbon kém phân cực (Silica gel pha đảo), hoặc ghép với mạch phân cực (Silica gel pha thuận)
4. Dung môi:
Do sự sắc ký tuỳ thuộc vào khả năng hoà tan của chất phân tích trong pha động và pha tĩnh nên dung môi là yếu tố quan trọng quyết định để cho một bảng sắc ký tốt.
Mẫu phân tích thường là các chất phân cực nên dùng môi cũng mang tính phân cực. Việc chọn dung môi nên tham khảo các tài liệu nghiên cứu trước đó. Bảng các hệ dung môi tương ứng với từng loại hợp chất tự nhiên có thể tham khảo tại tài liệu [8]
Đảm bào pha tĩnh có ái lực thích hợp nhất, thời gian ổn định của hệ dung môi nên dưới 30s. Hệ số phân bố của chất phân tích nên trong khoảng 0,5<K<2,0, và hệ số phân bố giữa 2 thành phần nên lớn hơn 1,5.
Để tăng khả năng tách, ta có thể thay đổi pH.
5. Cách phát hiện:
Cũng như kỹ thuật sắc ký cột thông thường, ta sẽ thu những phân đoạn chất chảy ra, những chất có độ tan càng nhiều trong pha động thì sẽ ra trước. Từ những phân đoạn thu được, ta tiến hành những phương pháp chuyên biệt để định tính cũng như định lượng chất phân tích.