slide phân tích hóa học thực phẩm sắc kí cột

• quá trình tách dựa trên sự phân bố liên tục các cấu tử chất phân tích trên hai pha• các cấu tử chất phân tích di chuyển với tốc độ khác nhau... Phương pháp dùng để tách các chất cấu tử

• quá trình tách dựa trên sự phân bố liên tục các cấu tử chất phân tích trên hai pha

• các cấu tử chất phân tích di chuyển với tốc độ khác nhau

Phân loại

theo 3 cách Sắc kí

hấp thụ

Sắc kí phân

bố lỏng –lỏng

Theo

cơ chế tách

SK ion

SK rây phân tử

PT tiền lưu

PT rửa giải

Theo cách hình thành sắc đồ

PT thế đẩy

Phương pháp dùng để tách các chất (cấu tử) ra khỏi hỗn hợp dựa vào

tính phân cực của từng chất

Chất nhồi ( là pha tĩnh: hấp thụ, trao đổi ion, phân bố gel) được nhồi vào cột, dùng để phân chia các chất trong hỗn hợp và tinh chế các chất

Hòa tan hỗn hợp chất nghiên cứu vào một dung môi ( pha động) với lượng vừa

đủ, rồi nạp lên cột theo cách phù hợp sao cho chất nghiên cứu lan thành một lớp phẳng lên cột, sau đó tiến hành sắc ký .

SẮC KÍ

CỘT

SẮC KÍ CỘT

Sắc kí trao đổi ion Sắc kí hấp phụ

SẮC KÍ CỘT

PHÂN LOẠI

LOGO Cơ chế sắc ký trao đổi ion

Sự trao đổi ion là sự gắn kết có tính chất thuận nghịch giữa các phân tử có mang điện tích Các phản ứng trao đổi xảy ra giữa các ion pha tĩnh và các ion trong dung dịch, các ion ngược dấu với điện tích của nhóm chức sẽ được giữ lại trong cột, các ion khác sẽ đi ra khỏi cột.

LOGO Cơ chế sắc ký trao đổi ion

Phản ứng xảy ra:

RG- + S+ -Æ RG-S+ + C+

Hoặc RG+ +S- -Æ RG+S- + C- Trong đó:

R là pha tĩnh hay gọi là nhựa (resin)

G là nhóm chức mang điện tích cố định

C là đối ion của G

S là chất hữu cơ có mang điện tích trái dấu với G

(a) Những hạt mang điện tích dương sẽ trao đổi ion âm với dung dịch đệm

(b) Khi protein gắn với hạt, protein thay thế những ion âm tương tác với hạt cũng như hạt thay thế những ion dương tương tác với protein

Sự hấp thụ xảy ra do:

- sự tương tác lẫn nhau giữa các phân tử phân cực.

-sự tương tác giữa các phân tử có mang các nhóm phân cực đối với pha tĩnh rắn là chất rất phân cực.

- nối hydrogen, nối Vanderwaal…

ứng dụng

ký hấp thụ hiệu năng cao để phát hiện Melamine trong sữa

CÔNG CỤ TRONG SẮ KÍ CỘT

Cột sắc ký giống cái buret thường được làm

bằng thép không gỉ, thủy tinh đặc biệt hoặc là

chất dẻo và 1 cái khóa, nhưng không cần vạch chia độ, đôi khi cũng không cần cái có khóa,

kích thước cột có lớn, có nhỏ

Cỡ hạt pha tĩnh: 3-5μmm N=100000 đĩa/met

 Chất nhồi cột (pha tĩnh-stationary

Nhôm oxyd, polymer, nhựa trao đổi

Trong một vài trường hợp kích thước hạt quá nhỏ làm giảm hiệu quả quá trình tách chiết

Là một chất phân cực thường dùng làm pha tĩnh để phân tách các chất, phù hợp với các pha động, nó có thể chạy tới những lượng mẫu nhỏ như trong lớp sắc

Silicagel pha đảo

Đây là silicagel có gắn một chuỗi cacbon dài thường

amin

Eter/aldehyl alkan

 Không cần phải hoạt hóa trước khi dùng.

 Hệ được thiết lập cân bằng nhanh chóng.

 Dung dịch thân nước có thể đi qua.

 Tách tốt đối với các chất phân cực

4 BƯỚC

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH SẮC KÍ CỘT

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH SẮC KÍ CỘT

Tiến hành rót thêm dung môi (từ erlen bên dưới) để

ổn định hệ, chế đi chế lại nhiều lần đến khi hệ ổn định, cột không bị nứt hay gãy thì xem như việc nhồi cột đã hoàn thành Khóa cột lại.

Lấy một miếng nhỏ bông gòn nhồi dưới đáy cột để chặn silicagel lại.

NHỒI

CỘT Tiến hành khuấysilicagel trong dung môi

đã pha sẵn rồi rót nhẹ nhàng vào cột

Tiến hành khuấysilicagel trong dung môi

đã pha sẵn rồi rót nhẹ nhàng vào cột

Sau khi đã chọn cột, làm khô và cân silicagel cần dùng, pha dung môi chạy hệ rồi thì hòa tan silicagel vào dung môi đó

NẠP MẪU VÀO CỘT

Nạp mẫu ướt là hỗn hợp cần phân tích tan trong dung môi chạy cột nên chỉ cần cho mẫu vào là được

Nạp mẫu khô: Mẫu không tan trong

dung môi chạy cột thì phải hòa tan mẫu

vào dung môi gián tiếp trong erlen.

Dùng lượng ít silicagel cho vào erlen để hấp thu mẫu, sau đó cho hết vào bình cô quay để cô quay đuổi dung môi đi thu được silicagel khô có chứa mẫu

Nạp hết silicagel đó vào cột và cho

dung môi chạy cột vào

Khi hoàn tất việc nạp mẫu rồi thì lót 1 miếng

bông gòn ở bên trên mẫu chất để ổn định hệ

Khi hoàn tất việc nạp mẫu rồi thì lót 1 miếng

bông gòn ở bên trên mẫu chất để ổn định hệ

Tiếp tục châm dung môi vào

Từ từ thay đổi độ phân cực của hệ

Không được thay đổi đột ngột cũng như chuyển từ không phân cực sang phân cực rồi lại quay lại không phân cực, làm như vậy sẽ gãy cột và phải nhồi lại từ đầu, mất hết chất.

CHÚ Ý

BƯỚC 3

Mở khóa, lúc này cột bắt đầu tách chất, hứng lượng

dung môi chảy ra có kém theo chất đã tách được bằng hũ bi, mỗi lần hứng khoảng 1/5 hũ (mỗi hủ bi chứa được khoảng 50-200mL tùy kích thước lớn nhỏ) Sau đó đem chấm bản các hủ bi, những hủ

có vệt tương tự nhau sẽ được gom lại, đó là 1 chất Tiếp tục như vậy thì cuối cùng ta sẽ tách được các chất mong muốn.

Bước 4

lỏng cao áp

Hiệu quả thấp hơn so với sắc ký

lỏng cao áp

Pha tĩnh sử dụng những chất dễ tìm và cho hiệu quả cao ví dụ như: silicagel, nhôm oxit,

điều kiện cho ngành hóa học và thực phẩm phát triển

Như vậy, sắc kí nói chung và sắc kí cột nói riêng là một trong kĩ thuật được áp dụng trong

nhiều lĩnh vực trong đó điển hình là chuyên

ngành công nghệ thực phẩm Nhờ có nó mà ta

có thể phân tách được nhiều cấu tử ra trong hỗn hợp và xác định được hàm lượng của chúng một cách đơn giản và nhanh chóng Góp phần tạo

điều kiện cho ngành hóa học và thực phẩm phát triển

TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Hà Duyên Tư, Phân tích hóa học thực phẩm, NXBKH&KT Hà Nội, 2009

[2]http://vi.scribd.com/doc/73184150/TI%E1%BB%82U-LU%E1%BA%ACN-S%E1%BA%AFc-k%C3%BD-trao-%C4%91%E1%BB%95i-ion

[3]i.scribd.com/doc/138854023/Sắc-ki-cột-la-phương-phap-dung-để-tach-cac-chất-doc#scribd