Đánh giá khả năng sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ của trâu murrah nuôi tại trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh moncada

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii LỜI CẢM ƠN Trong quá trình nghiên cứu ñể hoàn thành luận văn của mình, tôi ñã nhận ñược sự chỉ bảo tận tìn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i

LỜI CAM ðOAN

Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của tôi Các số liệu và kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược công bố trong bất

kỳ công trình nghiên cứu nào khác

Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày 10 tháng 6 năm 2014

Tác giả luận văn

ðinh Thị Thuận

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình nghiên cứu ñể hoàn thành luận văn của mình, tôi ñã

nhận ñược sự chỉ bảo tận tình, sự giúp ñỡ quý báu của các thầy giáo, cô giáo,

các nhà khoa học, các nhà quản lý, cán bộ công nhân viên Trung tâm giống gia

súc lớn Trung ương, Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh ñông lạnh Moncada

Nhân dịp này, cho phép tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

TS Lê Văn Thông - Giám ñốc Trung tâm Giống gia súc lớn Trung

ương, TS Nguyễn Hữu ðức – Phó Trưởng Khoa Công nghệ sinh học,

Trưởng Bộ môn Công nghệ sinh học ðộng vật – ðại học Nông nghiệp Hà Nội

ñã hướng dẫn, giúp ñỡ và tạo ñiều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá trình

thực hiện ñề tài, ñánh giá kết quả và hoàn thành luận văn ñồng thời bồi dưỡng

cho tôi những kiến thức chuyên môn và kinh nghiệm quý báu

Với tình cảm sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban lãnh ñạo, cán bộ

công nhân viên Trung tâm giống gia súc lớn Trung ương, Trạm nghiên cứu và

sản xuất tinh ñông lạnh Moncada ñặc biệt ThS Hà Minh Tuân – Phó trưởng

phòng khoa học -Trung tâm giống gia súc lớn Trung ương ñã tận tình giúp ñỡ

ñể tôi hoàn thành luận văn này

ðể hoàn thành luận văn này, tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới các Thầy

giáo, Cô giáo, Ban Quản lý ñào tạo, Bộ môn Công nghệ sinh học ðộng vật,

Khoa Công nghệ sinh học - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, ñã ủng hộ,

tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành các thủ tục cần thiết ñể bảo vệ thành

công luận văn này

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn toàn thể gia ñình, bạn bè, anh em, ñồng

nghiệp ñã tạo mọi ñiều kiện thuận lợi và giúp ñỡ tôi về mọi mặt, ñộng viên

khuyến khích tôi hoàn thành luận văn này!

Hà Nội, ngày 10 tháng 6 năm 2014

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii

2.2 Một số chỉ tiêu sinh vật học về tinh dịch trâu Murrah 11

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv

2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng tới phẩm chất tinh ñông lạnh của trâu

2.4.2 Ảnh hưởng của ñóng băng lên tế bào tinh trùng 26

2.5 Các yếu tố ảnh hưởng ñến sức sống của tinh trùng trong ñông lạnh 28

PHẦN III ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

3.1 ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian nghiên cứu 39

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v

3.2.1 Nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch tươi

3.2.2 Khả năng sản xuất tinh ñông lạnh của trâu ñực giống Murrah 40

3.2.3 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn trâu cái nội của trâu

3.3.1 Khai thác tinh dịch từ trâu ñực giống Murrah 41

3.3.3 Các bước sản xuất tinh trâu Murrah ñông lạnh dạng cọng rạ 42

3.3.4 Phương pháp nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng

3.3.5 Khả năng sản xuất tinh ñông lạnh của trâu ñực giống Murrah 44

3.3.6 Phương pháp nghiên cứu tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên

ñàn trâu cái nội của từng trâu ñực giống Murrah 44

4.1 Một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch tươi của trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi

4.2.1 Tổng số tinh trùng tiến thẳng trong một lần khai thác tinh 62

4.2.2 Số lượng tinh cọng rạ sản xuất ñược trong một lần khai thác tinh 64

4.3 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn trâu cái nội của trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii

DANH MỤC BẢNG

3.1 Ngày sinh và tháng tuổi huấn luyện, khai thác tinh của các trâu

4.4 Nồng ñộ tinh trùng của trâu ñực giống Murrah 534.5 Hoạt lực tinh trùng của trâu ñực giống Murrah 554.6 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình của trâu ñực giống Murrah 574.7 Tỷ lệ tinh trùng sống của trâu ñực giống Murrah 604.8 Tổng số tinh trùng tiến thẳng của trâu ñực giống Murrah 634.9 Số lượng tinh cọng rạ sản xuất ñược trên lần khai thác tinh của

4.10 Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của trâu ñực giống Murrah 674.11 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn trâu cái nội của trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ix

DANH MỤC BIỂU ðỒ

4.1 Tỷ lệ xuất hiện màu sắc tinh dịch của trâu ñực giống Murrah 47

4.4 Nồng ñộ tinh trùng của trâu ñực giống Murrah 54 4.5 Hoạt lực tinh trùng của trâu ñực giống Murrah 56 4.6 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình của trâu ñực giống Murrah 58 4.7 Tỷ lệ tinh trùng sống của trâu ñực giống Murrah 61 4.8 Tổng số tinh trùng tiến thẳng của trâu ñực giống Murrah 64 4.9 Số lượng tinh cọng rạ sản xuất ñược trên một lần khai thác tinh

4.10 Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông trâu ñực giống Murrah 68 4.11 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn trâu cái nội của trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page x

DANH MỤC HÌNH

2.2 Quá trình tạo hình tinh trùng (Junichi, 1992) 10

2.3 Cấu tạo tinh trùng (Nguyễn Xuân Tịnh và cs, 1996) 10

2.5 Quá trình ựông lạnh dung dịch (Hiroshi, 1992) 26

2.6 đông lạnh nước muối sinh lý (Hiroshi, 1992) 26

2.7 Ảnh hưởng của glycerol trong dung dịch NaCl so với nồng ựộ

NaCl trong dung dịch còn lại khi dung dịch NaCl (0,15M) ựược

2.8 Sự biến ựổi vật lý của tế bào khi ựông lạnh 31

4.1 Quan sát màu sắc tinh dịch đo thể tắch tinh dịch 50

4.2 (1) Tinh trùng trâu Murrah bình thường (2) Tinh trùng trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 1

PHẦN I ðẶT VẤN ðỀ

1.1 Tính cấp thiết của ñề tài nghiên cứu

Chăn nuôi gia súc, gia cầm từ lâu ñã trở thành ngành sản xuất chủ yếu của nhiều nước trên thế giới, nhất là các nước ñang phát triển Việt Nam là nước Nông nghiệp với diện tích trên 326.600 km2, trong ñó 2/3 là ñồi núi và cao nguyên, 75% dân số hoạt ñộng chủ yếu trong lĩnh vực Nông nghiệp Do

ñó ngành chăn nuôi nói chung ñặc biệt là chăn nuôi trâu nói riêng ñã dần trở thành một trong những ngành trọng yếu trong nền sản xuất của nước ta Trâu

có ưu ñiểm là dễ nuôi, sử dụng thức ăn ña dạng, chịu ñược kham khổ tốt, dễ thích nghi với ñiều kiện ngoại cảnh và chống ñỡ bệnh tật cao

Hiện nay trên thế giới có khoảng 198,88 triệu con trâu, chủ yếu phân bố

ở Châu Á (97,17%) trong ñó tập trung nhiều nhất ở Ấn ðộ có 115,40 triêụ con, Pakistan có 32,70 triệu con và Trung Quốc có 23,25 triệu con, chiếm tỷ lệ tương ứng là 58,02%; 16,44% và 11,69% trên toàn thế giới Việt Nam ñứng thứ 6 ( FAO, 2010), nay ñứng thứ 9 trên thế giới về số lượng trâu, ñạt 2,63 triệu con (FAO, 2012)

Trong hơn 5000 năm qua, trâu là loài ñộng vật quan trọng cung cấp sức kéo, sữa và thịt chất lượng cao cho con người, ñồng thời trâu còn cung cấp phân bón cho cây trồng và là một nguồn vốn tiết kiệm, có thể bán ñi ñể ñáp ứng nhu cầu tài chính khi cần thiết, góp phần to lớn trong cải thiện cuộc sống của người nông dân

Tuy nhiên hiện nay ñàn trâu Việt Nam ñang có xu hướng giảm sút về tầm vóc làm hạn chế năng suất cho thịt, sữa của trâu, nguyên nhân do công tác giống trâu chưa ñược ñầu tư ñúng mực, hiện tượng ñồng huyết và giết thịt trâu ñực to xảy ra phổ biến ở nhiều ñịa phương Ngoài ra còn do một số ñặc ñiểm hạn chế trong sinh sản của trâu, ñặc biệt là sự khó khăn trong bảo quản lạnh tinh trùng trâu ñã giảm hiệu quả việc ứng dụng công nghệ thụ tinh nhân

Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 2

tạo (TTNT), cải tạo di truyền cho ựàn trâu (Sansone và cs, 2000)

Cải thiện khả năng sinh sản là một biện pháp kỹ thuật ựể tăng ựàn, tăng năng suất chất lượng sản phẩm vật nuôi Kỹ thuật bảo tồn tinh dịch ựông lạnh

và kỹ thuật TTNT ựã cho phép tạo ra số lượng lớn những cá thể là con của những ựực giống ưu tú, làm tăng tốc ựộ cải tiến di truyền, góp phần thúc ựẩy quá trình chọn lọc giống vật nuôi nói chung, chọn lọc giống trâu nói riêng

và tăng năng suất vật nuôi một cách bền vững Do ựó, cần tuyển chọn trâu ựực giống tốt ựể sản xuất tinh ựông lạnh khắc phục tình trạng suy giảm số lượng và chất lượng ựàn trâu Việt Nam

Trâu Murrah thuộc dạng trâu sông, là giống trâu sữa và thịt nổi tiếng có nguồn gốc từ Ấn độ ựã ựược nhập vào nước ta trong giai ựoạn 1970 - 1978 từ Trung Quốc và Ấn độ, trâu ựã thắch nghi và phát triển tốt trong ựiều kiện Việt Nam, ựồng thời trâu ựực Murrah ựã ựược dùng ựể lai với trâu cái nội (Mai Văn Sánh, 1996) Trâu lai có tầm vóc lớn hơn, khả năng sinh trưởng, sinh sản, cày kéo, cho thịt, sữa ựều cao hơn so với trâu nội và nó cũng có thể phát triển tốt trong ựiều kiện nông thôn (Nguyễn đức Thạc, 1983; Nguyễn đức Thạc và Nguyễn Văn Vực, 1984) đã có nhiều công trình nghiên cứu của nhiều tác giả

về khả năng sinh trưởng, sinh sản, cho thịt sữa của trâu Murrah nhưng có rất ắt công trình nghiên cứu về khả năng sản xuất tinh của trâu ựực giống Murrah

Xuất phát từ những yêu cầu nói trên chúng tôi tiến hành ựề tài: Ộđánh giá

khả năng sản xuất tinh ựông lạnh dạng cọng rạ của trâu Murrah nuôi tại Trạm Nghiên cứu và sản xuất tinh ựông lạnh MoncadaỢ

Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 3

1.2 Mục tiêu của ựề tài

đánh giá phẩm chất tinh dịch , khả năng sản xuất tinh ựông lạnh dạng

cọng rạ và tỷ lệ phối giống có chửa lần một của tinh trâu Murrah ựông lạnh dạng cọng rạ nuôi tại Trạm Nghiên cứu và Sản xuất tinh ựông lạnh Moncada

1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ựề tài

+ Kết quả luận văn ựánh giá ựược số lượng, chất lượng tinh dịch và tinh ựông lạnh của trâu Murrah nuôi tại Trạm Nghiên cứu và sản xuất tinh ựông lạnh Moncada

+ Giúp cho cơ sở sản xuất ựánh giá, tuyển chọn ựược những trâu ựực giống sản xuất tinh ựông lạnh tốt, loại thải những trâu ựực giống sản xuất tinh kém, ựồng thời giúp cơ sở chăn nuôi có kế hoạch chủ ựộng số lượng trâu ựực giống cần thiết ựể sản xuất tinh ựông lạnh cung cấp, thoả mãn nhu cầu thị trường góp phần giảm chi phắ, nâng cao hiệu quả kinh tế trong chăn nuôi trâu ựực giống

+ Biết ựược tỷ lệ thụ thai ở lần phối ựầu theo cơ sở chăn nuôi, ựể nâng cao tỷ lệ thụ thai ở lần phối ựầu của toàn ựàn, góp phần nâng cao hiệu quả chăn nuôi trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 4

PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU

Trâu Murrah thuộc giống trâu sông (River Buffalo Carabao) là giống trâu nổi tiếng nhất và ñược nuôi nhiều nhất trên thế giới ðặc trưng về ngoại hình của trâu Murrah là thường có da và lông màu ñen tuyền, da mỏng, mềm mại, nhẵn bóng, có lông thưa, ở cuối ñuôi có chòm lông màu trắng sát với chân, sừng ngắn, quay ra sau và lên trên sau ñó vòng vào trong thành hình xoắn ốc ðầu trâu ñực thô kệch và nặng nề, ñầu con cái thì tương ñối nhỏ, cân ñối Trán rộng và hơi gồ, mặt cân ñối, lỗ mũi rộng, tai trâu bé, mỏng và rủ xuống Cổ trâu ñực thô và mập, cổ trâu cái dài, mảnh Ngực to, rộng, không có yếm Trâu ñực có phần thân trước nặng, phần sau nhẹ, trâu cái thì phần thân trước nhẹ và hẹp, phần thân sau nặng và rộng tạo thành hình cái nêm Lưng rộng, dài và thon về phía ñầu Xương sườn rất tròn, núm rốn nhỏ, không có u bướu Năng suất sữa của trâu Murrah ñạt 1600 –

1800 Kg/ chu kỳ 270 - 300 ngày với tỷ lệ mở sữa tới 7% Trâu ñực trưởng thành có khối lượng: 650-730kg/con, có thể tới 1000 kg, chiều cao trung bình 142 cm Trâu cái: 350-400kg/con, có thể tới 900 kg, chiều cao trung bình 133 cm, nghé sơ sinh: 30kg/con

Sự thành thục về tính dục phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau như

Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 5

giống, tuổi, khối lượng cơ thể, ựiều kiện nuôi dưỡng và môi trường .Nghé ựực 3-4 tháng ựã có phản xạ nhảy (nhảy ôm lên những con nghé khác), một năm rưỡi nghé ựực ựã có khả năng giao phối với cái Theo Nguyễn đức Thạc (2006), kiểm tra tinh dịch nghé ựực tại trại Ngọc Thanh thấy 18 tháng tuổi nghé ựã có tinh trùng ựầy ựủ, có nghĩa là nếu giao phối có thể thụ thai ựược Tuổi thành thục về tắnh của trâu phụ thuộc vào loại hình, giống trâu và ựặc biệt là chế ựộ chăm sóc, nuôi dưỡng nghé trước và sau khi tách mẹ Theo tác giả Mai Văn Sánh (1996) thì trâu Murrah nuôi tại Sông Bé Ờ Việt Nam có tuổi thành thục sinh dục là 33,81 tháng

2.1.1.2 Cấu tạo bộ máy sinh dục trâu ựực

- Bao dịch hoàn là một túi ngoài của da trong vùng bẹn, là nơi chứa dịch hoàn Bao dịch hoàn trâu dài và thõng, cổ thon và có rãnh giữa rõ khi không co rút Bìu dái có cổ ngắn hoặc thót lại là không tốt (Nguyễn Tấn Anh

và Nguyễn Duy Hoan, 1998)

- Dịch hoàn ựược xem là cơ quan nguyên thủy vì chúng sản sinh giao tử ựực (tinh trùng) và các hormone tắnh dục ựực (androgen) Dịch hoàn trâu ựực dài 10-13cm, rộng 5-6cm và nặng 300-400g Những ống sinh tinh uốn khúc (trong ựó tinh trùng ựược sản sinh) ựược hình thành từ những thừng giới tắnh nguyên thủy Chúng có chứa những tế bào mầm (tinh nguyên bào) và những tế bào nuôi dưỡng (tế bào Sertoli) được FSH kắch thắch, các tế bào Sertoli sản sinh cả protein ựắnh androgen và inhibin Các tế bào Leydig (tế bào kẽ) có trong mô mềm của dịch hoàn giữa những ống sinh tinh uốn khúc LH kắch thắch tế bào Leydig sản sinh testosterone và một ắt những androgen khác

- Ống tinh ra dùng ựể vận chuyển tinh trùng từ ựuôi dịch hoàn phụ ra niệu quản vùng chậu Phần tận cùng của ống tinh ra có thành dày và ựược gọi

là phồng ống đôi phồng ống, cùng với ống tiết của tinh nang, ựổ vào niệu quản ngay phắa sau cổ bóng ựái

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 6

- Thừng dịch hoàn kéo dài từ vòng bẹn ñến các dịch hoàn Nó gồm có các ñộng mạch dịch hoàn, các tĩnh mạch dịch hoàn, các mạch lympho, thần kinh, ống dẫn tinh ra, cơ bao dịch hoàn ngoài và một số lớp áo ngoài Qua cổ bao dịch hoàn có thể sờ ñược thừng dịch hoàn ðộng mạch dịch hoàn uốn khúc rất nhiều phía trên dịch hoàn trong một khu vực ñược gọi là ñám rối tĩnh mạch, rồi tiếp tục ñi xuống dưới phía sau dịch hoàn rồi tỏa nhánh ñể phân bố mạch máu cho dịch hoàn

- Dịch hoàn phụ là ống dẫn tinh ra ngoài ñầu tiên từ dịch hoàn lượn

theo chiều dài của bề mặt dịch hoàn, ñược bọc trong một lớp giáp mạc với dịch hoàn ðầu dịch hoàn phụ là khu vực gồ lên ở ñỉnh của dịch hoàn, tại ñây

có 12-15 ống nhỏ, chúng dồn vào một ống dẫn tinh ra

- Dương vật là cơ quan giao cấu ở con ñực Dương vật trâu ñực có một

ñoạn cong chữ S, nhờ ñó dương vật có thể co rụt hoàn hoàn vào bên trong khi không giao cấu (Kunitada, 1992)

Quy ñầu là ñầu mút tự do của dương vật, có nhiều thần kinh cảm giác

và nó tương ñương với âm vật ở con cái

Mô cương là mô hổng (xốp) nằm ở hai vùng của dương vật Mô xốp dương vật là mô hổng bao quanh niệu quản Những lỗ hổng này chứa ñầy máu khi kích thích tính dục, làm duỗi dương vật ra (cương) tạo ñiệu kiện dễ dàng cho quá trình phóng tinh

- Bao dương vật (còn gọi là “bao bì”) là cái túi do da thụt vào, túi này

chứa toàn bộ quy ñầu Nó chia thành nếp gấp ngoài và nếp gấp trong Miệng của bao dương vật ñược bao quanh bằng một túm lông dài và mịn

2.1.1.3 Các tuyến sinh dục phụ

Các tuyến sinh dục phụ nằm dọc theo niệu quản phần xương chậu, chúng tiết dịch và ñổ vào niệu quản Chúng gồm có tuyến tinh nang, tuyến tiền liệt và tuyến cầu niệu ñạo Chúng ñóng góp một phần lớn thể tích vào

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 7

lượng xuất tinh, hơn nữa dịch tiết của chúng là dung dịch ñệm, chất dinh dưỡng và những chất cần thiết khác ñảm bảo tối ưu cho sự vận ñộng và khả năng thụ tinh của tinh dịch

- Tuyến tinh nang là một ñôi tuyến hình thùy dễ phân biệt vì chúng có

dạng lồi Chúng ñược mô tả có hình dạng giống “chùm nho” Hai trong các hợp chất của dịch tiết (fructose và sorbitol) là nguồn năng lượng chủ yếu cho tinh trùng trâu ñực Trong dịch tiết này có cả ñệm phosphate và cacbonate là các hợp chất rất quan trọng vì chúng giữ cho pH tinh dịch không thay ñổi

- Tuyến tiền liệt là một tuyến ñơn nằm xung quanh và dọc theo niệu

quản ngay phía sau ống ñổ ra của tuyến tinh nang Có thể sờ khám tuyến tiền liệt ở trâu ñực Dịch tiết của tuyến tiền liệt giàu các ion vô cơ với sodium, chlorine, calcium, magnesium

- Tuyến cầu niệu ñạo là một ñôi tuyến nằm dọc theo niệu quản, miệng

ñổ ra của nó nằm ở cuối niệu ñạo phần xoang chậu Tuyến có kích cỡ và hình dáng giống quả hồ ñào Nó ñóng góp phần dịch tiết rất ít vào tinh dịch

2.1.1.4 Sự tiết tinh dịch ở trâu ñực

Tinh dịch là dịch tiết của cơ quan sinh dục ñực khi nó thực hiện có kết quả phản xạ sinh dục Tinh dịch chỉ ñược hình thành một cách tức thời khi con ñực phóng tinh nghĩa là lúc nó hưng phấn cao nhất trong quá trình thực hiện phản xạ giao phối (Trần Tiến Dũng và cs, 2002)

Tinh dịch gồm: tinh trùng (3-5%) và tinh thanh (95-97%) Tinh trùng ñược sinh ra từ những ống sinh tinh ở dịch hoàn, còn tinh thanh ñược sinh ra

từ các tuyến sinh dục phụ

- Tinh thanh ñược sinh ra từ tuyến sinh dục phụ chủ yếu là nước, còn

lại là vật chất khô (8,76% có nguồn gốc hữu cơ; 0,9% có nguồn gốc vô cơ) Tinh thanh chứa nhiều loại muối axit amin và men góp phần vào hoạt ñộng sống và trao ñổi chất của tinh trùng ðường Fructoza do túi tinh tiết ra là

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 8

nguồn năng lượng chủ yếu cho tinh trùng, ñồng thời nó chứa một số dung dịch ñệm làm pH không bị thay ñổi Do vậy trong thụ tinh nhân tạo ñể duy trì các liều tinh ñông lạnh trong một thời gian dài nhất ñịnh người ta sử dụng nhiệt ñộ thấp (-1960C) nhằm giảm khả năng vận ñộng của tinh trùng và bảo tồn ñường Fructoza Các chất pha loãng tinh dịch cũng có các chất ñệm ñể ổn ñịnh pH

- Tinh trùng

Sự hình thành tinh trùng ở trâu ñực

Hình 2.1 Sơ ñồ hình thành tinh trùng (Junichi, 1992)

Sự hình thành tinh trùng của trâu ñực là một quá trình liên tục trong ống sinh tinh từ khi con ñực thành thục về tính ñến khi già yếu Các tế bào mầm nguyên thuỷ phát triển thành tinh nguyên bào rồi biệt hoá thành tinh trùng Các tế bào Sertoli có nhiệm vụ cung cấp chất dinh dưỡng cho quá trình hình thành tinh trùng Quá trình hình thành tinh trùng có thể chia làm 3 giai ñoạn chính:

+ Sản sinh tinh trùng: Quá trình sinh tinh và thành thục của tinh trùng diễn ra liên tục trong năm, tuy nhiên cường ñộ có thay ñổi theo mùa Quá trình tạo tinh bắt ñầu từ tế bào mầm biệt hoá thành tinh nguyên bào A1, rồi

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 9

một tinh nguyên bào A1 chia thành 2 tinh nguyên bào A2, một trong hai tinh nguyên bào A2 bị tiêu hủy ngay sau ñó, tế bào A2 còn lại sẽ phân bào nguyên nhiễm thành các tinh nguyên bào trung gian, sau ñó chúng tạo thành tế bào tinh bào sơ cấp và nhanh chóng phân bào giảm nhiễm thành các tinh bào thứ cấp có n nhiễm sắc thể Mỗi tinh bào thứ cấp phân chia thành hai tinh tử Như vậy từ một tinh nguyên bào tạo thành 64 tinh tử trong thời gian 32-45 ngày ở trâu ñực (Junichi, 1992)

+ Sự tạo hình tinh trùng: Là giai ñoạn tinh tử biến ñổi hình thái trở

thành tinh trùng ñặc trưng cho từng loài Một tinh tử biến ñổi hình thái thành một tinh trùng và chúng thường chụm quanh tế bào Sertoli, sau ñó chúng tách rời, di chuyển tự do trong ống sinh tinh và di chuyển ñến xoang dịch hoàn cuối cùng ñến dịch hoàn phụ

+ Sự thành thục tinh trùng: Ngay sau khi hình thành, tinh trùng không

có khả năng hoạt ñộng, càng không có năng lực hoạt ñộng tiến thẳng hoặc nhiều tinh trùng còn có giọt bào tương bám theo Chỉ sau khi tinh trùng ñi qua dịnh hoàn phụ, do sự co thắt của ống dịch hoàn phụ và sức hút của ống dẫn tinh, giọt bào tương mất ñi, khả năng vận ñộng tiến thẳng, năng lực thụ tinh của tinh trùng mới ñược hình thành

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 10

Hình 2.2 Quá trình tạo hình tinh trùng (Junichi, 1992)

1- Tinh bào sơ cấp 2- Pha hạt 3,4- Pha ñỉnh

5- Pha acrosome 6,7- Pha thành thục 8- Tinh trùng

2.1.1.5 Một số ñặc tính sinh lý của tinh trùng trâu

- Sự hình thành và cấu tạo của tinh trùng trâu

Tinh trùng gia súc có hình giống con nòng nọc Có thể chia cấu trúc của nó thành 4 phần: ñầu, cổ, ñoạn giữa và ñuôi

Hình 2.3 Cấu tạo tinh trùng (Nguyễn Xuân Tịnh và cs, 1996)

ðầu: ðầu tinh trùng gia súc dẹt và có hình quả trứng ðầu tinh trùng

có nhân tế bào Nó chứa chủ yếu AND liên kết với protein Cả hai nửa trước

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 11

và nửa sau ñược phủ bằng những cái màng ñược xem như là chóp acrosome

và chóp sau chân Chóp acrosome có chứa những enzym như hyaluronidase

và acrosin là rất cần thiết ñể thụ tinh trứng

Cổ: Phần này ñược nối vào ñầu, có thể dễ dàng bị gãy và chứa trung

thể Một sợi trục từ ñây kéo dài ñến chót ñuôi

ðoạn giữa: ðoạn này ñược nối vào cổ và dày hơn ñuôi Ở giữa có một

tập hợp sợi trục và bọc quanh tập hợp sợi trục này là một bao ty thể xoắn và màng tế bào chất ðầu cuối của ñoạn giữa là một vòng nhẫn ðoạn giữa giàu phospholipid, có chứa nhiều oxidase và cung cấp năng lượng cho tinh trùng

ðuôi: Phần này nối vào ñoạn giữa và có một tập hợp sợi trục gồm 9 bó

sợi ñược nối vào vòng nhẫn Bao quanh tập hợp sợi này là 1 bao sợi ñược xem như là nguyên sinh chất ðuôi thon dần bắt ñầu từ ñoạn giữa, tại chót ñuôi không có bao sợi hoặc sợi dày ñặc Tập hợp sợi trục ñược bộc lộ ra tạo chót ñuôi

2.2 Một số chỉ tiêu sinh vật học về tinh dịch trâu Murrah

Cũng như bò và các gia súc khác, tinh dịch trâu Murrah có thể ñược khai thác bằng cách sử dụng âm ñạo giả, bằng máy xung ñiện (electroejaculator), mát xa qua trực tràng hoặc lấy ra từ âm ñạo của con cái sau khi cho con ñực xuất tinh vào Tuy nhiên khai thác tinh bằng âm ñạo giả ñược sử dụng phổ biến hơn bởi tính an toàn và phù hợp với tập tính sinh dục, các phương pháp còn lại hoặc có chất lượng tinh dịch thấp hoặc có những phản ứng phụ không tốt cho vật nuôi

Tinh dịch trâu Murrah thường ñược khai thác vào buổi sáng, trước khi cho

ăn và có thể lấy một lần hoặc lấy ñúp 2 lần, lần 2 cách lần 1từ 15 phút ñến 30 phút, tùy thuộc vào ñộ hưng phấn sinh dục của gia súc (Jainudeen và cs., 1982; Koonjaenak và cs., 2007a, Vale, 2010; Bhakat và cs., 2011) Một số chỉ tiêu phẩm chất tinh dịch ñược kiểm tra, ñánh giá gồm màu sắc tinh dịch, lượng xuất

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 12

tinh (ml), nồng ñộ tinh trùng (tỷ/ml), hoạt lực tinh trùng (%), tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%), tỷ lệ tinh trùng sống (%), pH tinh dịch Các chỉ tiêu này có ý nghĩa trong việc phát hiện các trường hợp sinh sản yếu hoặc vô sinh ở gia súc

2.2.1 Màu sắc tinh dịch

Tinh dịch trâu thường có màu trắng sữa hay trắng ngà Màu sắc tinh dịch phụ thuộc vào nồng ñộ tinh trùng cũng như sự hiện diện của các chất khác (Vale 1994a) Tinh dịch có màu trắng sữa hoặc trắng ngà thường có nồng ñộ tinh trùng cao, màu trắng trong, loãng là tinh dịch có nồng ñộ tinh trùng thấp Tinh dịch có màu xanh hoặc xám thường có lẫn mủ, có màu cà phê hay màu nâu thường do lẫn máu hay sản phẩm viêm của ñường sinh dục

Theo Koonjaenak và cs (2007a) ñã quy ñổi màu sắc ra số học, màu trắng ngà (màu kem) là số 3, màu trắng sữa là số 2 và màu trắng trong là số 1, kết quả ñánh giá cho thấy màu sắc tinh dịch trâu ñều có kết quả là 2-3 ở các mùa khác nhau trong năm, ñảm bảo tiêu chuẩn sản xuất tinh phục vụ công tác thụ tinh nhân tạo

2.2.2 Lượng xuất tinh (ml)

Chỉ tiêu này kiểm tra bằng mắt thường trên vạch chia mililit (ml) ở thành ống hứng tinh Lượng xuất tinh là số ml tinh dịch lấy ñược trong một lần xuất tinh thành công (ml/lần khai thác) Lượng xuất tinh liên quan chặt chẽ tới giống, tuổi, chế ñộ chăm sóc, nuôi dưỡng, kích thước dịch hoàn, mùa

vụ, mức ñộ kích thích tính dục trước khi lấy tinh, phản xạ nhảy giá và kỹ thuật khai thác tinh Trâu ñực giống trẻ thì lượng xuất tinh thường ít nhưng sau 2 tuổi có thể ñạt ñược hơn 4ml tinh dịch Trâu ñực trên 4 tuổi lượng xuất tinh có thể ñạt hơn 6ml tinh dịch (Vale 1994a) Nếu lấy tinh hai lần thì thể tích lấy tinh lần hai thường ít hơn lần ñầu (Nguyễn Tấn Anh, Nguyễn Quốc ðạt-1997) Theo Bhakat và cs (2011) trâu Murrah ở Ấn ðộ có ñộ tuổi từ 2,31-7,36 năm tuổi có lượng tinh ñạt 2,58 ml, dao ñộng từ 1,79-3,61 ml Nghiên cứu của Manik và Mudgal (1984) cho biết, trâu ñực giống Murrah có lượng

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 13

xuất tinh bình quân ñạt 3,25 ml/lần khai thác

Nghiên cứu của Manik và Mudgal (1984) cho biết, trâu ñực giống Murrah có lượng xuất tinh bình quân ñạt 3,56-4,34 ml/lần khai thác ở mùa xuân, ở mùa hè lượng xuất tinh dao ñộng từ 3,98-4,28 ml/lần khai thác tinh, ở mùa thu dao ñộng từ 3,48-4,38 ml/lần khai thác tinh và ở mùa ñông lượng xuất tinh dao ñộng từ 3,88-4,02 ml/lần khai thác tinh Pawan Singh và cs (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu ñưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn ðộ cho biết thể tích tinh trùng ñạt 4,26 ml/ lần khai thác

Theo Pant và cs (2002) khi nghiên cứu 133 trâu ñực giống Murrah ở các giai ñoạn cho biết: ở giai ñoạn tuổi 25-36 tháng tuổi có lượng xuất tinh ñạt 2,5ml/ lần khai thác, ở giai ñoạn 37-48 tháng tuổi lượng xuất tinh ñạt 3,1ml/ lần khai thác, ở giai ñoạn 49- 60 tháng tuổi tuổi lượng xuất tinh ñạt 3,5ml/ lần khai thác và trên 60 tháng tuổi lượng xuất tinh ñạt 3,6ml/ lần khai thác

Theo Vale (1994a) khi nghiên cứu về ñặc ñiểm tinh dịch trâu ñực Murrah cho biết thể tích tinh dịch ñạt 3ml/ lần khai thác Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại Trung tâm nghiên cứu trâu và ñồng cỏ Sông Bé cho biết thể tích tinh dịch trâu Murrah ñạt 3,0-5,0ml/ lần khai thác

Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại Trung tâm nghiên cứu và phát triển chăn nuôi miền núi khi nghiên cứu về tinh trâu Murrah cho biết: thể tích tinh dịch trâu Murrah ñạt 3,25ml/ lần khai thác Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú ñược huấn luyện lấy tinh lúc 24 tháng tuổi ñến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịch ổn ñịnh và có thể tích ñạt là thể tích tinh dịch 3,29ml/ lần khai thác

2.2.3 pH tinh dịch

Sau khi tinh vừa lấy xong cần kiểm tra ñộ pH của tinh dịch sẽ hỗ trợ cho ñánh giá chất lượng tinh dịch chính xác ðây là chỉ tiêu quan trọng ñể ñánh giá

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 14

chất lượng tinh dịch trâu Người ta có thể dùng máy ño pH ñể kiểm tra, hoặc dùng giấy ño pH cũng chính xác và nhanh

Tinh dịch trâu ñực giống Murrah thường có pH dao ñộng từ 6,8-7,0 (Tomar và cs 1966); pH dao ñộng từ 6,4 – 7,0 (Kumar và cs 1993b) Theo Vale (1994a) khi nghiên cứu về ñặc ñiểm tinh dịch trâu ñực Murrah ñã công

bố pH của tinh dịch dao ñộng từ 6,7 – 7,5 Theo Mandal và cs (2000) công bố tinh dịch trâu ñực giống Murrah ở Ấn ðộ có pH dao ñộng từ 6,85 ñến 6,97 Tinh dịch có pH hướng kiềm là không tốt hoặc biểu hiện viêm các bộ phận sinh dục… Tinh dịch nguyên tươi của trâu ñực giống không ñạt tiêu chuẩn về chỉ tiêu này phải loại bỏ và không cần kiểm tra các chỉ tiêu khác

2.2.4 Nồng ñộ tinh trùng C (tỷ/ ml)

Nồng ñộ tinh trùng (C) là số lượng tinh trùng có trong một ml tinh dịch Nồng ñộ tinh trùng là một chỉ tiêu quan trọng ñánh giá chất lượng tinh dịch, là chỉ tiêu cơ sở ñể tính số liều tinh sản xuất

Có nhiều cách xác ñịnh nồng ñộ tinh trùng, nhưng hiện nay nồng ñộ tinh trùng ñược xác ñịnh bằng máy so màu rất nhanh và chính xác Phương pháp này dựa trên nguyên tắc là: Tinh dịch có nồng ñộ tinh trùng khác nhau

sẽ tạo nên các mức ñộ mờ ñục khác nhau, làm cho ñộ sáng ñến tế bào quang học có kết quả khác nhau và ñược chuyển thành dòng ñiện tích làm lệch kim ñiện kế, nhờ chương trình cài ñặt sẵn máy tự ñộng tính toán và hiện thông số nồng ñộ tinh trùng khá chính xác Nếu ta nhập dữ liệu thể tích tinh dịch và hoạt lực tinh trùng thì máy có thể tính toán cho ta thông số về lượng môi trường cần pha, số lượng cọng rạ có thể sản xuất ñược Nồng ñộ tinh trùng có

ý nghĩa khoa học thực tiễn, nó xác ñịnh số lượng tinh trùng trên một lần lấy tinh, phân loại tinh dịch, quyết ñịnh loại bỏ hay sử dụng cho các công ñoạn sau Nồng ñộ tinh trùng (C) khi phối hợp với V và A cho biết tổng số tinh trùng hoạt ñộng tiến thẳng của lần xuất tinh ñó (Hà Văn Chiêu, 1999)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 15

Theo Pant và cs (2002) khi nghiên cứu 133 trâu ñực giống Murrah ở các giai ñoạn tuổi ñã công bố trâu Murrah ở giai ñoạn 25-36 tháng tuổi nồng

ñộ tinh trùng ñạt 1,67 tỷ/ml, ở giai ñoạn 37-48 tháng tuổi nồng ñộ tinh trùng ñạt 1,49 tỷ/ml, ở giai ñoạn 49- 60 tháng tuổi nồng ñộ tinh trùng ñạt 1,47 tỷ/ml và trên 60 tháng tuổi nồng ñộ tinh trùng ñạt 1,66 tỷ/ml

Nghiên cứu của Manik và Mudgal (1984) cho biết, trâu ñực giống Murrah có nồng ñộ tinh trùng ñạt 0,97 tỷ/ml ñến 1,44 tỷ/ml.Theo Mandal

và cs (2000) cho biết tinh dịch trâu ñực giống Murrah có nồng ñộ tinh trùng dao ñộng từ 0,96 tỷ/ml ñến 1,18 tỷ/ml Nghiên cứu Bhakat và cs (2011) trên trâu ñực giống Murrah tại Ấn ðộ có nồng ñộ tinh trùng 0,99 tỷ/ml Pawan Singh và cs (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu ñưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn ðộ cho biết nồng ñộ tinh trùng ñạt 1,32 tỷ/ml

Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú ñược huấn luyện lấy tinnh lúc 24 tháng tuổi ñến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịnh với nồng ñộ tinh trùng ñạt 1,1 tỷ/ml Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại Trung tâm nghiên cứu và phát triển chăn nuôi miền núi khi nghiên cứu về tinh trâu Murrah cho biết nồng ñộ tinh trùng ñạt 0,80 tỷ/ml

2.2.5 Hoạt lực tinh trùng A (%)

Hoạt lực tinh trùng là sức sống hay sức hoạt ñộng của tinh trùng, là chỉ tiêu thể hiện số lượng tinh trùng hoạt ñộng tiến thẳng trong tinh dịch và ñược xếp theo phần trăm, từ 0% ñến 100%

Tinh trùng tiến thẳng ñược là nhờ cấu trúc ñặc biệt của ñuôi và nguồn năng lượng từ lò xo ty thể Tốc ñộ di chuyển tiến thẳng của tinh trùng phụ thuộc vào các ñiều kiện nội tại và ngoại cảnh như giống, cá thể, niêm dịch ñường sinh dục tiết ra nhiều hay ít và ñộ co bóp của các bộ phận sinh dục của con cái

Chỉ có tinh trùng vận ñộng tiến thẳng mới có khả năng tham gia quá

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 16

trình thụ tinh Do vậy người ta ñánh giá chất lượng tinh dịch thông qua ước lượng tỷ lệ tinh trùng tiến thẳng hoặc mức “sóng ñộng” của mặt thoáng vi trường tinh dịch do hoạt lực của tinh trùng tạo nên

Nghiên cứu Bhakat và cs (2011) trên trâu ñực giống Murrah tại Ấn ðộ

có hoạt lực tinh trùng 66,63 % Theo Mandal và cs (2000) cho biết tinh dịch trâu ñực giống Murrah có hoạt lực tinh trùng từ 63,86% ñến 67,99% Pawan Singh và cs (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu ñưc giống Murrah

40 tháng tuổi tại Ấn ðộ cho biết hoạt lực tinh trùng trước ñông lạnh ñạt 59,58%; hoạt lực sau giải ñông ñạt 32,91%

Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại trunng tâm nghiên cứu trâu

và ñồng cỏ sông bé cho biết hoạt lực tinh trùng ñạt 60- 75% ( Sharma ðỗ Kim Tuyên, 1990).Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú ñược huấn luyện lấy tinh lúc 24 tháng tuổi ñến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịch ổn ñịnh với hoạt lực tinh trùng ñạt 71,7% Trịnh Thị Kim Thoa và cs (2005) nghiên cứu sản xuất tinh trâu ñông lạnh dạng viên, mỗi viên chứa hơn 40 triệu tinh trùng và có hoạt lực sau giải ñông ñạt 30,64% Môi trường pha loãng gồm Superoxide dismutase, Tris, axit citric, fructoza, long ñỏ trứng gà, glycerol, penicillin, streptomycin và nước cất Lưu Kỷ (1979); Vũ Ngọc Tý và Lưu Kỷ (1979) ñã thành công trong nghiên cứu ñông lạnh tinh dịch trâu trên mặt hơi ni tơ lỏng (tinh viên), hoạt lực sau giải ñông ñạt 30%

Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K) ñược tính bằng %, ñược xác ñịnh bằng cách ñếm trên kính hiển vi Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình phụ thuộc vào nhiều yếu tố như giống, ñiều kiện nuôi dưỡng, thời tiết, bệnh tật, di truyền kỹ thuật xử lý tinh

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 17

- Tinh trùng kỳ hình ñầu thường gặp:

Kích thước ñầu khác thường: ñầu to, ñầu nhỏ, ñầu hẹp, ñầu quả lê, ñầu quả trứng…

Kỳ hình ở thể cực ñầu: tháo rời cực ñầu, phù, thoát ñầu…

ðầu bất thường về cấu trúc: bất thường ngoại hình của khối nhân, có xoang rỗng ở ñầu và cực ñầu, hạt bám cực ñầu

Kỳ hình ở phần ñáy của ñầu: ñáy hẹp, ñáy rộng, ñáy phẳng, ñáy lồi

- Ở cổ tinh trùng có kỳ hình: ñuôi và ñáy ñầu bị lệch, cổ kép, cổ tách rời

- Phần thân có kỳ hình: ngắn, dài, mảnh, rộng, kép, gián ñoạn

- ðuôi có kỳ hình: ngắn, mảnh, gián ñoạn, gập về phía ñầu, ñuôi xoắn, ñuôi kép…

Những tinh trùng không thành thục có ñặc ñiểm là còn sót những giọt nguyên sinh chất ở cổ và ñuôi Những tinh trùng kỳ hình ở ñầu thường do di truyền, do bệnh ở tinh hoàn như viêm, thoái hoá, sơ hoá…

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 18

Hình 2.4 Các dạng kỳ hình phổ biến của tinh trùng

(Koonjaenak và cs, 2007a)

A - Acrosom lồi (dạng phổ biến)

B - Acrosom lồi (dạng hạt)

C - ðầu quả lê (nghiêm trọng)

D - ðầu quả lê (vừa phải)

E - ðầu quả lê (nhẹ)

F - Không bào nhân

G - Khiếm khuyết vòng miện

H - ðầu tách rời

I - Phản xạ xa tâm

J - ðuôi gập ñôi (ñoạn giữa bị gãy)

K - ðuôi gập ñôi (ñoạn giữa uốn cong)

L - Giọt bào tương gần tâm

M - Giọt bào tương xa tâm

có thể sử dụng, tuy nhiên tỷ lệ tinh trùng kỳ hình ở ñầu không vượt qua 5%

Kỳ hình tinh trùng có thể xảy ra trong 3 trường hợp:

+ Trường hợp 1: do qua trình sinh tinh bị tổn thương

+ Trường hợp 2: xảy ra khi tinh trùng ñi qua dịch hoàn phụ

+ Trường hợp 3: xảy ra do tác ñộng bên ngoài khi lấy tinh, khi kiểm tra chất lượng tinh, khi cân bằng và ñông lạnh tinh dịch

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 19

Nếu kỳ hình ở trường hợp 1 và 2 cao thì tỷ lệ thụ tinh thấp và những trâu ñực này nên loại thải Nếu trường hợp 3 cần hạn chế những nguyên nhân gây ra

kỳ hình bằng cách thực hiện nghiêm các quy trình kỹ thuật qua các khâu khai thác tinh, ñánh giá chất lượng tinh dịch và sản xuất tinh ñông lạnh

Nghiên cứu của Manik và Mudgal (1984) cho biết, trâu ñực giống Murrah có tỷ lệ tinh trùng kỳ hình dao ñộng trong khoảng 4,60% ñến 6,53% Theo Mandal và cs (2000) cho biết tinh dịch trâu ñực giống Murrah có tỷ lệ tinh trùng kỳ hình chiếm 7,32% ñến 14,21% Bhosrekar và cs (1991) khi nghiên cứu về tinh dịch trâu Murrah cho biết tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng trâu Murrah từ 7,32% ñến 14,21%.Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú ñược huấn luyện lấy tinh lúc 24 tháng tuổi ñến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịch ổn ñịnh với tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 12,78% (Nguyễn ðức Thạc và Nguyễn Văn Vực, 1985)

2.2.7 Tỷ lệ tinh trùng sống

Tỷ lệ tinh trùng sống xác ñịnh chất lượng của xuất tinh Tinh dịch vừa thu với hơn 30% tinh trùng chết có thể không thích hợp cho việc lưu trữ và ñóng băng (Rochwerger và Cuaniscu, 1992)

Tỷ lệ tinh trùng sống liên quan chặt chẽ ñến tỷ lệ thụ tinh của tinh trùng Dựa vào nguyên lý màng của tinh trùng chết hoặc ñang chết có khả năng cho các chất nhuộm màu thấm qua, do sự rối loạn tính thẩm thấu của màng tinh trùng Trong khi ñó những tinh trùng sống màng tinh trùng không cho các chất nhuộm màu thấm qua nên không bắt màu khi nhuộm Bằng cách này người ta ñã sử dụng thuốc nhuộm màu eosine ñể nhuộm tinh trùng chết rồi ñếm chúng trên kính hiển vi và tính tỷ lệ sống Tỷ lệ tinh trùng sống phụ thuộc vào giống, ñộ tuổi, chế ñộ chăm sóc nuôi dưỡng, khai thác tinh, môi trường pha loãng (Masuda, 1992)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 20

Nghiên cứu của Manik và Mudgal (1984) cho biết, trâu ñực giống Murrah

có tỷ lệ sống của tinh trùng dao ñộng trong khoảng 72,94% ñến 93,33%

Theo Mandal và cs (2000) cho biết tinh dịch trâu ñực giống Murrah có

tỷ lệ tinh trùng sống dao ñộng từ 76,11% ñến 83,08%

Pawan Singh và cs (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu ñưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn ðộ cho biết tỷ lệ tinh trùng sống ñạt 88,09% Ramakrishnam và cs (1989) cho kết quả khi nghiên cứu 401 lần thu tinh trùng trâu Murrah như sau: tỷ lệ tinh trùng sống ñạt 86,87%

Theo Vale (1994a) khi nghiên cứu về ñặc ñiểm tinh dịch trâu ñực Murrah ñã cho biết tỷ lệ tinh trùng sống trên 70%

2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng tới phẩm chất tinh ñông lạnh của trâu Murrah

Các chỉ tiêu ñánh giá phẩm chất tinh dịch gia súc nói chung và trâu Murrah nói riêng có mối tương quan với nhau và chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như giống, cá thể, lứa tuổi, mùa vụ, thức ăn, quản lý khai thác tinh ðặc biệt, ảnh hưởng của môi trường pha loãng và quá trình ñông lạnh tinh trùng có tác ñộng lớn ñối với chất lượng tinh trùng sau giải ñông (McCool và Entwistle, 1989a,b; Suryaprakasam và cs 1993; Pant và cs, 2003; Shukla và Misra, 2005; Koonjaenak và cs, 2007a; Al Sahaf và Ibrahim, 2012; Da Luz và

cs, 2013; Dahiya và Singh, 2013)

2.3.1 Giống và cá thể

Trâu Murrah thuộc giống trâu ñầm lầy (Swamp buffalo), kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả ñã chứng minh rằng, các giống khác nhau có các ñặc ñiểm phẩm chất tinh dịch khác nhau Nghiên cứu so sánh trâu ñịa phương, trâu Murrah và trâu Surti ở Sri Lanka Rajamahendran và Manickavadivale (1981) thấy rằng, lượng xuất tinh, nồng ñộ tinh trùng và tỷ lệ tinh trùng chết

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 21

ñạt cao nhất ở trâu Murrah Trâu ñịa phương có lượng xuất tinh, tỷ lệ tinh trùng chết và kỳ hình lớn hơn trâu Surti nhưng có nồng ñộ tinh trùng nhỏ hơn Lượng xuất tinh trung bình của trâu ñầm lầy trưởng thành ñạt 3,7ml (Nordin và cs, 1990), trâu Murrah ñạt từ 2,58ml (Bhakat và cs, 2011), trâu Nili-Ravi ñạt tới 4,96ml (Javed và cs, 2000) Các giống trâu ñầm lầy, Murrah, Nili-Ravi, Surti…, pH dao ñộng từ 6,26-7,5 (Vale, 1994a; Mandal và cs, 2000; Koonjaenak và cs, 2007a) Trâu ñầm lầy trưởng thành có tỷ lệ tinh trùng sống 69,9% (Nordin và cs, 1990), tỷ lệ tinh trùng sống của trâu Murrah

ñạt 77,77% (Capitan và cs, 1990)

2.3.2 Tuổi

Quá trình sinh tinh ở trâu ñực ñược bắt ñầu khá sớm, từ 6 tháng tuổi ñã

có thể quan sát thấy sự phát triển của các tế bào sertoli trong ống sinh tinh, ñến 12 tháng tuổi xuất hiện các tế bào sertoli hoàn chỉnh, từ 15 tháng tuổi trở

ñi bắt ñầu có tế bào tinh trùng trong ống sinh tinh, ñến 29 tháng tuổi trâu có tinh dịch hoàn chỉnh, nhưng ñến 32 tháng tuổi các ống sinh tinh mới phát triển hoàn thiện (Ahmad và cs, 2010)

Trâu Murrah có mối tương quan mạnh mẽ giữa tuổi tác, chu vi dịch hoàn và khối lượng cơ thể (Suryaprakasam và cs, 1993;) Chu vi dịch hoàn tăng nhanh từ 3,5-4,5, tuổi và sau ñó tăng trưởng chậm lại, lượng xuất tinh và nồng ñộ tinh trùng tăng tuyến tính ñến 6 năm tuổi và sau ñó có xu hướng giảm ñi (Suryaprakasam và cs, 1993) Mức ñộ testosterone huyết thanh của trâu có mối tương quan thuận với chu vi dịch hoàn và lượng xuất tinh (Sajjad

và cs, 2007) ðây là lí do ham muốn tình dục của con ñực trưởng thành cao hơn so với con ñực già hay trẻ (Younis và cs, 2003) ðiều này phù hợp với công bố của nhiều tác giả ñã khẳng ñịnh rằng tinh dịch trâu Murrah có chất lượng tốt nhất trong giai ñoạn từ 3-5 tuổi (Chinnaiya và Ganguli, 1990; Kumar và cs, 1993; Singh và cs, 2004)

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 22

2.3.3 Mùa vụ

Yếu tố mùa vụ ảnh hưởng tới gia súc thông qua nhiệt ñộ, ñộ ẩm, lượng mưa… ở cả khí hậu trong và ngoài chuồng nuôi và ảnh hưởng gián tiếp bởi stress nhiệt cao trong mùa hè sẽ ức chế ham muốn tình dục, giảm phẩm chất tinh và khả năng sinh sản của gia súc (Maldal và cs, 2000; Pant, 2000) Stress nhiệt trong mùa hè có ảnh hưởng ña chiều ñến khả năng sinh sản của trâu ñực

Nó ức chế hoạt ñộng tiết hormone sinh sản GnRH, FSH và LH bằng cách tăng nồng ñộ corticosteroid trong huyết tương Trong mùa hè Nồng ñộ thyroxin tiết giảm dẫn ñến giảm lượng thức ăn ăn vào của ñộng vật, giảm sự trao ñổi chất và từ ñó giảm quá trình sinh tinh (Zafar và cs, 1988) Do ñó con gia súc

bị stress nhiệt có thể kiệt sức và giảm hưng phấn tình dục, giảm khả năng khai thác tinh (Mandal và cs, 2000)

Vale (1997) cho rằng thời gian chiếu sáng là một yếu tố quan trọng ảnh hưởng khả năng sinh sản và hoạt ñộng tình dục của trâu ñực Ở các khu vực

ôn ñới, tinh dịch gia súc có chất lượng tốt ở mùa ñông và mùa xuân (Mohan

và Sahni, 1990; Galli và cs, 1993) Ở vùng nhiệt ñới như Brazil, từ tháng giêng ñến tháng sáu trâu có phẩm chất tinh dịch tốt nhất (Vale, 1994b) Mandal và cs (2000) cho biết, hoạt lực tinh trùng trâu trong mùa xuân, mùa mưa tốt hơn trong mùa hè nóng ẩm Kết luận rằng mùa mưa là thuận lợi nhất cho sản xuất chất lượng tinh dịch Koonjaenak (2007) thấy rằng, ảnh hưởng của mùa vụ trong năm ảnh hưởng tới dạng tinh trùng kỳ hình ñầu quả lê

Al Sahaf và Ibrahim (2012) cho biết, hoạt ñộng sinh sản của trâu và phẩm chất tinh dịch tăng lên trong những tháng có nhiệt ñộ vừa và thấp, giảm trong những tháng có nhiệt ñộ cao Sự gia tăng của nhiệt ñộ môi trường xung quanh trong những tháng nóng dẫn ñến những xáo trộn trong hoạt ñộng sinh sản của trâu

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 23

Tuy nhiên, Koonjaenak và cs (2007a) báo cáo rằng, mùa vụ không ảnh hưởng ñến phẩm chất tinh dịch của trâu ñầm lầy ở Thái Lan Nguyên nhân có thể do các trâu thí nghiệm trong nghiên cứu này ñược quản lý, chăm sóc nuôi dưỡng cẩn thận trong một trung tâm sản xuất tinh do vậy ñã hạn chế ñược ảnh hưởng của các tác ñộng stress nhiệt tới trâu ñực

2.3.4 Thức ăn

Thức ăn có vai trò ñặc biệt quan trọng trong sinh trưỡng, phát triển và sinh sản của gia súc và là một trong những yếu tố quyết ñịnh ñến phẩm chất tinh dịch của con ñực (Chinnaiya và Ganguli, 1990; Dahiya và Singh, 2003; Dahiya và cs, 2006) Thiếu hụt dinh dưỡng là một trong những nguyên nhân phổ biến nhất của việc suy giảm khả năng sinh sản gia súc như dậy thì muộn, giảm và mất tính hưng phấn sinh dục, giảm chất lượng tinh dịch (Pant, 2002)

Việc cho trâu ăn khẩu phần ăn thích hợp từ trước tuổi dậy thì là yếu tố quan trọng cho sự phát triển khả năng sinh sản của trâu (Dahiya và Singh, 2013) Các nghiên cứu ñã chỉ ra rằng việc thiếu hụt dinh dưỡng vitamin, khoáng chất ña lượng và vi lượng ñã làm giảm chất lượng tinh dịch Vitamin

A và E có liên quan trực tiếp ñến chất lượng tinh dịch trong tất cả các loài vật nuôi Thiếu hụt selen làm tăng kỳ hình ñuôi tinh trùng Tiêm vitamin A, D và

E ñịnh kỳ sẽ cải thiện chất lượng tinh dịch (Sighl và cs, 2001) Hàm lương Zn

có liên quan ñến quá trình trao ñổi chất của tinh trùng và từ ñó ảnh hưởng tới hoạt lực tinh trùng Các axit amin cũng có tác dụng ñến cải thiện chất lượng tinh dịch và chất lượng tinh ñông lạnh (Singh và cs, 2000)

2.3.5 Quản lý, chăm sóc và khai thác tinh

Các yếu tố quản lý, chăm sóc, khai thác và sản xuất tinh ñông lạnh cũng ảnh hưởng tới chất lượng tinh trâu (Chinnaiya và Ganguli, 1990; Dahiya

và Singh, 2013) Việc phun nước làm mát cho trâu trong những tháng mùa hè nóng làm giữ ổn ñinh chất lượng tinh dịch (Jainudeen và cs, 1982; Pawan

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 24

Singh và cs, 2001) Kỹ thuật kích thích hưng phấn nhảy giá khai thác tinh ở trâu ñực làm tăng nồng ñộ tinh trùng (Jainudeen và cs, 1982) Nền khu vực khai thác tinh ñược trải ñệm cao su sẽ có ảnh hưởng tốt hơn tới khả năng xuất tinh của gia súc so với nền ñất sét và nền bê tông Koonjaenak và cs (2007c) thấy rằng, ảnh hưởng của tần suất khai thác tinh ảnh hưởng ñến các dạng kỳ hình kích thước ñầu tinh trùng, kỳ hình ñuôi có mảng bám và ñuôi cong và tuổi ảnh hưởng ñến dạng tinh trùng kỳ hình có giọt bào tương

Ngoài ra, việc tiêm phòng bệnh truyền nhiễm, một mặt giúp gia súc tránh ñược bệnh dịch nhưng mặt khác cũng làm ảnh hưởng ñến phẩm chất tinh dịch vì tiêm phòng vắc xin gây phản ứng sốt sau tiêm chủng Tiêm phòng vắc xin LMLM tác ñộng xấu ñến chất lượng tinh dịch, làm giảm khối lượng

và nồng ñộ tinh trùng, hoạt lực tinh trùng, tỷ lệ sống, thời gian ảnh hưởng lên tới 1 tháng ( Singh và cs, 2003) Tiêm phòng văc xin có thể làm rối loạn chức năng mào tinh và làm tăng số lượng tinh trùng kỳ hình, giảm hoạt lực tinh trùng, giảm nồng ñộ tinh trùng Những phản ứng miễn dịch trong cơ thể sau khi tiêm vắc xin dẫn ñến tăng số lượng tinh trùng ñã chết Hoạt ñộng trao ñổi chất và sức kháng ñông của tinh trùng ñều giảm mạnh sau khi tiêm phòng vắc xin (Venkataswami và cs, 1972)

Khai thác tinh một lần trong một tuần là hợp lý nhất cho một con trâu, bò ñực có ñộ tuổi từ 2-3 năm Việc khai thác tinh ñúp, lần hai cách lần một khoảng

30 phút cũng giúp thu ñược tinh dịch có số lượng và chất lượng cao hơn Việc thực hiện tốt kỹ năng kích thích hưng phấn nhảy giá và kỹ thuật lấy tinh bằng âm ñạo giả của người khai thác tinh gia súc sẽ giúp thu ñược số lượng tinh nhiều hơn Khai thác tinh gia súc vào ban ñêm cho kết quả tốt hơn ban ngày do ban ngày có nhiều yếu tố liên lạc xã hội tác ñộng làm giảm sự tập trung trong công việc

2.4 Một số nguyên lý về ñông lạnh tinh dịch

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 25

Tinh trùng là một tế bào sống, vận ñộng ngoài cơ thể, rất mẫn cảm với sự thay ñổi của ñiều kiện môi trường xung quanh Trong quá trình ñông lạnh tinh dịch, ngoài việc dựa vào nguyên lý lý học, hóa học còn phải dựa vào nguyên lý sinh học và mối tương tác của chúng sao cho tinh trùng khi ñông băng vẫn giữ nguyên hình thái, trao ñổi chất tạm ngừng và sau khi giải ñông tinh trùng vẫn hoạt ñộng bình thường (Ditto, 1992)

2.4.1 Hiện tượng ñóng băng chất lỏng

Tinh trùng là một tế bào sống, vận ñộng ngoài cơ thể, rất mẫn cảm với sự thay ñổi của ñiều kiện môi trường xung quanh Trong quá trình ñông lạnh, tinh trùng sẽ chịu ảnh hưởng của hiện tượng ñóng băng chất lỏng

Khi chất lỏng bị làm lạnh xuống nhiệt ñộ quá thấp sẽ xảy ra hiện tượng ñóng băng Quá trình này xảy ra các giai ñoạn sau:

- Tiền ñóng băng (Supercooling)

- Tạo nhân tinh thể (nucleation)

- Giãn nở của tinh thể băng (growth of ice crystals)

- Kết tinh hoàn thiện tại một nhiệt ñộ nhất ñịnh (EP/Entectic point) Khi ñông lạnh tinh dịch sự tạo tinh thể và giãn nở tinh thể băng chỉ xảy ra trong ñiều kiện ñông lạnh chậm, còn khi ñông lạnh cực nhanh thì hai hiện tượng trên không xảy ra, mà xảy ra hiện tượng thủy tinh hóa (Vitrification), tạo ra các hạt băng nhỏ li ti, loại trừ ñược hiện tượng giãn nở tinh thể (Mazur, 1989).Quá

trình làm lạnh và ñông băng của một dung dịch sảy ra như hình 7 và hình 8

Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 26

Hình 2.5 Quá trình ựông lạnh dung dịch (Hiroshi, 1992)

Hình 2.6 đông lạnh nước muối sinh lý (Hiroshi, 1992)

2.4.2 Ảnh hưởng của ựóng băng lên tế bào tinh trùng

Tinh trùng rất mẫn cảm và luôn tồn tại trong tinh thanh, khi ựông lạnh, tinh trùng chịu sự tác ựộng của các hiện tượng sau (Ditto, 1992):

- Hiện tượng ựóng băng nội bào

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 27

Tinh trùng bị chết, hoặc mất năng lực hoạt ñộng, khi cấu tạo nội bào bị phá vỡ do việc hình thành tinh thể nước nội bào Nếu tinh trùng nằm trong dung dịch muối sinh lý có thể loại trừ ñược hiện tượng này vì ñược các phân

tử nước dạng lỏng bao quanh, mặc dù dung dịch ngoại bào bắt ñầu ñông băng

ở nhiệt ñộ - 20C hoặc -50C Như vậy quá trình ñóng băng sẽ không làm hại tới

tế bào tinh trùng cho ñến khi nước nội bào ñông lạnh mặc dù dung dịch môi trường bao quanh ñã ñông lạnh (Mazur, 1989)

- Sự mất nước của tế bào tinh trùng

Nếu nước nội bào thoát ra ngoài, tinh trùng sẽ bị teo lại, nhưng vẫn có tinh trùng sống ñược ở nhiệt ñộ thấp hoặc siêu thấp chẳng hạn -1960C Trong quá trình làm lạnh tinh dịch, nước ngoại bào ñông băng làm áp suất thẩm thấu chênh lệch, nước nội bào thoát ra khỏi ngoài tinh trùng và tiếp tục ñông băng phần ngoại bào ở -150C có 80% nước nội bào bị ñông lạnh và ñược thoát ra ngoài do ñó ngăn ngừa ñược hiện tượng ñông băng nội bào (Maria, 1995 trích

từ Hà Văn Chiêu, 1999) Ở -300C phần lớn nước nội bào thoát ra khỏi tinh trùng Với tinh trùng có thể chịu lạnh ở -300C, có thể tồn tại ñược ở -1960C, còn tế bào bình thường thì bị phá hủy, tuy nhiên cũng có tinh trùng không có khả năng chịu lạnh do các biến ñổi lý - hoá - sinh xảy ra Những biến ñổi hóa sinh có thể xảy ra trong tế bào bị phá hủy ở nhiệt ñộ thấp như vậy, bao gồm thay ñổi trong cấu trúc nội bào, do thay ñổi trong cấu trúc nội bào, do thay ñổi liên kết hydro ở chuỗi polyme Sự ñông ñặc hóa không thể quay trở lại như cũ

và sự kết tủa protein do mất nước của nguyên sinh chất (Aritani, 1989)

- Hiện tượng ñóng băng ngoại bào

Trong khi ñông lạnh ngoại bào, sẽ xảy ra hiện tượng nồng ñộ chất hòa tan kèm theo áp suất thẩm thấu tăng lên và kéo theo những thay ñổi về ñộ pH Các chất ñiện giải như Natri và kali có nhiều nhất trong tinh thanh và chúng tồn tại ở dạng Natri clorua, Kali clorua Ở ñiểm eutectic, nồng ñộ các muối này cao nhất, là khi nhiệt ñộ -21,20C ñối với Natri clorua và -11,10C ñối với

Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 28

Kali clorua và biên ñộ nhiệt ñộ này có hại cho tinh trùng Do có sự tăng nồng

ñộ chất hòa tan ñi kèm với tăng áp suất thẩm thấu cũng như pH thay ñổi tất cả xảy ra trong biên ñộ nhiệt ñộ này, mà người ta không rõ cái gì có tác hại nhất ñến tinh trùng (Maria, 1995 trích từ Hà Văn Chiêu, 1999)

- Chuyển ñộng của nước và sự dãn nở của tinh thể nước gây ra huỷ

hoại cơ học ñối với tinh trùng

Hiện tượng giải ñông giống như ñông lạnh cũng làm huỷ hoại tinh trùng do chênh lệch áp suất thẩm thấu, sự di chuyển của nước qua màng tế bào tinh trùng và sự dãn nở của các tinh thể nước ñá trong quá trình ñông lạnh hoặc tan băng có thể gây tổn thương tế bào tinh trùng Các bọt khí tồn tại trong tinh thể băng cũng có thể gây tổn hại tinh trùng trong quá trình này (Maria, 1995 trích từ Hà Văn Chiêu, 1999)

2.5 Các yếu tố ảnh hưởng ñến sức sống của tinh trùng trong ñông lạnh

2.5.1 Khả năng chịu lạnh của tinh trùng

Khả năng chịu lạnh của tinh trùng là tỷ lệ sống sót của tinh trùng sau khi

giải ñông, ñiều này phụ thuộc vào giống, ñộ tuổi lấy tinh, mùa vụ lấy tinh…

2.5.2 Thành phần môi trường ñông lạnh

Môi trường ñông lạnh bao gồm: chất có năng lượng, chất ñệm, chất chống ñông, chất ñiện giải… Tỷ lệ tinh trùng sau ñông lạnh và giải ñông phục thuộc vào các thành phần trên, nếu việc pha chế môi trường không hợp lý sẽ giảm hoạt lực, tăng tỷ lệ chết của tinh trùng

2.5.3 Thời gian cân bằng

Tinh trùng sau khi ra ngoài cơ thể rất dễ bị sốc nhiệt do sự chênh lệch giữa nhiệt ñộ trong cơ thể và nhiệt ñộ môi trường ngoài cơ thể Chính vì vậy cần thiết phải hạ nhiệt ñộ từ từ ñể tinh trùng làm quen với nhiệt ñộ thấp Tác giả Ditto (1992) cho biết: Thời gian cân bằng khoảng 3-5 giờ ở nhiệt ñộ 50C

ñể tinh trùng làm quen với nhiệt ñộ thấp

2.5.4 Tốc ñộ ñông lạnh