ảnh hưởng của tuổi, mùa vụ đến chất lượng tinh dịch của trâu murrah nuôi tại trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh moncada

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VŨ TRUNG HIẾU ẢNH HƯỞNG CỦA TUỔI, MÙA VỤ ĐẾN CHẤT LƯỢNG TINH DỊCH CỦA TRÂU MURRAH NUÔI TẠI TRẠM NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH MONCADA Mã số: 60.

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

VŨ TRUNG HIẾU

ẢNH HƯỞNG CỦA TUỔI, MÙA VỤ ĐẾN CHẤT LƯỢNG TINH DỊCH CỦA TRÂU MURRAH NUÔI TẠI TRẠM NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH

MONCADA

Mã số: 60.62.01.05 Người hướng dẫn khoa học: 1 PGS.TS Nguyễn Bá Mùi

2 TS Lê Văn Thông

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi Các số liệu và kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kì công trình nghiên cứu nào khác

Tôi xin cam đoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày tháng năm 2016

Tác giả luận văn

Vũ Trung Hiếu

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình nghiên cứu để hoàn thành luận văn của mình, tôi đã nhận được sự chỉ bảo tận tình, sự giúp đỡ quý báu của các thầy giáo, cô giáo, các nhà khoa học, các nhà quản lý, cán bộ công nhân viên Trung tâm giống gia súc lớn Trung ương, Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada

Nhân dịp này, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

TS Lê Văn Thông - Giám đốc Trung tâm Giống gia súc lớn Trung ương, PGS.TS Nguyễn Bá Mùi – Bộ môn sinh lý tập tính động vật, Khoa chăn nuôi – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam đã hướng dẫn, giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài, đánh giá kết quả và hoàn thành luận văn đồng thời bồi dưỡng cho tôi những kiến thức chuyên môn và kinh nghiệm quý báu

Tôi xin chân thành cảm ơn TS Lê Bá Quế, chủ nhiệm đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu sản xuất tinh trâu đông lạnh cọng rạ phục vụ công tác cải tạo giống trâu Việt Nam” giai đoạn 2011-2014, đã cho phép tôi được sử dụng các kết quả của đề tài và nhiệt tình giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu, hoàn thành luận văn

Với tình cảm sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban lãnh đạo, cán bộ công nhân viên Trung tâm giống gia súc lớn Trung ương, Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada đã tận tình giúp đỡ để tôi hoàn thành luận văn này

Để hoàn thành luận văn này, tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới các Thầy giáo, Cô giáo, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Sinh lý tập tính động vật, Khoa Chăn nuôi – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam, đã ủng hộ, tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành các thủ tục cần thiết để bảo vệ thành công luận văn này

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn toàn thể gia đình, bạn bè, anh em, đồng nghiệp

đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn này!

Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn

Vũ Trung Hiếu

MỤC LỤC

Lời cam đoan i

Lời cảm ơn ii

Mục lục iii

Danh mục các từ viết tắt v

Danh mục bảng vi

Danh mục hình vi

Danh mục hình vi

Trích yếu luận văn vii

Thesis abstract viii

Phần 1 mở đầu 1

1.1 Tính cấp thiết của đề tài nghiên cứu 1

1.2 Mục tiêu của đề tài 2

1.3 Ý nghĩa của đề tài 2

Phần 2 Tổng quan tài liệu 3

2.1 Cơ sở khoa học 3

2.2 Một số chỉ tiêu sinh vật học về tinh dịch trâu Murrah 3

2.2.1 Màu sắc tinh dịch 4

2.2.2 Thể tích tinh dịch (ml) 4

2.2.3 pH tinh dịch 6

2.2.4 Nồng độ tinh trùng C (tỷ/ ml) 6

2.2.5 Hoạt lực tinh trùng A (%) 7

2.2.6 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 9

2.2.7 Tỷ lệ tinh trùng sống 10

2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng tới phẩm chất tinh đông lạnh của trâu Murrah 11

2.3.1 Giống và cá thể 11

2.3.2 Tuổi 12

2.3.3 Mùa vụ 12

2.3.4 Thức ăn 13

2.3.5 Quản lý, chăm sóc và khai thác tinh 13

2.4 Thụ tinh nhân tạo trâu bằng tinh đông lạnh 14

2.5 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 15

2.5.1 Những nghiên cứu trong nước 15

2.5.2 Những nghiên cứu ngoài nước 17

Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 19

3.1 Vật liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứu 19

3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 19

3.1.3 Thời gian nghiên cứu 19

3.2 Điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng 19

3.3 Điều kiện khí hậu khu vực ba vì h nội 20

3.4 Nội dung nghiên cứu 21

3.4.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 21

3.4.2 Ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 21

3.4.3 Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh cọng rạ của trâu Murrah trên đàn trâu cái địa phương 22

3.5 Phương pháp nghiên cứu 22

3.5.1 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 22

3.5.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 22

3.5.3 Phương pháp đánh giá tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh đông lạnh cọng rạ của từng trâu Murrah trên đàn trâu cái địa phương 26

3.6 Xử lý số liệu 27

Phần 4 Kết quả và thảo luận 29

4.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 29

4.1.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah 29

4.1.2 Ảnh hưởng của tuổi đến khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 36

4.2 Ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 40

4.2.1 Ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah 40

4.2.2 Ảnh hưởng của mùa vụ đến khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah 46

4.3 Tỷ lệ thụ thai của tinh trâu murrah đông lạnh dạng cọng rạ trên đàn trâu cái địa phương 50

Phần 5 Kết luận và kiến nghị 52

5.1 Kết luận 52

5.2 Kiến nghị 52

Tài liệu tham khảo 53

Phụ lục 64

Tổ chức lương thực và nông nghiệp liên hiệp quốc Follicle-stimulating hormone

DANH MỤC BẢNG

Bảng 3.1 Nhiệt độ và độ ẩm ở khu vực nghiên cứu theo từng mùa trong giai

đoạn 2013-2016 21 Bảng 4.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah 30 Bảng 4.2 Ảnh hưởng của tuổi đến tỷ lệ các lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn và

các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch đạt tiêu chuẩn của trâu Murrah 37 Bảng 4.3 Ảnh hưởng của tuổi đến số lượng tinh đông lạnh dạng cọng rạ trên lần

khai thác tinh đạt tiêu chuẩn 39 Bảng 4.4 Ảnh hưởng của tuổi đến hoạt lực tinh trùng sau giải đông của trâu

Murrah 39 Bảng 4.5 Ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah 41 Bảng 4.6 Ảnh hưởng của mùa vụ đến tỷ lệ các lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn

và các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch 47 Bảng 4.7 Số lượng tinh đông lạnh dạng cọng rạ trên lần khai thác tinh đạt tiêu

chuẩn của trâu Murrah theo mùa vụ 49 Bảng 4.8 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông của trâu Murrah theo mùa vụ 49 Bảng 4.9 Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu của trâu Murrah 50

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1 Các dạng kỳ hình phổ biến của tinh trùng 9

TRÍCH YẾU LUẬN VĂN

Tên tác giả: Vũ Trung Hiếu

Tên Luận Văn: Ảnh hưởng của tuổi, mùa vụ đến chất lượng tinh dịch của trâu Murrah nuôi tại Trạm Nghiên cứu và Sản xuất tinh đông lạnh Moncada

Phương pháp nghiên cứu

Tổng số có 800 mẫu tinh dịch của 5 trâu đực giống Murrah (có độ tuổi, khối lượng đồng đều) được nghiên cứu đánh giá Mỗi trâu đực khai thác 160 mẫu tinh dịch ở 4 giai đoạn tuổi và 4 mùa trong năm Các giai đoạn tuổi được phần chia gồm: từ 36 tháng tuổi trở xuống, từ 37 đến 48 tháng tuổi, từ 49 đến 60 tháng tuổi và trên 60 tháng tuổi Các mùa trong năm gồm có: mùa xuân từ tháng 1 đến tháng 3, mùa hạ từ tháng 4 đến tháng 6, Mùa thu từ tháng 7 đến tháng 9, mùa đông từ tháng 10 đến tháng 12

Kết quả chính và kết luận

Kết quả nghiên cứu về các chỉ tiêu thể tích tinh dịch, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng, tổng số tinh trùng tiến thẳng, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình, tỷ lệ tinh trùng sống, tỷ lệ tinh trùng sống, số lượng tinh cọng rạ trong một lần khai thác theo từng giai đoạn tuổi, theo từng mùa vụ và tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh đông lạnh cọng rạ của từng trâu Murrah trên đàn trâu cái địa phương cho thấy, yếu tố tuổi và mùa vụ có ảnh hưởng đến một

số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah Giai đoạn từ 49 đến 60 tháng tuổi có phẩm chất tinh dịch đạt tốt nhất, thể tích tinh dịchđạt 4,07ml, hoạt lực tinh trùng đạt 77,43%, nồng độ tinh trùng đạt 1,14 tỷ/ml, số lượng cọng rạ trong một lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn đạt 160,58 liều, hoạt lực sau giải đông đạt 45,82% Chất lượng tinh dịch, số lượng cọng rạ trong một lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn của trâu Murrah thấp nhất trong mùa hạ, sau đó đến mùa xuân, mùa thu và tốt nhất là mùa đông (P<0,05) Tỷ lệ thụ thai ở lần phối giống đầu của các trâu đực giống trên đàn trâu cái địa phương đạt 50,77% và dao động từ 50,00% đến 50,91% tùy theo từng cá thể trâu

THESIS ABSTRACT

Master candidate: Vu Trung Hieu

Thesis title: “Effects of age, season on semen quality of Murrah buffaloes raised at Moncada research and produce frozen semen station”

Major: Husbandry Code: 60.62.01.05

University’s name: Vietnam National University of Agriculture

Research Objectives

The objective of this study was evaluating the influence of age, season on quantity, quality semen, and the ability to producing frozen semen of Murrah buffalo at Moncada research and produce frozen semen station Thereby, helping breeding farms have effective management and semen collection depending on age and season

Materials and Methods

800 semen samples from 5 Murrah buffalo bulls (the same: age, weight) is assessed Each buffalo were collected 160 semen samples at stage 4 periods of age and

4 seasons Age stages were divided into 4 groups: under 36 months of age, from 37 to

48 months of age, from 49 to 60 months and over 60 months of age The seasons include: Spring: from January to March; Summer: from April to June; Autumn: from July to September and Winter: from October to December

Results and conclusions

The results showed that there was a clear effect of age and season on semen quality and production of frozen semen Murrah buffaloes The period from 49 to 60 months of age had the best quality semen: V (Volume) 4.07ml, motility (A) 77.43%, C (sperm concentration) 1.14 billion/ml, the number of straws per a standard ejaculation was 160.58 straws, post-thawing motility was 45.82%

Semen quality, the number of straws per a standard ejaculation of Murrah buffalo was the lowest in Summer, followed by Spring, Autumn and Winter was the best (P<0.05) The fertility rate at first insemination on the swamp buffalo herd was 50.77% and about from 50.00% to 50.91% depending on each individual male buffalo (P> 0.05)

PHẦN 1 MỞ ĐẦU

1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU

Hàng ngàn năm qua, trâu là loài động vật cung cấp sức kéo, sữa và thịt chất lượng cao cho con người, cung cấp phân bón cho cây trồng và là một nguồn vốn tiết kiệm góp phần cải thiện cuộc sống của người nông dân (Gupta and Das, 1994)

Có 2 loại hình trâu gồm trâu sông (River buffalo) và trâu đầm lầy (Swamp buffalo) Chúng có chung nguồn gốc từ trâu rừng và được tách biệt ước tính đã ít nhất từ 10.000 đến 15.000 năm trước đây Do quá trình chọn lọc và sử dụng mà ngoại hình, khả năng sản xuất và số lượng nhiễm sắc thể của hai loại hình trâu có những đặc điểm khác nhau Trâu sông có 50 nhiễm sắc thể (Ahmad et al., 2004), sống tập trung ở vùng Tây Á nhằm khai thác sữa và được chia làm nhiều giống khác nhau như Murrah, Nili-Ravi, Kundi, Surti, Mehsana, Jafarabadi … (Cockrill, 1974) Trâu trâu đầm lầy có 48 nhiễm sắc thể (Supanuam et al., 2009), sống tập trung ở vùng Đông Nam Á, được sử dụng để cày kéo, lấy thịt và chỉ có một giống (do ít được chọn lọc cải tạo) nhưng có những tên gọi địa phương khác nhau như trâu Ngố, trâu Gié ở Việt Nam, trâu Carabo ở Philipin, trâu Krbau ở Malaysia…(Lê Viết Ly và Mai Văn Sánh, 2004)

Trên thế giới có khoảng 198,88 triệu con trâu, phân bố chủ yếu ở Châu Á (chiếm 97,17%) và tập trung ở 3 nước Ấn Độ (115,40 triệu con), Pakistan (32,70 triệu con), Trung Quốc (23,25 triệu con) (FAO, 2013) Việt Nam thuộc nhóm những quốc gia có số lượng trâu đầm lầy lớn trên thế giới với 2,51 triệu con năm

2014 (Tổng Cục thống kê, 2015)

Trâu Việt Nam chỉ được nuôi để cày kéo, giết thịt mà không có đàn trâu khai thác sữa, do vậy nước ta đã nhập nội giống trâu Murrah trong giai đoạn 1970-1978 từ Trung Quốc, Ấn Độ nhằm nhân thuần phát triển đàn trâu sữa và đồng thời lai tạo với trâu cái Việt Nam Trâu lai F1 (Murrah x trâu Việt Nam) có tầm vóc lớn hơn, khả năng sinh trưỡng, sinh sản, cày kéo, cho thịt, sữa đều cao hơn so với trâu nội và có thể phát triển tốt trong điều kiện nông thôn (Nguyễn Đức Thạc, 1983; Nguyễn Đức Thạc và Nguyễn Văn Vực, 1984; Mai Văn Sánh, 1996; Tạ Văn Cần và cs., 2008)

Do khác nhau về đặc điểm giống loài, việc ghép đôi nhảy trực tiếp giữa trâu đực Murrah và trâu cái Việt Nam gặp nhiều khó khăn Vì vậy, kỹ thuật thụ tinh nhân tạo đã giúp cho quá trình sinh sản tạo con lai F1 (Murrah x trâu Việt Nam) trở nên dễ dàng hơn trong những năm gần đây Việc tuyển chọn, nuôi dưỡng những trâu đực Murrah có chất lượng giống tốt để sản xuất tinh đông lạnh

đã giúp làm tăng tốc độ cải tiến di truyền, góp phần thúc đẩy quá trình cải tạo cải tạo giống trâu và tăng năng suất trong chăn nuôi trâu một cách bền vững (Lê Bá Quế và cs., 2015)

Đã có nhiều công trình nghiên cứu của các tác giả về khả năng sinh trưởng, sinh sản, cho thịt sữa của trâu Murrah ở nước ta nhưng hiện nay chưa có công trình nào nghiên cứu ảnh hưởng của của các yếu tố ngoại cảnh đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah sản xuất tinh đông lạnh Chính vì vậy, việc nghiên cứu “Ảnh hưởng của tuổi, mùa vụ dến chất lượng tinh của trâu Murrah nuôi tại Trạm Nghiên cứu và Sản xuất tinh đông lạnh Moncada” là cần thiết và mang tính khoa học, tính thực tiễn cao nhằm nâng cao khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah, góp phần phục vụ tốt công tác thụ tinh nhân tạo, cải tạo đàn trâu địa phương, nâng cao hiệu quả kinh tế trong chăn nuôi trâu thịt Việt Nam

1.2 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI

- Đánh giá được ảnh hưởng của các yếu tố lứa tuổi, mùa vụ đến một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh cọng rạ của trâu Murah nuôi tại Trạm Nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada

1.3 Ý nghĩa của đề tài

- Ý nghĩa khoa học: Kết quả của đề tài giúp bổ sung các dữ liệu khoa học về ảnh hưởng của lứa tuổi, mùa vụ đến một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh cọng rạ của trâu Murrah trong điều kiện chăn nuôi ở miền Bắc Ngoài ra, kết quả của luận văn là tài liệu tham khảo cho các

cơ sở nghiên cứu, các trường đại học, cao đẳng cũng như cho cơ sở chăn nuôi trâu đực giống

- Ý nghĩa thực tiễn: - Thông qua nghiên cứu ảnh hưởng của lứa tuổi, mùa vụ đến một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh cọng rạ của trâu Murah, giúp cơ sở chăn nuôi có biện pháp chăn nuôi, khai thác tinh đạt hiệu quả cao với từng lứa tuổi trâu và ở từng mùa vụ trong năm

PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

Trâu Murrah thuộc giống trâu sông (River buffalo Carabao) là giống trâu nổi tiếng nhất và được nuôi nhiều nhất trên thế giới Đặc trưng về ngoại hình của trâu Murrah là thường có da và lông màu đen tuyền, da mỏng, mềm mại, nhẵn bóng, có lông thưa, ở cuối đuôi có chòm lông màu trắng sát với chân, sừng ngắn, quay ra sau

và lên trên sau đó vòng vào trong thành hình xoắn ốc Đầu trâu đực thô kệch và nặng nề, đầu con cái thì tương đối nhỏ, cân đối Trán rộng và hơi gồ, mặt cân đối, lỗ mũi rộng Tai trâu bé, mỏng và rủ xuống Cổ trâu đực thô và mập, cổ trâu cái dài, mảnh Ngực to, rộng, không có yếm Trâu đực có phần thân trước nặng, phần sau nhẹ, trâu cái thì phần thân trước nhẹ và hẹp, phần thân sau nặng và rộng tạo thành hình cái nêm Lưng rộng, dài và thon về phía đầu Xương sườn rất tròn, núm rốn nhỏ, không có u bướu Năng suất sữa của trâu Murrah đạt 1600 – 1800 Kg/ chu kỳ

270 - 300 ngày với tỷ lệ mở sữa tới 7% Trâu đực trưởng thành có khối lượng: 730kg/con, có thể tới 1000 kg, chiều cao trung bình 142 cm Trâu cái: 350-400kg/con, có thể tới 900 kg, chiều cao trung bình 133 cm, nghé sơ sinh: 30kg/con 2.1 CƠ SỞ KHOA HỌC

650-Trong quá trình sinh trưởng, phát triển, một con đực hoặc cái đạt đến thành thục về tính dục là khi chúng có khả năng sản sinh giao tử và biểu hiện đầy đủ các

hệ quả tập tính sinh dục ở con đực, thành thục về tính là lúc bộ máy sinh sản đã đủ phát triển, sản sinh ra tinh trùng có khả năng làm con cái có chửa (Hiroshi, 1992; Kunitada, 1992)

Sự thành thục về tính dục phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau như giống, tuổi, khối lượng cơ thể, điều kiện nuôi dưỡng và môi trường Nghé đực 3-

4 tháng đã có phản xạ nhảy (nhảy ôm lên những con nghé khác), một năm rưỡi nghé đực đã có khả năng giao phối với cái

Tuổi thành thục về tính của trâu phụ thuộc vào loại hình, giống trâu và đặc biệt

là chế độ chăm sóc, nuôi dưỡng nghé trước và sau khi tách mẹ Theo tác giả Mai Văn Sánh (1996) thì trâu Murrah nuôi tại Sông Bé – Việt Nam có tuổi thành thục sinh dục là 33,81 tháng

2.2 MỘT SỐ CHỈ TIÊU SINH VẬT HỌC VỀ TINH DỊCH TRÂU MURRAH Cũng như bò và các gia súc khác, tinh dịch trâu Murrah có thể được khai

xa qua trực tràng hoặc lấy ra từ âm đạo của con cái sau khi cho con đực xuất tinh vào Tuy nhiên khai thác tinh bằng âm đạo giả được sử dụng phổ biến hơn bởi tính an toàn và phù hợp với tập tính sinh dục, các phương pháp còn lại hoặc có chất lượng tinh dịch thấp hoặc có những phản ứng phụ không tốt cho vật nuôi Tinh dịch trâu Murrah thường được khai thác vào buổi sáng, trước khi cho

ăn và có thể lấy một lần hoặc lấy đúp 2 lần, lần 2 cách lần 1từ 15 phút đến 30 phút, tùy thuộc vào độ hưng phấn sinh dục của gia súc (Jainudeen et al., 1982; Koonjaenak et al., 2007a, Vale, 2010; Bhakat et al., 2011) Một số chỉ tiêu phẩm chất tinh dịch được kiểm tra, đánh giá gồm màu sắc tinh dịch, thể tích tinh dịch (ml), nồng độ tinh trùng (tỷ/ml), hoạt lực tinh trùng (%), tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%), tỷ lệ tinh trùng sống (%), pH tinh dịch Các chỉ tiêu này có ý nghĩa trong việc phát hiện các trường hợp sinh sản yếu hoặc vô sinh ở gia súc (Rodriguez – Martinez, 1998)

2.2.1 Màu sắc tinh dịch

Tinh dịch trâu thường có màu trắng sữa hay trắng ngà Màu sắc tinh dịch phụ thuộc vào nồng độ tinh trùng cũng như sự hiện diện của các chất khác (Vale, 1994) Tinh dịch có màu trắng sữa hoặc trắng ngà thường có nồng độ tinh trùng cao, màu trắng trong, loãng là tinh dịch có nồng độ tinh trùng thấp Tinh dịch có màu xanh hoặc xám thường có lẫn mủ, có màu cà phê hay màu nâu thường do lẫn máu hay sản phẩm viêm của đường sinh dục

2.2.2 Thể tích tinh dịch (ml)

Chỉ tiêu này kiểm tra bằng mắt thường trên vạch chia mililit (ml) ở thành ống hứng tinh Thể tích tinh dịch là số ml tinh dịch lấy được trong một lần xuất tinh thành công (ml/lần khai thác) Thể tích tinh dịch liên quan chặt chẽ tới giống, tuổi, chế độ chăm sóc, nuôi dưỡng, kích thước dịch hoàn, mùa vụ, mức độ kích thích tính dục trước khi lấy tinh, phản xạ nhảy giá và kỹ thuật khai thác tinh Đực giống trẻ thì thể tích tinh dịch thường ít nhưng sau 2 tuổi có thể đạt được hơn 4ml Trâu đực trên 4 tuổi thể tích tinh dịch có thể đạt hơn 6ml(Vale 1994) Nếu lấy tinh hai lần thì thể tích lấy tinh lần hai thường ít hơn lần đầu (Nguyễn Tấn Anh và Nguyễn Quốc Đạt, 1997) Theo Bhakat et al (2011) trâu Murrah ở

Ấn Độ có độ tuổi từ 2,31-7,36 năm tuổi có thể tích tinh dịch đạt 2,58 ml, dao động từ 1,79-3,61 ml Nghiên cứu của Manik và Mudgal (1984) cho biết, trâu đực giống Murrah có thể tích tinh dịch bình quân đạt 3,25 ml/lần khai thác

Trong thực tiễn, không phải tinh dịch của lần xuất tinh nào cũng đủ tiêu chuẩn đông lạnh Chỉ những lần lấy tinh qua kiểm tra đánh giá đạt tiêu chuẩn quy định của từng nước, ở Việt Nam theo quy định số 675/QĐ-BNN-CN của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn ngày 04/4/2014 quy định đối với trâu đực giống Murrah là hoạt lực tinh trùng ≥ 65%, nồng độ trên 0,7 tỷ tinh trùng/ml, kỳ hình dưới 20 % mới đủ tiêu chuẩn pha chế sản xuất tinh đông lạnh, nếu không đạt thì loại bỏ ngay

Nghiên cứu của Manik and Mudgal (1984) cho biết, trâu đực giống Murrah có bình quân thể tích tinh dịch đạt 3,56-4,34 ml/lần khai thác ở mùa xuân, ở mùa thể tích tinh dịch dao động từ 3,98-4,28 ml/lần khai thác tinh, ở mùa thu dao động từ 3,48-4,38 ml/lần khai thác tinh và ở mùa đông thể tích tinh dịch dao động từ 3,88-4,02 ml/lần khai thác tinh

Nghiên cứu Bhakat et al (2011) trên trâu đực giống Murrah có độ tuổi từ 2,31-7,36 tại Ấn Độ thể tích tinh dịch bình quân là 2,58 ml/lần khai thác, dao động từ 1,79-3,61 ml/lần khai thác Pawan Singh et al (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu đưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn Độ cho biết thể tích tinh trùng đạt 4,26 ml/ lần khai thác

Theo Pant et al (2002) khi nghiên cứu 133 trâu đực giống Murrah ở các giai đoạn cho biết: ở giai đoạn tuổi 25-36 tháng tuổi thể tích tinh dịch đạt 2,5ml/ lần khai thác, ở giai đoạn 37-48 tháng tuổi thể tích tinh dịch đạt 3,1ml/ lần khai thác, ở giai đoạn 49- 60 tháng tuổi thể tích tinh dịch đạt 3,5ml/ lần khai thác và trên 60 tháng tuổi thể tích tinh dịch 3,6ml/ lần khai thác

Theo Vale (1994) khi nghiên cứu về đặc điểm tinh dịch trâu đực Murrah cho biết thể tích tinh dịch đạt 3ml/ lần khai thác Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại Trung tâm nghiên cứu trâu và đồng cỏ Sông Bé cho biết thể tích tinh dịch trâu Murrah đạt 3,0-5,0ml/ lần khai thác

Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại Trung tâm nghiên cứu và phát triển chăn nuôi miền núi khi nghiên cứu về tinh trâu Murrah cho biết: thể tích tinh dịch trâu Murrah đạt 3,25ml/ lần khai thác

Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú được huấn luyện lấy tinh lúc 24 tháng tuổi đến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịch ổn định và có thể tích đạt là

2.2.3 pH tinh dịch

Sau khi tinh vừa lấy xong cần kiểm tra độ pH của tinh dịch sẽ hỗ trợ cho đánh giá chất lượng tinh dịch chính xác Đây là chỉ tiêu quan trọng để đánh giá chất lượng tinh dịch trâu Người ta có thể dùng máy đo pH để kiểm tra, hoặc dùng giấy đo pH cũng chính xác và nhanh

Tinh dịch trâu đực giống Murrah thường có pH dao động từ 6,8-7,0 (Tomar et al., 1966); pH dao động từ 6,4 – 7,0 (Kumar et al., 1993b) Theo Vale (1994) khi nghiên cứu về đặc điểm tinh dịch trâu đực Murrah đã công bố pH của tinh dịch dao động từ 6,7 – 7,5

Theo Mandal et al (2000) công bố tinh dịch trâu đực giống Murrah ở Ấn

Độ có pH dao động từ 6,85 đến 6,97

Tinh dịch có pH hướng kiềm là không tốt hoặc biểu hiện viêm các bộ phận sinh dục… Tinh dịch nguyên tươi của trâu đực giống không đạt tiêu chuẩn về chỉ tiêu này phải loại bỏ và không cần kiểm tra các chỉ tiêu khác

2.2.4 Nồng độ tinh trùng C (tỷ/ ml)

Nồng độ tinh trùng (C) là số lượng tinh trùng có trong một ml tinh dịch Nồng độ tinh trùng là một chỉ tiêu quan trọng đánh giá chất lượng tinh dịch, là chỉ tiêu cơ sở để tính số liều tinh sản xuất

Có nhiều cách xác định nồng độ tinh trùng, nhưng hiện nay nồng độ tinh trùng được xác định bằng máy so màu rất nhanh và chính xác Phương pháp này dựa trên nguyên tắc là: Tinh dịch có nồng độ tinh trùng khác nhau sẽ tạo nên các mức độ mờ đục khác nhau, làm cho độ sáng đến tế bào quang học có kết quả khác nhau và được chuyển thành dòng điện tích làm lệch kim điện kế, nhờ chương trình cài đặt sẵn máy tự động tính toán và hiện thông số nồng độ tinh trùng khá chính xác Nếu ta nhập dữ liệu thể tích tinh dịch và hoạt lực tinh trùng thì máy có thể tính toán cho ta thông số về lượng môi trường cần pha, số lượng cọng rạ có thể sản xuất được Nồng độ tinh trùng có ý nghĩa khoa học thực tiễn,

nó xác định số lượng tinh trùng trên một lần lấy tinh, phân loại tinh dịch, quyết định loại bỏ hay sử dụng cho các công đoạn sau Nồng độ tinh trùng (C) khi phối hợp với V và A cho biết tổng số tinh trùng hoạt động tiến thẳng của lần xuất tinh

đó (Hà Văn Chiêu, 1999)

Tổng số tinh trùng hoạt động tiến thẳng = VAC, từ thông số này giúp ta xác

Theo Pant et al (2002) khi nghiên cứu 133 trâu đực giống Murrah ở các giai đoạn tuổi đã công bố trâu Murrah ở giai đoạn 25-36 tháng tuổi nồng độ tinh trùng đạt 1,67 tỷ/ml, ở giai đoạn 37-48 tháng tuổi nồng độ tinh trùng đạt 1,49 tỷ/ml, ở giai đoạn 49- 60 tháng tuổi nồng độ tinh trùng đạt 1,47 tỷ/ml và trên 60 tháng tuổi nồng độ tinh trùng đạt 1,66 tỷ/ml

Nghiên cứu của Manik and Mudgal (1984) cho biết, trâu đực giống Murrah có nồng độ tinh trùng đạt 0,97 tỷ/ml đến 1,44 tỷ/ml

Theo Mandal et al (2000) cho biết tinh dịch trâu đực giống Murrah có nồng độ tinh trùng dao động từ 0,96 tỷ/ml đến 1,18 tỷ/ml Nghiên cứu Bhakat

et al (2011) trên trâu đực giống Murrah tại Ấn Độ có nồng độ tinh trùng 0,99 tỷ/ml

Pawan Singh et al (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu đưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn Độ cho biết nồng độ tinh trùng đạt 1,32 tỷ/ml

Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú được huấn luyện lấy tinh lúc

24 tháng tuổi đến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịnh với nồng độ tinh trùng đạt 1,1 tỷ/ml

Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại Trung tâm nghiên cứu và phát triển chăn nuôi miền núi khi nghiên cứu về tinh trâu Murrah cho biết nồng

độ tinh trùng đạt 0,80 tỷ/ml

2.2.5 Hoạt lực tinh trùng A (%)

Hoạt lực tinh trùng là sức sống hay sức hoạt động của tinh trùng, là chỉ tiêu thể hiện số lượng tinh trùng hoạt động tiến thẳng trong tinh dịch và được xếp theo phần trăm, từ 0% đến 100%

Tinh trùng tiến thẳng được là nhờ cấu trúc đặc biệt của đuôi và nguồn năng lượng từ lò xo ty thể Tốc độ di chuyển tiến thẳng của tinh trùng phụ thuộc vào các điều kiện nội tại và ngoại cảnh như giống, cá thể, niêm dịch đường sinh dục tiết ra nhiều hay ít và độ co bóp của các bộ phận sinh dục của con cái

Chỉ có tinh trùng vận động tiến thẳng mới có khả năng tham gia quá trình thụ tinh Do vậy người ta đánh giá chất lượng tinh dịch thông qua ước lượng tỷ lệ tinh trùng tiến thẳng hoặc mức “sóng động” của mặt thoáng vi trường tinh dịch

Đây là một chỉ tiêu rất quan trọng để đánh giá chất lượng tinh dịch, nó cho thấy khả năng pha loãng tinh dịch và khả năng thụ thai của tinh trùng Trong thụ tinh nhân tạo gia súc chỉ có tinh dịch đạt A ≥ 60% thì mới dùng để pha chế bảo tồn ở dạng lỏng; A ≥ 70% thì tinh dịch đó mới đủ tiêu chuẩn để pha chế bảo tồn ở dạng đông lạnh (Vale, 1994)

Với tinh sau khi đã bảo quản đông lạnh sâu thì phải có sức hoạt động là A≥30% (với tinh đông viên) và A≥40% (đối với tinh cọng rạ) Đánh giá sức hoạt động của tinh trùng là phương pháp chủ quan, quan sát qua kính hiển vi vì vậy kĩ thuật viên phải thành thạo Có thể kiểm tra sức hoạt động của tinh trùng qua kính hiển vi bằng tinh nguyên tươi hoặc tinh pha loãng Ở tinh dịch sau khi lấy tinh và duy trì nhiệt độ từ 37-39oC có thể gặp những loại hoạt động như: tiến thẳng, lắc lư, xoay tròn, giật lùi và không hoạt động, trong đó hoạt động tiến thẳng là biểu hiện đặc trưng của sự sống của tinh trùng và có quan hệ chặt chẽ với tỷ lệ thụ tinh

Nghiên cứu Bhakat et al (2011) trên trâu đực giống Murrah tại Ấn Độ có hoạt lực tinh trùng 66,63 % Theo Mandal et al (2000) cho biết tinh dịch trâu đực giống Murrah có hoạt lực tinh trùng từ 63,86% đến 67,99%

Pawan Singh et al (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu đưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn Độ cho biết hoạt lực tinh trùng trước đông lạnh đạt 59,58%; hoạt lực sau giải đông đạt 32,91%

Ramakrishnam et al (1989) cho kết quả khi nghiên cứu 401 lần thu tinh trùng trâu Murrah công bố hoạt lực tinh trùng đạt 71,52 % Bhosrekar et al (1991) khi nghiên cứu về tinh dịch trâu Murrah cho biết hoạt lực của tinh trùng

từ 63% đến 86%

Theo Shukla et al (2006) khi nghiên cứu về bảo quản đông lạnh tinh trâu Murrah cho biết: hoạt lực tinh trùng đạt 73,4%, và hoạt lực tinh trùng sau giải đông đạt 56,3% Theo Vale (1994) khi nghiên cứu về đặc điểm tinh dịch trâu đực Murrah đã công bố kết quả: hoạt lực tinh trùng lớn hơn 70%

Theo kết quả nghiên cứu trâu Murrah nuôi tại trunng tâm nghiên cứu trâu và đồng cỏ sông bé cho biết hoạt lực tinh trùng đạt 60- 75% (Sharma và Đỗ Kim Tuyên, 2006)

Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú được huấn luyện lấy tinh lúc 24 tháng tuổi đến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịch ổn định với hoạt lực tinh trùng

Trịnh Thị Kim Thoa và cs (2005) nghiên cứu sản xuất tinh trâu đông lạnh dạng viên, mỗi viên chứa hơn 40 triệu tinh trùng và có hoạt lực sau giải đông đạt 30,64% Môi trường pha loãng gồm Superoxide dismutase, Tris, axit citric, fructoza, long đỏ trứng gà, glycerol, penicillin, streptomycin và nước cất

Lưu Kỷ (1979); Vũ Ngọc Tý và Lưu Kỷ (1979) đã thành công trong nghiên cứu đông lạnh tinh dịch trâu trên mặt hơi nitơ lỏng (tinh viên), hoạt lực sau giải đông đạt 30%

2.2.6 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình

Trong điều kiện bình thường, tinh trùng có hình dạng đặc trưng cho mỗi loài, nhưng có thể vì một lý do nào đó trong quá trình sinh tinh hoặc xử lý tinh dịch, tinh trùng có hình thái khác thường như giọt bào tương bám theo; biến dạng hay khuyết tật ở đầu, đuôi như: đầu méo, to, hai đầu, đuôi gấp khúc, hai đuôi, đuôi xoăn, có giọt bào tương, thể đỉnh phù, tháo rời, vỡ vv Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K) được tính bằng %, được xác định bằng cách đếm trên kính hiển vi Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình phụ thuộc vào nhiều yếu tố như giống, điều kiện nuôi dưỡng, thời tiết, bệnh tật, di truyền kỹ thuật xử lý tinh dịch (Trần Tiến Dũng và cs., 2002)

A - Acrosom lồi (dạng phổ biến)

B - Acrosom lồi (dạng hạt)

C - Đầu quả lê (nghiêm trọng)

D - Đầu quả lê (vừa phải)

E - Đầu quả lê (nhẹ)

F - Không bào nhân

G - Khiếm khuyết vòng miện

H - Đầu tách rời

I - Phản xạ xa tâm

J - Đuôi gập đôi (đoạn giữa bị gãy)

K - Đuôi gập đôi (đoạn giữa uốn cong)

L - Giọt bào tương gần tâm

M - Giọt bào tương xa tâm

sử dụng, tuy nhiên tỷ lệ tinh trùng kỳ hình ở đầu không vượt qua 5%

Nghiên cứu của Manik and Mudgal (1984) cho biết, trâu đực giống Murrah có tỷ lệ tinh trùng kỳ hình dao động trong khoảng 4,60% đến 6,53% Theo Mandal et al (2000) cho biết tinh dịch trâu đực giống Murrah có tỷ lệ tinh trùng kỳ hình chiếm 7,32% đến 14,21%

Ramakrishnam et al (1989) cho kết quả khi nghiên cứu 401 lần thu tinh trùng trâu Murrah như cho biết tỷ lệ tinh trùng kỳ hình chiếm 12,2% Bhosrekar

et al (1991) khi nghiên cứu về tinh dịch trâu Murrah cho biết tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng trâu Murrah từ 7,32% đến 14,21%

Trâu Murrah nuôi ở Ngọc thanh, Vĩnh Phú được huấn luyện lấy tinh lúc 24 tháng tuổi đến 34 tháng tuổi phẩm chất tinh dịch ổn định với tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 12,78% (Nguyễn Đức Thạc và Nguyễn Văn Vực, 1985)

vi và tính tỷ lệ sống Tỷ lệ tinh trùng sống phụ thuộc vào giống, độ tuổi, chế độ chăm sóc nuôi dưỡng, khai thác tinh, môi trường pha loãng

Nghiên cứu của Manik and Mudgal (1984) cho biết, trâu đực giống Murrah có tỷ lệ sống của tinh trùng dao động trong khoảng 72,94% đến 93,33%

Theo Mandal et al (2000) cho biết tinh dịch trâu đực giống Murrah có tỷ

lệ tinh trùng sống dao động từ 76,11% đến 83,08%

Pawan Singh et al (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu đưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn Độ cho biết tỷ lệ tinh trùng sống đạt 88,09% Ramakrishnam et al (1989) cho kết quả khi nghiên cứu 401 lần thu tinh trùng trâu Murrah như sau: tỷ lệ tinh trùng sống đạt 86,87%

Theo Shukla et al (2006) khi nghiên cứu về bảo quản đông lạnh tinh trâu Murrah cho biết: tỷ lệ tinh trùng sống đạt 81,6%

Theo Vale (1994) khi nghiên cứu về đặc điểm tinh dịch trâu đực Murrah

đã cho biết tỷ lệ tinh trùng sống trên 70%

2.3 MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TỚI PHẨM CHẤT TINH ĐÔNG LẠNH CỦA TRÂU MURRAH

Các chỉ tiêu đánh giá phẩm chất tinh dịch gia súc nói chung và trâu Murrah nói riêng có mối tương quan với nhau và chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu

tố như giống, cá thể, lứa tuổi, mùa vụ, thức ăn, quản lý khai thác tinh Đặc biệt, ảnh hưởng của môi trường pha loãng và quá trình đông lạnh tinh trùng có tác động lớn đối với chất lượng tinh trùng sau giải đông (Suryaprakasam et al., 1993; Pant et al., 2003; Shukla and Misra, 2005; Koonjaenak et al., 2007a; Bahakat et al., 2009; Al Sahaf and Ibrahim, 2012

2.3.1 Giống và cá thể

Trâu Murrah thuộc giống trâu đầm lầy (Swamp buffalo), kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả đã chứng minh rằng, các giống khác nhau có các đặc điểm phẩm chất tinh dịch khác nhau Nghiên cứu so sánh trâu địa phương, trâu Murrah

và trâu Surti ở Sri Lanka Rajamahendran and Manickavadivale (1981) thấy rằng, thể tích tinh dịch, nồng độ tinh trùng và tỷ lệ tinh trùng chết đạt cao nhất ở trâu Murrah Trâu địa phương có lượng xuất tinh, tỷ lệ tinh trùng chết và kỳ hình lớn hơn trâu Surti nhưng có nồng độ tinh trùng nhỏ hơn

Thể tích tinh dịch trung bình của trâu đầm lầy trưởng thành đạt 3,7ml (Nordin et al., 1990), trâu Murrah đạt từ 2,58ml (Bhakat et al., 2011), trâu Nili-Ravi đạt tới 4,96ml (Javed et al., 2000) Các giống trâu đầm lầy, Murrah, Nili-Ravi, Surti…, pH dao động từ 6,26-7,5 (Younis, 1996; Vale, 1994; Mandal et al.,

2000; Koonjaenak et al., 2007a) Trâu đầm lầy trưởng thành có tỷ lệ tinh trùng sống 69,9% (Nordin et al., 1990), tỷ lệ tinh trùng sống của trâu Murrah đạt 77,77% (Capitan et al., 1990)

2.3.2 Tuổi

Quá trình sinh tinh ở trâu đực được bắt đầu khá sớm, từ 6 tháng tuổi đã có thể quan sát thấy sự phát triển của các tế bào sertoli trong ống sinh tinh, đến 12 tháng tuổi xuất hiện các tế bào sertoli hoàn chỉnh, từ 15 tháng tuổi trở đi bắt đầu

có tế bào tinh trùng trong ống sinh tinh, đến 29 tháng tuổi trâu có tinh dịch hoàn chỉnh, nhưng đến 32 tháng tuổi các ống sinh tinh mới phát triển hoàn thiện (Ahmad et al., 2010)

Trâu Murrah có mối tương quan mạnh mẽ giữa tuổi tác, chu vi dịch hoàn

và khối lượng cơ thể (Suryaprakasam et al., 1993) Chu vi dịch hoàn tăng nhanh

từ 3,5-4,5, tuổi và sau đó tăng trưởng chậm lại, thể tích tinh dịchvà nồng độ tinh trùng tăng tuyến tính đến 6 năm tuổi và sau đó có xu hướng giảm đi (Suryaprakasam et al., 1993) Mức độ testosterone huyết thanh của trâu có mối tương quan thuận với chu vi dịch hoàn và thể tích tinh dịch (Sajjad et al., 2007) Đây là lí do ham muốn tình dục của con đực trưởng thành cao hơn so với con đực già hay trẻ Điều này phù hợp với công bố của nhiều tác giả đã khẳng định rằng tinh dịch trâu Murrah có chất lượng tốt nhất trong giai đoạn từ 3-5 tuổi (Chinnaiya and Ganguli, 1990; Kumar et al., 1993; Singh et al., 2004)

2.3.3 Mùa vụ

Yếu tố mùa vụ ảnh hưởng tới gia súc thông qua nhiệt độ, độ ẩm, lượng mưa… ở cả khí hậu trong và ngoài chuồng nuôi và ảnh hưởng gián tiếp bởi stress nhiệt cao trong mùa hè sẽ ức chế ham muốn tình dục, giảm phẩm chất tinh và khả năng sinh sản của gia súc (Maldal et al., 2000; Pant, 2000) Stress nhiệt trong mùa hè có ảnh hưởng đa chiều đến khả năng sinh sản của trâu đực Nó ức chế hoạt động tiết hormone sinh sản GnRH, FSH và LH bằng cách tăng nồng độ corticosteroid trong huyết tương Trong mùa hè Nồng độ thyroxin tiết giảm dẫn đến giảm lượng thức ăn ăn vào của động vật, giảm sự trao đổi chất và từ đó giảm quá trình sinh tinh Do đó con gia súc bị stress nhiệt có thể kiệt sức và giảm hưng phấn tình dục, giảm khả năng khai thác tinh (Mandal et al., 2000)

Vale (1997) cho rằng thời gian chiếu sáng là một yếu tố quan trọng ảnh hưởng khả năng sinh sản và hoạt động tình dục của trâu đực Ở các khu vực ôn

đới, tinh dịch gia súc có chất lượng tốt ở mùa đông và mùa xuân (Mohan and Sahni, 1990; Galli et al., 1993) Ở vùng nhiệt đới như Brazil, từ tháng giêng đến tháng sáu trâu có phẩm chất tinh dịch tốt nhất (Vale, 1994) Mandal et al.(2000) cho biết, hoạt lực tinh trùng trâu trong mùa xuân, mùa mưa tốt hơn trong mùa hè nóng ẩm Koonjaenak (2007) thấy rằng, ảnh hưởng của mùa vụ trong năm ảnh hưởng tới dạng tinh trùng kỳ hình đầu quả lê

Al Sahaf and Ibrahim (2012) cho biết, hoạt động sinh sản của trâu và phẩm chất tinh dịch tăng lên trong những tháng có nhiệt độ vừa và thấp, giảm trong những tháng có nhiệt độ cao Sự gia tăng của nhiệt độ môi trường xung quanh trong những tháng nóng dẫn đến những xáo trộn trong hoạt động sinh sản của trâu

Tuy nhiên, Koonjaenak et al (2007a) báo cáo rằng, mùa vụ không ảnh hưởng đến phẩm chất tinh dịch của trâu đầm lầy ở Thái Lan Nguyên nhân có thể

do các trâu thí nghiệm trong nghiên cứu này được quản lý, chăm sóc nuôi dưỡng cẩn thận trong một trung tâm sản xuất tinh do vậy đã hạn chế được ảnh hưởng của các tác động stress nhiệt tới trâu đực

2.3.4 Thức ăn

Thức ăn có vai trò đặc biệt quan trọng trong sinh trưỡng, phát triển và sinh sản của gia súc và là một trong những yếu tố quyết định đến phẩm chất tinh dịch của con đực (Chinnaiya and Ganguli, 1990; Dahiya et al., 2006) Thiếu hụt dinh dưỡng là một trong những nguyên nhân phổ biến nhất của việc suy giảm khả năng sinh sản gia súc như dậy thì muộn, giảm và mất tính hưng phấn sinh dục, giảm chất lượng tinh dịch (Pant, 2002)

2.3.5 Quản lý, chăm sóc và khai thác tinh

Các yếu tố quản lý, chăm sóc, khai thác và sản xuất tinh đông lạnh cũng ảnh hưởng tới chất lượng tinh trâu (Chinnaiya and Ganguli, 1990; Dahiya and Singh, 2013) Việc phun nước làm mát cho trâu trong những tháng mùa hè nóng làm giữ ổn đinh chất lượng tinh dịch (Jainudeen et al., 1982; Pawan Singh et al., 2001) Kỹ thuật kích thích hưng phấn nhảy giá khai thác tinh ở trâu đực làm tăng nồng độ tinh trùng (Jainudeen et al., 1982) Nền khu vực khai thác tinh được trải đệm cao su sẽ có ảnh hưởng tốt hơn tới khả năng xuất tinh của gia súc so với nền đất sét và nền bê tông Koonjaenak et al (2007c) thấy rằng, ảnh hưởng của tần suất khai thác tinh ảnh hưởng đến các dạng kỳ hình kích thước đầu tinh trùng, kỳ

hình đuôi có mảng bám và đuôi cong và tuổi ảnh hưởng đến dạng tinh trùng kỳ hình có giọt bào tương

2.4 THỤ TINH NHÂN TẠO TRÂU BẰNG TINH ĐÔNG LẠNH

Thụ tinh nhân tạo (TTNT) đã được sử dụng rộng rãi trên bò sữa và bò thịt với tỷ lệ thụ thai cao và ổn định nhưng đối với trâu, TTNT còn gặp nhiều khó khăn và có kết quả sinh sản chưa cao do ảnh hưởng của mùa vụ sinh sản, hiện tượng động dục ẩn, thời gian rụng trứng dài, tử cung nhỏ Ngoài ra, tỷ lệ thụ thai thấp ở trâu còn do tỷ lệ chết phôi trong khoảng từ 24-40 ngày là rất cao từ 21-50%) Vale (1997) và Cruz (1998) cho rằng hiệu quả TTNT trâu còn thấp do các yếu tố liên quan đến các yếu tố quản lý chăm sóc nuôi dưỡng, theo dõi phát hiện động dục và chất lượng tinh trâu sản xuất ra Có thể sử dụng nhiều biện pháp kỹ thuật nhằm nâng cao hiệu quả TTNT ở trâu như đo điện trở âm đạo (Gupta, 1998; Gupta and Purohit, 2001) kiểm tra hàm lượng progesterone, siêu âm, sử dụng hormon sinh sản như GnRH, LH, FSH, progesterone, PGF2alpha hoặc đơn giản hơn là dùng trâu đực thí tính để phát hiện trâu cái đông dục

Theo Taraphder (2003) tỷ lệ thụ thai trung bình của trâu đạt 40,75% và dao động từ 22,66 – 54,54% Tỷ lệ thụ thai của trâu Surti khi TTNT bằng tinh đông lạnh dao động từ 37,5 – 59,1% (Dhami and Kodagali, 1990; Dhami et al., 1994) Theo Gokhale and Bhagat (2000) tỷ lệ thụ thai trên các giống trâu ở Ấn

Độ trung bình đạt 51,84%, tỷ lệ thụ thai tăng từ chu kỳ đầu (39,36%) đến chu kỳ thứ 3 (56,25%) và sau đó giảm dần

Kumaresan and Ansari (2001) cho rằng tỷ lệ thụ thai thay đổi tùy theo thời gian thục hiện TTNT, tác giả đã tiến hành TTNT cho trâu cái trong các khoảng thời gian từ 6-12 giờ, 12-18 giờ và 18-24 giờ sau khi động dục, tỷ lệ mang thai lần lượt là 16,67%, 28,99% và 33,33%

Tỷ lệ thụ thai ở trâu đối với nhảy trực tiếp, TTNT bằng tinh lỏng và tinh đông lạnh đã có kết quả lần lượt là trên 60%, từ 35-60% và từ 25-45% (Jainudeen and Hafez, 1993c)

Ấn Độ đa sử dụng sản xuất tinh trâu đông lạnh phục vụ công tác TTNT trên đàn trâu từ năm 1955 Đến nay, tỷ lệ thụ thai khi sử dụng tinh đông lạnh trâu đạt tới 70-80% và đã có hàng trăm ngàn trâu cái được TTNT (Bhattacharya, 1955; Vale, 2010)

Haranath et al (1990) đánh giá hiệu quả TTNT giữa hai loại tinh trâu Murrah đông lạnh dạng cọng rạ 0,25 ml và 0,5 ml sử dụng môi trường pha loãng

gồm có lòng đỏ, tris và glycerol cho thấy tỷ lệ thụ thai đạt tương ứng là 52,7% và 50,4% Tỷ lệ thụ thai của trâu Surti sau khi TTNT với tinh trâu đông lạnh sử dụng 3 loại môi trường có tris, citrate và lactose đạt lần lượt là 42,7%, 39,8%, 37,5% (Dhami and Kodagali, 1990) Dhami et al (1994) công bố, tỷ lệ thụ thai của trâu Surti với tinh đông lạnh có môi trường gồm lòng đỏ, lactose và glycerol đạt tới tỷ lệ 59,1% Trong một nghiên cứu khác của Dhami and Sahni (1994) nhằm so sánh các phương pháp cân bằng lạnh (làm mát) tinh trùng trâu Murrah khác nhau, kết quả cho thấy tỷ lệ thụ thai cao nhất đạt 68,1% đối với cho tinh dịch được cân bằng lạnh với tốc độ 0,20C/phút El-Amrawi (1997) kiểm tra khả năng sinh sản của trâu với các phương pháp giải đông tinh khác nhau và cho biết,

tỷ lệ thụ thai tốt nhất đạt 64,5% khi giải đông tinh trâu ở 350C trong 60 giây Bhosrekar and Ganguli (1976) nghiên cứu tinh dịch trâu đực Murrah có hoạt lực ban đầu là 77-78%, pha loãng phối giống có tỷ lệ đậu thai 44,8%

Việc cải thiện phương pháp đông lạnh hoặc phương pháp giải đông tinh trâu có thể cải thiện tỷ lệ thụ thai lên 65% (Dhami and Sahni, 1994; El-Amrawi, 1997) Theo Vale (1997), tỷ lệ thụ thai trên 50% được coi là tốt đối với kết quả TTNT bằng tinh đông lạnh Thụ tinh kép trong thời gian động dục với khoảng cách thời gian từ 6-8 giờ góp phần tăng tỷ lệ thụ thai ở trâu (Rao and Venkataramulu, 1994)

2.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC

2.5.1 Những nghiên cứu trong nước

Trâu Murrah ở Việt Nam được nhập trong giai đoạn 1970-1978 từ Trung Quốc và Ấn Độ, khối lượng trung bình của trâu đực đạt 570kg, trâu cái đạt 470kg (Nguyễn Đức Thạc và Nguyễn Văn Vực, 1984) nhưng tới nay chỉ còn một số ít nuôi tại Hà Nội, Thái Nguyên và Bình Dương Hiện nay, ở nước ta những nghiên cứu về phẩm chất tinh dịch, kỹ thuật đông lạnh tinh và thụ tinh nhân tạo chủ yếu thực hiện trên bò sữa, bò thịt và đã mang lại những kết quả to lớn trong công tác phát triển chăn nuôi bò (Phùng Thế Hải, 2013) Con trâu chưa được quan tâm nghiên cứu nhiều, chỉ có một số ít công trình nghiên cứu về sinh sản của trâu, thụ tinh nhân tạo cho trâu, lai tạo trâu, bảo tồn tinh lỏng và tinh đông viên

Nguyễn Đức Thạc và cs trong giai đoạn 1974 – 1985 đã nghiên cứu huấn luyện, khai thác và đánh giá chất lượng tinh trâu Murah Lưu Kỷ (1979); Vũ Ngọc Tý và Lưu Kỷ (1979) đã thành công trong nghiên cứu đông lạnh tinh dịch

trâu trên mặt hơi ni tơ lỏng (tinh viên), hoạt lực sau giải đông đạt 30%, tỷ lệ thụ thai khi phối TTNT đạt khoảng 50% khi phối kép

Tác giả Cao Xuân Thìn (1987); Lê Viết Ly và Võ Sinh Huy (1982); Mai Văn Sánh(1996) nghiên cứu bảo tồn tinh trâu trong môi trường lỏng gồm: Citrat Natri, H2O, Glycacol, Trilon B, Tetracycline, lòng đỏ trứng gà và nước cất Kết quả bảo tồn tinh trâu được 2 ngày, hoạt lực tinh trùng đạt 55,2-61%, tỷ lệ thụ thai khi phối TTNT đạt 53,65%khi tiến hành phối kép

Trung tâm giống trâu sữa Phùng Thượng (Ninh Bình) sản xuất tinh trâu lỏng trong giai đoạn 1976-1987 chủ yếu phục vụ tại chỗ, tỷ lệ phối giống đạt khoảng 50%

Trung tâm tinh đông viên Moncada (nay là trung tâm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada thuộc Trung tâm Giống gia súc lớn TW) từ năm

1981 – 1984 đã sản xuất tinh trâu đông lạnh dạng viên, số lượng khoảng 23.000 liều, số tinh trùng/viên là 35 triệu tinh trùng, hoạt lực sau giải đông đạt 30%, tỷ lệ thụ thai khi phối TTNT đạt 40%

Các tác giả Lê Việt Anh và cs (1984), Nguyễn Hữu Trà và cs (2001) nghiên cứu sản xuất tinh trâu đông lạnh Murrah dạng viên trong môi trường pha loãng đông lạnh của bò (Nagase) và môi trường Triladyl nhập của Đức Hoạt lực sau giải đông đạt khoảng 35%, tỷ lệ thụ thai khi phối TTNT đạt khoảng 50% khi phối kép

Đỗ Kim Tuyên (1986) sử dụng môi trường pha loãng tổng hợp bảo quản tinh trâu lỏng ở 40C, sử dụng trong vòng 2 ngày Môi trường pha loãng là Sodiumcitrate, pH= 6,75, tỷ lệ Glycerol 7%, lòng đỏ trứng gà 20% Tỷ lệ thụ thai đạt 63,7% khi phối kép

Trịnh Thị Kim Thoa và cs (2005) nghiên cứu sản xuất tinh trâu đông lạnh dạng viên, mỗi viên chứa hơn 40 triệu tinh trùng và có hoạt lực sau giải đông đạt 30,64% Môi trường pha loãng gồm Superoxide dismutase, Tris, axit citric, fructoza, lòng đỏ trứng gà, glycerol, penicillin, streptomycin và nước cất

Theo Sharma và Đỗ Kim Tuyên (2006) trâu đực Murrah nuôi tại Bình Dương có thể tích tinh dịch dao động từ 3-5 ml, hoạt lực tinh trùng đạt 60-70% Tạ Văn Cần và cs (2008) cho biết, trâu đực Murrah nuôi tại Thái Nguyên có thể tích tinh dịch dao động từ 2.35-3,51 ml, hoạt lực tinh trùng dao

số tinh trùng tiến thẳng dao động từ 1,38-2,09 tỷ Tinh đông viên có hoạt lực tinh trùng sau giải đông trên 30% và tổng số tinh trùng tiến thẳng đạt từ 12,0 đến 12,5 triệu được coi là đủ tiêu chuẩn để TTNT Kết quả TTNT tinh đông viên cho đàn trâu cái địa phương có tỷ lệ thụ thai đạt 33,7% Phối giống bằng tinh lỏng có tỷ lệ thụ thai đạt 39,1% Khi cho trâu đực Murrah nhảy trực tiếp trâu cái nội, tỷ lệ thụ thai đạt 72,5%

Vũ Đình Ngoan và cs (2010) nghiên cứu trên trâu Murrah ở Thái Nguyên cho biết, tinh dịch trâu có màu trắng và trắng ngà, thể tích tinh dịch đạt 3,02 ml, hoạt lực tinh trùng đạt 73,67%, nồng độ tinh trùng đạt 0,947 tỷ/ml, tổng số tinh trùng tiến thẳng đạt 2,63 tỷ/lần khai thác, tỷ lệ kỳ hình là 9,73%, pH là 6,57

Đinh Văn Cải và cs (2010) cho biết, sử dụng tinh trâu Murrah đông lạnh dạng cọng rạ 0,25 ml phối TTNT cho trâu cái đạt tỷ lệ trâu có chửa trung bình cứ

3 lần phối là 34,84, hệ số phối 2,85 Tỷ lệ thụ thai khi phối đơn là 47,89%, thấp hơn so với phối kép (55,56%) Phối kép cho trâu 2 lần cách nhau 6-9 giờ tỷ lệ trâu có chửa đạt 66,67%, cao hơn phối kép cách nhau 10-13 giờ chỉ đạt 51,85% Trong điều kiện chăn nuôi nhỏ nông hộ, người chăn nuôi không phát hiện đúng thời điểm bắt đầu trâu cái động dục thì có thể áp dụng kỹ thuật phối giống cho trâu cái trong khoảng thời gian từ 18-24 giờ kể từ khi phát hiện trâu cái có dấu hiệu động dục và sau 6-9 giờ phối lặp lại lần hai cho con trâu có biểu hiện động dục rõ sau khi phối lần một để đạt tỷ lệ có chửa cao

Ở Việt Nam, các nghiên cứu về sản xuất tinh trâu đông lạnh nói chung và sản xuất tinh trâu dạng cộng rạ nói riêng chỉ dừng lại ở bước đầu xác định khả năng sản xuất tinh của một số ít trâu đực thực nghiệm, tinh đông lạnh sản xuất chưa được áp dụng đại trà mà chỉ được sử dụng trong phạm vi hẹp

2.5.2 Những nghiên cứu ngoài nước

Nghiên cứu của Manik and Mudgal (1984) cho biết, trâu đực giống Murrah có thể tích tinh dịch bình quân đạt 3,25 ml/lần khai thác; nồng độ tinh trùng đạt 0,97 tỷ/ml đến 1,44 tỷ/ml; tỷ lệ tinh trùng kỳ hình dao động trong khoảng 4,60% đến 6,53%; tỷ lệ sống của tinh trùng dao động trong khoảng 72,94% đến 93,33%

Nghiên cứu Bhakat et al (2011) trên trâu đực giống Murrah tại Ấn Độ

có độ tuổi từ 2,31-7,36 tuổi Thể tích tinh dịch bình quân là 2,58 ml/lần khai thác; hoạt lực tinh trùng 66,63 %; nồng độ tinh trùng 0,99 tỷ/ml; tỷ lệ tinh trùng kỳ hình là 11,1%

Theo Tomar et al (1966) cho biết tinh dịch trâu đực giống Murrah có

pH dao động từ 6,8 đến 7,0; tỷ lệ tinh trùng sống ở mùa hè đạt 85,4%, mùa thu đạt 85%, mùa đông đạt 82,4%, mùa xuân đạt 62,4%

Theo Mandal et al (2000) cho biết tinh dịch trâu đực giống Murrah có

pH dao động từ 6,85 đến 6,97; nồng độ tinh trùng dao động từ 0,96 tỷ/ml đến 1,18 tỷ/ml; tỷ lệ tinh trùng kỳ hình chiếm 7,32% đến 14,21%; hoạt lực tinh trùng từ 63,86% đến 67,99%; tỷ lệ tinh trùng sống dao động từ 76,11% đến 83,08%

Pawan Singh et al (2001) công bố kết quả khi nghiên cứu 12 trâu đưc giống Murrah 40 tháng tuổi tại Ấn Độ cho biết thể tích tinh trùng đạt 4,26 ml; hoạt lực của tinh trùng trâu Murrah sau pha loãng là 70,83%; hoạt lực tinh trùng trước đông lạnh đạt 59,58% ; hoạt lực sau giải đông đạt 32,91%; tỷ lệ tinh trùng sống đạt 88,09 %; nồng độ tinh trùng đạt 1,32 tỷ/ml

Ramakrishnam et al (1989) cho kết quả khi nghiên cứu 401 lần thu tinh trùng trâu Murrah như sau: thể tích tinh dịch 2,19 ml; hoạt lực tinh trùng đạt 71,52 %;tỷ lệ tinh trùng sống đạt 86,87 %; tỷ lệ tinh trùng kỳ hình chiếm 12,2 %

Bhosrekar et al (1991) khi nghiên cứu về tinh dịch trâu Murrah cho biết tỷ lệ sống của tinh trùng dao động trong khoảng 66% dến 89%; tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng trâu Murrah từ 7,32% đến 14,21%; hoạt lực của tinh trùng

từ 63% đến 86%

Theo Pant et al (2002) khi nghiên cứu 133 trâu đực giống Murrah ở các giai đoạn tuổi 25-36 tháng tuổi; 37-48 tháng tuổi;49- 60 tháng tuổi và trên 60 tháng tuổi cho biết: Giai đoạn 25 – 36 tháng tuổi: thể tích tinh trùng đạt 2,5ml; nồng độ tinh trùng 1,67 tỷ/ml.Giai đoạn 37 – 48 tháng tuổi: thể tích tinh trùng đạt 3,1ml; nồng độ tinh trùng 1,49 tỷ/ml Giai đoạn 49 – 60 tháng tuổi: thể tích tinh trùng đạt 3,5ml; nồng độ tinh trùng 1,47 tỷ/ml Giai đoạn trên 60 tháng tuổi: thể tích tinh trùng đạt 3,6ml; nồng độ tinh trùng 1,66 tỷ/ml

Kumar et al (1993a) thấy rằng hoạt lực tinh trùng trâu Murrah ở Ấn Độ dao động từ 60,8-69% và có khoảng 30% số mẫu tinh trùng không di động nhưng sau khi pha loãng tinh trùng trở lại di động bình thường Nồng độ tinh trùng dao động từ 0,52-1,03 tỷ/ml

Theo Capitan et al (1990), tỷ lệ tinh trùng sống ở trâu Murrah đạt

PHẦN 3 VẬT LIỆU

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 VẬT LIỆU, ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU

3.1.1 Vật liệu nghiên cứu

- Tinh dịch của 05 trâu đực giống Murrah, trâu được tuyển chọn từ giai đoạn hậu bị (dưới 24 tháng tuổi) ở Trung tâm Nghiên cứu và Huấn luyện Chăn nuôi gia súc lớn (Lai Hưng, Bến Cát, Bình Dương) Các trâu có ngoại hình đẹp, khả năng sinh trưởng phát triển tốt, có độ tuổi và khối lượng khá đồng đều, thời gian sinh trong năm 2010, khối lượng ở thời điểm bắt đầu đưa vào khai thác tinh dao động từ 420kg đến 490kg

- Đàn trâu cái địa phương là trâu Việt Nam (Swamp buffalo), khối lượng

từ 300kg đến 400kg, độ tuổi từ 5 năm tuổi đến 7 năm tuổi, có khả năng sinh sản bình thường, đã đẻ được 1 lứa, sức khỏe tốt và chưa được phối giống

3.1.2 Địa điểm nghiên cứu

- Các trâu đực Murrah sử dụng trong nghiên cứu này được chăm sóc nuôi dưỡng và khai thác tinh tại Trạm Nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada (Tản Lĩnh, Ba Vì, Hà Nội) thuộc Trung tâm Giống gia súc lớn Trung ương

- Đàn trâu cái sử dụng trong nghiên cứu này được lựa chọn tại các địa phương có công tác TTNT trâu phát triển gồm: i) thị xã Bỉm Sơn và huyện Hà Trung, tỉnh Thanh Hóa; ii) huyện Thanh Chương và huyện Tân Kỳ, tỉnh Nghệ An 3.1.3 Thời gian nghiên cứu

- Từ tháng 01/2015 đến tháng 04/2016

- Đồng thời thu thập số liệu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch

và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah từ tháng 1/2013 đến tháng 12/2014 trong khuôn khổ đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu sản xuất tinh trâu đông lạnh cọng rạ phục vụ công tác cải tạo giống trâu Việt Nam” giai đoạn 2011-2014 3.2 ĐIỀU KIỆN CHĂM SÓC NUÔI DƯỠNG

- Tất cả trâu đực giống sử dụng trong nghiên cứu này đều được chăm sóc,

ứng đầy đủ tiêu chí theo quy định của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (Quyết định số 13/2007/QĐ-BNN ngày 09/02/2007 v/v Ban hành Quy định về quản lý và sử dụng trâu đực giống; Quyết định số 2489/QĐ-BNN ngày 16/9/2010 v/v Phê duyệt các chỉ tiêu định mức kinh tế kỹ thuật chăn nuôi gia súc gia cầm giống gốc)

- Mỗi cá thể trâu đực được nuôi trong một ô chuồng riêng với diện tích là 45m2, trong đó gồm 20m2 chuồng có mái che và 25m2 sân chơi không mái, có máng ăn và máng uống riêng cho từng con Quản lý cá thể và phòng bệnh cho đàn trâu được thực hiện nghiêm ngặt, kiểm tra thú y định kỳ 2 lần/năm Trâu đực giống trong nghiên cứu được cho ăn cùng chế độ dinh dưỡng tính sẵn cho từng

cá thể theo tiêu chuẩn cơ sở dựa trên tiêu chuẩn của Kearl (1982) Các loại thức

ăn thô được ăn tự do gồm có cỏ Alfalfa, cỏ pangola, cỏ ghinê và thức ăn tinh có

tỷ lệ protein không nhỏ hơn 16%, nước uống đầy đủ, ngoài ra còn bổ sung khoáng bằng đá liếm

- Đàn trâu cái trong nghiên cứu này được nuôi tại các nông hộ gia đình

có chuồng trại riêng, trâu được chăn thả vào ban ngày kết hợp bổ sung thức ăn tại chuồng vào ban đêm theo quy trình kỹ thuật chăn nuôi trâu sinh sản kết hợp cày kéo

3.3 ĐIỀU KIỆN KHÍ HẬU KHU VỰC BA VÌ HÀ NỘI

Ba Vì là huyện thuộc vùng bán sơn địa, nằm về phía Tây Bắc thủ đô Hà Nội Địa hình của huyện thấp dần từ phía Tây Nam sang phía Đông Bắc Về khí hậu, Ba Vì nằm trong vùng đồng bằng sông Hồng chịu ảnh hưởng khí hậu nhiệt đới gió mùa

Thời tiết khí hậu khu vực Ba Vì được chia ra làm bốn mùa Xuân, Hạ, Thu, Đông Mùa Xuân từ tháng 1 đến tháng 3 hàng năm; mùa Hạ (hè) từ tháng 4 đến tháng 6 hàng năm; mùa Thu từ tháng 7 đến tháng 9 hàng năm; mùa Đông từ tháng 10 đến tháng 12 hàng năm

- Số liệu quan trắc nhiệt độ và độ ẩm ngoài trời từ tháng 1 năm 2013 đến tháng 4 năm 2016 được thu thập từ Trạm Khí Tượng Nông Nghiệp Ba Vì (Tản Lĩnh, Ba Vì, Hà Nội)

Bảng 3.1 Nhiệt độ và độ ẩm ở khu vực nghiên cứu theo từng mùa trong giai

3.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

3.4.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah

- Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah

Các chỉ tiêu nghiên cứu gồm: Thể tích tinh dịch (V - ml), hoạt lực tinh trùng (A - %), nồng độ tinh trùng (C - tỷ/ml), tổng số tinh trùng sống tiến thẳng (VAC - tỷ), pH, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) và tỷ lệ tinh trùng sống (%)

- Ảnh hưởng của lứa tuổi đến khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah

Các chỉ tiêu nghiên cứu gồm: Tỷ lệ các lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn (%), một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch đạt tiêu chuẩn (V, A, C, VAC,

pH, K, tỷ lệ tinh trùng sống), số lượng tinh đông lạnh dạng cọng rạ trên lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn (cọng rạ) và hoạt lực tinh trùng sau giải đông (%)

3.4.2 Ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah

- Ảnh hưởng của mùa vụ đến một số đặc điểm số lượng, chất lượng tinh dịch của trâu Murrah

Các chỉ tiêu nghiên cứu gồm: Thể tích tinh dịch (V - ml), hoạt lực tinh trùng (A - %), nồng độ tinh trùng (C - tỷ/ml), tổng số tinh trùng sống tiến thẳng (VAC - tỷ), pH, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%) và tỷ lệ tinh trùng sống (%)

- Ảnh hưởng của mùa vụ đến khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah

Các chỉ tiêu nghiên cứu gồm: Tỷ lệ các lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn (%), một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch đạt tiêu chuẩn (V, A, C, VAC,

pH, K, tỷ lệ tinh trùng sống), số lượng tinh đông lạnh dạng cọng rạ trên lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn (cọng rạ) và hoạt lực tinh trùng sau giải đông (%)

3.4.3 Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh cọng rạ của trâu Murrah trên đàn trâu cái địa phương

3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.5.1 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah

- Các lứa tuổi của trâu đực Murrah được chia ra làm 4 giai đoạn:

+ Giai đoạn từ 36 tháng tuổi trở xuống

+ Giai đoạn từ 37 tháng tuổi đến 48 tháng tuổi

+ Giai đoạn từ 49 tháng tuổi đến 60 tháng tuổi

+ Giai đoạn trên 60 tháng tuổi

- Để đánh giá ảnh hưởng của lứa tuổi đến một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah, mỗi cá thể trâu đực giống tiến hành lấy số liệu của 10 mẫu tinh dịch trong một giai đoạn tuổi (đồng thời trong một mùa vụ) Mỗi giai đoạn tuổi lấy tổng số 200 mẫu tinh dịch của 5 trâu đực giống Murrah

3.5.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ đến phẩm chất tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah

- Mùa vụ trong năm được chia ra làm 4 mùa:

+ Mùa xuân từ tháng 1 đến tháng 3 hàng năm

+ Mùa hạ từ tháng 4 đến tháng 6 hàng năm

+ Mùa thu từ tháng 7 đến tháng 9 hàng năm

+ Mùa đông từ tháng 10 đến tháng 12 hàng năm

- Để đánh giá ảnh hưởng của mùa vụ đến một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của trâu Murrah, mỗi cá thể trâu đực giống tiến hành lấy số liệu của 10 mẫu tinh dịch trong một mùa vụ (đồng thời trong một giai đoạn tuổi) Mỗi mùa vụ lấy tổng số 200 mẫu tinh dịch của 5 trâu đực giống Murrah

* Phương pháp khai thác tinh dịch

- Thời gian khai thác tinh: từ 7 giờ đến 8 giờ (buổi sáng)

- Tần suất khai thác tinh dịch: 2 lần/tuần

- Chuẩn bị âm đạo giả: Các bộ phận của âm đạo giả, đã được khử trùng rồi lắp ráp và bảo quản trong tủ ấm 420C trước khi lấy tinh

- Chuẩn bị trâu đực: Những trâu đực đến ngày khai thác tinh được tắm sạch sẽ và thụt rửa bao dương vật trước khi khai thác tinh 30 phút bằng nước muối sinh lý 0,9%

- Chuẩn bị trâu giá: Chọn trâu giá thích hợp, vệ sinh cơ thể trâu sạch sẽ và cho vào giá

- Lấy tinh: Kích thích cho trâu đực giống hưng phấn sinh dục, rồi cho nhảy trâu giá và lấy tinh bằng âm đạo giả

- Mẫu tinh dịch khai thác được đưa ngay vào phòng thí nghiệm và đặt trong bể nước ấm 350C để kiểm tra các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch sau

đó đưa những mẫu tinh dịch đạt tiêu chuẩn vào sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ

* Phương pháp xác định một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch trâu Murrah

- Thể tích tinh dịch: Xác định bằng cách quan sát trên ống nhựa có chia vạch khắc ml

- Hoạt lực tinh trùng: Dùng micropipét hút 0,01 ml tinh dịch + 0,09 ml dung dịch A (môi trường pha loãng tinh dịch không có glycerol) rồi nhỏ lên phiến kính chuyên dụng và được giữ ấm ở nhiệt độ 380C, đậy la men rồi đưa lên kính hiển vi phản pha có có gắn camera phóng đại 100 lần có kết nối với màn hình Hoạt lực tinh trùng được đánh giá bởi 03 chuyên gia độc lập, giá trị hoạt lực là giá trị trung bình của các chuyên gia đánh giá (Jainudeen et al., 1982; Beheshti et al., 2011) Hoạt lực tinh trùng được kiểm tra ngay sau khi khai thác tinh dịch

- Nồng độ tinh trùng: Dùng micropipét hút 0,02ml tinh dịch pha loãng trong 4ml nước muối sinh lý 0,9%, lắc nhẹ cho đều và đưa vào máy Photometer SDM5 (Minitub, Đức) Chỉ số hiện trên máy là nồng độ tinh trùng (tỷ/ml)

- Tổng số tinh trùng sống tiến thẳng: Xác định bằng tích của lượng xuất

- pH tinh dịch: Xác định bằng máy đo pH (Minitub, Đức)

- Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình: Sử dụng Fucsin 5% nhuộm tinh trùng từ 5 đến 7 phút, phết lam kính và soi trên kính hiển vi có độ phóng đại 400 lần Đếm số lượng tinh trùng kỳ hình và không kỳ hình, tổng số 500 tinh trùng, rồi tính toán theo công thức sau:

K (%) = Số lượng tinh trùng kỳ hình x 100

500

- Tỷ lệ tinh trùng sống (%): Xác định theo phương pháp của Blom (1950), nhỏ 1 giọt tinh dịch lên lam kính lõm và 2 giọt Eosin 5%, đảo nhẹ, sau đó nhỏ 4 giọt Nigrosin 10%, đảo nhẹ, để ấm 370C trong 30 giây Lấy 1 giọt tinh dịch đã nhuộm phết kính dàn mỏng đều đưa lên kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần Đếm tổng số 500 tinh trùng gồm cả tinh trùng sống và tinh trùng chết (tinh trùng chết là những tinh trùng bắt màu đỏ Eosin) Tính tỷ lệ tinh trùng sống theo công thức sau:

Tỷ lệ tinh trùng sống (%) = Số lượng tinh trùng sống x 100

- Pha môi trường: Sử dụng môi trường gồm có Tris, axit Citric, Fructose, Lactose, Raffinose, Penicillin G, Streptomycin, glycerin, lòng đỏ trứng gà Các môi trường được pha làm 2 loại dung dịch, dung dịch A không có glycerin, dung dịch B gồm dung dịch A và glycerin theo tỷ lệ của từng môi trường (theo quy trình kỹ thuật của cơ sở) Bảo quản môi trường trong tủ bảo quản có nhiệt độ

50C Trước khi sử dụng, môi trường được lấy ra và đặt trong Autobath có nhiệt

- In nhãn mác lên vỏ cọng rạ bằng máy in chuyên dùng (Linx 4900) với các chỉ số:

+ VN: là mã nước Việt Nam

+ MR 3095: là trâu đực giống Murrah số hiệu 3095

+ NSX: là ngày sản xuất tinh 25/08/2015

+ VINALICA: là thương hiệu Trung tâm giống gia súc lớn Trung ương

- Pha loãng tinh dịch: Sử dụng các dung dịch A và B của môi trường pha loãng tinh dịch sao cho nồng độ tinh trùng đạt 0,12 tỷ/ml tương đương 30 triệu/cọng rạ 0,25ml (Ansari et al., 2011)

- Làm mát và cân bằng glycerol: Giảm nhiệt độ tinh dịch xuống 400C trong 2h và tiếp tục cân bằng ở 400C trong 4h (Shukla and Misra, 2007; Akhter

et al., 2011; Beheshti et al., 2011; El-Kon, 2011; Sadeg et al., 2011; Ansari et al., 2011)

- Đóng gói tinh dịch: Sử dụng máy nạp hàn cọng rạ (hãng Minitub, Đức)

để nạp tinh dịch vào cọng rạ 0,25ml (hãng IMV, Pháp)

- Bảo quản: Tinh cọng rạ đạt tiêu chuẩn thì được đóng vào ống 25 cọng rạ/ống và sắp vào cóng đựng tinh theo từng đực giống, từng ngày sản xuất (có ghi sơ đồ quản lý từng ngày sản xuất và của từng đực giống) và bảo quản trong bình chuyên dụng chứa đầy nitơ lỏng (-1960C)

b) Phương pháp xác định các chỉ tiêu nghiên cứu

- Tỷ lệ các lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn ở từng chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch được tính toán theo phép tính số học thông thường:

Tỷ lệ ĐTC (%) = Số lần khai thác tinh ĐTC x 100

Tổng số lần khai thác tinh

- Các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch đạt tiêu chuẩn (V, A, C,

lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn (cọng rạ) được tính toán bằng phép tính số học thường quy sau khi đưa mẫu tinh dịch trâu đạt tiêu chuẩn vào sản xuất tinh đông lạnh

- Hoạt lực tinh trùng sau giải đông (%) được xác định sau khi bảo quản tinh đông lạnh 24 giờ, kiểm tra ngẫu nhiên 1 cọng rạ của từng lô tinh cọng rạ của từng lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn của từng trâu đực, giải đông ở nhiệt độ 37°C trong

30 giây, kiểm tra hoạt lực tinh trùng trên kính hiển vi phản pha có màn hình nếu hoạt lực A  40% thì đạt tiêu chuẩn

3.5.3 Phương pháp đánh giá tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh đông lạnh cọng rạ của từng trâu Murrah trên đàn trâu cái địa phương

- Xác định tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh đông lạnh cọng rạ của từng trâu Murrah với đàn trâu cái địa phương cụ thể như sau:

+ Tinh cọng rạ của 6 trâu Murrah được lấy ngẫu nhiên ở các lô sản xuất trong các bình nitơ bảo quản tinh đông lạnh Tinh cọng rạ đảm bảo tiêu chuẩn hoạt lực tinh trùng sau giải đông không nhỏ hơn 40% Mỗi trâu đực sử dụng tối thiểu 50 cọng rạ đạt tiêu chuẩn để phối TTNT với tối thiểu 50 trâu cái địa phương, tổng cộng sử dụng 260 cọng rạ tinh trâu đông lạnh phối TTNT cho 260 trâu cái

+ Dẫn tinh viên là người đã và đang làm công tác TTNT tại cơ sở đều được đào tạo cơ bản và có ít nhất 5 năm kinh nghiệm

+ Chọn trâu cái nền: Tiến hành chọn lựa 260 trâu cái địa phương từ 5 đến

7 năm tuổi, sinh sản bình thường, đã đẻ được một lứa, sức khỏe tốt, khối lượng từ 300kg đến 400kg

+ Theo dõi trâu cái động dục và phối giống: Theo dõi trâu cái động dục bằng các biện pháp thông thường là quan sát niêm dịch và niêm mạc âm đạo vào ban đêm, buổi sáng và những biểu hiện nhảy nhau, bỏ ăn, theo đực khác, âm hộ căng mòng, niêm dịch tiết nhiều, niêm mạc âm đạo xung huyết Trâu cái động dục được phối giống TTNT với tinh đông lạnh dạng cọng rạ của các trâu Murrah

+ Quản lý trâu thí nghiệm: Tất cả các trâu cái sinh sản được đánh số, có sổ theo dõi từng khu vực Khi trâu cái động dục được phối giống và giữ tại nhà đến khi hết động dục mới cho đi chăn thả

+ Thời gian thực hiện phối giống TTNT: Thời gian phối giống TTNT trong khoảng từ tháng 9 đến tháng 2 hàng năm (Mai Văn Sánh, 1996; Mai Thị Thơm và Mai Văn Sánh, 2004; Nguyễn Văn Thanh, 2005)

- Xác định trâu có chửa và tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu: Sử dụng phương pháp khám thai qua trực tràng sau khi phối 90 ngày để xác định trâu cái có chửa

Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu tính theo công thức:

Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu (%) = Số trâu cái có chửa x 100

Tổng số trâu cái phối lần một 3.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU

- Sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2007 (Microsoft, Redmond, WA) để

xử lý sơ bộ các số liệu thu thập được Trong quá trình xử lý số liệu một số chỉ tiêu số lượng và chất lượng tinh dịch trâu Murrah, tiến hành loại bỏ những số liệu đặc biệt (quá cao hoặc quá thấp) Các số liệu có bản chất là phần trăm như hoạt lực tinh trùng, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình, tỷ lệ tinh trùng sống được chuyển dạng số liệu theo công thức: y = asin[sqrt(x/100)] trước khi đưa vào xử lý thống kê Sau khi tính toán xong, giá trị trung bình (Mean) và độ lệch chuẩn (SD - Standard Deviation) của các chỉ tiêu này được chuyển dạng trở lại công thức x = [sin(y)]2x100 (Nguyễn Văn Đức và Lê Thanh Hải, 2002)

- Các số liệu về số lượng, chất lượng tinh dịch trâu (Thể tích tinh dịch, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng, tổng số tinh trùng sống tiến thẳng, pH, tỷ

lệ tinh trùng kỳ hình, tỷ lệ tinh trùng sống), số lượng cọng rạ sản xuất, số lượng cọng rạ đạt tiêu chuẩn, chất lượng tinh đông lạnh (hoạt lực tinh trùng sau giải đông, tỷ lệ tinh trùng sống sau giải đông, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải đông) được phân tích phương sai (ANOVA) một nhân tố, sử dụng phương pháp kiểm tra Tukey trong phần mềm Minitab (Version 14; Minitab Inc., State College, PA) nhằm đánh giá sự sai khác giá trị trung bình của các chỉ tiêu theo từng lứa tuổi và theo từng mùa vụ trong năm (P<0,05)

- Các số liệu tỷ lệ các lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn, tỷ lệ các lần sản xuất tinh cọng rạ đạt tiêu chuẩn theo từng lứa tuổi và theo từng mùa vụ, tỷ lệ thụ thai của từng cá thể trâu đực giống được so sánh theo phương pháp Chi-square, sử

- Các mô hình phân tích:

Mô hình phân tích phương sai một nhân tố:

ij i

+ ai là ảnh hưởng của yếu tố thứ i

+ eij là sai số dư thừa ngẫu nhiên với giả thiết N (0,σ2

e)

PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1 ẢNH HƯỞNG CỦA TUỔI ĐẾN PHẨM CHẤT TINH DỊCH VÀ KHẢ NĂNG SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH CỦA TRÂU MURRAH

4.1.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch của trâu murrah

4.1.1.1 Ảnh hưởng của tuổi đến thể tích tinh dịch

Thể tích tinh dịch (V - ml) là lượng tinh dịch thu được trong một lần khai thác tinh (ml/lần) của mỗi trâu đực giống Murrah Chỉ số này có ý nghĩa quan trọng khi kết hợp với nồng độ tinh trùng (C) và hoạt lực tinh trùng (A), giúp đánh giá khả năng sản xuất tinh của trâu đực giống, cũng như tính được tổng số tinh trùng tiến thẳng/ lần khai thác tinh, từ đó cho phép xác định được số liều tinh cọng rạ sản xuất được và lượng môi trường pha loãng cần thiết của lần lấy tinh đó Thể tích tinh dịch chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như giống, lứa tuổi, chế độ chăm sóc nuôi dưỡng, quản lý và liên quan chặt chẽ với các chỉ tiêu khác của tinh dịch, từ đó xác định được lượng môi trường và số liều tinh sẽ sản xuất trong lần khai thác tinh đó và có thể xác định được nguyên nhân ảnh hưởng đến thể tích tinh dịch nhằm đạt hiệu quả cao nhất trong sản xuất

Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của lứa tuổi đến thể tích tinh dịch của trâu đực giống Murrah nuôi tại Trạm Nghiên cứu và Sản xuất tinh đông lạnh Moncada được thể hiện qua bảng 4.1

Qua bảng 4.1 cho thấy, thể tích tinh dịch của trâu Murrah ở các lứa tuổi lần lượt: Từ 36 tháng tuổi trở xuống là thấp nhất (2,07ml), tiếp đến giai đoạn từ

37 đến 48 tháng tuổi (2,73ml), trên 60 tháng tuổi (3,61ml), và cao nhất giai đoạn

từ 49 đến 60 tháng tuổi (4,07ml) (P<0,05) Ta thấy Trâu Murrah có mối tương quan mạnh mẽ giữa tuổi tác, chu vi dịch hoàn và khối lượng cơ thể (Suryaprakasam et al., 1993;) Chu vi dịch hoàn tăng nhanh từ 3,5 - 4,5 tuổi và sau đó tăng trưởng chậm lại, thể tích tinh dịch và nồng độ tinh trùng tăng tuyến tính đến 6 năm tuổi và sau đó có xu hướng giảm đi (Suryaprakasam et al., 1993) Mức độ testosterone huyết thanh của trâu có mối tương quan thuận với chu vi dịch hoàn và lượng xuất tinh Đây là lí do ham muốn tình dục của con đực trưởng thành cao hơn so với con đực già hay trẻ (Younis et al., 2003) Điều này phù hợp với công bố của nhiều tác giả đã khẳng định rằng tinh dịch trâu Murrah có chất lượng tốt nhất trong giai đoạn từ 3-5 tuổi (Chinnaiya and Ganguli, 1990; Kumar

et al., 1993; Singh et al., 2004)

Bảng 4.1 Ảnh hưởng của tuổi đến phẩm chất tinh dịch của trâu Murrah

n= 05 trâu đực giống

Chỉ tiêu

Lứa tuổi

Số lần khai thác tinh (lần)

Từ 36 tháng tuổi trở xuống

Từ 37 tháng tuổi đến 48 tháng tuổi

Từ 49 tháng tuổi đến 60 tháng tuổi

Trên 60 tháng tuổi Mean SE Mean SE Mean SE Mean SE

Thể tích tinh dịch (ml) 200 2,07 c 0,02 2,73 bc 0,02 4,07 a 0,02 3,61 b 0,02 Hoạt lực tinh trùng (%) 200 70,46 c 0,01 73,59 b 0,01 77,43 a 0,01 76,14 ab 0,01 Nồng độ tinh trùng

(tỷ/ml) 200 0,77b 0,01 0,91ab 0,01 1,14a 0,01 1,05a 0,01 Tổng số tinh trùng tiến