Nghiên cứu thành phần hóa học của một số loài cây thuộc họ Betulaceae và họ Zingiberaceae

Các loài cây thuộc họ Cáng lò Betulaceae và họ Gừng Zingiberaceae, từ lâu đã là đối tượng được các nhà khoa học thuộc lĩnh vực các hợp chất thiên nhiên trên thế giới đặc biệt quan tâm, b

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NÔI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

1.1.1 Vài nét về thực vật học của chi Alnus và Betula 2

1.1.5 Nghiên cứu hoạt tính sinh học các loài Betula 12

1.1.6 Công dụng của các loài Alnus và Betula trong y dược học 14

1.2 Thực vật học, nghiên cứu hóa học và hoạt tính sinh học các loài Zingiber

và Alpinia (Zingiberaceae)

14

1.2.1 Vài nét về thực vật học của chi Zingiber và Alpinia 14

1.2.3 Nghiên cứu hoạt tính sinh học của các loài Zingiber 19

1.2.5 Nghiên cứu hoạt tính sinh học các loài Alpinia 24

1.2.6 Công dụng của các loài Zingiber và Alpinia trong y dược học 26

1.3.2 Cây Cáng lò (Betula alnoides Buch Ham ex D Don) 27

1.3.3 Cây Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I Theilade) 28

2.1 Đối tượng nghiên cứu và phương pháp điều chế các phần chiết 30 2.2 Các phương pháp phân tích, phân tách các hỗn hợp và phân lập các hợp chất 30

Tống quán sủi

43

3.2 Nghiên cứu hoá học cây Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don) 51

3.2.2 Điều chế các phần chiết từ lá, cành con và vỏ cành của cây Cáng lò 51

3.2.3.1 Phân tách các phần chiết từ lá của cây Cáng lò 52 3.2.3.2 Phân tách các phần chiết từ cành con của cây Cáng lò 56 3.2.3.3 Phân tách các phần chiết từ vỏ cành của cây Cáng lò 58 3.2.4 Hằng số vật lý và dữ kiện phổ của các hợp chất phân lập được từ cây

3

3.4.4 Hằng số vật lý và dữ kiện phổ của các hợp chất phân lập được từ thân rễ

cây Riềng maclurei

75

4.1 Nghiên cứu hoá học cây Tống quán sủi (Alnus nepalensis D Don) 78

4.1.2 Điều chế các phần chiết từ lá, cành con và vỏ cành 78 4.1.3 Phân tách các phần chiết từ cây Tống quán sủi 78 4.1.3.1 Phân tách các phần chiết từ lá cây Tống quán sủi 78 4.1.3.2 Phân tách các phần chiết từ cành con cây Tống quán sủi 79 4.1.3.3 Phân tách các phần chiết từ vỏ cành cây Tống quán sủi 80 4.1.4 Cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ cây Tống quán sủi 80

4.2 Nghiên cứu hoá học cây Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don) 100

4.2.2 Điều chế các phần chiết từ lá, cành con và vỏ cành 101

4.2.3.1 Phân tách các phần chiết từ lá của cây Cáng lò 101 4.2.3.2 Phân tách các phần chiết từ cành con của cây Cáng lò 102 4.2.3.3 Phân tách các phần chiết từ vỏ cành của cây Cáng lò 102 4.2.4 Cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ cây Cáng lò 103

4.3 Nghiên cứu hoá học cây Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I Theilade) 115

4.3.2 Điều chế các phần chiết từ thân rễ cây Gừng môi tím đốm 116 4.3.3 Phân tách các phần chiết từ thân rễ cây Gừng môi tím đốm 116 4.3.4 Cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ cây Gừng môi tím đốm 117

4.4 Nghiên cứu hoá học cây Riềng maclurei (Alpinia maclurei Merr.) 124

4.4.3.3 Phân tách phần chiết etyl axetat từ thân rễ cây Riềng maclurei 125

4.4.4 Cấu trúc của các hợp chất phân lập được từ cây Riềng maclurei 126

Bảng 4.1: Khối lượng mẫu khô và hiệu suất thu nhậncác phần chiết

từ cây Tống quán sủi

Bảng 4.4: Khối lượng mẫu và hiệu suất thu nhậncác phần chiết từ thân rễ

cây Riềng maclurei

125

Bảng 4.5: Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của các hợp chất Phụ lục 3

DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ

Trang

Sơ đồ 3.1: Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi 34

Sơ đồ 3.2: Phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi 35

Sơ đồ 3.3: Phân tách phần chiết diclometan từ lá của mẫu 2 của cây Tống

5

Sơ đồ 3.9: Phân tách phần chiết n-hexan từ vỏ cành của cây Tống quán sủi 41

Sơ đồ 3.10: Phân tách phần chiết diclometan từ vỏ cành của cây Tống quán sủi 42

Sơ đồ 3.11: Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của cây Cáng lò 53

Sơ đồ 3.12: Phân tách phần chiết diclometan từ lá của cây Cáng lò 54

Sơ đồ 3.13: Phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của cây Cáng lò 55

Sơ đồ 3.14: Phân tách phần chiết n-butanol từ lá của cây Cáng lò 56

Sơ đồ 3.15: Phân tách phần chiết n-hexan từ cành con của cây Cáng lò 57

Sơ đồ 3.16: Phân tách phần chiết diclometan từ cành con của cây Cáng lò 57

Sơ đồ 3.17: Phân tách phần chiết diclometan từ vỏ cành của cây Cáng lò 58

Sơ đồ 3.18: Phân tách phần chiết n-hexan từ thân rễ của cây Gừng môi tím

Sơ đồ 3.21: Phân tách phần chiết diclometan từ thân rễ cây Riềng maclurei 74

Sơ đồ 3.22: Phân tách phần chiết etyl axetat từ thân rễ cây Riềng maclurei 75

Hình 1.4: Ảnh hoa và lá cây Riềng Maclurei (Alpinia maclurei Merr.) 29

Hình 4.4: Tương tác 1

Hình 4.7: Các tương tác 1

Hình 4.8: Sự phân mảnh EI-MS của A12 93 Hình 4.9: Các tương tác 1

Hình 4.14: Sơ đồ phân mảnh trên phổ EI-MS của Z5 và Z6 121

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT

DÙNG TRONG LUẬN ÁN

Các phương pháp sắc ký:

CC : Sắc ký cột (Column Chromatography)

FC : Sắc ký cột nhanh (Flash Chromatography)

GC-MS : Sắc ký khí-khối phổ (Gas Chromatography-Mass Spectrometry)

TLC : Sắc ký lớp mỏng (Thin-Layer Chromatography)

Các phương pháp phổ:

MS : Phổ khối lượng (Mass Spectrometry)

EI-MS : Phổ khối lượng va chạm electron (Electron Impact Mass Spectrometry)

ESI-MS : Phổ khối lượng phun bụi điện tử (Electrospray Ionization Mass

Spectrometry) HR-ESI-MS : High-Resolution Electrospray Ionization Mass Spectrometry

HR-APCI-MS : High-Resolution Atmospheric-Pressure Chemical Ionization Mass

C-NMR : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13

(Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer

2D NMR : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều

(Two-Dimensional Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) COSY : Correlation SpectroscopY

HMQC : Heteronuclear Multiple Quantum Coherence

7

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence

Theo ước tính của tổ chức y tế thế giới, hiện nay khoảng trên 80% dân số thế giới sử dụng nguồn dược liệu để điều trị bệnh tật và chăm sóc sức khoẻ Để đáp ứng nhu cầu sử dụng dược liệu

và các sản phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên đang ngày càng tăng, việc nghiên cứu hoá học và hoạt tính sinh học của các cây thuốc nhằm đóng góp vào việc sử dụng hợp lý và có hiệu quả cây thuốc cũng như tiêu chuẩn hoá cây thuốc và tìm ra các hợp chất có hoạt tính sinh học có giá trị có vai trò đặc biệt quan trọng

Nước ta có thảm thực vật đa dạng và phong phú Theo con số thống kê gần đây, hiện nay Việt Nam có 337 họ cây với 2.342 chi và 10.585 loài, trong số đó có 3.800 loài thực vật được dùng làm thuốc Với xu hướng nghiên cứu chung trên thế giới, việc đi sâu nghiên cứu tìm kiếm những hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học có giá trị dựa trên nền y học cổ truyền đang được các nhà khoa

học rất quan tâm Các loài cây thuộc họ Cáng lò (Betulaceae) và họ Gừng (Zingiberaceae), từ lâu đã

là đối tượng được các nhà khoa học thuộc lĩnh vực các hợp chất thiên nhiên trên thế giới đặc biệt quan tâm, bởi chúng thường chứa các lớp chất như tecpenoit, diarylheptanoit, flavonoit,… với nhiều hoạt tính sinh học lý thú

Trong luận án này, chúng tôi lựa chọn 4 loài cây thuộc họ Cáng lò (Betulaceae) và họ Gừng (Zingiberaceae), là những cây thuộc loại hiếm hoặc mới chỉ được phát hiện gần đây ở nước

ta và chưa được nghiên cứu về thành phần hoá học làm đối tượng nghiên cứu: Tống quán sủi

(Alnus nepalensis D Don), Cáng lò (Betula alnoides Buch.-Ham ex D Don), Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I Theilade), Riềng maclurei (Alpinia maclurei Merr.) Những nội

dung chính của luận án là:

1 Xây dựng quy trình chiết và điều chế các phần chiết

2 Phân tích sắc ký các phần chiết, xây dựng các quy trình phân tách và phân lập

3 Phân tách sắc ký các phần chiết và phân lập các hợp chất thành phần

4 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được

5 Đánh giá hoạt tính sinh học của một số hợp chất có cấu trúc tecpenoit và steroit nhận được trong khuôn khổ của luận án

Chương 1 TỔNG QUAN

1.1 THỰC VẬT HỌC, NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÁC

LOÀI ALNUS VÀ BETULA (BETULACEAE)

1.1.1 Vài nét về thực vật học của chi Alnus và chi Betula [98]

Họ Betulaceae có 6 chi với khoảng 150-200 loài Trung Quốc là nước có đủ cả 6 chi với 89

loài, trong số đó có một chi và 56 loài đặc hữu Các chi của họ Betulaceae gồm: Corylus,

Ostryopsis, Carpinus, Ostrya, Alnus và Betula, trong đó Alnus và Betula là 2 chi lớn nhất trong họ

Chi Alnus có khoảng 40 loài Các loài Alnus được phân bố rộng khắp ở Bangladesh, Bhutan, Trung Quốc, Ấn Độ, Nhật Bản, Hàn Quốc, Nepal, châu Âu, Bắc và Nam Mỹ A incana thường thấy phổ biến ở Bắc Âu, A viridis được tìm thấy chủ yếu ở vùng đồng cỏ của Thuỵ Sĩ (Alps), trong khi đó A cordata lại tìm thấy ở miền nam và miền tây nước Ý [52] Alnus glutinosa

xuất hiện phổ biến ở một số nước Bắc Phi và các nước có khí hậu ôn hoà ở châu Á, châu Âu [128]

Các loài Alnus nepalensis được phân bố rộng khắp từ Pakistan qua Nepan, Bhutan tới Vân Nam,

tây nam Trung Quốc, Miến Điện và tới một phần Ấn Độ Ở nước ta, cây mọc ở trong rừng khô vùng Sapa (Lào Cai)

Các loài Alnus phổ biến là: A acuminata, A cordata, A glutinosa, A incana, A sinuata, A

rugosa, A maximowiczii, A tenuifolia, A hirsuta, A fruticosa, A mandshurica, A japonica,

9

A kamtschatica, A crispa, A viridis, A sieboldiana, A serrulatoides, A rubra, A cordata, A maritim, A oblongifolia, A rhombifolia,…

Chi Betula có khoảng 50-60 loài Các loài Betula được phân bố rộng khắp ở Afghanistan,

Trung Quốc, Nhật Bản, Kazakstan, Hàn Quốc, Kyrgyzstan, Mông Cổ, Nepal, Nga, Ấn Độ, châu

Âu, Bắc và Nam Mỹ B pendula Roth (cáng lò bạc) và B pubescens Ehrh được phân bố rộng rãi ở Scandinavia và Bắc Âu, trong khi B utilis lại được tìm thấy ở Himalaya,… Ở Thổ Nhĩ Kỳ, có 5 loài Betula được phân bố ở phía đông và đông bắc, trong đó Betula litwinowii Doluch là một loài

với đặc điểm là có vỏ thân cây có màu trắng hồng [38, 101, 150]

Một số loài Betula: B pendula, B papyrifera, B nigra, B alleghaniensis, B glandulosa, B

pubescens, B platyphylla, B albosinensis, B maximowicziana, B schmidtii, B neoalaskana, B populifolia, B nana, B humilis, B ermanii, B fruticosa, B lenta, B occidentalis, B utilis, B uber,

B davurica, B costata, B alnoides, B pumila,…

1.1.2 Nghiên cứu hoá học chi Alnus

Từ một số bộ phận như phấn hoa, hạt,… của loài Alnus glutinosa người ta đã phân lập

được một số diarylheptanoit, flavonoit, sterol và các axit [52, 113, 115, 128, 135]

Năm 1978, 4ʹ,5ʹ-dihydroxy-3ʹ-metoxy stilben (1) đã lần đầu tiên được tìm thấy từ chồi A

viridis (Chaix) DC [43]

Từ hoa của A pendula đã phân lập được axit alnustic và 7 tritecpenoit kiểu secodammaran,

trong đó có ba chất được phân lập lần đầu tiên là O-(2ʹ-O-axetyl)--D-xylopyranozit (2a),

12-O-(2ʹ-O-axetyl)--D-glucopyranozit của axit alnustic (2b) và axit

(20S)-20-hydroxy-24-metylen-3,4-secodammar-4(28)-en-3-oic (3) [152, 153]

Lá A fruticosa, A kamtschatica và A hirsuta có chứa heptacosan, tetracosanol, lupenon, glutin-5-en-3-ol, hỗn hợp của α- và β-amyrin, β-sitosterol và 1,7-diphenylheptan-3,5-diol [166]

Từ lá và vỏ thân Alnus hirsuta đã phân lập được 12 diarylheptanoit, 4 tritecpenoit, 3

flavonoit Trong số các diarylheptanoit này đáng chú ý nhất là 2 hợp chất tách được từ lá là các

chất lần đầu tiên được tìm thấy trong thực vật:

(5R)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-heptan-5-O-β-D-xylopyranozit (4a), (5R)-l,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)heptan-5-O-β-D-glucopyranozit (4b) và

một số hợp chất có cấu trúc lý thú như 4,17-dimetoxy-2-oxatricyclo[13.2.2.13,7

]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10,16-diol (5), 2-oxatricyclo [13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7

(20),15,17,18-hexaen-10-on, rhoiptelol B (6),… [33, 36, 69, 96]

Lee M W và cộng sự [94] đã phân lập được từ lá Alnus hirsuta var microphylla được 10

hợp chất là oregonin và 9 tanin Trong số các tanin, một ellagitannin được phân lập lần đầu tiên là

hirsunin (7) cùng với các tannin đã biết khác

Từ vỏ A hirsuta var sibirica đã phân lập được 2 diarylheptanoit là dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptan-3-on (hirsutanonol) và (5S)-1,7-bis(3,4-dihydroxyphenyl)-5- (β-D-xylopyranozyloxy)heptan-3-on (oregonin) [95]

(5S)-1,7-bis(3,4-Wollenweber đã phân lập được từ chồi Alnus crispa, A koehnei, A sinuata và A sinuata

các flavonoit: quercetin và các dẫn xuất, các dẫn xuất của kaempferol, rhamnetin, isorhamnetin, rhamnazin, acacetin, salvigenin, các dẫn xuất metyl ete của apigenin, betuletol và genkwanin [175]

Từ loài Alnus japonica nguồn gốc Đức đã phân lập được trên 10 flavonoit, trong số đó chủ

yếu là các dẫn xuất của kaempferol [166, 175]

Cũng loài A japonica nhưng nguồn gốc Nhật Bản thì lại có thành phần chính là các

tritecpenoit, diarylheptanoit và tanin còn flavonoit có phần ít hơn [22, 23, 56, 82, 88, 93, 124, 123]

Từ hoa cây này, người ta đã phân lập được 12 tritecpenoit và 3 diarylheptanoit, trong số đó có 6

tritecpenoit kiểu secodammaran được tìm thấy lần đầu tiên với cấu trúc lý thú như axit

(24E)-3,4-secodammara-4(28),20,24-trien-3,26-dioic (8), axit

(20S,24S)-20,24-dihydroxy-3,4-secodammara-4(28),25-dien-3-oic (9), axit 4(28),23-dien-3-oic (10a), axit (23E)-(20S)-20,25,26-trihydroxy-3,4-secodammara-4(28),23-dien-3-oic

(23E)-(20S)-20,25-dihydroxy-3,4-secodammara-(10b) [22, 23] Từ lá của cây này lại thu được 8 diarylheptanoit, 3 flavonoit và 14 tanin thủy phân,

trong số đó, đáng kể nhất là 3 diarylheptanoit được phân lập lần đầu tiên:

1-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-7-(4-hydroxyphenyl)-3-heptanon-5-O-β-D-xylopyranozit (11a),

1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-3-heptanon-5-O-[2-(2-metylbutenoyl)]-β-D-xylopyranozit (11b) và

1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-metoxy-3-heptanon (11c) cùng với hai tanin thủy phân cũng lần đầu tiên được phát hiện là alnusjaponin A (12) và alnusjaponin B (13) [88, 93]

Loài Alnus japonica Steudel nguồn gốc Nhật bản, Hàn Quốc ngoài thành phần chính là các

diarylheptanoit, tritecpenoit còn có thêm một số lớp chất khác [56, 82, 124, 123] Từ gỗ của cây này đã phân lập được 7 diarylheptanoit, trong số đó có 5 chất có cấu trúc vòng biarylheptanoit, 4 hợp chất phenolic, 4 steroit và 3 tritecpenoit [124] Từ vỏ thân của cây này cũng đã phân lập được

14 diarylheptanoit và 2 flavonoit, trong số đó

1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)5-hydroxyheptan-3-O-β-D-xylopyranozit (14) là một diarylheptanoit glycozit mới được phân lập lần đầu tiên [56, 82] và

hai diarylheptanoit vòng hiếm thấy, mới được phân lập từ chi Alnus là oregonoyl A (15) và

oregonoyl B (16) [123]

Thành phần hóa học chủ yếu của A sieboldiana là các tritecpenoit và tanin còn diarylheptanoit và flavonoit lại rất ít [23, 65, 142] Từ hoa của A sieboldiana đã phân lập được 14

tritecpenoit và 1 diarylheptanoit, trong số đó thành phần tritecpenoit chủ yếu là axit alnustic và các

dẫn xuất 12-O-glycozit của axit alnustic [23, 142] Từ lá của loài này người ta đã phân lập được 2

flavonoit và 10 tanin thủy phân, trong số đó có hai ellagitannin được phân lập lần đầu tiên là alnusnin A (17a) và alnusnin B (17b) [65]

Aoki T và cộng sự đã phân lập được từ hoa A serrulatoides 18 hợp chất gồm 13

tritecpenoit và 5 diarylheptanoit [23]

11

Từ lá, hoa, chồi A maximowiczii Call., Tori M và cộng sự [162] đã phân lập được 12 hợp

chất thuộc nhiều lớp chất khác nhau như diarylheptanoit, flavonoit, stilbenoit, sesquitecpenoit và

phenanthren, trong số đó, 1,7-diphenyl-hept-3-en-5-on (18) và 2,3,4-trimetoxyphenanthren (19) là

hai hợp chất lần đầu tiên được phân lập

Vỏ Alnus rubra Bong đã được nghiên cứu và từ vỏ này đã phân lập được 4 diarylheptanoit, trong số đó một chất lần đầu tiên được phân lập là (S)-1,7-bis-(4-hydroxyphenyl)-

heptan-3-on-5-O-β-D-xylopyranozit (20) [32]

Nhận xét

Thành phần hoá học của các loài Alnus rất đa dạng, bao gồm nhiều lớp chất như

diarylheptanoit, tritecpenoit, flavonoit, phenylpropanoit và các dẫn xuất của stilben Tuy nhiên, lớp chất đặc trưng nhất của chi này lại là các diarylheptanoit và các glycozit của chúng Ngoài ra, tanin

cũng là một thành phần quan trọng của một số loài Alnus Các hợp chất này được phân bố ở hầu

hết các bộ phận của cây như lá, cuống hoa, phấn hoa, hạt, chồi, gỗ, cành, vỏ,… Một số loài có

thành phần phong phú và đa dạng cả về số lượng chất cũng như số lớp chất là Alnus hirsuta, A

japonica, A sieboldiana, Các diarylheptanoit có mặt chủ yếu trong các loài này Các loài có

tecpenoit là thành phần chính gồm A sieboldiana, Alnus serrulatoides, A sieboldiana, Loài chứa nhiều tanin là A hirsuta và A japonica

Dưới đây là công thức hoá học của một số hợp chất đã phân lập được từ chi Alnus

OMe

OH OH

3' 4' 5'

1

HO 2 C

RO HO

3

12 20

24 31

28 29

2a 2b

1

4 2

R = 2'-OAc-  - D -pyr

R = 2'-OAc-  - D -glc

31

29 28

24 20

12 3

HO

HO 2 C

3

1 2 4

1 2 3 5

13

14 15 16 17

20

4 4'

4'

7 5 3 1

OH C

HO O

H 2

O O

O O

H

4'

C

OH O

HO2C 3

12 20 24

28 29 1

4 2

9

CH2R OH

HO2C

HO

3

12 20 24

28

29

10a 10b

1

4 2

R = H

R = OH

26 25 23

7 5 3 1

OR1O

C

H2

O C

O O

O

O

O O

HO

O HO

HO

HO OH

C

H2

O C

OH O

O

O

O

O HO

13

H

H O

OH O

H2HO

HO O

H2

O C

O O

OH C

HO

C

HO HO

HO HO

HO

C

C

O OH

OH O

O O

O C

O O

R2

R1O

C C

O

H2O

O

O

C

C HO

19

7 5 3 1

1.1.3 Nghiên cứu hoạt tính sinh học các loài Alnus

Các tritecpenoit và diarylheptanoit được phân lập từ Alnus firma S Z thể hiện hoạt tính ức

chế sự sao chép của virut HIV-1 và kiểm soát các enzym thiết yếu của virut này Dịch chiết

metanol từ lá A firma có khả năng ức chế mạnh tác dụng gây bệnh tế bào gây ra bởi HIV-1 trong

các tế bào MT-4 với nồng độ tối thiểu để ức chế được hoàn toàn là IC= 50 μg/ml Metyl alnustat phân lập được từ cây này có hoạt tính ức chế sự phát triển của virut HIV-1 với IC50= 15,8 μM Các

chất quercetin, quercitrin và myricetin 3-O-β-D-galactopyranozit thể hiện hoạt tính chống HIV-1

với các giá trị IC50 đều bằng 60 μM [184]

Loài A hirsuta có chứa các thành phần thể hiện các hoạt tính chống khối u và chống oxi hóa mạnh [33, 36, 69] Các diarylheptanoit phân lập được từ vỏ cây A hirsuta Turcz có khả năng

ức chế rõ rệt sự sinh tổng hợp melanin trong các tế bào u melanin B16 với các nồng độ 2,5; 5; 10

và 20 μg/ml [33] Sáu hợp chất phenolic phân lập từ lá cây A hirsuta (Spach) Rupr đều thể hiện

khả năng ức chế sự peoxi hóa lipit của ty lạp thể với các giá trị IC50 từ 8,0-173,6 μM, trong số đó, hirsutanonol, hirsutenon và quercetin có khả năng dọn gốc tự do mạnh với giá trị IC50 là 18,3 ± 2,5; 15,7 ± 3,8 và 23,5 ± 3,1 μM [36] Hai diarylheptanoit vòng là 4,17-dimetoxy 2-oxatricyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10,16-diol và 17-metoxy-2-oxatrixyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10-on-4,16-diol được phát hiện là có hoạt tính ức chế mạnh sự hoạt hoá nhân tố cảm ứng sự giảm oxy mô HIF-1 (hypoxia-inducible factor-1)

trong các tế bào AGS với các giá trị IC50 lần lượt là 11,2 và 12,3 μM Ở nồng độ ức chế hiệu quả HIF-1, hai chất này không gây độc đáng kể đối với các tế bào AGS và sẽ là hai ứng viên chống ung thư mới thông qua hoạt tính cảm ứng sự giảm oxy mô HIF-1 [69]

Theo M W Lee và cộng sự [95] hai diarylheptanoit, oregonin và hisutanonol được phân

lập từ vỏ cây Alnus hirsuta var sibirica đều có tác dụng ức chế mạnh sự biểu hiện của xyclooxygenaza-2 (COX-2) gây ra bởi 12-O-tetradecanoylphorbol-13-axetat (TPA) trong các tế

bào biểu mô vú ở người MCF-10A

Pedunculagin, một ellagitannin được phân lập từ A hirsuta var microphylla được thử hoạt tính chống khối u in vitro và in vivo [30] In vitro, pedunculagin thể hiện tác dụng độc hại tế bào

phụ thuộc liều lượng đối với các dòng tế bào bệnh bạch cầu mạn tính tạo nên ở tuỷ xương của người (K-562), bệnh bạch cầu tiền tủy bào ở người (HL-60), khối u dạng bạch huyết ở chuột nhắt (P388), bệnh bạch cầu lympho bào ở chuột nhắt (L1210) và sarcoma 180 ở chuột nhắt (S180);

dòng tế bào nhạy cảm nhất là HL-60 In vivo, ở chuột nhắt pedunculagin thể hiện hoạt tính chống

khối u và tỷ lệ T/C (%) của nó là 120,82%

Nhiều diarylheptanoit phân lập được từ loài A japonica có hoạt tính chống khối u, chống

oxi hóa và kháng virut [34, 56, 88, 123] Bảy hợp chất phân lập được từ lá thể hiện hoạt tính chống oxi hoá Kết quả thử này cũng cho thấy cấu trúc catechol của các diarylheptanoit là tuyệt đối cần thiết cho hoạt tính chống oxi hoá [88] 1,7-bis(4-hydroxyphenyl)-3,5-heptandiol, 5-hydroxy-1,7-bis(4-hydroxyphenyl)-3-heptanon, 5,3ʹ-dihydroxy-7,4ʹ-dimetoxyflavon và 3,5,7,3ʹ,4ʹ-pentahydroxy-flavon thể hiện khả năng dọn gốc tự do DPPH với các giá trị IC50 tương ứng là 30,1; 37,4; 20,2 và 13,7 μg/ml [56]

Mười hợp chất được phân lập từ vỏ cây này đều có hoạt tính gây độc tế bào mạnh đối với dòng tế bào ung thư dạ dày SNU-1 ở người và dòng tế bào u melanin B16 ở chuột Đặc biệt, ngoài

hai dòng tế bào trên platyphyllozit và hirsutanonol còn thể hiện hoạt tính gây độc tế bào đối với

dòng tế bào ung thư gan SNU-354 và ung thư trực tràng SNU-C4 ở người [34]

Cũng từ vỏ cây này, ba diarylheptanoit được phát hiện có hoạt tính kháng virut cúm gia cầm KBNF-0028 (H9N2), trong số đó, chất có hoạt tính mạnh là platyphyllon với SI> 26,6, platyphylonol-xylopyranozit có hoạt tính ở mức độ trung bình với SI>10, và platyphyllozit lại có

hoạt tính yếu với SI >5 [123]

1.1.4 Nghiên cứu hoá học chi Betula

Khảo sát bằng GC-MS đã cho thấy tinh dầu của các loài Betula có thành phần rất phong phú và thành phần chính thường là các sesquitecpen như α-copaen (10-12%), germacren D (11%- 18%), δ-cadinen (11%-15%),… [30] Từ tinh dầu của một số loài Betula như B litwinowii, B

pendula Roth., B browicziana,… người ta đã phân lập được các dẫn xuất caryophyllen [27, 38]

Từ vỏ thân và từ gỗ Betula papyrifera đã phân lập được 6 diarylheptanoit, 7 tritecpenoit, 4

flavonoit, cùng một số hợp chất thuộc các lớp chất khác như steroit, lignan, chalvicol glycozit,… [119,

15

146]; trong số đó, papyriferozit A

[(S)-1,7-bis-(4-hydroxyphenyl)heptan-3-on-5-O-α-L-arabinofuranozyl-(1→6)-β-D-glucopyranozit] (21) là chất lần đầu tiên được phân lập [119]

Từ lá Betula platyphylla đã phân lập được 9 diarylheptanoit, 5 tritecpenoit và 5

arylbutanoit, trong số đó có hai chất mới là axit

1-[(2R)-4-(4-hydroxyphenyl)-2-butanol-2-O-β-D-glucopyranozyl]-3-hydroxy-3-metylglutaric (22) và heptanon-5-O-[2,6-bis-O-(β-D-apiofuranozyl)-β-D-glucopyranozit] (23) [55, 64, 85]

(5S)-5-hydroxy-1,7-bis-(4-hydroxyphenyl)-3-Từ vỏ và hoa Betula platyphylla var japonica đã được chứng minh có chứa tới 20

tritecpenoit, 6 diarylheptanoit, 7 arylbutanoit, 4 lignan và 2 flavonoit [74, 107]; trong số đó có 4

tritecpenoit được phân lập lần đầu tiên là axit seco-olean-4(23),13(18)-dien-3-oic (24), axit

3,4-seco-urs-4(23),20(30)-dien-3-oic (25), 3-O-metylmalonylepiocotillol (26),

3-O-metylmalonylcabraleahydroxylacton (27) [74], hai diarylheptanoit mới là betulaplatozit Ia (28), betulaplatozit Ib (29) và 1 arylbutanoit mới betulaplatozit II (30) [107]

Từ chồi Betula nigra đã phân lập được 13 flavonoit, chủ yếu là các dẫn xuất của quercetin

và kaempferol, trong số đó có các metoxyflavonoit hiếm: myricetin 3,7,3ʹ,4ʹ,5ʹ-pentametyl ete

(combretol), kaempferol 3,trimetyl ete, quercetin 3,7,3ʹ,4ʹ-tetrametyl ete (retusin), apigenin dimetyl ete [176, 177]

7,4ʹ-Loài Betula pubescens có thành phần chủ yếu là các flavonoit và tritecpenoit, ngoài ra còn

có thêm một số hợp chất thuộc các lớp chất phenolic và arylbutanoit [129, 130, 132, 133, 161]

Một số hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ vỏ của loài này là

3,4,5-trimetoxyphenyl-6-O-vanilloyl-β-D-glucopyranozit (31a), 3,4,5-trimetoxyphenyl-6-O-syringoyl-β-D-glucopyranozit (31b) [133], 3β-23-dihydroxy-olean-12-en-28-oic axit 3β-caffeat, 3β,23-dihydroxy-olean-12-en-

28-oic 23-caffeat và 3β,23-dihydroxy-lup-20(29)-en-28-oicaxit 3β-caffeat [132]

Thành phần hóa học của loài B pendula rất phong phú và đa dạng với nhiều lớp chất như

diarylheptanoit, phenylbutanoit, arylbutanoit, hợp chất phenolic, lignan glycozit và flavonoit [62, 75,

101, 130, 149, 150, 161] Các flavonoit của loài này chủ yếu là các dẫn xuất của quercetin và

myricetin [75, 161] Hai phenylbutanoit mới được phân lập từ vỏ thân là 7-{3R-[(4-hydroxyphenyl) butyl] β-glucopyranozit-O-6-yl} 4-O-β-glucopyranozyl-vanillin (32) và 3-β-glucopyranozyloxy-1-(4-

hydroxyphenyl)butanon (33) [101]

Cũng từ vỏ loài này, Smite E và cộng sự [150] đã phân lập được (-)-rhododendrol (34a),

platyphyllon (35a) và các glycozit của chúng; trong số đó (2R)-4-(4-hydroxyphenyl)-butanol

Lớp chất chính đã phân lập được từ vỏ và gỗ của các loài Betula lenta, B alleghaniensis, B

ermanii là các tritecpenoit với các hợp chất đặc trưng: betulin, lupeol, axit axetyl oleanolic, axit

betulinic, axit oleanolic, procyanidin,… [146, 181]

Từ vỏ Betula alnoides Dcne (Việt Nam), Kamperdic C và cộng sự đã phân lập được các tritecpenoit là lupeol, axit 3-O-axetoxyoleanolic cùng hỗn hợp của betulin và axit betulinic [73]

Thành phần hóa học của một số loài như Betula alba, vỏ B utilis, cành B nana, phấn hoa

B verrucosa, nhánh B glandulosa, đã được công bố chỉ gồm một vài tritecpenoit hoặc

arylbutanoit hoặc chất có cấu trúc đơn giản khác [44, 76, 115, 140, 174, 189]

Hanawa F và cộng sự đã phân lập được từ gỗ Betula maximowicziana 2 diarylheptanoit

và 2 lignan; trong số đó

(-)-rel-(pR,3S,5S)-3ʹ,4ʺ-epoxy-1-(4-hydroxyphenyl)-7-phenylheptan-3,5-diol (36) là chất được phân lập lần đầu tiên [57]

Nhận xét: Các loài Betula là nguồn nguyên liệu thiên nhiên quan trọng với nhiều lớp chất

Hầu như tất cả các bộ phận của các loài Betula đều có thành phần hoá học phong phú Từ vỏ, các

tritecpenoit năm vòng, hầu hết là kiểu lupan và olean đã được phân lập Các sesquitecpen, đặc biệt

là các dẫn xuất caryophyllen cũng đã được phát hiện và phân lập cùng các lớp chất khác như

arylbutanoit, diarylheptanoit, lignan, glycozit phenolic,…

Dưới đây là công thức hoá học của một số hợp chất phân lập được từ chi Betula

HO

O

H RO

OH HO

23R =  -D-Apif -(1 2)-[  -D- Apif -(1 6)-  -D-Glcp]

H H

H H R

O HO

R = H, OCOCH 2 COOCH 3

26

O O

H

H H R

HO

OGlc OH

28

17

O HO

HO

H 2 C

OH O HO

31a 31b

R = H

R = OMe HO

H O

CH3

O

OH O

OH H OH

3 2 1HO

33

H

OH H

OH O

1.1.5 Nghiên cứu hoạt tính sinh học các loài Betula

Bốn diarylheptanoit được phân lập từ vỏ B platyphylla Sukatchev var japonica (Miq.)

Hara là betulaplatozit Ia (28), betulaplatozit Ib (29),

(5S)-5-hydroxy-1,7-bis-(4-hydroxyphenyl)-3-heptanon 5-O-β-D-apiofuranozyl-(1→6)-β-D-glucopyranozit và acerozit thể hiện rõ rệt tác dụng ức

chế tính độc hại tế bào gây ra bởi D-GalN ở các tế bào gan chuột cống được nuôi cấy bước 1 [107]

Dịch chiết metanol toàn phần của B platyphylla var japonica thể hiện tác dụng bảo vệ

chống lại hydropeoxit ở dòng tế bào nguyên bào sợi phổi chuột túi má Trung Quốc (V 79-4); và gây ra sự chết được chương trình hoá đối với dòng tế bào bạch cầu tiền tuỷ bào ở người (HL-60) Dịch chiết này cũng thể hiện tác dụng mạnh dọn gốc tự do DPPH và khả năng ức chế mạnh sự peoxi hoá lipit (IC50 tương ứng lần lượt là 2,4 μg/ml và < 4,0 μg/ml) [72]

Hai chục tritecpenoit được phân lập từ hoa của B platyphylla var japonica đã được

Y Kashiwada và cộng sự [74] thử hoạt tính gây độc tế bào đối với 6 dòng tế bào ung thư: KB (ung

thư biểu bì - epidermoid carcinoma of the nasopharynx), K562 (bạch cầu - leukemia), MCF7 (ung

thư vú), COLO205 (ung thư ruột kết), KB-C2 ( KB kháng colchicin) và K562/Adr (K562 kháng doxorubicin); trong số các chất được thử này axit betulonic có hoạt tính gây độc tế bào đáng kể đối với 2 dòng tế bào KB và KB-C2 với

IC50 tương ứng là 3,8 và 2,3 μM

Một công trình nghiên cứu về hoạt tính ức chế sự mất hạt gây ra bởi kháng nguyên của các

tế bào RBL-2H3 bởi các hợp chất aryl vừa mới được S H Kim và cộng sự [85] công bố trong năm

2010 Với 4 arylbutanoit và 8 diarylheptanoit được thử thì 6 chất có tác dụng ức chế đáng kể đối

với sự giải phóng β-hexosaminidaza từ các tế bào RBL-2H3, trong số đó, 3 arylbutanoit thể hiện

hoạt tính mạnh hơn chất so sánh quercetin Từ kết quả thử hoạt tính này, tác giả đưa ra nhận xét về mối liên quan giữa cấu trúc và hoạt tính của các arylheptanoit: sự có mặt nhóm cacbonyl ở vị trí C3

và nhóm O-glycozit ở C5, và việc loại nhóm hydroxy ở C5 không thể đóng góp vào hoạt tính ức

chế này

14-Hydroxy-4,5-dihydro-β-caryophyllen thể hiện hoạt tính kháng khuẩn tương đương chất chuẩn cloramphenicol đối với chủng Bacillus cereus với giá trị MIC 125 μg/ml tuy nhiên yếu hơn đối với các chủng Escherichia coli, Staphylococcus aureus và Pseudomonas aeruginosa Chất này cũng thể hiện hoạt tính kháng nấm trung bình đối với Candida glabrata với giá trị MIC 125 μg/ml

và có hoạt tính yếu hơn đối với các chủng nấm gây bệnh ở cây như Drechslera sorokinianse và

Theo kết quả thử của K H C Başer và cộng sự [27], các dẫn xuất caryophyllen được

phân lập từ tinh dầu của một số loài Betula ở Thổ Nhĩ Kỳ thể hiện hoạt tính kháng khuẩn đối với 5 chủng vi khuẩn Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Pseudomonas

aeruginosa, Bacillus cereus và hoạt tính kháng nấm đối với chủng Candida glabrata gây bệnh ở

người cũng như các chủng nấm gây bệnh ở cây như Cephalosporium aphidicola và Rhizoctonia

cerealis

Các tritecpenoit kiểu oleanan được phân lập từ cây B ermani đã được C Yamaguchi và

cộng sự [181] đánh giá về khả năng ức chế lên sự hoạt hoá kháng nguyên sớm của virut

Epstein-Barr (EBV-EA) được cảm ứng bởi 12-O-tetradecanoylphurbol-13-axetat (TPA) Kết quả cho thấy

cả 8 tritecpenoit được thử đều có hoạt tính cao hơn chất so sánh là axit oleanolic một chút Tác giả cũng đưa ra nhận định là hoạt tính chống ung thư của các chất này có thể là do cấu trúc kiểu oleanan (giống axit oleanolic) và nhóm epoxy trong phân tử gây nên

1.1.6 Công dụng của các loài Alnus và Betula trong y dƣợc học

Các loài Alnus thường được sử dụng nhiều trong các bài thuốc dân gian của Trung Quốc,

Hàn Quốc, Thổ Nhĩ Kỳ,… để điều trị nhiều loại bệnh khác nhau như sốt, tiêu chảy, cầm máu và

chứng khó tiêu A japonica Steud được sử dụng để điều trị đau dạ dày, đau gan và gan nhiễm mỡ

[56]

19

Các loài Betula cũng thường được sử dụng trong nhiều bài thuốc dân gian Ở Ấn Độ, vỏ của Betula alnoides Buch Syn được dùng làm thuốc chống viêm [156] Vỏ của B pendula Roth được dùng để trị các bệnh về da và là một thuốc trị sốt [101] Ở Himalaya, vỏ của B utilis được

dùng làm thuốc sát trùng, chữa đầy hơi và chứng quá kích động [69] Ở Ấn Độ và Trung Quốc, vỏ

và lá của một số loài Betula được dùng để trị rắn cắn, trị cảm mạo, đau dạ dày, lỵ và phong thấp

đau xương [1]

1.2 THỰC VẬT HỌC, NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÁC

LOÀI ZINGIBER VÀ ALPINIA (ZINGIBERACEAE)

1.2.1 Vài nét về thực vật học của chi Zingiber và Alpinia [178]

Zingiber là một chi lớn và tương đối phổ biến của họ Gừng (Zingiberaceae) Trong số 53

chi với hơn 1.300 loài cây của họ Gừng, Zingiber có khoảng 100-150 loài Chúng được phân bố

rộng rãi từ phía Đông Á đến vùng nhiệt đới Australia và đặc biệt có nhiều ở Indo-Malaysia [29]

Ở Việt Nam, họ Gừng có 19 chi với khoảng 136-145 loài Các loài Zingiber tương đối

phong phú Một số loài mọc hoang ở các vùng rừng núi, nơi râm mát ở các tỉnh phía bắc Một số

loài được trồng làm cây gia vị ở khắp nơi trên đất nước

Một số loài Zingiber phổ biến: Zingiber officinale, Z nimmonii , Z roseum, Z zerumbet,

Z aromaticum, Z ottensii, Z spectabile, Z malaysianum, Z cassumunar, Z neglectum, Z

mioga,…

Alpinia là chi lớn nhất, phổ biến nhất và được phân loại phức tạp nhất trong họ Gừng với

230 loài, phân bố trên khắp các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới châu Á, Australia và các đảo Thái

Bình Dương Alpinia officinarum là loài cây gia vị được sử dụng rộng rãi ở châu Âu và Trung Quốc hàng nghìn năm nay [21] Alpinia galanga (L.) Willd thì được trồng rộng rãi ở Nam Á [188]

Ở nước ta, chi Alpinia cũng khá phong phú Các loài Alpinia sinh trưởng trong vùng rừng núi ở hầu hết các tỉnh từ Bắc vào Nam Một số loài được coi là đặc hữu như: Alpinia phuthoensis Gagnep (Riềng Phú Thọ), Alpinia tonkinensis Gagnep (Riềng Bắc Bộ), Alpinia breviligulata

Gagnep (Riềng mép ngắn),

Một số loài Alpinia phổ biến: Alpinia abundiflora, A acrostachya, A caerulea (Riềng

Australia), A conchigera, A emaculata, A galanga (Riềng nếp, Riềng ấm), A javanica (Riềng Java), A melanocarpa (Riềng quả đen), A mutica (Riềng lá hẹp), A nutans, A officinarum (Riềng, Riềng thuốc), A petiolata, A purpurata (Riềng đỏ),…

1.2.2 Nghiên cứu hoá học chi Zingiber

a Khảo sát thành phần hoá học của tinh dầu

Thành phần tinh dầu của các cây họ Gừng nói chung cũng như các loài Zingiber nói riêng

đều rất phong phú Bộ phận chủ yếu được dùng để lấy tinh dầu thường là thân rễ, đôi khi còn dùng

lá, hạt,

Tinh dầu Zingiber officinale Thái Lan và Trung Quốc có chứa thành phần chính là

zingiberen với hàm lượng tương ứng 30,81% và 8,0% cùng một số thành phần khác [154] Trong khi

một nghiên cứu khác lại cho thấy thành phần chính của tinh dầu Z officinale là geranial (25,9%)

[148]

Thành phần chính của tinh dầu thân rễ Zingiber nimmonii Dalzell có chứa tới 65 thành

phần, chiếm 97,5% tinh dầu Đây là là loại tinh dầu giàu caryophyllen tự nhiên với 71,2 % secquitecpen, 14,2% secquitecpen được oxy hóa [141]

Tinh dầu hạt Zingiber roseum Rosc có chứa 60 thành phần, chiếm 96,2% lượng tinh dầu Thành phần chính là α-pinen, β-pinen, α-terpineol,… Các mono- và sesquitecpen chiếm 82% tinh

phần gồm 25 chất, chủ yếu là camphen (34,8%), L-linalol (10,1%), geranial (10,89%), … [5]

b Phân lập và khảo sát cấu trúc các hợp chất

Loài Zingiber officinale có thành phần hóa học tương đối phong phú với các lớp chất chủ

yếu là diarylheptanoit, tecpenoit và hợp chất phenolic, [31, 41, 78, 83, 77, 105, 159, 186, 190]

Trong số các tecpenoit này có một chất mới là hydroxycineol-10-O-β-D-glucopyranozit (37) [159]

Hợp chất phenolic chủ yếu gồm các shogaol, gingerol, gingediol và các chất tương tự của chúng

[31, 83, 77, 190] Diarylheptanoit là lớp chất chủ yếu của loài này với nhiều hợp chất mới hoặc hợp chất được phân lập lần đầu tiên [41, 78, 105, 159, 186] Một vài diarylheptanoit vòng được phân lập lần đầu tiên là: 3-axetoxy-l,5-epoxy-l-(3,4-dihydroxy-5-metoxyphenyl)-7-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)heptan

Trong khi đó, thành phần hóa học của Zingiber cassumunar lại gồm các phenylbutanoit,

phenylbutenoit và diarylheptanoit [3, 54, 70, 71, 92, 110, 111, 164] Một số phenylbutanoit được phân

21

lập lần đầu tiên là 4-(3ʹ,4ʹ-dimetoxyphenyl)but-1,3-dien (43), 4-(3ʹ,4ʹ-dimetoxyphenyl)but-3-en

(44), (E)-4-(3ʹ,4ʹ-dimetoxyphenyl)but-3-en-1-yl palmitat (45), [164]

Một số phenylbutenoit mới hoặc được phân lập lần đầu tiên từ loài này là

(±)-cis-1,2-bis[(E)-3,4-dimetoxystyryl]cyclobutan (46) [70], (E)-4-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl) but-2-en-1-ol

(47), (E)-2-hydroxy-4-(3,4-dimetoxyphenyl)but-3-en-1-ol (48) [98] và

(±)-trans-3-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)-4-[(E)-3,4-dimetoxystyryl]cyclohex-1-en (49),

[54, 92]

Các diarylheptenoit lần đầu tiên được phân lập gồm các dẫn chất của curcumin như:

cassumunin A (50a), cassumunin B (50b), cassumunin C (51), cassumunarin A (52), cassumunarin

B (53a), cassumunarin C (53b) [71, 111]

Lớp chất chính của loài Zingiber zerumbet là flavonoit Ngoài ra, còn có một số rất ít hợp

chất thuộc lớp sesquitecpen, steroit và các chất khác [35, 109, 4, 10] Các hợp chất flavonoit của

loài này chủ yếu là các dẫn xuất của kaempferol Trong số đó, có 3 hợp chất được phân lập lần đầu

tiên là 3-O-(2-O-acetyl-α-L-rhamnopyranozit) (54a), 3-O-(3-O-acetyl-α-L-rhamnopyranozit) (54b),

3-O-(4-O-acetyl-α-L-rhamnopyranozit) (54c) [109]

Loài Z zerumbet của Việt Nam có chứa một vài thành phần sesquitecpen, flavonoit và

steroit Trong số các hợp chất phân lập được, đáng lưu ý nhất là zerumbon, một sesquitecpen có

hàm lượng lớn và có hoạt tính chống ung thư [4, 10]

Từ cuống hoa, thân rễ Z mioga Rosc đã phân lập được các ditecpenoit: miogadial, galanal

A, galanal B và galanolacton [191]

Từ thân rễ Zingiber aromaticum đã phân lập được 5 sesquitecpen, 10 flavonoit, 2 hợp chất

phenolic và 1 steroit Trong đó có 3 sesquitecpen mới là

(2R,3S,5R)-2,3-epoxy-6,9-humuladien-5-ol-8-on (55), (2R,3R,5R)-2,3-epoxy-6,9-humuladien-5-ol-8-(2R,3S,5R)-2,3-epoxy-6,9-humuladien-5-ol-8-on (56), (5R)-2,6,9-humulatrien-5-ol-8-(2R,3S,5R)-2,3-epoxy-6,9-humuladien-5-ol-8-on (57)

Các hợp chất flavonoit chủ yếu là các dẫn xuất của kaempferol với 2 chất mới là

kaempferol-3-O-(2,3-di-O-axetyl-α-L-rhamnopyranozit) (58a) và kaempferol-3-O-(2,3,4-tri-O-axetyl-α-L-rhamnopyranozit)

(58b) [165]

Akiyama K và cộng sự đã phân lập được từ thân rễ Zingiber ottensii Val 16 hợp chất

thuộc các lớp chất tecpenoit, diarylheptanoit, flavonoit, Trong đó có 4 tecpenoit mới là

1,10,10-trimetylbicyclo[7,4,0]tridecan-3,6-dion (59), (E)-14-hydroxy-15-norlabda-8(17),12-dien-16-al

(60), (E)-labda-8(17),12,14-trien-15(16)-olit (61), (E)-14,15,16-trinorlabda-8(17),11-dien-13-oic

axit (62) và 1 diarylheptanoit mới là

rel-(3R,5S)-3,5-dihydroxy-1-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)-7-(3,4-dihydroxyphenyl)heptan (63) [16]

Zingiber purpureum Rosc đã được phân tách với thành phần gồm zerumbon, 2 dẫn

xuất của kaempferol, 2 steroit và 1 flavonoit [6]

Từ thân rễ Zingiber eberhardtii Gagnep đã phân lập được một chất gây cay đặc trưng

của gừng là gingerol và daucosterol [5]

Nhận xét:

Zingiber là một chi có thành phần hóa học đa dạng và phong phú với nhiều lớp chất khác

nhau, trong số đó chủ yếu là các tecpenoit, diarylheptanoit, flavonoit và các hợp chất phenolic Tinh dầu của các loài này chủ yếu chứa các sesquitecpen, monotecpen và các dẫn xuất oxy hóa của

chúng Các loài điển hình về sự đa dạng, phong phú trong thành phần hóa học là Zingiber

officinale, Zingiber cassumunar, Zingiber zerumbet,… Bộ phận chủ yếu sử dụng để phân lập các

OH OCH3

OH HO

MeO

CH 3 O

OH OH

OCH3

OCH3OH

OCH 3 OCH 3 R

H

O

55

H OH O

H O

56

H OH O

57

R 1 = H

R 1 = Ac

58b 58a

OH HO

OH

O O O AcO RO

1.2.3 Nghiên cứu hoạt tính sinh học của các loài Zingiber

Loài Zingiber officinale là một đại diện tương đối điển hình về sự đa dạng hoạt tính sinh

học với các hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, chống oxi hóa, chống dị ứng, gây độc tế bào, Các hoạt tính sinh học này chủ yếu là do các lớp chất tecpenoit, diarylheptanoit và hợp chất phenolic tạo nên [31, 41, 83, 91, 159, 186, 190]

Chất diarylheptanoit 1,5-epoxy-3-hydroxy-1-(3-metoxy-4,5-dihydroxyphenyl)-7-

(4-hydroxyphenyl)-heptan (41) được phân lập từ thân rễ loài này thể hiện khả năng ức chế

sự tạo ra các gốc peoxit mạch béo trong gan chuột với tỷ lệ 24% ở 10 μM và 95% ở 20 μM [186]

Ba diarylheptanoit khác 3-metoxybenzen-1,2-diol, 5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)-7-(3,4-dihydroxyphenyl)heptan-3-on và 1,5-epoxy-3-hydroxy-1-(4,5-dihydroxy-3-metoxyphenyl) -7-(3,4-dihydroxyphenyl)heptan có hoạt tính dọn gốc tự do với các giá trị IC50 tương ứng là 48,14; 36,35; 39,89 μM và khả năng ức chế sự tạo ra các gốc peoxit mạch béo trong gan chuột với các giá trị IC50tương ứng là 27,90; 17,08; 21,86 μM [159]

(5-[4-hydroxy-6-(4-hydroxyphenetyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl]-Theo kết quả thử hoạt tính của K Endo và cộng sự [41], gingerenon A có hoạt tính trung

bình kháng coccidium và kháng nấm mạnh đối với chủng Pyricularia oryzae

Năm hợp chất phenolic phân lập được từ loài Zingiber này hexahydrocurcumin,

6-dehydrogingerdion, 10-gingerol, 6-shogaol, 6-gingerol có khả năng ức chế dị ứng yếu đối với dòng

tế bào RBL-2H3 (bệnh bạch cầu ưa bazơ ở chuột) Trong số đó, 6-dehydrogingerdion và 6-shogaol

thể hiện hoạt tính gây độc tế bào với giá trị IC50 tương ứng là 38,5 μM và 90,4 μM Giá trị IC50 của

3 chất còn lại đều trên 100 μM [31]

Hai hợp chất phenolic 6-shogaol và 12-shogaol đã được thử hoạt tính chống oxi hoá bằng phương pháp DPPH, với các chất so sánh là butyl hydroxyanisol (BHA), butyl hydroxytoluen

(BHT) và α-tocopherol Kết quả cho thấy cả hai chất này đều có hoạt tính chống oxi hoá cao hơn

tương ứng là 0,58 μM và 10,7 μM

Ngoài các hoạt tính kháng viêm, chống tổn thương gan và trợ tim, [6]-gingerol hydroxy-3′-metoxyphenyl]-5-hydroxy-3-decanon) đã được chứng minh là có khả năng ức chế quá trình di căn của bệnh ung thư vú ở người MDA-MB-231 [91]

(1-[4′-Zingiber cassumunar cũng là loài có khá nhiều hoạt tính sinh học đáng quý như chống

viêm, chống oxi hóa, chống ung thư,… [54, 68, 71, 92, 111]

Cassumunarin A, cassumunarin B và cassumunarin C được phân lập từ thân rễ loài này thể hiện hoạt tính chống oxi hoá và chống viêm mạnh hơn curcumin [71, 111]

Kết quả nghiên cứu đánh giá hoạt tính chống viêm của (E)-1-(3,4-dimetoxyphenyl)

butadien (DMPDB) cho thấy chất này thể hiện hoạt tính tốt hơn bất cứ loại thuốc chống viêm nào đang được sử dụng [68]

A R Han và cộng sự [54] đã thử hoạt tính gây độc tế bào của hydroxy-3-metoxyphenyl)-4-[(E)-3,4-dimetoxystyryl]cyclohex-1-en (49), (±)-trans-3-(3,4-

(±)-trans-3-(4-dimetoxyphenyl)-4-[(E)-3,4-dimetoxystyryl]cyclohex-1-en (49a), 4-(3,4-dimetoxyphenyl)

but-1,3-dien, 4-(2,4,5-trimetoxyphenyl)but-1,3-dien (49b) với 4 dòng tế bào ung thư người là ung thư phổi

(A549), ung thư ruột kết (Col2), ung thư dạ dày (SNU-638) và ung thư ở tế bào liên kết (HT-1080)

Kết quả cho thấy 2 chất 49 và 49a thể hiện hoạt tính gây độc tế bào ở mức độ trung bình đối với cả

4 dòng tế bào ung thư được thử Chất 49b có hoạt tính chống khối u ác tính ở tế bào liên kết

25

aureus Kết quả cho thấy, (E)-8(17)-epoxylabd-12-en-15,16-dial và galanal A có hoạt tính kháng

khuẩn đối với cả 3 chủng được thử, còn galanolacton thì kháng được 2 chủng vi khuẩn đầu tiên

Với 18 chất phân lập được từ Zingiber aromaticum, T Usia và cộng sự [165] đã thử khả

năng ức chế chuyển hoá bởi các enzym phụ thuộc cytochrom-P450 CYP3A4 hoặc CYP2D6 Kết

quả cho thấy 4 flavonoit có hoạt tính ức chế chuyển hoá bởi CYP3A4, trong đó (2,3,4-tri-O-axetyl-α-L-rhamnopyranozit) có khả năng ức chế mạnh nhất với IC50 14,4 μM, còn

kaempferol-3-O-kaempferol-3-O-metyl ete lại có khả năng ức chế mạnh nhất quá trình chuyển hoá bởi CYP2D6

với IC50 4,63 μM

Hợp chất

rel-(3R,5S)-3,5-dihydroxy-1-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)-7-(3,4-dihydroxyphenyl)heptan, một diarylheptanoit được phân lập từ cây Zingiber ottensii Val có hoạt tính chống oxi hoá mạnh hơn hai chất so sánh là axit L-ascobic và α-tocopherol [16]

Kết quả thử của O Prakash và cộng sự [136] cho thấy tinh dầu hạt Zingiber roseum

Roscoe thể hiện hoạt tính chống co thắt cơ trơn của tá tràng chuột

S Y Chung và cộng sự [35] đã thử hoạt tính gây độc tế bào của 6 dẫn xuất kaempferol

phân lập được từ thân rễ Zingiber zerumbet Smith với dòng tế bào ung thư vú ở người 7/ADR) Kết quả cho thấy, 5 trong số 6 dẫn xuất kaempferol này đều có khả năng ức chế P- glycoprotein (P-gp); trong số đó, kaempferol-3-O-metyl ete và kaempferol-3,4′-O-dimetyl ete thể hiện khả năng ức chế P-glycoprotein (P-gp) mạnh như verapamil, một chất đã biết là có khả năng

(MCF-ức chế P-gp mạnh

Các cặn chiết diclometan và etanol của loài Zingiber eberhardtii Gagnep (Việt Nam)

có hoạt tính kháng 3 vi khuẩn kiểm định Gram (-) E Coli, Gram (+) B subtillis và S

aureus, gingerol còn kháng cả nấm F oxysporum [5]

1.2.4 Nghiên cứu hoá học chi Alpinia

a Khảo sát thành phần hóa học của tinh dầu

Phan Tống Sơn và cộng sự [12] đã thông báo thành phần chính của tinh dầu Alpinia

officinarum Hance (Riềng thuốc) Việt Nam chiếm tới 54,6% là 1,8-cineol

Trịnh Đình Chính và cộng sự [2] đã nghiên cứu tinh dầu của một số loài Alpinia ở Việt Nam như Riềng mép ngắn (A breviligulata Gagnep.), Riềng tàu (A chinensis (Retz.) Roscoe), Riềng nếp (A galanga (L.) Willd.) và Riềng ấm (A speciosa (Wall.) K Schum.) Kết quả cho thấy, thành phần chính của các loại tinh dầu này là -pinen, -pinen, - bisabolen, (E, E)-farnesol, 1,8-cineol,…; trong số đó, thành phần sesquitecpen chiếm tỷ lệ

cao

Tinh dầu hạt và quả của cây A tonkinensis Gagnep (Riềng Bắc Bộ) Việt Nam có các

thành phần chính là farnesol (15,92%), eugenol (14,86%), cinamoyl axetat (9,59%) [9]

b Phân lập và khảo sát cấu trúc các hợp chất

Từ thân rễ loài A officinarum đã phân lập được trên 40 hợp chất, trong số đó chủ yếu là

các diarylheptanoit, một số không nhiều hợp chất phenolic, steroit và các glycozit khác [86,

104, 20, 21, 42, 185, 187] Trong số các chất này có một số được phân lập lần đầu tiên như

6-(2-hydroxyphenyl)-4-metoxy-2-pyron (64), 6-hydroxy-1,7-diphenyl-4-en-3-heptanon (65) [42],

(5S)-5-hydroxy-7-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-phenyl-3-heptanon (66a),

(5R)-5-hydroxy-7-(3-metoxy-4,5-dihydroxyphenyl)-1-phenyl -3-heptanon (66b) [20] và các chất mới là

officinaruminane A (67), officinaruminane B (68),

5(S)-axetoxy-7-(4-dihydroxyphenyl)-1-phenyl-3-heptanon (69) [21], officinin A (70) [187], hepten-3-on (71), 1,7-diphenyl-5-hepten-3-on (72), 4-phenetyl-1,7-diphenyl-1-hepten-3,5-dion (73) [185] Tuy nhiên, thân rễ tươi của loài này ở Việt Nam lại không có diarylheptanoit mà

7-(4ʺ,5ʺ-dihydroxy-3ʺ-metoxyphenyl)-1-phenyl-4-chỉ chứa các hợp chất phenolic và các glycozit [104]

Thành phần hóa học của hạt A blepharocalyx có chứa tới trên 40 diarylheptanoit cùng

một số hợp chất flavonoit, phenolic và steroit [18, 19]

Từ lá và thân rễ Alpinia flabellata đã phân lập được 1 labdan ditecpen, 2 flavonoit và 7

hợp chất phenolic [79, 80]

Từ phần trên mặt đất của A katsumadai, K S Ngo và cộng sự đã phân lập 2

diarylheptanoit và 1 flavonoit [122] Từ hạt của loài này 2 chất mới là isorubrain (74)

và sumadain C (75) đã được phân lập [63]

Quả A oxyphylla có chứa 2 diarylheptanoit yakuchinon A và yakuchinon B, 2 flavonoit

tectochrysin và izalpinin cùng 4 hợp chất tecpenoit mới là oxyphyllon A (76), oxyphyllon B (77), oxyphyllon E (78) và oxyphyllon F (79) [117, 179, 180]

Các loài Alpinia densibracteata, A japonica, A zerumbet, A galanga, trong thành phần hầu như chỉ chứa các tecpenoit Tuy nhiên, từ A galanga đã phân lập được 2 chất mới

là 4,4ʹ[(2E,2ʹE)-bis(prop-2-en)-1,1ʹ-oxy]-diphenyl-7,7ʹ- diaxetat (80) và 1ʹ-axetoxychavicol axetat

(ACA) (81) [67, 89, 157, 188]

Alpinia pricei Hayata chứa một chalcon mới flavokawain B (82) [87]

Thành phần hóa học của một số loài Alpinia của Việt Nam như: Alpinia laosensis Gagnep., A malaccensis,… chỉ chứa các hợp chất phenolic và steroit [13] Từ loài A

tonkinensis Gagnep cũng chỉ phân lập được một hợp chất ditecpen Ngoài các hợp chất

phenolic và steroit, các loài A globosa (Lour.) Horaninov, A gagnepainii K Schum., còn có chứa một số flavonoit, riêng A pinnanensis và A conchigera Griff còn có một vài diarylheptanoit

và một số glycozit [13]

Nhận xét: Các bộ phận được sử dụng của các loài Alpinia bao gồm cả lá, hoa, quả, hạt,

thân rễ Các lớp chất phân lập được từ loài này gồm có diarylheptanoit, tecpenoit, flavonoit,…

Một trong những loài có chứa nhiều tecpenoit là A densibracteata Các loài có chứa nhiều diarylheptanoit nhất là loài A officinarum (thân rễ), A blepharocalyx (hạt),… Một số

27

loài mà trong thành phần chủ yếu chứa các flavonoit là A japonica, A zerumbet, A

galanga, Các flavonoit được phân lập đa số là các dẫn xuất của chalcon, flavanon và

flavanonon… Thành phần hóa học các loài Alpinia của Việt Nam thường chủ yếu là các hợp

chất flavonoit, hợp chất phenolic, steroit và đặc biệt hiếm thấy có diarylheptanoit

Dưới đây là công thức hoá học của một số hợp chất tìm được từ chi Alpinia

R1

OH OH

R 5

HO

O

OH O OH HO

O OH O

74

O OH

O HO

H 3 C

O

O O O

CH 3

80

O

H3C O

81

1.2.5 Nghiên cứu hoạt tính sinh học các loài Alpinia

Nghiên cứu của H Morita và cộng sự [118] cho thấy các ditecpen phân lập được từ

hạt của A galanga có hoạt tính kháng nấm và gây độc tế bào, với các nấm được thử là

Candida albicans, C guilliermondii, C tropicalis và C citilis

Phần chiết toàn phần từ hạt cây A katsumadai có hoạt tính chống oxi hóa đáng kể

Khả năng dọn gốc 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) của phần chiết toàn phần ở giá trị

IC50=1,6 mg/ml Các hợp chất đã biết như (-)-epigallocatechin-3-gallat (EGCG) và resveratrol có các giá trị IC50 lần lượt là < 0,8 và 4,8 mg/ml Phần chiết toàn phần từ A

katsumadai cũng làm tăng khả năng sống được của các tế bào nguyên bào sợi ở phổi V79-4

của chuột hang Trung Quốc và ức chế apoptosis gây ra bởi H2O2 [100]

H Itokawa và cộng sự [66] đã phân lập được thành phần chính có hoạt tính chống

ung thư từ Alpinia galanga Thân rễ của loài này cho các hợp chất 1′-axetoxychavicol axetat

và 1′-axetoxyeugenol axetat, cả hai đều có tác dụng chống ung thư, kìm hãm tế bào u báng

Sarcoma 180 ở chuột

J Yamahara và cộng sự [182] đã thử hoạt tính chống loét của quả Alpinia oxyphylla

Phần chiết axeton ở liều lượng 50 mg/kg thể trọng chuột dùng theo đường uống có thể ức chế được các thương tổn dạ dày đến 57% Nootkaton, thành phần có hoạt tính trong quả của loài này có liều ức chế thương tổn dạ dày là 20 mg/kg thể trọng của chuột

Ba diarylheptanoit 6-hydroxy-1,7-diphenyl-4-en-3-heptanon,

1,7-diphenyl-4-en-3-heptanon, 1,7-diphenyl-5-metoxy-3-heptanon phân lập được từ Alpinia officinarum đều thể hiện

hoạt tính ức chế liên kết thụ thể đối với PAF (yếu tố hoạt hoá tiểu cầu, platelet-activating factor) [42]

Diarylheptanoit 7-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-(4-hydroxy-3-metoxy phenyl)-4-en-3-heptanon

phân lập được từ thân rễ A officinarum Hance thể hiện hoạt tính gây độc tế bào đối với 3 dòng tế

bào ung thư người Hep G2, MCF-7 và SF-268 với IC50 tương ứng là 6, 7 và 10 μM/ml [20]

Ba monotecpenoit phân lập từ hạt Alpinia katsumadai đã được S Z Hua [63] thử hoạt tính

gây độc tế bào với 3 dòng tế bào ung thư người HepG2 (ung thư gan), MCF-7 và MAD-MB-435

(ung thư vú) Kết quả cho thấy sumadain C (75) có hoạt tính gây độc tế bào với cả 3 dòng được thử

với các giá trị IC50 13,0; 15,93 và 12,78 μg/ml

Diarylheptanoit 7-(4ʺ-hydroxy-3ʺ-metoxyphenyl)-1-phenylhept-4-en-3-on và 2 flavonoit (kaempferit, galangin) thể hiện hoạt tính gây độc tế bào đối với dòng tế bào u melamin ở chuột B16 với các giá trị IC50 là 10 μM, 16 μM và 17 μM Các diarylheptanoit 5-hydroxy-1,7-

29

diphenyl-3-heptanon, 5-hydroxy-7-(4ʺ-hydroxy-3ʺ-metoxyphenyl)-1-phenyl-3-heptanon và dihydroxy-1,7-diphenylheptan thể hiện hoạt tính này với IC50 từ

3,5-30-48 μM [108]

Gần đây, Y F Kuo và cộng sự [87] đã phân lập được flavokawain B (82) từ thân rễ

Alpinia pricei Hayata và phát hiện chất này thể hiện hoạt tính gây độc tế bào tương đối mạnh với

dòng tế bào ung thư ruột kết

Mười ba diarylheptanoit được phân lập từ thân rễ A officinarum Hance [185] đều thể hiện hoạt tính kháng khuẩn với chủng Helicobactor pylori Đặc biệt 3 diarylheptanoit là 7-(4ʺ,5ʺ-

dihydroxy-3ʺ-metoxyphenyl)-1-phenyl-4-hepten-3-on (71), 4-phenetyl-1,7-diphenyl

-1-hepten-3,5-dion (72) và 1,7-diphenyl-5-hepten-3-on có hoạt tính mạnh với cả chủng Hp-Sydney strain 1 lẫn

chủng Hp-F44 với các giá trị MIC tương ứng là 9-12 μg/ml và 25-30 μg/ml

1.2.6 Công dụng của các loài Zingiber và Alpinia trong y dƣợc học

Ở các nước nhiệt đới, nhiều loài Zingiber được dùng trong các bài thuốc dân tộc, mà

Zingiber cassumunar Roxb (tên tiếng Việt: gừng dại) và Zingiber officinale (Willd.) Roscoe (tên

tiếng Việt: gừng) là các thí dụ Ở Việt Nam và Trung Quốc, rễ gừng tươi được dùng để trị bệnh đổ

mồ hôi, trị cảm lạnh, chống nôn và tiêu độc Rễ khô đã xử lý được dùng để trị cảm lạnh, chữa đau bụng, dạ dày, tiêu chảy do cảm lạnh, ho, thấp khớp và nhiều bệnh khác Trong các bài thuốc dân tộc của Ấn Độ, gừng được dùng để trị cảm lạnh, chống nôn, hen xuyễn, ho, đau bụng, đánh trống ngực, sưng đau, khó tiêu, chán ăn và thấp khớp [29]

Các loài Alpinia được sử dụng phổ biến trong các bài thuốc dân gian của nhiều nước để điều trị nhiều loại bệnh Ví dụ, A officinarum dùng để trị bệnh đau dạ dày, buồn nôn, khó tiêu,

viêm loét tá tràng, viêm ruột non, nhiễm trùng, cảm lạnh, tăng cường tuần hoàn máu và giảm sưng

viêm [20, 21, 42] Hạt A katsumadai Hayata được sử dụng làm thuốc chống nôn, chữa đau dạ dày

và được đưa vào dược điển Trung Quốc như một thuốc dễ tiêu [63] A calcarata được dùng để điều trị bệnh tiểu đường, thấp khớp, sốt và đau dạ dày [61] A oxyphylla Miq được dùng để điều

trị các bệnh rối loạn đường ruột, tiểu tiện, ung nhọt, tâm thần phân liệt [179]

1.3 TỔNG QUAN VỀ CÁC CÂY NGHIÊN CỨU TRONG LUẬN ÁN

1.3.1 Cây Tống quán sủi (Alnus nepalensis D Don) [1, 8]

Tống quán sủi là cây thân gỗ, cao 8-15m (có thể cao tới 30m), vỏ dày có màu xám bạc Cành nhẵn, dài, chẽ ba cứng Cành non có lông sét, cành già không lông, nâu Lá mọc so le, phiến bầu dục, xoan ngược, dài 4-16 cm, rộng 2,5-10 cm, mép nguyên hoặc hơi có răng cưa, gân phụ có

13 cặp, mặt dưới có lông, nách lá có gân, mặt trên không có lông, cuống lá to, dài 1-2 cm, lá bẹ mau rụng Hoa đực đuôi sóc dài tới 10-16 cm, đường kính 3-5 mm, 3 hoa ở nách một lá bắc, nhị 4 Hoa cái thành bông ngắn, mang 5-8 cái ở nách lá, hình thuôn, đuôi sóc dài 10-17 mm, rộng 6-7

mm, cuống hoa dài 3-6 mm Cụm quả dạng chuỳ cứng, quả dẹp có cánh mỏng, hạt 1 Ảnh lá, hoa

và cành cây xem Hình 1.1

Hình 1.1: Lá, hoa và cành cây Tống quán sủi (Alnus nepalensis D Don)

Cây Tống quán sủi phân bố rộng rãi ở Ấn Độ, Nepan, Mianma, Trung Quốc, Việt Nam Ở nước ta, chúng thường mọc hoang trong các rừng khô vùng Lào cai, Sapa Ở Vân nam Trung Quốc, người ta thường dùng vỏ để chữa thuỷ thũng, lỵ, trực khuẩn, ỉa chảy, viêm phổi, phong, thấp, đau nhức xương, gãy xương, đòn ngã tổn thương, lở sơn, có nơi chữa viêm gan, chảy máu mũi

Theo sự tra cứu của chúng tôi, cho đến nay chưa có một công trình khoa học nào công bố

về thành phần hoá học cũng như hoạt tính sinh học của cây Tống quán sủi (Alnus nepalensis D

Don)

1.3.2 Cây Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don) [1, 8]

Cáng lò là cây gỗ nhỏ, thân thẳng tròn, vỏ ngoài màu nâu xám, bong ra từng mảng, thịt vỏ màu nâu, mùi thơm hắc Lá có phiến xoan, đầu nhọn, đáy tròn hay hình tim, dài 8-14 cm, rộng 4-6

cm, mép có răng cưa nhọn, gân phụ 10-12 cặp, lúc khô màu nâu đỏ, có lông chói mặt trên, mặt dưới nâu đỏ, cuống dài 1,5 cm Bông hoa đực hình đuôi sóc, hoa đực có chỉ nhị dính từng cặp Hoa cái xếp thành cụm, 2-3 hoa ở nách lá bắc Quả nhỏ thuôn, có cánh to, có lông Hoa tháng 1 Ảnh lá, hoa và cành cây xem Hình 1.2

Cáng lò được phân bố rộng rãi ở hầu hết các vùng phía Nam của Bắc bán cầu Đây là loài cây bản địa của các nước Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Miến Điện, Ấn Độ, Nepal và

Hình 1.2: Lá, hoa và cành cây Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don)

Việt Nam Ở Việt Nam, Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don) được phân bố ở các tỉnh

vùng núi phía Bắc như Lạng Sơn, Sơn La, Lai Châu, Hà Giang, Tuyên Quang, Cao Bằng, cùng

31

một số khu vực khác của Tây Nguyên Ở Ấn Độ, người ta dùng vỏ, lá làm thuốc trị rắn cắn Ở Trung Quốc, vỏ cây dùng trị cảm mạo, đau dạ dày, lỵ và phong

thấp đau xương

Về thành phần hoá học của cây Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don), theo sự

tra cứu của chúng tôi cho đến nay mới chỉ có một công trình khoa học dưới dạng thông báo ngắn

công bố trong vỏ cây này có 2 tritecpenoit là lupeol và axit 3-O-axetoxyoleanolic cùng một hỗn hợp

của betulin và axit betulinic [73]

1.3.3 Cây Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I Theilade) [114, 160, 178]

Hình 1.3: Ảnh cây, hoa và lát cắt thân rễ của cây Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I

Theilade)

Gừng môi tím đốm là cây thảo, cao 1-2 m Lá có phiến hình mác, dài rộng 25-30 x 6-8,5

cm, 2 mặt không lông trừ gân chính mặt dưới có lông thưa mảnh; lưỡi lá dài 3-5 mm; cuống lá 4-8

mm Cụm hoa 1-2, mọc sát gốc thân có lá Đài hoa trắng hồng, xẻ xiên 1 bên, tràng trắng, không lông; cánh môi nhiều đốm tím, 3 thùy, thùy giữa to hơn 2 thùy bên nhiều; trung đới kéo dài lên trên, dài 0,8-1 cm Bầu hình trụ, cao 2-2,5 mm, không lông Quả chưa biết Ảnh cây, hoa và lát cắt thân rễ của cây xem Hình 1.3

Ở Việt Nam, cây Gừng môi tím đốm thường mọc hoang ở những chỗ râm mát trong rừng thuộc các tỉnh như Gia Lai, Tây Nguyên,…

Cho đến nay, chưa có một công trình khoa học nào công bố về thành phần hoá học cũng

như hoạt tính sinh học của cây Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I Theilade)

1.3.4 Cây Riềng maclurei (Alpinia maclurei Merr.) [102, 114, 178]

Riềng maclurei là cây thảo, cao 1-2 m Phiến lá dạng mác, dài rộng 30-50 (80) x 8-10 (20)

cm, mặt trên xanh, mặt dưới có lông trắng mềm; cuống lá dài 1-5 cm; lưỡi lá dài 1-2 cm Cụm hoa thẳng hay nghiêng, dài 30-40 (50) cm, cụm hoa có nhánh, mhánh dài 1,5-3 (5) cm, hoa đính rải trên nhánh, mỗi nhánh 3-5 hoa Đài hoa dạng ống, 6-10 mm, trên xẻ xiên ngắn; tràng trắng, ngoài

có lông tơ, trên 3 thùy thuôn, trắng, đầu đỏ; cánh môi vàng ngà, 1,6-1,8 x 1,2-1,4 cm, hình trứng rộng, dọc 2 bên cánh môi có 2 dải nâu đỏ do các sọc ngang xếp thành Bầu nhỏ, xanh, gần như

Hoa và lát cắt thân rễ Cây có hoa

tròn, đường kính 1,7-2 mm, có lông trắng Quả nang hình cầu, đường kính đến 1 cm, vỏ mỏng, dễ

vỡ Ảnh hoa và lá của cây xem Hình 1.4

Hình 1.4: Ảnh hoa và lá cây Riềng maclurei

Riềng maclurei được phân bố ở các vùng rừng núi thuộc một số tỉnh của Trung Quốc và Việt Nam Riềng maclurei được dùng trong một số bài thuốc dân gian của Trung Quốc

Cho đến nay, chưa có một công trình khoa học nào công bố về thành phần hoá học cũng

như hoạt tính sinh học của cây Riềng maclurei (Alpinia maclurei Merr.)

Chương 2 PHƯƠNG PHÁP VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU CHẾ CÁC PHẦN CHIẾT

Đối tượng nghiên cứu của luận án là:

1 – Tống quán sủi (Alnus nepalensis D Don);

2 – Cáng lò (Betula alnoides Buch -Ham ex D Don);

3 – Gừng môi tím đốm (Zingiber peninsulare I Theilade); và

4 – Riềng maclurei (Alpinia maclurei Merr.)

Bột nguyên liệu khô được ngâm chiết với metanol ở nhiệt độ phòng rồi phân bố chọn lọc

trong các dung môi thích hợp, thường dùng là n-hexan, diclometan, etyl axetat và n-butanol để thu

được các phần chiết tương ứng

2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH, PHÂN TÁCH CÁC HỖN HỢP VÀ PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT

33

- Dùng thuốc thử xeri sunphat: Thuốc thử được điều chế bằng cách hoà tan 2,5 g Ce(SO4)2.4H2O và 5 g axit photphomolipdic trong 12 ml axit sunphuric đặc, sau đó thêm nước cất đến 200 ml Thuốc thử xeri sunphat cho các vệt chất màu xanh đen

2.2.2 Sắc ký cột (CC và FC)

Chất hấp phụ dùng cho CC và FC là silica gel (Merck) với các cỡ hạt khác nhau: cỡ hạt 0,063-0,200 mm; 0,063-0,100 mm; 0,040-0,063 mm và 0,015- 0,040 mm Sắc ký cột CC được thực hiện dưới trọng lực của dung môi Sắc ký cột FC được sử dụng không khí nén với áp suất từ 0,2-0,3 bar để đẩy dung môi chạy qua cột sắc ký

2.2.3 Kết tinh lại

Chất cần kết tinh lại được hoà tan trong dung môi hoặc hỗn hợp dung môi, lọc bỏ tạp chất không tan rồi để bay hơi bớt dung môi, làm lạnh hoặc thêm dung môi ít hoà tan vào để tạo tinh thể

2.3 CÁC PHƯƠNG PHÁP KHẢO SÁT CẤU TRÖC CÁC HỢP CHẤT

Đã sử dụng kết hợp phương pháp đo điểm nóng chảy, độ quay cực với các phương pháp phổ để khảo sát cấu trúc các hợp chất: phổ khối lượng va chạm electron (EI-MS), phổ khối lượng ion hóa phun bụi điện tử (ESI-MS), phổ khối lượng phân giải cao (HR-ESI-MS và HR-APCI-MS), phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (1D NMR) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều (2D NMR)

- Phổ khối lượng phân giải cao HR-ESI-MS được ghi trên máy Thermo Fischer Scientific LTQ Orbitrap XL mass spectrometer

- Các phổ 1H-NMR, HSQC, HMBC, COSY, NOESY (500 MHz), 13C-NMR/DEPT (125 MHz) được ghi trên thiết bị Bruker Avance 500 với TMS (tetrametylsilan) là chất chuẩn nội

2.4 PHƯƠNG PHÁP THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC

Một số hợp chất tecpenoit và steroit phân lập được từ các loài cây được nghiên cứu trong

luận án đã được khảo sát in vitro về hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định theo phương pháp của

Vanden Berghe và Vlietinck [168, 169]

Chương 3 PHẦN THỰC NGHIỆM

3.1 NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC CÂY TỐNG QUÁN SỦI (ALNUS NEPALENSIS D Don)

3.1.1 Nguyên liệu thực vật

Mẫu cây Tống quán sủi (Alnus nepalensis D Don) được TS Trần Ngọc Ninh, Viện Sinh

thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, thu thập theo hai thời điểm tại vùng núi thuộc huyện Đồng Văn, tỉnh Hà Giang, mẫu 1: tháng 7 năm 2006, và mẫu 2: tháng 6 năm 2007

Các mẫu cây sau khi thu hái được tách riêng thành 3 bộ phận: lá, cành con và vỏ cành Phần lá được phơi trong bóng râm, sấy ở nhiệt độ 45 oC đến khô và xay thành bột mịn Cành to được tách riêng lấy phần vỏ, phơi và sấy khô ở 45 oC sau đó xay thành bột mịn Cành con được cắt ngắn, phơi và sấy khô ở 45 o

C

Khối lượng khô của các mẫu Tống quán sủi được ghi trong Bảng 4.1, phần Kết quả và Thảo luận

3.1.2 Điều chế các phần chiết từ các mẫu cây Tống quán sủi

Các bộ phận lá, cành con và vỏ cành của 2 mẫu Tống quán sủi được ngâm chiết riêng rẽ trong metanol ở nhiệt độ phòng trong vòng 3 ngày, sau đó lọc lấy dịch chiết Phần bã được ngâm tiếp với metanol, và việc ngâm chiết được lặp lại khoảng 4-5 lần Các dịch lọc metanol của từng bộ phận được gộp lại, cất loại metanol thu được các phần chiết metanol Pha thêm nước cất vào các

phần chiết metanol này để được các dịch cô metanol-nước và tiến hành phân bố hai pha lỏng với

n-hexan, diclometan, etyl axetat và hoặc n-butanol để thu các phần chiết tương ứng của lá (ALHI,

ALHII, ALDII, ALEI, ALEII, ALBII), cành con (ACHI, ACHII, ACDI, ACDII, ACEI, ACEII) và vỏ cành (AVHI, AVHII, AVDI, AVDII, AVEI và AVEII)

Khối lượng và hiệu suất thu nhận các phần chiết được ghi cụ thể trong Bảng 4.1, phần Kết quả và Thảo luận

3.1.3 Phân tách các phần chiết của cây Tống quán sủi

3.1.3.1 Phân tách các phần chiết từ lá cây Tống quán sủi

a Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của mẫu 1

22 g phần chiết n-hexan (ALHI) được hoà tan bằng một lượng diclometan vừa đủ

để tan hết, thêm 33 g silica gel (cỡ hạt 0,063-0,200 mm) vào, đảo đều đến khi bay hơi hết dung môi, thu được hỗn hợp bột tơi mịn màu xanh đen Hỗn hợp chất đã tẩm trên silica gel được phân tách bằng sắc ký cột CC trên chất hấp phụ silica gel Cột được nhồi ướt với 350 g silica gel (0,063-

0,200 mm) trong dung môi n-hexan và để ổn định qua đêm Dung môi chạy cột là n-hexan và hệ

35

dung môi n-hexan-etyl axetat građien 7:1, 4:1, 2:1, 1:1 (v/v) Kết quả thu được 31 phân đoạn, mỗi

phân đoạn 150 ml Dựa trên kết quả khảo sát sắc ký lớp mỏng, các phân đoạn này được gộp thành

14 nhóm phân đoạn từ ALHI1 đến ALHI14

Nhóm phân đoạn ALHI1 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel

(0,063-0,200 mm) với hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 90:1, cho A1 (21,3 mg) Nhóm phân đoạn ALHI2

được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,200 mm) với hệ dung môi

n-hexan-etyl axetat 90:1, 70:1 và 49:1 cho A1 (50 mg), A2 (2,2 mg) và A3 (30 mg) Nhóm phân đoạn

ALHI3 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,200 mm), hệ dung môi

hexaetyl axetat 30:1-7:1 cho A3 (28 mg) Các nhóm phân đoạn ALHI4 và ALHI5 được rửa hexan sau đó kết tinh lại trong hệ dung môi n-hexan-etyl axetat cho A3 (49 mg và 40,5 mg) Nhóm

phân đoạn ALHI6 được phân tách tiếp bằng CC trên silica gel (0,063-0,200 mm), hệ dung môi

n-hexan-etyl axetat 30:1- 4:1 cho A4 (8 mg)

Quá trình phân tách phần chiết n-hexan từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi được trình bày

trên Sơ đồ 3.1

b Phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 1

8 g phần chiết etyl axetat (ALEI) được hòa tan trong một lượng axeton vừa đủ Thêm 12 g

silica gel (0,063-0,200 mm) để tẩm bằng cách nghiền, trộn đều đến khi bay hết dung môi Cột được nhồi ướt với 150 g silica gel (0,063-0,200 mm) trong diclometan Cột sắc ký (CC) được triển khai với hệ dung môi diclometan-metanol građien thu được 60 phân đoạn, mỗi phân đoạn 30 ml Các phân đoạn này được gộp thành 9 nhóm phân đoạn từ ALEI1 đến ALEI9

Nhóm phân đoạn ALEI7 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel 0,200 mm), hệ dung môi diclometan-axeton 19:1, 9:1, 6:1, 4:1, 2:1, 1:1, sau đó tinh chế bằng sắc

(0,063-ký cột FC trên silica gel (0,040-0,063 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 1:1 hoặc kết tinh lại

trong axeton cho A5 (26 mg) và A6 (25 mg) Nhóm phân đoạn ALEI9

được phân tách 2 lần bằng sắc ký cột CC trên chất hấp phụ silica gel và kết tinh lại trong

CC, Si gel, H/E 30:1→ 4:1

ALHI0

0,41g

ALHI7-ALHI14 4,96 g

CC, Si gel, H/E 7:1→1:1

CC, Si gel,

H/E 90:1

CC, Si gel, H/E 30:1→7:1

Rửa, kết tinh lại

Rửa, kết tinh lại

Rửa

n-hexan

Rửa, kết tinh lại

Rửa, kết tinh lại

ALHI1

0,38 g

ALHI2 3,71 g

ALHI3 0,44 g

ALHI4 0,84 g

ALHI5 1,45 g

ALHI6 0,88 g

90:1→49:1

Sơ đồ 3.1: Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi

axeton cho A7 (141,5 mg)

Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi được trình bày trong Sơ đồ 3.2

Kết quả khảo sát sắc ký lớp mỏng (TLC) cho thấy các phần chiết n-hexan từ lá của mẫu 1

(ALHI) và mẫu 2 (ALHII) có thành phần tương tự nhau nên chúng tôi chỉ tiến hành phân tách các

phần chiết diclometan và etyl axetat từ lá của mẫu 2

c Phân tách phần chiết diclometan từ lá của mẫu 2

17,5 g phần chiết diclometan từ lá của mẫu 2 (ALDII) được phân tách bằng sắc ký cột CC

trên silica gel (0,063-0,200 mm), hệ dung môi diclometan-etyl axetat 49:1, 29:1, 19:1, 9:1, 4:1, 2:1, 1:1, thu được 46 phân đoạn, mỗi phân đoạn 150 ml Các phân đoạn này được gộp thành 9 nhóm phân đoạn từ ALDII1 đến ALDII9

Nhóm phân đoạn ALDII1 được phân tách tiếp bằng sắc ký cột CC trên silica gel

(0,063-0,100 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 70:1 đến 19:1 và rửa bằng n-hexan, cho A1 (5 mg)

và A2 (1 mg) ALDII2 được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ

dung môi n-hexan-etyl axetat 7:1, 4:1, 2:1, và sắc ký cột FC trên

Sơ đồ 3.2: Phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 1 cây Tống quán sủi

CC: Si gel, D/M 19:1 → 1:1

CC, Si gel, D/A 19:1→1:1

CC, Si gel, D/A 2:1→1:7

ALEI6 0,88 g

ALEI7 0,98 g

ALEI8 0,98 g

ALEI9 3,29 g

ALEI 9.2 1,08 g

A5

26 mg

FC, Si gel, H/E 1:1

37

silica gel (0,015-0,040 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 15:1, cho A8 (19,7 mg) và A9 (10,7

mg) ALDII3 được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,015-0,040 mm), hệ dung môi

n-hexan-etyl axetat 15:1, 9:1, 4:1 và kết tinh lại trong axeton cho A10 (6 mg)

Các nhóm phân đoạn ALDII4 (0,51 g) và ALDII5 (1,74 g) được gộp chung và phân tách

bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 15:1, 9:1,

6:1, 4:1 và được gộp thành 8 nhóm phân đoạn, ký hiệu từ ALDII4.1 đến ALDII4.8 ALDII4.1

được rửa bằng n-hexan, cho A11 (1,2 mg) ALDII4.3 được tinh chế bằng sắc ký cột mini (mini-C) trên silica gel (0,015-0,040 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 15:1, 9:1, 6:1, 4:1 cho A12 (7

mg) ALDII4.5 được tinh chế bằng mini-C trên silica gel (0,015-0,040 mm), hệ dung môi

n-hexan-etyl axetat 9:1, 4:1, 2:1 cho A13 (6,5 mg)

Nhóm phân đoạn ALDII6 (4,0 g) được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel 0,100 mm), hệ dung môi diclometan-etyl axetat 29:1→ 4:1 và được gộp thành 4 nhóm phân đoạn

(0,063-ALDII6.2 được tinh chế bằng mini-C trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl

axetat 9:1, 7:1, 4:1 cho AA (1,7 mg) ALDII6.4 được phân tách tiếp bằng FC trên silica gel

(0,015-0,04 mm), hệ dung môi diclometan-etyl axetat 9:1, 4:1, và FC trên silica gel (0,015-(0,015-0,040 mm), hệ

dung môi n-hexan-etyl axetat 4:1, 2:1, 1:1 cho A14 (2,8 mg) và A15 (166 mg)

Quá trình phân tách phần chiết diclometan từ lá của mẫu 2 của cây Tống quán sủi được trình bày trên Sơ đồ 3.3

Sơ đồ 3.3: Phân tách phần chiết diclometan từ lá của mẫu 2 của cây Tống quán sủi

d Phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 2

40 g phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 2 (ALEII) được hòa tan trong một lượng axeton vừa

đủ Thêm 50 g silica gel (0,063-0,200 mm) vào để tẩm bằng cách nghiền, trộn đều đến khi bay hết

CC, Si gel, D/E 29:1→4:1

ALDII7-ALDII9 5,09 g

ALDII1

0,19 g

CC, Si gel, D/E 49:1→1:1

ALDII3 0,67 g

ALDII4 0,51 g

ALDII5 1,74 g

ALDII6 4,0 g

Rửa

n-hexan

FC, Si gel, H/A 9:1→2:1

dung môi Cột được nhồi ướt với 350 g silica gel (0,063-0,200 mm) trong diclometan và để ổn định qua đêm Sau khi đưa chất lên cột, tiến hành chạy sắc ký cột CC với hệ dung môi diclometan-metanol 19:1, 9:1, 4:1, 2:1, 1:1, 1:2 thu được 45 phân đoạn, mỗi phân đoạn 150 ml Các phân đoạn này được gộp thành 6 nhóm phân đoạn, kí hiệu từ ALEII1 đến ALEII6

Nhóm phân đoạn ALEII1 (1,41 g) được phân tách sắc ký cột FC trên silica gel (0,063-0,100

mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 19:1, 9:1, 4:1, 2:1, 1:1 cho 33 phân đoạn, mỗi phân đoạn 20

ml Các phân đoạn được gộp thành 5 nhóm phân đoạn từ ALEII1.1 đến ALEII1.5 Phân đoạn

ALEII1.3 (0,13 g) được tinh chế bằng mini-C trên silica gel (0,015-0,040 mm), hệ dung môi

n-hexan-etyl axetat 9:1, 4:1 và 2:1 cho A16 (5,5 mg)

Nhóm phân đoạn ALEII2 (6,67 g) được phân tách bằng sắc ký cột FC trên silica gel

(0,063-0,200 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat 7:1, 4:1, 2:1, 1:1, 1:2 và 1:3, thu được 4 nhóm

phân đoạn ALEII2.1, ALEII2.2, ALEII2.3 và ALEII2.4 Nhóm phân đoạn ALEII2.2 (2,51 g) được

rửa axeton sau đó kết tinh lại trong axeton cho A5 (35 mg)

Nhóm phân đoạn ALEII3 (6,95 g) được phân tách bằng sắc kí cột FC trên silica gel 0,100 mm), hệ dung môi diclometan-etyl axetat 9:1, 4:1, 2:1, 1:1, 1:2 cho 4 nhóm phân đoạn

(0,063-ALEII3.1, ALEII3.2, ALEII3.3 và ALEII3.4 Nhóm phân đoạn ALEII3.1 (0,35 g) được rửa và kết tinh lại trong axeton cho A5 (15 mg) Nhóm phân đoạn ALEII3.2 (1,3 g) được phân tách 2 lần

bằng sắc kí cột FC trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ dung môi n-hexan-axeton 2:1, 1:1, 1:2 và

sắc ký cột FC trên silica gel (0,040-0,063 mm), hệ dung môi diclometan-etyl axetat 2:1, 1:1 cho A5

(10 mg)

ALEII4 (11,85 g) được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ

dung môi diclometan-axeton 9:1, 4:1, 2:1, 1:1, 1:2, thu được 9 nhóm phân đoạn từ ALEII4.1 đến

ALEII4.9 Nhóm phân đoạn ALEII4.4 được tinh chế bằng mini-C trên silica gel (0,015-0,040 mm),

hệ dung môi diclometan-axeton 6:1 cho A17 (5 mg) Các nhóm phân đoạn ALEII4.6 và ALEII4.8 được rửa và kết tinh lại trong axeton cho A7 (20 mg và 15 mg)

ALEII5 (7,66 g) được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ dung môi diclometan-axeton 4:1, 2:1, 1:1, 1:2 cho 6 nhóm phân đoạn từ ALEII5.1 đến ALEII5.6

Nhóm phân đoạn ALEII5.3 được rửa và kết tinh lại trong axeton cho A7 (6 mg) Nhóm phân đoạn ALEII5.6 được tinh chế bằng mini-C trên silica gel (0,040-0,063 mm), hệ dung môi diclometan- metanol 4:1 và rửa bằng axeton cho A18 (5 mg)

Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 2 cây Tống quán sủi được trình bày trong Sơ đồ 3.4

3.1.3.2 Phân tách các phần chiết từ cành con của cây Tống quán sủi

a Phân tách phần chiết n-hexan từ cành con của mẫu 1

Phần chiết n-hexan từ cành con của mẫu 1 (ACHI, 1,3 g) được phân tách bằng sắc ký cột

CC Mẫu được hoà tan trong diclometan và tẩm trên 2 g silica gel (0,063-0,200 mm) Cột sắc ký

lại trong n-hexan cho A1 (33 mg), A3

Sơ đồ 3.4: Phân tách phần chiết etyl axetat từ lá của mẫu 2 của cây Tống quán sủi

(21,6 mg) và A19 (10 mg)

Quá trình phân tách phần chiết n-hexan từ cành con của mẫu 1 và khối lượng của các nhóm

phân đoạn được trình bày trên Sơ đồ 3.5

Sơ đồ 3.5: Phân tách phần chiết n-hexan từ cành con của mẫu 1 của cây Tống quán sủi

b Phân tách phần chiết n-hexan từ cành con của mẫu 2

18,87 g phần chiết n-hexan từ cành con của mẫu 2 của cây Tống quán sủi (ACHII) được

phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,200 mm), hệ dung môi n-hexan-etyl axetat

19:1, 9:1, 6:1, 4:1 và 2:1 thu được 52 phân đoạn, mỗi phân đoạn 30 ml Các phân đoạn được gộp

A5

35 mg

CC, Si gel, D/A 4:1→1:2

ALEII3 6,95 g

ALEII4 11,85 g

ALEII5 7,66 g

ALEII6 3,52 g

FC, H/E 7:1→1:3 Kết tinh lại

FC,Si gel, D/E 9:1→1:2

ACHI (1,3 g)

ACHI2

0,22 g

ACHI3 0,15 g 0,15 0,15 0,15 0,15

ACHI4 0,40 g