Nghiên cứu thành phần hóa học của một phân đoạn dịch chiết từ hạt cần tây

ĐẶT VẤN ĐỀThuốc phòng bệnh và chữa bệnh hiện nay hầu hết được sản xuất từ hai nguồn nguyên liệu chính là dược liệu và hóa dược. Trong những năm gần đây, xu hướng trên thế giới dùng thuốc có nguồn gốc dược liệu ngày càng nhiều bởi những ưu điểm của các thuốc này là tương đối an toàn, ít tác dụng không mong muốn, hơn nữa lại phù hợp với thu nhập của đa số người dân.Đặc biệt trong những thập niên đầu của thế kỷ XXI, mặc dù kỹ thuật tổng hợp hóa dược có những bước tiến vượt bậc song dược liệu vẫn đóng một vị trí quan trọng trong việc cung cấp nguồn nguyên liệu làm thuốc nói chung và trong việc nghiên cứu phát triển thuốc mới nói riêng. Bằng thực nghiệm khoa học, nhiều tác dụng sinh học của cây thuốc đã được chứng minh, đồng thời cũng phát hiện được những tác dụng mới, hoạt chất mới từ nhiều loài cây quen thuộc.Cây Cần tây có tên khoa học là Apium graveolens L. thuộc họ Cần (Apiaceae) có nguồn gốc từ châu Âu và được di thực vào Việt Nam. Cần tây là loại rau ăn được trồng rộng rãi trên thế giới, nhất là ở những nước có khí hậu á nhiệt đới và ôn đới. Cần tây còn được sử dụng làm thuốc và chữa được nhiều bệnh. Cây Cầntây đã được người Hy lạp dùng làm thuốc lợi tiểu, người Ai cập dùng Cần tây để chữa bệnh tim. Ở Việt Nam, cây Cần tây đã được sử dụng trong rất nhiều bài thuốc dân gian để chữa cơ thể suy nhược, tiêu hóa kém, tiểu tiện bí, đau khớp, cao huyết áp ….4, 5, 6, 10, 11. Với rất nhiều công dụng hữu ích cây Cầntây đang ngày càng nhận được sự quan tâm và nghiên cứu của các nhà khoa học.Một số nghiên cứu trên thế giới gần đây đã chứng minh Cần tây có một số tác dụng sinh học, chẳng hạn như tác dụng hạ huyết áp 39, chống viêm 19, hạ lipid máu 41,… Ở Việt Nam, đã có một số công trình nghiên cứu về Cần tây.

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  VŨ TIẾN THÀNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT TỪ HẠT CẦN TÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  VŨ TIẾN THÀNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT TỪ HẠT CẦN TÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Thu Hằng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Trước bước ngoặt quan trọng ngày hôm nay, tôi xin được giành những cảm xúc thiêng liêng nhất để tri ân tới tất cả những người đã giúp đỡ tôi trong suốt năm tháng tôi sống và học tập dưới mái trường Đại học Dược Hà Nội. Đầu tiên với tất cả lòng kính yêu và biết ơn sâu sắc, tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới cô giáo TS. NGUYỄN THU HẰNG (Bộ môn Dược liệu – Trường Đại học Dược Hà Nội), người thầy đã trực tiếp dìu dắt, động viên và khích lệ tôi vượt qua rất nhiều khó khăn trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện khóa luận tốt nghiệp này. Tôi xin được gửi lời cảm ơn tới các thầy cô và các anh chị kỹ thuật viên trong bộ môn Dược liệu – Trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong quá trình làm khóa luận. Tôi cũng mong muốn gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, Phòng Đào tạo, các Bộ môn và các thầy cô giáo đã dạy tôi trong suốt thời gian học tập dưới mái trường Dược Hà Nội. Cuối cùng tôi muốn gửi những lời cám ơn tới những người thân yêu trong gia đình tôi, bạn bè tôi đã luôn ở bên cạnh giúp đỡ, cổ vũ và khích lệ tôi trong suốt những năm tháng sinh viên và đặc biệt trong khoảng thời gian tôi làm khóa luận này. Hà Nội, tháng 05 năm 2013 Sinh viên Vũ Tiến Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. Đặc điểm thực vật của cây Cần tây 3 1.2. Thành phần hóa học của hạt Cần tây. 4 1.3. Tác dụng sinh học của hạt Cần tây 12 1.4. Công dụng 15 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 16 2.2. Nội dung nghiên cứu 17 2.3. Phương pháp nghiên cứu 18 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1. Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 20 3.2. Định tính flavonoid, coumarin, tanin và chất béo trong phân đoạn dịch chiết A 2 bằng phản ứng hóa học 22 3.3. Định tính phân đoạn dịch chiết A 2 bằng sắc ký lớp mỏng 24 3.4. Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết A 2 hạt Cần tây 27 3.5. Sơ bộ nhận dạng các chất phân lập từ PĐ A 2 hạt Cần tây 35 BÀN LUẬN 37 KẾT LUẬN 39 KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT 3nB 3-n-butylphthalid ALAT Alanin amino transferase ASAT Aspartat amino transferase CTTN Công trình tốt nghiệp ĐH Đại học GLP Good laboratory practice HDL High density lipoprotein iNOS Inducible nitric oxid synthase LDL Low density lipoprotein NO Nitric oxid Nxb Nhà xuất bản PĐ Phân đoạn SKLM Sắc ký lớp mỏng SKCH Sắc ký chế hóa STT Số thứ tự UV Ultra violet Spectroscopy KH Ký hiệu BPD Bộ phận dùng TLTK Tài liệu tham khảo TDSH Tác dụng sinh học DANH MỤC CÁC BẢNG TÊN BẢNG TRANG Bảng 1.1: Các hợp chất flavonoid có trong hạt Cần tây 5 Bảng 1.2: Các hợp chất phthalid trong tinh dầu hạt Cần tây 8 Bảng 1.3: Các hợp chất monoterpenoid có trong tinh dầu hạt của loài Apium graveolens L. 9 Bảng 1.4: Các hợp chất khác có trong tinh dầu hạt Cần tây 10 Bảng 1.5: Các hợp chất furocoumarin có trong hạt Cần tây 11 Bảng 1.6: Các hợp chất coumarin khác có trong hạt Cần tây 11 Bảng 1.7: Một số chất khác có trong hạt Cần tây 12 Bảng 3.8: Kết quả định tính phân đoạn dịch chiết A 2 từ hạt Cần tây 24 Bảng 3.9: Kết quả SKLM phân đoạn A 2 hạt Cần tây với hệ dung môi VIII 27 Bảng 3.10: Độ tan của các chất T 1 , T 2 , T 3 36 Bảng 3.11: Kết quả định tính các chất T 1 , T 2 , T 3 bằng phương pháp hóa học 37 DANH MỤC CÁC HÌNH TÊN HÌNH TRANG Hình 1.1: Khung cấu trúc của các hợp chất flavonoid có trong hạt Cần tây 4 Hình 1.2: Khung cấu trúc các hợp chất furocoumarin có trong hạt Cần tây 11 Hình 2.3: Ảnh chụp cây Cần tây 16 Hinh 2.4: Ảnh chụp hạt Cần tây 16 Hình 3.5: Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 21 Hình 3.6: Ảnh chụp sắc ký đồ PĐ A 2 với hệ III 26 Hình 3.7: Ảnh chụp sắc ký đồ PĐ A 2 với hệ VI 26 Hình 3.8: Ảnh chụp sắc ký đồ PĐ A 2 với hệ VIII 26 Hình 3.9: Sơ đồ tóm tắt quy trình phân lập các chất từ PĐ A 2 28 Hình 3.10: Ảnh chụp sắc ký đồ chất T 1 ở 3 hệ dung môi I, V, VIII 31 Hình 3.11: Ảnh chụp sắc ký đồ chất T 2 ở 3 hệ dung môi I, V, IX 34 Hình 3.12: Ảnh chụp sắc ký đồ chất T 3 ở 3 hệ dung môi I, V, VIII 35 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Thuốc phòng bệnh và chữa bệnh hiện nay hầu hết được sản xuất từ hai nguồn nguyên liệu chính là dược liệu và hóa dược. Trong những năm gần đây, xu hướng trên thế giới dùng thuốc có nguồn gốc dược liệu ngày càng nhiều bởi những ưu điểm của các thuốc này là tương đối an toàn, ít tác dụng không mong muốn, hơn nữa lại phù hợp với thu nhập của đa số người dân. Đặc biệt trong những thập niên đầu của thế kỷ XXI, mặc dù kỹ thuật tổng hợp hóa dược có những bước tiến vượt bậc song dược liệu vẫn đóng một vị trí quan trọng trong việc cung cấp nguồn nguyên liệu làm thuốc nói chung và trong việc nghiên cứu phát triển thuốc mới nói riêng. Bằng thực nghiệm khoa học, nhiều tác dụng sinh học của cây thuốc đã được chứng minh, đồng thời cũng phát hiện được những tác dụng mới, hoạt chất mới từ nhiều loài cây quen thuộc. Cây Cần tây có tên khoa học là Apium graveolens L. thuộc họ Cần (Apiaceae) có nguồn gốc từ châu Âu và được di thực vào Việt Nam. Cần tây là loại rau ăn được trồng rộng rãi trên thế giới, nhất là ở những nước có khí hậu á nhiệt đới và ôn đới. Cần tây còn được sử dụng làm thuốc và chữa được nhiều bệnh. Cây Cần tây đã được người Hy lạp dùng làm thuốc lợi tiểu, người Ai cập dùng Cần tây để chữa bệnh tim. Ở Việt Nam, cây Cần tây đã được sử dụng trong rất nhiều bài thuốc dân gian để chữa cơ thể suy nhược, tiêu hóa kém, tiểu tiện bí, đau khớp, cao huyết áp ….[4], [5], [6], [10], [11]. Với rất nhiều công dụng hữu ích cây Cần tây đang ngày càng nhận được sự quan tâm và nghiên cứu của các nhà khoa học. Một số nghiên cứu trên thế giới gần đây đã chứng minh Cần tây có một số tác dụng sinh học, chẳng hạn như tác dụng hạ huyết áp [39], chống viêm [19], hạ lipid máu [41],… Ở Việt Nam, đã có một số công trình nghiên cứu về Cần tây. Tuy nhiên, các nghiên cứu mới chỉ là bước đầu và chưa có tính hệ thống. Đặc biệt hầu như chưa có nghiên cứu nào về hạt Cần tây ở Việt nam. Với mục tiêu nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học của một phân đoạn dịch chiết hạt Cần tây” với các nội dung chính sau: 2 1. Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây. 2. Định tính phân đoạn dịch chiết A 2 bằng phản ứng hóa học và bằng SKLM. 3. Phân lập một số chất từ phân đoạn A 2 của hạt Cần tây. 4. Sơ bộ nhận dạng các chất phân lập được. 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Đặc điểm thực vật của cây Cần tây 1.1.1. Tên gọi Tên thường gọi: Cần tây, Cần tàu, họ Cần [5] Tên khoa học: Tên chính: Apium graveolens Linnaeus, Apiaceae [20] Tên đồng nghĩa: Apium integrilobum Hayata, Apiaceae [20] 1.1.2. Đặc điểm hình thái Cây thảo, cao 15-150cm, có mùi thơm, sống 1-2 năm. Thân mọc thẳng đứng, nhẵn, có nhiều rãnh dọc, phân nhánh nhiều. Lá hình thuôn hoặc hình trứng ngược, dài 7-18cm, rộng 3,5-8cm, chia làm 3 thùy hoặc xẻ 3, thùy cuối có hình thoi, kích thước 1,2–2,5 × 0,8–2,5cm, có răng cưa hoặc có khía tai bèo. Lá phía trên có cuống ngắn, phiến lá hình tam giác rộng, xẻ sâu 3 thùy, thùy cuối có hình trứng. Lá ở gốc có cuống, bẹ to rộng, có nhiều sóng, hình tam giác – thuôn hoặc dạng 5 cạnh có gốc cụt, xẻ 3-5 thùy hình tam giác, đầu tù, mép khía răng to, không lông. Cụm hoa tán mọc đối diện với lá, kích thước 1,5-4,0cm, gồm nhiều tán dài, ngắn không đều, các tán ở đầu có cuống dài hơn các tán bên trong và có kích thước 4-15mm. Tán kép mang 8-12 tán, mỗi tán có 7-25 hoa, kích thước tán 6-9mm theo chiều ngang. Hoa phía ngoài có 3-8 (-16) cánh hoa mảnh, kích thước 0,5-2,5cm. Hoa nhỏ màu trắng hoặc lục nhạt, tràng có cánh khum, bầu nhỏ. Cuống quả dài 1-1,5mm. Quả có kích thước (1,3-1,5) x (1-2) mm [20]. Quả đôi dạng trứng, hơi dẹt, nhẵn, có cánh lồi chạy dọc [14], có 5 cạnh, 2n=22 [6]. Mùa ra hoa và quả từ tháng 4 đến tháng 7 hàng năm [20]. 1.1.3. Phân bố Trên thế giới, loài Apium graveolens L. bắt nguồn từ châu Á và châu Âu rồi được canh tác rộng rãi trên toàn thế giới làm rau ăn. Loài Apium graveolens L. thích hợp và phân bố nhiều ở vùng khí hậu ôn đới. Tất cả các bộ phận của loài [...]... vết Nhận xét: Dịch chiết PĐ A2 của hạt Cần tây khi khai triển SKLM với hệ dung môi VIII cho 18 vết, trong đó vết 1, 4, 5, 7, 9, 11, 13 hấp thụ UV366 mạnh nhất nên có thể dự đoán các vết này là flavonoid 3.4 Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết A2 hạt Cần tây 3.4.1 Tóm tắt quy trình phân lập các chất từ phân đoạn dịch chiết A2 Quy trình phân lập các chất từ phân đoạn dịch chiết A2 hạt Cần tây được tóm... hóa học và bằng SKLM - Phân lập một số chất từ phân đoạn A2 của hạt Cần tây - Sơ bộ nhận dạng các chất phân lập được 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Chiết xuất Chiết xuất dịch chiết Ethanol hạt Cần tây bằng phương pháp ngâm lạnh với Ethanol tuyệt đối (TĐ) ở nhiệt độ phòng Dịch chiết Ethanol hạt Cần tây thu được đem cất quay thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được dịch chiết đặc Thêm nước cất... chiết xuất dịch chiết từ hạt Cần tây được tóm tắt ở sơ đồ hình 3.5 21 Bột dược liệu (5kg) EtOH TĐ Thấm ẩm Khay men EtOH TĐ Bình ngấm kiệt Ngâm 5 ngày Rút dịch chiết Bã dược liệu Dịch chiết lần 1 EtOH TĐ Ngâm 3 ngày Rút dịch chiết Dịch chiết cồn Dịch chiết lần 2,3 Cất thu hồi cồn Dịch chiết đặc Nước nóng (1:1) Dịch chiết thân dầu Dịch chiết nước PĐ A2 n-hexan nhiều lần Dịch chiết nước Dịch chiết n-hexan... protein toàn phần, albumins) Kết quả cho thấy có khả năng giải độc đáng kể của dịch chiết Cần tây, trong đó tác dụng bảo vệ gan của dịch chiết hạt Cần tây là cao nhất [18] Một nghiên cứu năm 1995 ở Ấn Độ thấy rằng hạt Cần tây có tác dụng bảo vệ gan [1] 1.3.4 Tác dụng chống ung thư Dịch chiết methanol từ hạt Cần tây có tác dụng chống lại các tác nhân gây ung thư gan trên chuột cống Wistar [35] Dịch chiết (ether... ứng định tính chất béo Nhỏ 2 giọt dịch chiết Ether dầu hỏa lên giấy lọc, hơ nóng cho bay hơi hết dung môi thấy không có vết mờ trên giấy lọc (-) Kết luận: Phân đoạn dịch chiết A2 từ hạt Cần tây không chứa chất béo 24 Kết quả định tính phân đoạn dịch chiết A2 hạt Cần tây được trình bày tóm tắt ở bảng 3.8 Bảng 3.8: Kết quả định tính phân đoạn dịch chiết A2 từ hạt Cần tây Nhóm chất Phản ứng định tính... các phân đoạn dịch chiết tương ứng Do dịch chiết thân dầu có thể hòa tan hoàn toàn trong n-hexan nên chúng tôi quyết định gộp chung phần dịch chiết thân dầu với dịch chiết n-hexan và gọi là phân đoạn dịch chiết n-hexan hạt Cần tây Các phân đoạn dịch chiết được đem cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm và cô cách thủy ở nhiệt độ 60ºC đến cắn thu được các cắn tương ứng ký hiệu là A, B, C Quy trình chiết. .. n-hexan CHCl3 nhiều lần EtOAc nhiều lần Dịch chiết nước Dịch chiết CHCl3 Dịch chiết nước Dịch chiết EtOAc Cô cách thủy Cất thu hồi EtOAc Cất thu hồi CHCl3 Cắn B Cắn A Cắn C Cắn D Hình 3.5: Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 22 3.2 Định tính flavonoid, coumarin, tanin và chất béo trong phân đoạn dịch chiết A2 bằng phản ứng hóa học Lấy khoảng 2g cắn PĐ A2 hòa tan... phần trên chuột tăng cholesterol do di truyền khi cho chuột uống dịch chiết trong suốt 8 tuần liên tục Ngoài ra sử dụng một phần nhỏ phân đoạn butanol và phân đoạn nước chiết xuất Cần tây với 7 ngày tiêm phúc mạc có hiệu quả giảm Cholesterol toàn phần trong huyết thanh và lượng Cholesterol HDL trên chuột Rico trưởng thành [40] 1.3.2 Tác dụng chống viêm Dịch chiết nước và dịch chiết n-hexan từ hạt Cần. .. (kính, kim loại, chất dẻo) đóng vai trò là một pha tĩnh Một hoặc một hệ dung môi khai triển (pha động) di chuyển dọc theo bản mỏng sẽ làm di chuyển các cấu tử của mẫu thử theo một vận tốc khác nhau tạo thành một sắc ký đồ gồm nhiều vết có Rf khác nhau 20 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây Hạt Cần tây tán thành bột thô bằng máy xay Xác định độ... Thiết bị nghiên cứu - Cân phân tích Mettler Toledo AB204-S9 (Thụy Sĩ) - Máy cất quay Buchi Rotavapor R-200 (Đức) - Máy đo độ ẩm Precisa HA60 tại bộ môn công nghiệp Dược ĐH Dược Hà Nội - Tủ sấy Memmert (Đức) - Kính hiển vi Leica (Đức) - Máy đun cách thủy Memmert (Đức) 2.2 Nội dung nghiên cứu - Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây - Định tính phân đoạn dịch chiết A2 bằng phản ứng hóa học và . thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học của một phân đoạn dịch chiết hạt Cần tây với các nội dung chính sau: 2 1. Chiết xuất các phân. xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây. 2. Định tính phân đoạn dịch chiết A 2 bằng phản ứng hóa học và bằng SKLM. 3. Phân lập một số chất từ phân đoạn A 2 của hạt Cần tây. 4. Sơ bộ. béo trong phân đoạn dịch chiết A 2 bằng phản ứng hóa học 22 3.3. Định tính phân đoạn dịch chiết A 2 bằng sắc ký lớp mỏng 24 3.4. Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết A 2 hạt Cần tây 27 3.5.