- Phổ hồng ngoại được ghi trên máy Impact 410Nicolet FTIR hoặc trên máy Horiba FT
a. Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của cây Cáng lò
Phần chiết n-hexan từ lá (BLH, 14 g) được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,200 mm), dung môi chạy cột là n-hexan (300 ml) và hệ dung môi n-hexan-axeton 15:1, 9:1, 6:1, 3:1 và 2:1. Các phân đoạn được gộp thành 13 nhóm phân đoạn từ BLH1 đến BLH13. Nhóm phân đoạn BLH3 (2,06 g) và BLH5 (2,35 g) được rửa bằng n-hexan cho B1 (18 mg và 19,1 mg).
Nhóm phân đoạn BLH6 (1,52 g) được phân tách bằng sắc kí cột CC trên silica gel (0,063- 0,100 mm). Rửa giải građien với hệ n-hexan-etyl axetat 19:1, 9:1 và 4:1 cho B2 (10,8 mg). Kết quả phân tích TLC và co-TLC cho thấy sự đồng nhất của B2 với β-sitosterol.
Nhóm phân đoạn BLH7 (1,74 g) được phân tách bằng sắc ký cột CC trên silica gel (0,063- 0,100 mm), hệ dung môi n-hexan-axeton 9:1, 6:1, 4:1, thu được 39 phân đoạn, mỗi phân đoạn 10 ml, được gộp thành 8 nhóm phân đoạn. Nhóm phân đoạn BLH7.4 được rửa bằng n-hexan cho B3 (53,8 mg).
Các nhóm phân đoạn BLH11 và BLH12 được gộp lại, ký hiệu là BLH12 (1,89 g) và phân tách bằng sắc kí cột CC trên silica gel (0,063-0,100 mm). Rửa giải građien với các hệ dung môi n-
hexan-axeton theo các tỉ lệ 15:1, 9:1, 4:1 và 2:1, thu được 4 nhóm phân đoạn, kí hiệu từ BLH12.1 đến BLH12.4. Nhóm phân đoạn BLH12.2 (70 mg) được phân tách nhiều lần bằng phương pháp chiết pha rắn trên cột RP-SPE (C-18 Sep-Pak Vac Catridge, Waters, Hoa Kỳ), rửa giải bằng các hệ MeOH-H2O 70%, MeOH-H2O 80% và MeOH. Cất loại dung môi phân đoạn MeOH-H2O 70% cho B3 (7 mg). Nhóm phân đoạn BLH13 (1,48 g) được phân tách sắc ký cột CC trên silica gel (0,063-0,100 mm), hệ dung môi n-hexan-axeton 9:1, 3:1, 2:1, thu được 27 phân đoạn, mỗi phân đoạn 10 ml, được gộp thành 8 nhóm phân đoạn. Nhóm phân đoạn BLH13.2 được rửa bằng n-
hexan và kết tinh lại
trong axeton cho B3 (55 mg).
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan từ lá của cây Cáng lò được trình bày trên Sơ đồ 3.11.
Sơ đồ 3.11: Phân tách phần chiết n-hexan từ lá của cây Cáng lò