- Phổ hồng ngoại được ghi trên máy Impact 410Nicolet FTIR hoặc trên máy Horiba FT
4.2.4Cấu trúc của các hợp chất phân lập đƣợc từ cây Cáng lò
a. Phân tách phần chiết diclometan từ vỏ cành của cây Cáng lò
4.2.4Cấu trúc của các hợp chất phân lập đƣợc từ cây Cáng lò
♦ Chất B1 (Axit hexacosanoic)
Hợp chất B1 được phân lập từ phần chiết n-hexan của lá (BLH) dưới dạng chất bột vô định hình màu trắng, đ.n.c. 74-75 o
C, Rf = 0,5 (TLC, silica gel, n-hexan-etyl axetat 4:1, v/v).
COOH
(Axit hexacosanoic) Phổ EI-MS của B1 cho pic ion phân tử M+.
ở m/z 396, cho giả thiết về một công thức phân tử là C26H52O2. Phổ EI-MS cho thấy sự phân mảnh của một mạch hidrocacbon với các pic cách
nhau một nhóm metylen (m/z 14) và các mảnh hidrocacbon có chứa oxy ở m/z 59, 73, 87,… của một axit cacboxylic.
Phổ 1H-NMR của B1 cho các tín hiệu cộng hưởng từ proton của một nhóm metyl bậc một ở δH 0,88 (3H, t, J = 6,5 Hz), các nhóm metylen của mạch ankyl ở δH 1,27 (44H, br s), 1,65 (2H, br s) và 2,35 (2H, br s). Sự chuyển dịch về phía trường thấp của nhóm
metylen ở δH 2,35 cho thấy nhóm metylen này phải liên kết với một nhóm cacbonyl. Sự kết hợp các dữ kiện phổ EI-MS và 1
H-NMR cho phép giả thiết B1 có cấu trúc axit cacboxylic với mạch hiđrocacbon no. Dữ kiện phổ EI-MS và 1
H-NMR cũng cho phép xác định mạch béo gồm 25 cacbon của axit cacboxylic này. Do đó, B1 đã được xác định là axit hexacosanoic.
Axit hexacosanoic có trong nhiều loại dầu, sáp và trong mỡ của vi khuẩn. ♦ Chất B2 (β-Sitosterol)
Hợp chất B2 được ghi phổ IR, đo đ.n.c. và so sánh TLC với chất chuẩn thấy hoàn toàn trùng khớp với chất chuẩn β-Sitosterol của chúng tôi. Chi tiết về cấu trúc của B2 xem chất A21, trang 99.
♦ Chất B3 (Ovalifoliolid B)
Hợp chất B3 được phân lập từ phần chiết n-hexan của lá dưới dạng tinh thể hình que màu trắng, đ.n.c. 196-198 o
C, []D24 = +92,3 (CHCl3), Rf = 0,42 (TLC, silica gel, n-hexan-axeton 3:1, v/v). 1 3 4 5 8 9 10 11 12 13 14 17 18 19 20 21 22 24 25 26 27 28 29 30 2 O O H O OH B3 (Ovalifoliolid B)
Phổ EI-MS của hợp chất B3 không cho pic ion phân tử, tuy nhiên, pic cơ sở ở m/z 143 cho thấy sự tồn tại của một vòng hydroxyisopropyl tetrahydrofuran (A) phù hợp với một sự đóng vòng mạch nhánh 20,24-epoxit thường thấy ở các tritecpenoit dãy dammaran.
A
Phổ HR-ESI-MS cho pic ion giả phân tử ở m/z 495,34335, xác định công thức phân tử C30H48O4 của B3 (tính cho C30H48O4Na: m/z 495,34448).
Phổ IR của B3 cho thấy sự có mặt của nhóm hydroxy ở νmax 3483 cm˗1, nhóm este của vòng lacton ở νmax 1702 và 1292 cm˗1 và nối đôi ở νmax 1633 cm˗1).
(s) ở δH 0,93 (3H, s), 0,95 (3H, s), 1,12 (3H, s), 1,13 (6H, s), 1,20 (3H, s) và 1,73 (3H, s); 2 nhóm oximetin ở δH 3,72 (1H, t, J = 7,0 Hz) và 4,51(1H, q, J = 8,5 Hz); 1 nhóm metylen liên kết với nhóm cacbonyl ở δH 2,60 (1H, dd, J = 15,5 Hz, 12,5 Hz) và 2,40 (1H, dd, J = 15,5 Hz, 8,0 Hz) và 2 proton olefinic của một nối đôi exometylen ở δH 4,69 (1H, s) và 4,86 (1H, s). Các tín hiệu cộng hưởng từ proton đã cho phép xác định 3 nhóm metyl gắn với các nguyên tử cacbon mang oxy (δH
1,12, 1,13 và 1,20) và nhóm oximetin (δH 3,72) của vòng hydroxyisopropyltetrahydrofuran của mạch nhánh của tritecpen dãy dammaran này, phù hợp với các dữ kiện phổ EI-MS. So sánh các dữ kiện phổ 1
H-NMR và 13C-NMR của các hợp chất tritecpen dãy dammaran khẳng định cho các kết luận trên và xác định được cấu trúc 3,4-secodammaran của B3. Cấu trúc này giải thích cho sự xuất
hiện của một nhóm este của vòng lacton ở C-3 [δC 176, 1 (s)] và nhóm isopropenyl ở C-4 [δH 1,73 (s), 4,69 (s) và 4,86 (s); δC 146,6 (s) và 114,1 (t)]. Nguyên tử oxy còn lại được xác định là liên kết với C-11 [δH 4,51 (q, J = 8,5 Hz); δC 76,4 (d)], tuy nhiên sự chuyển dịch về phía trường thấp của C- 11 so với các hợp chất dammaran có cấu trúc tương tự [47] cho thấy vòng lacton đã được tạo thành giữa C-3 và C-11.
Để xác định hóa lập thể ở C-20 và C-24 các độ chuyển dịch hóa học cacbon-13 của C-20 (C 85,5), C-21 (C 23,6), C-24 (C 83,5) và C-25 (C 71,4) đã được so sánh với các giá trị của ocotillol: C-20 86,4, C-21 23,5, C-24 83,3 và C-25 71,4 và cabraleadiol: C-20 86,5, C-21 27,1,
C-24 86,2 và C-25 70,2 [46]. Kết quả là hóa lập thể 20S và 24R như của ocotillol đã được xác định cho hợp chất này.
Trên cơ sở các phân tích phổ IR, EI-MS, 1
H-NMR, 13C-NMR và DEPT và sự phù hợp với công thức phân tử C30H48O4 cấu trúc của B3 đã được xác định là ovalifoliolide B [50]. Các tương tác trên các phổ 1
H-1H COSY, HSQC và HMBC đã khẳng định cấu trúc này và đã bổ sung việc gán các tín hiệu proton cho ovalifoliolid B.
Hình 4.10: Các tương tác HMBC của B3
Để khẳng định cấu trúc lập thể của các nhóm liên kết với khung phân tử dammaran phổ NOESY đã được ghi. Các tương tác NOESY giữa H2-29 (H 4,69/4,86) với H3-19 (H 1,13), giữa H3-28 (H 1,73) và H-1b (H 1,79) và giữa H-5 (H 1,81) với H3-30 (H 0,95) đã xác định rõ sự định hướng của nhóm isopropenyl ở C-5. Do đó, sự định hướng đã được xác định cho nhóm isopropenyl ở C-5 của ovalifoliolid B [50] đã được sửa lại là . (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
OO O
O OH OH
Hình 4.11: Các tương tác NOESY của B3
Đây là lần thứ hai ovalifoliolid B được phân lập từ thiên nhiên. Trước đó, hợp chất này đã được phân lập lần đầu tiên từ lá cây Betula ovalifolia năm 1998 [50].
♦ Hỗn hợp 2 chất B4 và B5 (Chrysoeriol và Kaempferol 7-O-metyl ete)
Hỗn hợp B4 và B5 được phân lập từ phần chiết etyl axetat của lá (BLE) dưới dạng bột vô định hình màu vàng, Rf = 0,65 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v).
OCH3 OH OH O HO OH O 2 10 4 3 5 7 9 1' 3' 4' 5' 6' OH O CH3O OH O OH 2 10 3 4 5 7 9 1' 3' 4' 5' 6'
B4 (Chrysoeriol) B5 (Kaempferol 7-O-metyl ete) Phổ 1
H-NMR của B4 cho các proton H-6 và H-8 của vòng A của một hợp chất flavonoit dưới dạng 2 doublet với các hằng số tương tác metaJ = 2,0 Hz ở 6,18 (1H) và 6,49 (1H). Sự thế 1, 3, 4 ở vòng B đã được xác định dựa trên tương tác của proton H-6 (7,54, br d, J = 8,5 Hz) với cả H-5 ( 6,90, d, J = 8,5 Hz) lẫn H-2 (7,53, br s). Tín hiệu cộng hưởng từ proton ở
12,9 (1H, s) cho thấy có một nhóm hydroxy ở C-5 tạo liên kết hydro với nhóm cacbonyl ở C- 4. Cuối cùng, cấu trúc khung flavon thế oxy 5,7,3,4 đã được khẳng định qua tín hiệu ở 6,86 (1H, s, H-3). Để xác định vị trí của nhóm metoxy [3,92 (s); C55,9 (q)] phổ 13
C-NMR của
B4 đã được so sánh với phổ của các hợp chất flavon metyl ete; các giá trị Ccủa vòng B quan sát được ở C110,1 (d, C-2), 115,8 (d, C-5), 120,4 (d, C-6), 121,5 (s, C-1), 147,9 (s, C-4) và 150,7 (s, C-3) đã xác định vị trí nhóm metoxy ở C-3, phù hợp với cấu trúc của B4 là chrysoeriol [15, 59].
Kaempferol 7-O-metyl ete (B5) đã được xác định khi so sánh các độ chuyển dịch hóa học proton của B5 và kaempferol [59]. Nhóm metoxy ( 3,85) đã được xác định ở C-7 qua sự chuyển dịch về phía trường thấp của H-6 ( 6,56) và H-8 ( 6,74).
Chrysoeriol được tìm thấy trong các họ cây Asteraceae, Cyperaceae, Fabaceae, Hydrophyllaceae, Labiatae,… Hợp chất này có khả năng chống oxi hoá và và chống gây đột biến tế bào [40]. ♦ Chất B6 (1- O H3C CH3 OH H H H O O CH3 CH3 H H H H H3C H CH3 CH3 H H H H
Hợp chất B6 được phân lập từ phần chiết etyl axetat của lá (BLE) dưới dạng chất bột vô định hình màu trắng, Rf = 0,57 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v).