nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của ba loài thuộc chi boerhaavia, họ bông phấn

đã được sử dụng trong dân gian để chữa thấp khớp, bệnh lậu, bệnh về gan, thận, tiểu đường, có khả năng làm trấn tĩnh thần kinh, giảm stress, tăng khả năng đề kháng; các hợp chất rotenoi

Người hướng dẫn khoa học:

GS TS NGUYỄN KIM PHI PHỤNG

GS TS DOMINIQUE GUILLAUME

Phản biện độc lập 1: PGS TS Trần Công Luận

Phản biện độc lập 2: TS Đào Thanh Sơn

Luận án sẽ được bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án họp tại

Trường Đại học Khoa học Tự nhiên TpHCM

vào lúc 9 giờ ngày 19 tháng 6 năm 2014

Có thể tìm hiểu luận án tại thư viện:

- Thư viện khoa học tổng hợp TpHCM

- Thư viện Trường Đại học Khoa học Tự nhiên TpHCM

MỞ ĐẦU

Việt Nam là nước nhiệt đới, có nguồn thực vật phong phú và đa dạng, còn nhiều loài cây mà thế giới chưa biết đến Một trong ba loài cây thuộc

chi Boerhaavia (Nyctaginaceae) lựa chọn nghiên cứu trong luận án là loài

chưa được tác giả nào khảo sát về thành phần hoá học, dược tính trên thế giới cũng như ở Việt Nam Trong khi đó, có loài cây cùng chi với chúng

như cây Nam sâm bò Boerhaavia diffusa L đã được sử dụng trong dân gian

để chữa thấp khớp, bệnh lậu, bệnh về gan, thận, tiểu đường, có khả năng làm trấn tĩnh thần kinh, giảm stress, tăng khả năng đề kháng; các hợp chất rotenoid trong cây có hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư vú

Nội dung chính được thực hiện trong luận án này là khảo sát thành phần

hóa học của ba loài cây: Nam sâm bò Boerhaavia diffusa L., Nam sâm bò

đỏ Boerhaavia diffusa var sub và Nam sâm đứng Boerhaavia erecta L Qua

tìm kiếm thông tin trên Sciencedirect.com và nhất là bằng phần mềm Scifinder, chúng tôi nhận thấy trên thế giới, đã có một số nghiên cứu trên

loài Nam sâm bò B diffusa L., về cây Nam sâm đứng B erecta L chỉ có 01

tài liệu khảo sát về thành phần hoá học bằng HPLC kết hợp với MS và

chưa thấy có tài liệu nào về cây B diffusa var sub

Với tinh thần mong mong muốn góp phần tìm hiểu mối liên hệ giữa

thành phần hóa học và dược tính của 03 cây thuộc chi Boerhaavia, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ly trích các hoạt chất từ ba cây B diffusa, B

diffusa var sub và B erecta và khảo sát khả năng ức chế enzyme

acetylcholinesrteraseae cũng như hoạt tính sinh học ức chế các dòng tế bào ung thư của các cao trích và các hợp chất cô lập được

Kết quả đạt được của luận án sẽ góp phần làm sáng tỏ hóa – thực vật

của chi Boerhaavia Bên cạnh đó, những thử nghiệm hoạt tính sinh học

cũng được thực hiện trên các hợp chất tinh khiết cô lập được, góp phần nâng cao giá trị ứng dụng của luận án Chúng tôi chọn thử nghiệm hoạt tính

ức chế enzyme acetylcholinesterase và hoạt tính gây độc trên ba dòng tế

bào ung thư vú (MCF–7), ung thư cổ tử cung (HeLa), ung thư phổi (NCI-H 460) vì những thử nghiệm này có thể thực hiện tại Việt Nam

ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN

Trong phần cô lập các hợp chất tinh khiết từ ba loài thuộc chi

Boerhaavia, chúng tôi đã cô lập được 55 hợp chất, trong đó có 16 hợp chất

mới Kết quả thử hoạt tính ức chế enzyme acetylcholinesrteraseae cho thấy các cao trích và các hợp chất tinh khiết của ba loài này có hoạt tính yếu hoặc không có hoạt tính Kết quả sang lọc thử hoạt tính sinh học ức chế các dòng tế bào ung thư cho thấy các hợp chất rotenoid có hoạt tính mạnh trên dòng tế bào ung thư vú (MCF-7) và ung thư cổ tử cung (HeLa)

BỐ CỤC CỦA LUẬN ÁN

Luận án gồm 254 trang, với phần nội dung chính 137 trang được phân

ra thành các phần như sau: Chương 1: Tổng quan (14 trang), Chương 2: Thực nghiệm (15 trang), Chương 3: Kết quả và bàn luận (89 trang), Kết luận và kiến nghị (6 trang), Tài liệu tham khảo (11 trang, với 84 tài liệu tham khảo) Riêng phần Phụ lục có 117 trang gồm 234 các phổ về 1D và 2DNMR, phổ MS Toàn bộ luận án có 25 bảng, 7 hình ảnh và 3 sơ đồ Danh mục công trình với một quyển riêng, gồm 02 bài báo đã đăng trong tạp chí quốc tế (Chemical Pharmaceutical Bulletin và Phytochemistry Letters), 02 bài báo đăng trong tạp chí chuyên ngành trong nước (Tạp chí Hoá học và Tạp chí Phát Triển Khoa Học và Công Nghệ), 01 bài báo đăng trong Hội nghị chuyên ngành hoá học

NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

Tổng hợp các tài liệu nghiên cứu về trước của các tác giả trong và ngoài nước, trên các nội dung: mô tả thực vật, những nghiên cứu về dược học và những nghiên cứu về hóa học

Các tài liệu tham khảo cho thấy trên thế giới, chi Boerhaavia có 40 loài,

nhưng chỉ có 4 loài được khảo sát về dược tính và hoá học và trong số này,

loài Boerhaavia diffusa L được khảo sát nhiều nhất Loài này được sử

dụng trong dân gian để chữa các bệnh về gan, thận, tiểu đường, làm trấn tĩnh thần kinh, giảm stress, tăng khả năng đề kháng, chữa ung thư Các nghiên cứu cho biết các hợp chất rotenoid trong cây có hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

Chương 2 liệt kê các hóa chất và thiết bị thí nghiệm, cùng với cơ quan

đo phổ nghiệm cũng như thực hiện các thử nghiệm hoạt tính sinh học

2.1 Trích ly và cô lập các hợp chất

2.1.1 Điều chế các loại cao

Rễ cây nam sâm bò thân-lá xanh B diffusa L và cây nam sâm bò thân lá

đỏ được thu hái ở ven bờ biển Phú Hải, Mũi Né, thành phố Phan Thiết, tỉnh Bình Thuận và được định danh bởi TS Võ Văn Chi Phần bộ phận trên mặt

đất của cây nam sâm đứng Boerhaavia erecta L được thu hái ở phường

Linh Trung, Quận Thủ Đức, TP HCM và được định danh bởi Cố DS Phan Đức Bình Mẫu tiêu bản được lưu trữ tại Bộ môn Hoá hữu cơ, Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, ký hiệu mẫu US-A001, US-A003 và US-A002 Mẫu được sấy khô, cắt nhỏ, xay nhuyễn và trích bằng phương pháp ngâm dầm ở nhiệt độ phòng, dung dịch được lọc qua giấy lọc và thu hồi dung môi

ở áp suất thấp, có được cao thô metanol Phần cao thô methanol tiếp tục được hòa tan vào nước sau đó được chiết lỏng–lỏng lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dần, đuổi dung môi dưới áp suất thấp môi thu được các cao tương ứng

2.1.2 Trích ly, cô lập các hợp chất từ ba loài thuộc chi Boerhaavia

Việc trích ly và cô lập được thực hiện bằng sắc ký cột cổ điển với silica gel pha thường hoặc pha đảo RP-18 kết hợp với sắc ký bản mỏng Sử dụng

kỹ thuật kết tinh để tinh chế các hợp chất

2.2 Thử nghiệm hoạt tính sinh học

2.2.1 Thử nghiệm hoạt tính ức chế acetylcholinesterase in vitro

Khảo sát tác động ức chế enzyme acetylcholinesterase in vitro của các cao chiết cũng như các hợp chất cô lập được thực hiện theo phương pháp Ellman, 1961 Mẫu được gửi thử nghiệm tại Bộ môn Dược lý- Dược lâm sàng Khoa Dược Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 41 đường Đinh Tiên Hoàng Quận 1, TP Hồ Chí Minh Qui trình thử nghiệm dựa theo tài liệu của Ellman

Cơ sở khoa học của phương pháp Ellman: Sử dụng đĩa 96 giếng, đo độ hấp thu bằng máy Elisa Multiskan Ascent Để khảo sát hoạt tính ức chế acetylcholinesterase, 5,5’-dithio-bis(2-nitrobenzoic) acid (thuốc thử Ellman) được sử dụng làm chất nền và bị enzyme acetylcholinesterase thủy

Hình 2.4 Sắc ký đồ HPLC cao metanol bộ phận trên mặt đất của loài thân-lá đỏ (a)

và của loài thân-lá xanh (b) của B diffusa

Hình 2.1 Cây nam sâm bò

34

35

phân tạo thành 2-nitrobenzoate-5-mecaptothiocholine and nitrobenzoate tạo màu vàng, sau đó đo màu ở bước sóng 412 nm Phương pháp này có ưu điểm: đơn giản, chính xác, nhanh, thích hợp cho phân tích

5-thio-2-tự động, thực hiện được trên nhiều mẫu thử

Qui trình thực hiện: Các giếng sau khi cho các hoá chất cần thiết vào, được ủ 15’, rồi tiến hành đo ở bước sóng 412 nm liên tục trong 10 lần, mỗi lần 16 giây Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần

2.2.2 Thử nghiệm hoạt tính ức chế in vitro trên ba dòng tế bào ung thư

người trên các hợp chất cô lập từ ba loài cây khảo sát

Hoạt tính gây độc tế bào kháng lại 3 dòng tế bào ung thư (Hela, MCF-7

và NCI-H460) của các mẫu là các hợp chất tinh sạch được thực hiện ở nồng

độ 100 g/mL, sử dụng chất nhuộm Sulforhodamine B (SRB) và chất chứng dương là camptothecin Mẫu được gửi thử nghiệm tại Bộ môn Di truyền Khoa Sinh Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên 227 đường

Nguyễn Văn Cừ Quận 5, TP Hồ Chí Minh

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Kết quả khảo sát cấu trúc hóa học

Từ các nguyên liệu nghiên cứu là bộ phận của ba loài cây như trình bày trong chương 2, chúng tôi đã cô lập được 55 hợp chất, trong đó có 16 hợp chất mới Cấu trúc hóa học của các hợp chất cô lập được xác định bằng cách phân tích các dữ liệu phổ nghiệm IR, MS, 1D và 2D–NMR, đo năng lực triền quang và nhiệt độ nóng chảy, kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo, đã được trình bày chi tiết trong quyển luận án

Các hợp chất được phân loại theo 8 nhóm, như sau:

Nhóm A: 12a-Hydroxyrotenoid (5 hợp chất: 2 mới và 3 đã biết)

Nhóm B: Dehydrorotenoid (10 hợp chất: 5 mới và 5 đã biết) Nhóm C: Coumaronochromonoid (4 hợp chất: 2 mới và 2 đã biết)

Nhóm D: Flavonoid (9 hợp chất đã biết)

Nhóm E: Hợp chất nitrogen (3 hợp chất đã biết)

Nhóm F: Hợp chất phenolic (12 hợp chất: 2 mới và 10 đã biết) Nhóm G: Terpenoid và steroid (6 hợp chất: 1 mới và 5 đã biết)

Nhóm H: Hợp chất khác (6 hợp chất: 3 mới và 3 đã biết)

Quyển tóm tắt luận án chỉ trình bày khảo sát cấu trúc hóa học của một vài

hợp chất rotenoid mới Rotenoid là đặc trưng của chi Boerhaavia

3.1.1 Khảo sát cấu trúc hoá học của Boeravinone K (54)

Hợp chất số 54 được cô lập từ phân đoạn EA.B3 của loài B erecta

 Khối phổ: ESI-MS (ghi nhận ion dương): m/z 345.1 [M+H]+ (tính toán lý thuyết cho C18H16O7 + H, 345.097)

 Phổ 1H,13C-NMR: Trình bày trong Bảng 3.1 và 3.2

Boeravinone K hay 8-methoxy-10-demethoxycoccineone E (54) được

cô lập ở dạng hình kim màu vàng nhạt Khối phổ ESI-MS cho mũi ion phân

tử giả ở m/z 345.1 [M+H]+ Phổ 1H–NMR cho thấy có 16 protons và phổ

13

C-NMR cho thấy có 18 tín hiệu Điều này phù hợp với kết quả khối phổ

cho biết công thức phân tử của hợp chất 54 là C18H16O7 Phổ 1H-NMR cho thấy các tín hiệu của hệ thống ABC [H 4.68 (1H, dd, J = 9.0, 7.0 Hz, H-

6a), 4.52 (1H, m, H-6), 4.50 (1H, dd, J = 9.5, 3.5 Hz, H-6)], cho biết 54

có sự hiện diện của nhóm –O–CH–CH2–O– Phổ 1

H-NMR cũng cho 4 tín hiệu phù hợp với vòng A của rotenoid, H 8.33 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-

1), 7.07 (1H, dt, J = 8.0, 1.0 Hz, H-2), 7.33 (1H, dt, J = 8.0, 1.5 Hz, H-3) và 6.93 (1H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, H-4) Phổ cũng cho thấy tín hiệu một nhóm

hydroxyl kiềm nối (H 11.72, s), một proton vòng thơm (H 6.19, s), hai

nhóm methoxy [H 3.91 (3H, s) và 3.83 (3H, s)] Phổ 13C–NMR của 54 cho

thấy sự hiện diện của nhóm chức ketone (C 192.9), bảy carbon vòng thơm

loại tứ cấp (C 161.7, 161.4, 154.9, 152.1, 129.4, 118.6, 101.4), năm carbon

thơm loại methine (C 131.2, 131.1, 121.5, 117.5, 94.1), một carbon methine (C 76.4), một carbon tứ cấp bão hoà (C 66.2), một carbon methylene (C 61.6) và hai nhóm methoxy C 61.5 và 56.4

Dạng phổ NMR của 54 rất giống với phổ của hợp chất coccineone E, là

hợp chất trong đó các carbon C-9 và C-10 mang nhóm methoxy và C-11

mang nhóm OH Phổ HMBC của 54 cho thấy sự tương quan giữa hydrogen

của nhóm OH kiềm nối (H 11.72) tại C-11 với các tín hiệu carbon tại C

161.4 (C-11), 101.4 (C-11a), 94.1 (C-10) Tín hiệu ở H 6.19 cho tương

quan với tín hiệu tại C 161.4 (C-11), 101.4 (C-11a), 129.4 (C-8), vì thế proton này là H-10

Sự hiện diện của nhóm methoxy tại C-8 làm ảnh hưởng đến sự chẻ mũi của các tín hiệu proton H-6a và H-6 Trong coccineone E, giá trị độ dịch chuyển hoá học và sự chẻ mũi của các proton này là (CDCl3) H 4.77 (dd,

10.0ax-ax, 5.5ax-eq Hz) cho H-6a, 4.48 (t, 10.0 Hz) cho H-6 và 4.44 (dd, 10.0gem, 5.5eq-ax Hz) cho H-6 Trong hợp chất 54, giá trị độ dịch chuyển

hoá học và sự chẻ mũi của các proton (CDCl3) của H-6a và H-6 lần lượt là

H 4.68 (dd, J = 9.0, 7.0 Hz), 4.52 (m) và 4.50 (dd, J = 9.5, 3.5 Hz)

Hoá lập thể của hai vòng súc hợp B/C được xác định nhờ vào phân tích

giá trị hằng số ghép J của H-6a và H2-6 cũng như giá trị độ dịch chuyển

hoá học của H-1 Cấu hình trans sẽ cho giá trị JH-6a,H-6  4.5 Hz và JH-6a,H-6 

11.0 Hz như trong boeravinone C, hoặc như hydroxyelliptone, trong khi dó, cấu hình cis sẽ cho JH-6a,H-6  3.2 Hz và JH- 6a,H-6  1.0 Hz như trong clitoriacetal, hoặc 5-deoxy-(2R,3R,11S)-11-O--glucopyranosylclitoriacetal.Hơn nữa, với cấu hình trans, giá trị độ dịch

(6aS,12aS)-12a-chuyển hoá học của H-1 vào khoảng H 8.0 và với cấu hình cis vào khoảng

H 7.0 Phổ 1H-NMR của 54, H-1 cộng hưởng ở H 8.33 như vậy A/B có

cấu hình trans Như thế, cấu trúc hoá học của 54 được đề nghị là

trans-6a,12a-dihydro-11,12a-dihydroxy-8,9-dimethoxy[1]benzopyrano[3,4-b][1] benzopyran-12(6H)-one hay Boeravinone K

3.1.2 Khảo sát cấu trúc hoá học của Boeravinone R (55)

Hợp chất số 55 được cô lập từ phân đoạn C2 của loài B diffusa thân-lá

C18H16O6 Phổ 1H-NMR cũng cho biết hợp chất 55 có chứa nhóm

–O–CH–CH2–O– nhờ các tín hiệu của hệ thống ABC [H 4.78 (1H, dd, 11.5, 4.5 Hz, H-6a), 4.49 (1H, m, H-6), 4.40 (1H, dd, 10.0, 4.5 Hz, H-

6)] Phổ 1H-NMR cũng cho 4 tín hiệu phù hợp với vòng A của rotenoid tại H 8.34 (1H, dd, 8.0, 2.0 Hz, H-1), 7.02 (1H, ddd, 8.0, 8.0, 1.5 Hz, H-2),

7.31 (1H, ddd, 8.5, 7.5, 1.5 Hz, H-3) và 6.88 (1H, dd, 8.5, 1.5 Hz, H-4) Ngoài ra phổ còn cho thấy tín hiệu một OH kiềm nối (H 11.95, s), một

proton vòng thơm (H 6.21, s), một nhóm methoxy ở H 3.93 (3H, s) và một

nhóm methyl ở H 1.97 (3H, s) Phổ 13C–NMR của 55 cho thấy sự hiện diện

của nhóm chức ketone (C 195.3), bảy carbon vòng thơm loại tứ cấp (C

166.5, 162.2, 161.2, 155.8, 120.9, 106.3, 98.5), năm carbon thơm loại methine (C 132.6, 131.1, 121.4, 117.6, 94.1), một carbon carbinol (C

76.9), một carbon tứ cấp bão hoà (C 66.6), một carbon methylene (C 62.2)

và thêm một nhóm methoxy (C 61.5) cùng một nhóm methyl (C 56.4)

Dạng phổ NMR của 55 rất giống với phổ của hợp chất boeravinone C, là

hợp chất trong đó C-9 mang nhóm methoxy, C-10 mang nhóm methyl và

C-11 mang nhóm OH Phổ HMBC của 55 cho thấy proton của nhóm OH

kiềm nối (H 11.95), gắn tại C-11 có tương quan với các tín hiệu tại C

162.2 (C-11), 98.5 (C-11a), 106.3 (C-10) Tín hiệu tại H 6.21 có tương

quan với tín hiệu tại C 161.2 7a), 166.5 9), 106.3 10), 98.5 11a), nên đó là H-8

(C-Tất cả các vị trí khác đều phù hợp với các tín hiệu trong phổ HMBC, như proton tại H 4.40 và 4.49 (H-6) cho tương quan 2,3J với C-4a (C

155.8), C-12a (C 66.6) và C-6 (C 62.2) Tín hiệu của nhóm methoxy tại H

3.93 tương quan với C-9 ( 166.5) và tín hiệu của nhóm methyl tại H 1.97 tương quan với C-10 (C 106.3)

Hoá lập thể của hai vòng súc hợp B/C được xác định nhờ vào phân tích

giá trị hằng số ghép J của H-6a, H2-6 cũng như giá trị độ dịch chuyển hoá

học của H-1 như trong hợp chất boeravinone K Trong hợp chất 55, H-1

cộng hưởng tại H 8.34 cho biết sự súc hợp hai vòng A/B theo cấu hình

trans, hằng số ghép của H-6a là 11.5 và 4.5 Hz cho biết vị trí trục của H-6a

so với hai vòng B và C Vì vậy, cấu trúc hoá học của 55 được đề nghị là

trans-6a,12a-dihydro-11,12a-dihydroxy-9-methoxy-10-methyl[1]

benzopyrano[3,4-b][1]benzopyran-12(6H)-one hay boeravinone R

3.1.3 Khảo sát cấu trúc hoá học của Boeravinone N (56)

Hợp chất số 56 được cô lập từ phân đoạn EA.B4 của loài B diffusa

thân-lá đỏ, và phân đoạn EA.D4 của loài B erecta

  23

D

 -198 (c=0.001, MeOH)

 Khối phổ: HR-ESI-MS (ghi nhận ion dương) m/z 515.1320 [M+Na]+

(tính toán lý thuyết cho C23H24O12 + Na, 515.1165)

 Phổ 1H,13C-NMR: Trình bày trong Bảng 3.1 và 3.2

Boeravinone N (56) có công thức phân tử C23H24O12 nhờ vào khối phổ

có độ phân giải cao, với tín hiệu ion phân tử giả ở m/z 515.1320 [M+Na]+

Phổ đồ 1H-NMR của 56 rất giống phổ của 10-demethylboeravinone C nhưng thiếu tín hiệu của nhóm OH kiềm nối (11-OH) và có xuất hiện thêm

tín hiệu của các proton của một phân tử đường ở vùng 4.9 to 3.3 ppm So sánh phổ 13C-NMR của 56 và 10-demethylboeravinone C cũng cho kết quả

tương tự, xác nhận có tín hiệu của một phần đường β–D–glucopyranosyl với proton anomer tại H 4.85 (d, J = 8.0 Hz) Phổ HMBC cho thấy phần

đường này gắn vào aglycone tại C–11 nhờ mối tương quan của proton H–1’

(H 4.85) và C-11 (C 162.1) Phổ HMBC cũng xác định nhóm methoxy

gắn tại C-9 Vậy 56 là 10-demethylboeravinone C

11-O-β-D-glucopyranoside hay boeravinone N

3.1.4 Khảo sát cấu trúc hoá học của Boeravinone P (57)

Hợp chất số 57 được cô lập từ phân đoạn EA.B3 của loài B diffusa

thân-lá đỏ

 [α]25D +316.5 (c 0.10, MeOH)

 Khối phổ: HR-ESI-MS (ghi nhận ion dương) m/z 365.0638 [M+Na]+

(tính toán lý thuyết cho C18H14O7 + Na, 365.0637)

 Phổ 1H,13C-NMR: Trình bày trong Bảng 3.1 và 3.2

Boeravinone P (57) có công thức phân tử C18H14O7 nhờ vào khối phổ có

độ phân giải cao, với tín hiệu ion phân tử giả ởm/z 365.0638 [M+Na]+ Phổ

13

C-NMR của 57 cho thấy tín hiệu carbon carbonyl liên hợp (C 181.7),

chín carbon vòng thơm loại tứ cấp (C 163.9, 159.1, 156.5, 150.4, 150.1,

130.9, 111.6, 111.0, 105.5), sáu carbon loại methine (C 130.0, 128.1, 123.6, 118.3, 100.8, 96.3), hai nhóm methoxy (C 62.0 and 56.4) Phổ 1H–

1

H COSY của 57 cho thấy bốn proton methine liền kề nhau trong vòng A

của rotenoid, trong đó, H-1 cộng hưởng ở vùng từ trường thấp do ở gần nhóm carbonyl

Phổ HSQC của 57 cho thấy mũi đơn tại H 5.97 là của proton hemiacetal H-6 vì carbon tương ứng của nó cộng hưởng tại C 96.3 Giá trị cộng hưởng này cũng được thấy trong boeravinone A (C 95.3) Nhờ vào H-6, các tương quan trong phổ HMBC cho phép xác định C-12a (C 111.0), C-4a (C

150.1), C-6a (C 156.5) và C6-có mang nhóm methoxy (C 56.4) Các giá trị này phù hợp với dữ liệu phổ NMR của các hợp chất boeravinone

Trong phổ 1H-NMR của 57, tín hiệu mũi đơn ở H 6.33 được xác định là H-8 vì phổ HMBC cho tương quan của proton này với C-11a (C 105.5), C-

10 (C 130.9), C-9 (C 150.4), C-7a (C 159.1) và C-12 (C 181.7) Phổ

HMBC của 57 cũng cho mối tương quan giữa tín hiệu methoxy tại H 3.88

với C-10 (C 130.9) Carbon C-10 có giá trị độ dịch chuyển hoá học ở vùng

từ trường cao như vậy cũng đã có thấy ở vòng D trong hợp chất coccineone

E (C-10 129.3, CDCl3) hoặc 9-O-methyl-10-hydroxycoccineone B (C-10

132.2, CD3OD)

Ngoài ra, phổ NOESY của 57 cho thấy tương quan rất rõ giữa tín hiệu

của nhóm methoxy tại H 3.88 và proton acetal H-6 và không có tương quan nào giữa nhóm methoxy thứ nhì tại H 3.61 và proton methine thơm duy nhất của vòng D Điều này giúp xác định nhóm methoxy thứ nhất là ở

C-6 và nhóm methoxy thứ nhì ở C-10 Cấu trúc hoá học của 57 là

9,11-

dihydroxy-6,10-dimethoxy[1]benzopyrano[3,4-b][1]benzopyran-12(6H)-one hay boeravindihydroxy-6,10-dimethoxy[1]benzopyrano[3,4-b][1]benzopyran-12(6H)-one P

3.1.5 Khảo sát cấu trúc hoá học của Boeravinone Q (59)

Hợp chất số 59 được cô lập từ phân đoạn EA.D2 của loài B erecta

H-NMR của 59 cho các tín hiệu đặc trưng của ba proton kề nhau và một

proton vòng thơm nhưng cô lập [(H 7.11 (1H, t, J = 7.8 Hz), 6.98 (1H,

dd, J = 8.0, 1.4 Hz), 6.72 (1H, dd, J = 7.5, 1.4 Hz) và 6.67 (1H, s)] cùng với

các tín hiệu của nhóm methoxy ở H 3.97 (3H, s) và một nhóm methyl ở H

2.07 (3H, s) Phổ 1H NMR cho thấy sự hiện diện của một phân tử đường