Phân lập và xác định các yếu tố gay bệnh của vi khuẩn escherichia coli, salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở lợn sau cai sữa tại một số huyện ở thành phố hà nội và biện pháp phòng trị

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI --- PHÙNG HẢI HƯNG PHÂN LẬP VÀ XÁC ðỊNH CÁC YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

-

PHÙNG HẢI HƯNG

PHÂN LẬP VÀ XÁC ðỊNH CÁC YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN SAU CAI SỮA TẠI MỘT SỐ HUYỆN Ở

THÀNH PHỐ HÀ NỘI VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ

LUẬN VĂN THẠC SĨ

HÀ NỘI - 2013

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

-

PHÙNG HẢI HƯNG

PHÂN LẬP VÀ XÁC ðỊNH CÁC YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN SAU CAI SỮA TẠI MỘT SỐ HUYỆN Ở

LỜI CAM ðOAN

Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất kì công trình nào khác

Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc

LỜI CẢM ƠN

để hoàn thành luận văn này, cùng với sự nỗ lực cố gắng của bản thân, tôi xin ựược ựặc biệt bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy: PGS.TS Cù Hữu Phú, người ựã trực tiếp hướng dẫn tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn

Tôi xin ựược chân thành cảm ơn tới thầy: TS Trịnh đình Thâu, các thầy cô trong Khoa Thú y, Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội ựã tận tình giúp ựỡ và tạo mọi ựiều kiện cho tôi hoàn thành luận văn này

Tôi xin cảm ơn Ban lãnh ựạo xắ nghiệp thuốc thú y Trung Ương, các anh, chị, em Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y, các bạn ựồng nghiệp ựặc biệt là gia ựình ựã tạo mọi ựiều kiện thuận lợi nhất giúp ựỡ tôi trong quá trình hoàn thành luận văn này

MỤC LỤC

LỜI CAM ðOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CÁC BẢNG vi

DANH MỤC CÁC BIỂU vii

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT viii

MỞ ðẦU 1

1 ðặt vấn ñề 1

2 Mục tiêu nghiên cứu 2

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 2

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Một số hiểu biết chung về hội chứng tiêu chảy 3

1.1.1 Khái niệm về hội chứng tiêu chảy 3

1.1.2 Một số nguyên nhân gây tiêu chảy ở lợn 3

1.1.3 Bệnh lý lâm sàng của hội chứng tiêu chảy 7

1.1.4 Biện pháp phòng trị tiêu chảy cho lợn 8

1.2 Một số nghiên cứu về vi khuẩn E.coli gây bệnh ñường tiêu hóa 10

1.2.1 ðặc ñiểm hình thái, cấu trúc của vi khuẩn 11

1.2.2 ðặc tính nuôi cấy, sinh vật, hoá học 13

1.2.3 ðặc tính gây bệnh của vi khuẩn E coli 14

1.2.4 Khả năng mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn E coli 19

1.2.5 Vai trò của vi khuẩn E coli trong hội chứng tiêu chảy 20

1.3 Những nghiên cứu về vi khuẩn Samonella gây bệnh ñường tiêu hóa 21

1.3.1 ðặc ñiểm hình thái cấu trúc của vi khuẩn 22

1.3.2 ðặc tính nuôi cấy, sinh vật hoá học 22

1.3.3 Cơ chế gây bệnh 23

1.3.4 Khả năng mẫn cảm với kháng sinh 24

1.3.5 Vai trò của vi khuẩn Salmonella trong hội chứng tiêu chảy 24

CHƯƠNG 2 ðỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26

2.1 ðối tượng 26

2.1.1 ðịa ñiểm nghiên cứu 26

2.1.2 Thời gian nghiên cứu: 26

2.2 Nội dung nghiên cứu 26

2.2.1 Nghiên cứu một số ñặc ñiểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy ở lợn sau cai sữa nuôi tại Hà Nội 26

2.2.2 Nghiên cứu xác ñịnh vai trò của vi khuẩn E coli và Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở lợn 26

2.2.3 Thử nghiệm phác ñồ ñiều trị tiêu chảy cho lợn 27

2.3 Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu 27

2.3.1 Mẫu bệnh phẩm 27

2.3.2 Các loại môi trường, hoá chất 27

2.3.3 ðộng vật thí nghiệm 27

2.4 Phương pháp nghiên cứu 27

2.4.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ 27

2.4.2 Thu thập mẫu và phân lập vi khuẩn 29

2.4.3 Xác ñịnh số lượng vi khuẩn E coli và Salmonella trong 1 g chất chứa ruột lợn tiêu chảy và lợn bình thường 31

2.4.4 Xác ñịnh serotyp kháng nguyên của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 32

2.4.5 Phương pháp xác ñịnh các yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược 34

2.4.6 Kiểm tra ñộc lực của các chủng vi khuẩn phân lập trên chuột bạch 35

2.4.7 Xác ñịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 36

2.4.8 Thử nghiệm một số phác ñồ ñiều trị tiêu chảy cho lợn 36

2.4.9 Phương pháp xử lý số liệu 37

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 38

3.1 Một số ñặc ñiểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy ở lợn sau cai sữa tại Hà Nội 38

3.1.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại một số huyện của Hà Nội 38 3.1.2 Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo mùa 39

3 2 Nghiên cứu xác ñịnh vai trò của vi khuẩn E.coli và Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở lợn sau cai sữa 43

3.2.1 Kết quả phân lập vi khuẩn từ các mẫu bệnh phẩm và phân lợn mắc bệnh tiêu chảy 43

3.2.2 Kết quả xác ñịnh số lượng vi khuẩn E coli và Salmonella sp có trong phân lợn tiêu chảy và lợn bình thường 46

3.2.3 Kết quả giám ñịnh ñặc tính sinh hoá của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 48

3.2.4 Kết quả xác ñịnh serotyp của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 50

3.2.5 Kết quả xác ñịnh các yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 52

3.2.6 Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng vi khuẩn E coli và Salmonella sp phân lập ñược trên ñộng vật thí nghiệm 54

3.2.7 Kết quả xác ñịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 57

3.3 Kết quả thử nghiệm phác ñồ ñiều trị tiêu chảy cho lợn 60

KẾT LUẬN 62

1 Kết luận: 62

2 ðề nghị: 63

TÀI LIỆU THAM KHẢO 64

PHỤ LỤC 72

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 3.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại một số huyện 38

Bảng 3.2.Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo mùa 40

Bảng 3.3 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo lứa tuổi 42

Bảng 3.4 Kết quả phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm và phân lợn tiêu chảy 44

Bảng 3.5 Kết quả xác ñịnh số lượng vi khuẩn E coli và Salmonella sp có

trong chất chứa ñường ruột của lợn tiêu chảy và lợn bình thường 47

Bảng 3.6 Kết quả giám ñịnh ñặc tính sinh hoá của các chủng vi khuẩn E coli và Salmonella sp phân lập ñược 49

Bảng 3.7 Kết quả xác ñịnh serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn

E coli phân lập ñược 50

Bảng 3.8 Kết quả xác ñịnh serotyp của các chủng vi khuẩn Salmonella sp phân lập ñược 52

Bảng 3.9 Tỷ lệ các chủng vi khuẩn E coli mang các gen quy ñịnh sinh

tổng hợp các yếu tố gây bệnh 53

Bảng 3.10 Kết quả kiểm tra ñộc lực một số chủng E.coli trên chuột nhắt

trắng 54

Bảng 3.11 Kết quả kiểm tra ñộc lực các chủng Salmonella phân lập ñược 56

Bảng 3.12 Kết quả xác ñịnh tính mẫn cảm của kháng sinh với chủng vi khuẩn

E coli và Salmonella sp phân lập ñược 58

Bảng 3.13 Kết quả ñiều trị thực nghiệm một số phác ñồ ñiều trị bệnh tiêu

chảy lợn sau cai sữa 61

DANH MỤC CÁC BIỂU

Biểu ñồ 3.1: So sánh tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết giữa 3 huyện, thị 39

Biểu ñồ 3.2: So sánh tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết theo mùa vụ 40

Biểu ñồ 3.3: So sánh tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy và chết theo lứa tuổi 43

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

ADP Adenosine DiPhosphate

ATP Adenosine TriPhosphate

BHI Brain Heart Infusion

BPW Buffered Pepton Water

CHO Chinese Hamster Ovary Cell

CIRAD Centre de Cooperation Internationale en Recherche

Agronomique pour le Developpement DHL Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose

DNA DeoxyriboNucleic Acid

DPF Delayer Permebility Factor

E.coli Escherichia coli

EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid

ETEC EnteroToxigenic E coli

LT Heat- Labile Toxin

mARN Messenger Acide RiboNucleotide

RPF Rapid Permebility Factor

ST Heat- stabile Toxin

Stn Salmonella toxin

TSI Triple- Sugar- Iron

PCR Polymerase Chain Reaction

RV Rappaports Vassiliadis

MỞ đẦU

1 đặt vấn ựề

Trong những năm gần ựây, cùng với sự phát triển của nền kinh tế quốc dân, ngành chăn nuôi nói chung và chăn nuôi lợn nói riêng ựã có những bước phát triển mạnh mẽ, trở thành ngành sản xuất quan trọng, chiếm tỷ lệ ựáng kể trong xuất khẩu các sản phẩm chăn nuôi và xoá ựói giảm nghèo

Ở Hà Nội, chăn nuôi lợn có tốc ựộ tăng trưởng khá nhanh, mức tăng ựàn lợn bình quân là 6 - 7%/ năm Tổng ựàn lợn 1.517.316 con (Số liệu thống

kê tắnh ựến 5/2013) Chế biến thịt lợn xuất khẩu vùng trọng ựiểm Thành phố

Hà Nội giai ựoạn 2010 - 2013 Còn theo ựịnh hướng ựược Thủ tướng Chắnh phủ phê duyệt trong quyết ựịnh số 10/2008/Qđ-TTg ngày 16 tháng 01 năm

2008 về chiến lược phát triển chăn nuôi ựến năm 2020, thì ựến năm 2020 mục tiêu là phát triển nhanh quy mô ựàn lợn ngoại theo hướng trang trại, duy trì quy mô nhất ựịnh ựối với chăn nuôi lợn lai, lợn ựặc sản phù hợp với ựiều kiện chăn nuôi của nông hộ và của một số vùng Chăn nuôi lợn ựã bắt ựầu chuyển theo hướng sản xuất hàng hoá và xuất khẩu

Tuy nhiên, người chăn nuôi lợn còn gặp nhiều khó khăn, trong ựó có vấn ựề dịch bệnh Trong nhiều năm qua, hội chứng tiêu chảy thường gặp ở lợn, gây thiệt hại ựáng kể cho người chăn nuôi Hội chứng tiêu chảy không những xảy ra ở lợn con theo mẹ mà còn thấy khá phổ biến ở lợn giai ựoạn sau cai sữa Theo nhiều tác giả, hội chứng tiêu chảy do rất nhiều nguyên nhân gây

ra (virus, vi khuẩn, ựộc tố, thức ăn, thời tiết, vệ sinh, chăm sóc, nuôi

dưỡng ), trong ựó, vi khuẩn E coli và Salmonella thuộc họ vi khuẩn ựường ruột (Enterobacteriacae) ựóng vai trò quan trọng

đã có nhiều công trình nghiên cứu về nguyên nhân gây tiêu chảy ở lợn Phần lớn, các tác giả ựều tập trung tìm hiểu nguyên nhân gây tiêu chảy ở giai ựoạn lợn con theo mẹ, còn giai ựoạn lợn con từ sau cai sữa ựến 6 tháng tuổi,

các nghiên cứu tập trung chủ yếu vào việc xác ñịnh vai trò gây bệnh của vi

khuẩn E coli dung huyết (gây bệnh phù ñầu) và vai trò của vi khuẩn Salmonella trong bệnh phó thương hàn ở lợn

Sau nhiều năm công tác ở xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương và qua thực tế theo dõi tình hình dịch bệnh trên ñàn lợn, chúng tôi nhận thấy hội chứng tiêu chảy

ở lợn từ sau cai sữa ñến 6 tháng tuổi xảy ra khá phổ biến, gây nhiều thiệt hại cho người chăn nuôi

Xuất phát từ yêu cầu cấp thiết của thực tiễn sản xuất, chúng tôi ñã tiến

hành ñề tài: " Phân lập và xác ñịnh các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn Escherichia coli, Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở lợn sau cai sữa tại một số huyện ở Thành phố Hà Nội và biện pháp phòng trị"

2 Mục tiêu nghiên cứu

- Xác ñịnh ñược một số ñặc ñiểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy ở lợn từ sau cai sữa

- Xác ñịnh ñược vai trò gây bệnh của vi khuẩn E coli và Salmonella

trong hội chứng tiêu chảy của lợn

- Xây dựng và ñề xuất phác ñồ ñiều trị bệnh tiêu chảy ở lợn sau cai sữa ñạt hiệu quả

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn

- Công trình ñã chứng minh vai trò của vi khuẩn E coli và Salmonella

trong bệnh tiêu chảy ở lợn sau cai sữa tại 3 huyện Kết quả nghiên cứu của ñề tài là cơ sở khoa học phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo, ñồng thời ñóng góp tư liệu tham khảo, nghiên cứu cho cán bộ thú y và người chăn nuôi

- Kết quả nghiên cứu ñưa ra phác ñồ ñiều trị có hiệu quả, giúp cho thú y

cơ sở, các hộ chăn nuôi trong phòng trị bệnh tiêu chảy cho lợn, góp phần giảm thiệt hại và tăng thu nhập trong chăn nuôi lợn

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Một số hiểu biết chung về hội chứng tiêu chảy

1.1.1 Khái niệm về hội chứng tiêu chảy

Hội chứng tiêu chảy là hội chứng bệnh lý ñường tiêu hoá, là hiện tượng con vật ỉa nhanh, nhiều lần trong ngày, trong phân có nhiều nước do rối loạn chức năng tiêu hoá (ruột tăng cường co bóp và tiết dịch) (Phạm Ngọc Thạch, 1996), hoặc chỉ phản ánh ñơn thuần sự thay ñổi tạm thời của phân gia súc bình thường khi gia súc ñang thích ứng với những thay ñổi trong khẩu phần ăn Tiêu chảy xảy ra ở nhiều bệnh và bản thân nó không phải là bệnh ñặc thù (Archie, 2000)

Tuỳ theo ñặc ñiểm, tính chất, diễn biến bệnh, hoặc loài gia súc, hoặc nguyên nhân chính gây bệnh mà hội chứng tiêu chảy ñược gọi bằng tên khác nhau như: bệnh xảy ra ñối với gia súc non theo mẹ, gọi là bệnh lợn con ỉa phân trắng, hay bê nghé phân trắng, còn ở gia súc sau cai sữa là chứng khó tiêu, chứng rối loạn tiêu hoá hoặc hội chứng rối loạn tiêu hoá Nếu xét về nguyên nhân chính gây bệnh thì có các tên gọi như: bệnh Colibacillosis do vi

khuẩn E coli gây ra, bệnh phó thương hàn lợn do vi khuẩn Samonella spp gây

ra, bệnh viêm dạ dày ruột truyền nhiễm (TGE) do Coronavirus gây ra,…

Song, với bất kỳ cách gọi thế nào thì tiêu chảy luôn ñược ñánh giá là hội chứng phổ biến trong các dạng bệnh của ñường tiêu hoá, xảy ra ở mọi nơi, mọi lúc (Archie, 2000) với các triệu chứng chung là: ỉa chảy, mất nước và chất ñiện giải, suy kiệt, dẫn ñến có thể chết

1.1.2 Một số nguyên nhân gây tiêu chảy ở lợn

Tiêu chảy là một hiện tượng bệnh lý có liên quan ñến nhiều yếu tố, có yếu tố là nguyên nhân nguyên phát, có yếu tố là nguyên nhân thứ phát Vì vậy việc phân biệt rạch ròi giữa các nguyên nhân gây tiêu chảy là rất khó khăn (Phạm Ngọc Thạch, 1996), (Lê Minh Chí, 1995) Có thể liệt kê một số

nguyên nhân quan trọng như sau:

1.1.2.1 Do môi trường ngoại cảnh

Môi trường ngoại cảnh là một trong 3 yếu tố cơ bản gây ra bệnh dịch, mối quan hệ giữa Cơ thể – Mầm bệnh – Môi trường là nguyên nhân của sự không ổn ñịnh sức khoẻ, ñưa ñến phát sinh bệnh (Nguyễn Như Thanh, 2001) Môi trường ngoại cảnh bao gồm các yếu tố: nhiệt ñộ, ẩm ñộ, các ñiều kiện về chăm sóc nuôi dưỡng, vệ sinh chuồng trại, sự di chuyển, thức ăn, nước uống…

Khi gia súc bị nhiễm lạnh kéo dài sẽ làm giảm phản ứng miễn dịch, giảm tác dụng thực bào, làm cho gia súc dễ bị nhiễm khuẩn gây bệnh (Hồ Văn Nam và cs, 1997)

Khẩu phần ăn cho vật nuôi không thích hợp, trạng thái thức ăn không tốt, thức ăn kém chất lượng như mốc, thối và nhiễm các tạp chất, các vi sinh vật có hại dễ dẫn ñến rối loạn tiêu hoá kèm theo viêm ruột, ỉa chảy ở gia súc (Trịnh Văn Thịnh, 1985), (Hồ Văn Nam, 1997)

Khi gặp ñiều kiện ngoại cảnh không thuận lợi, thay ñổi ñột ngột về thức

ăn, vitamin, protein, thời tiết, vận chuyển…làm giảm sức ñề kháng của con vật thì vi khuẩn thường trực sẽ tăng ñộc tố và gây bệnh (Bùi Quý Huy, 2003)

Như vậy, nguyên nhân môi trường ngoại cảnh gây bệnh tiêu chảy không mang tính ñặc hiệu mà mang tính tổng hợp Lạnh và ẩm gây rối loạn hệ thống ñiều hoà trao ñổi nhiệt của cơ thể lợn, dẫn ñến rối loạn quá trình trao ñổi chất, làm giảm sức ñề kháng của cơ thể, từ ñó các mầm bệnh trong ñường tiêu hoá có thời cơ tăng cường ñộc lực và gây bệnh

1.1.2.2 Nguyên nhân do vi sinh vật

Vi sinh vật bao gồm các loại virus, vi khuẩn và nấm mốc Chúng vừa là nguyên nhân nguyên phát, cũng vừa là nguyên nhân thứ phát gây tiêu chảy

* Tiêu chảy do vi khuẩn

Trong ñường tiêu hoá của gia súc có hệ vi khuẩn gọi là hệ vi khuẩn

ựường ruột, ựược chia thành 2 loại, trong ựó vi khuẩn có lợi, có tác dụng lên men phân giải các chất dinh dưỡng, giúp cho quá trình tiêu hoá ựược thuận lợi

và vi khuẩn có hại, khi có ựiều kiện thì gây bệnh

Họ vi khuẩn ựường ruột là họ vi khuẩn cộng sinh thường trực trong ựường ruột Họ vi khuẩn này, muốn từ vi khuẩn cộng sinh trở thành gây bệnh phải có 3 ựiều kiện (Jones, 1980), (Lê Văn Tạo, 1997):

- Trên cơ thể vật chủ có cấu trúc giúp cho vi khuẩn thực hiện ựược chức năng bám dắnh

- Vi khuẩn phải có khả năng sản sinh các yếu tố gây bệnh, ựặc biệt là sản sinh ựộc tố, trong ựó quan trọng nhất là ựộc tố ựường ruột Enterotoxin

- Có khả năng xâm nhập vào lớp tế bào biểu mô của niêm mạc ruột, từ

ựó phát triển nhân lên

Một số vi khuẩn thuộc họ vi khuẩn ựường ruột là E coli, Salmonella sp., Shigella, Klebsiella, C perfringensẦ đó là những vi khuẩn quan trọng,

gây rối loạn tiêu hoá, viêm ruột tiêu chảy ở người và nhiều loài ựộng vật Nguyễn Như Pho (2003) cho rằng, khả năng gây bệnh của các loại vi khuẩn ựối với lứa tuổi lợn khác nhau đối với lợn con theo mẹ, lợn sau cai

sữa hoặc giai ựoạn ựầu nuôi thịt thì tỷ lệ mắc tiêu chảy do Salmonella cao hơn; giai ựoạn từ lúc sơ sinh ựến sau khi cai sữa thường do E coli; lứa tuổi 6 -

12 tuần thì thường do xoắn khuẩn Treponema hyodysenterriae; còn vi khuẩn yếm khắ C.perfringens thường gây bệnh nặng cho lợn con theo mẹ trong

khoảng 1 tuần tuổi ựến cai sữa

* Tiêu chảy do virus

Virus cũng là tác nhân gây bệnh tiêu chảy ở lợn Sự xuất hiện của virus

ựã làm tổn thương niêm mạc ruột, làm suy giảm sức ựề kháng của cơ thể và thường gây ỉa chảy ở dạng cấp tắnh với tỷ lệ chết cao (Phạm Ngọc Thạch, 1996)

Khooteng (1995), ựã thống kê có hơn 10 loại virus có tác ựộng làm tổn

thương ñường tiêu hoá, gây viêm ruột ỉa chảy như: Enterovirus, Rotavius, Coronavirus, Adenovirus type IV, virus dịch tả lợn…

Rotavirus và Coronavirus là những virus gây tiêu chảy quan trọng ở gia

súc non mới sinh như nghé, dê cừu con, lợn con, ngựa con và ñặc biệt là bê do những virus này có khả năng phá huỷ màng ruột và gây tiêu chảy nặng (Archie, 2000) Các nghiên cứu trong nước của (Lê Minh Chí, 1995) và

(Nguyễn Như Pho, 2003) cũng ñã cho rằng: Rotavirus và Coronavirus gây

bệnh tiêu chảy chủ yếu cho lợn con trong giai ñoạn theo mẹ, với các triệu chứng tiêu chảy cấp tính, nôn mửa, mất nước với tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ chết cao

* Tiêu chảy do nấm mốc

Thức ăn khi chế biến hoặc bảo quản không ñúng kỹ thuật dễ bị nấm mốc

Một số loài như: Aspergillus, Penicillium, Fusarium…có khả năng sản sinh nhiều

loại ñộc tố, nhưng quan trọng nhất là nhóm ñộc tố Aflatoxin (Aflatoxin B1, B2, G1, G2, M1 )

ðộc tố Aflatoxin gây ñộc cho người và gia súc, gây bệnh nguy hiểm nhất cho con người là ung thư gan, huỷ hoại gan, ñộc cho thận, sinh dục và thần kinh Aflatoxin gây ñộc cho nhiều loài gia súc, gia cầm, mẫn cảm nhất là vịt, gà, lợn và các gia súc khác Lợn khi nhiễm ñộc thường bỏ ăn, thiếu máu, vàng da, ỉa chảy, ỉa chảy ra máu Nếu trong khẩu phần có 500 - 700µg Aflatoxin/kg thức ăn sẽ làm cho lợn con chậm lớn, còi cọc, giảm sức ñề kháng với các bệnh truyền nhiễm khác (Lê Thị Tài, 1997)

1.1.2.3 Tiêu chảy do ký sinh trùng

Có nhiều loại ký sinh trùng gây bệnh tiêu chảy ở lợn như: cầu trùng

Eimeria, Isospora suis, Crytosporidium, Ascaris suum, Trichuris suis… hoặc một số loài giun tròn lớp Nematoda (Ascaris suum, Trichuris suis, Strongloides, Haemonchus, Mecistocirrus…)

Bệnh do Isospora suis, Crytosporidium thường tập trung vào giai ñoạn

lợn con từ 5- 25 ngày tuổi, còn ở lợn trên 2 tháng tuổi do cơ thể ñã tạo ñược miễn dịch ñối với bệnh cầu trùng, nên lợn chỉ mang mầm bệnh mà ít khi xuất hiện triệu chứng tiêu chảy (Nguyễn Như Pho, 2003)

Cầu trùng và một số loại giun tròn (giun ñũa, giun tóc, giun lươn) là một trong những nguyên nhân gây tiêu chảy ở lợn sau cai sữa nuôi trong các

hộ gia ñình tại Thái Nguyên (Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2006) ðặc ñiểm chủ yếu của tiêu chảy do ký sinh trùng là con vật mắc bệnh bị tiêu chảy nhưng không liên tục, có sự xen kẽ giữa tiêu chảy và bình thường, cơ thể thiếu máu, da nhợt nhạt, gia súc kém ăn, thể trạng sa sút

1.1.3 Bệnh lý lâm sàng của hội chứng tiêu chảy

1.1.3.1 Cơ chế sinh bệnh

Cơ chế sinh bệnh của hội chứng tiêu chảy là quá trình rối loạn chức phận bộ máy tiêu hoá và nhiễm khuẩn Hai quá trình này có thể diễn ra ñồng thời, hoặc cũng có thể quá trình này trước, quá trình kia sau và ngược lại, song không thể phân biệt rõ ñược từng quá trình

1.1.3.2 Bệnh lý, lâm sàng của hội chứng tiêu chảy

Bệnh lý, lâm sàng của hội chứng tiêu chảy ở gia súc ñó là sự biến ñổi

về tổ chức, tình trạng mất nước và chất ñiện giải, trạng thái trúng ñộc của cơ thể bệnh

Sự mất nước kéo theo mất các chất ñiện giải trong dịch thể, ñặc biệt là các ion: HCO3-, K+, Na+, CL-…ñồng thời, khi gia súc bị rối loạn tiêu hoá thì cũng làm cản trở ñến khả năng tái hấp thu nước Ở gia súc ỉa chảy, nếu lượng dịch mất ñi trong ñường ruột vượt quá lượng dịch ñưa vào khi ăn hoặc uống, thận sẽ có gắng bù lại bằng cách cô ñặc nước tiểu ñể giảm lượng nước thải ra Nếu thận không bù ñược, mức dịch thể trong tổ chức bị giảm và máu bị ñặc lại Hiện tượng này gọi là mất nước và triệu chứng lâm sàng là yếu, bỏ ăn, thân nhiệt thấp và có thể truỵ tim, mắt bị hõm sâu, nhìn lờ ñờ, da khô và khi véo da

lên, nếp da chậm trở lại vị trí cũ (Archie, 2000) Lợn bị tiêu chảy gầy sút nhanh, da nhăn, tính ñàn hồi da kém; nếu tiêu chảy lâu ngày, lợn gầy nhô xương sống, da thô, lông dựng ngược Mặt khác, khi cơ thể mất nước và chất ñiện giải sẽ kéo theo sự biến ñổi của hàng loạt các bệnh lý khác nhau

Hiện tượng trúng ñộc xảy ra do thức ăn lên men phân giải sinh ñộc tố, hệ

vi khuẩn ñường ruột sinh sôi, sản sinh ra nhiều ñộc tố Các ñộc tố ñó cùng với các sản phẩm của viêm, tổ chức phân huỷ, ngấm vào máu, tác ñộng vào gan làm chức năng gan rối loạn, gia súc bị trúng ñộc, ñồng thời tác ñộng cản trở quá trình tiêu hoá tiếp tục gây tiêu chảy nặng hơn, tăng nguy cơ nhiễm ñộc máu

và gây tử vong

1.1.3.3 Hậu quả trong hội chứng tiêu chảy

Hậu quả trực tiếp và nặng nề của hiện tượng tiêu chảy là sự mất nước

và mất các chất ñiện giải của cơ thể, kéo theo hàng loạt các biến ñổi bệnh lý (Lê Minh Chí, 1995) Hiện tượng mất nước rất nghiêm trọng và có thể gây chết nếu không ñược ñiều chỉnh Gia súc non dự trữ dịch thể tương ñối thấp nên ñặc biệt mẫn cảm với sự mất nước Chính vì vậy, biện pháp phòng chống

và bù nước trong ñiều trị tiêu chảy luôn luôn phải ñặt ra (Archie, 2000)

Lợn bị tiêu chảy giảm khả năng tiêu hoá, chuyển hoá và hấp thụ các chất dinh dưỡng, nên lợn gầy còm, chậm tăng trọng, dễ dàng mắc các bệnh khác (Phạm Sỹ Lăng và cs, 1997)

Ở lợn, hiện tượng tiêu chảy thường có quá trình nhiễm khuẩn Khi tiêu chảy do nhiễm khuẩn, các triệu chứng trầm trọng hơn và hậu quả ñể lại nặng

nề hơn Bệnh có thể lây lan và kế phát nhiều bệnh khác, gây thiệt hại cho ngành chăn nuôi Như vậy, với mỗi một nguyên nhân gây bệnh khác nhau thì cũng ñể lại những hậu quả khác nhau

1.1.4 Biện pháp phòng trị tiêu chảy cho lợn

1.1.4.1 Phòng bệnh

Phòng bệnh là biện pháp chủ ñộng không ñể bệnh xảy ra Các biện

pháp phòng bệnh ựều xoay quanh các vấn ựề về môi trường, vật chủ và mầm bệnh

Các tác giả (Trịnh Văn Thịnh, 1985), (đào Trọng đạt, 1985) ựề xuất biện pháp phòng bệnh là: giữ ẩm và sưởi cho lợn sơ sinh vào mùa ựông, dọn phân, rác thải trong chuồng ựem ủ nhiệt sinh vật, ựịnh kỳ tẩy uế tiêu ựộc chuồng trại và dụng cụ chăn nuôi

Một số tác giả ựã tập trung nghiên cứu chế tạo và sử dụng vacxin phòng bệnh nhằm kắch thắch cơ thể chủ ựộng sản sinh kháng thể chống lại mầm bệnh (Nguyễn Thị Nội, 1985) dựa trên kết quả xác ựịnh tần suất các

serotype O của E coli gây bệnh phân trắng lợn con ựể chọn các serotype O có

tần suất xuất hiện cao chế vacxin (Lê Văn Tạo, 1997) ựã chọn chủng vi

khuẩn E coli mang kháng nguyên K88 kết hợp với ắt nhất 2 yếu tố gây bệnh

khác nhau là Ent và Hly dùng ựể sản xuất vacxin cho uống và tiêm phòng bệnh lợn con phân trắng Còn các tác giả Nguyễn Thị Nội, Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú (1989) tiến hành nghiên cứu một loại vacxin tổng hợp

gồm các chủng vi khuẩn Salmonella, E coli và Streptococcus ựể phòng bệnh

tiêu chảy cho lợn Việc sử dụng vacxin phòng bệnh tiêu chảy cho ựến hiện nay vẫn ựang ựược tiếp tục nghiên cứu

Ngoài sử dụng vacxin, một số tác giả ựã ựi sâu nghiên cứu các chế phẩm dùng ựể phòng bệnh tiêu chảy đây là biện pháp vừa giúp tăng khả năng ựề kháng, vừa khống chế sự phát triển quá mức của một số loài vi khuẩn

có hại cho cơ thể gia súc Tạ Thị Vịnh, đặng Thị Hoè (2002) ựã sử dụng chế

phẩm VITOM 1.1 (có chứa Bacillus subtilis chủng VKPMV-7092) ựể phòng

và trị bệnh tiêu chảy cho lợn con từ sơ sinh ựến 3 tuần tuổi

Như vậy, vấn ựề phòng bệnh tiêu chảy cho lợn ựã có rất nhiều tác giả nghiên cứu Mỗi một công trình nghiên cứu ựều ựi sâu vào một số khắa cạnh, một số nguyên nhân gây bệnh và ựã ựạt ựược một số kết quả khả quan Tuy nhiên, do có nhiều nguyên nhân và yếu tố gây bệnh, nên vẫn còn nhiều vấn ựề

thực tiễn ñòi hỏi phải giải quyết trong phòng bệnh tiêu chảy cho lợn

- Khắc phục rối loạn tiêu hoá và chống nhiễm khuẩn – những vi khuẩn

ñã phân lập ñược ở gia súc viêm ruột ỉa chảy

- ðiều trị hiện tượng mất nước và chất ñiện giải

Hiện nay, ñể ñiều trị hội chứng tiêu chảy ở lợn, nhiều tác giả ñã nghiên cứu và cho rằng, cần phải xác ñịnh ñược nguyên nhân gây bệnh, hiểu rõ cách sinh bệnh và triệu chứng bệnh Việc sử dụng kháng sinh trong ñiều trị tiêu chảy do nhiễm khuẩn ñược nhiều người nghiên cứu và ñưa ra nhiều phác ñồ khác nhau, nhưng các tác giả ñều thống nhất rằng: sử dụng kháng sinh có hiệu quả cần phải xem xét khả năng mẫn cảm và tính kháng thuốc của vi khuẩn Vấn ñề này, chúng tôi sẽ trình bày rõ hơn ở các phần tiếp sau

1.2 Một số nghiên cứu về vi khuẩn E.coli gây bệnh ñường tiêu hóa

Vi khuẩn Escherichia coli (E coli) trước ñây ñược gọi là Bacterium coli commune hay Bacilus coli communis, lần ñầu tiên phân lập ñược từ phân trẻ em

bị tiêu chảy năm 1885 và ñược ñặt theo tên của người bác sĩ nhi khoa ðức Theodor Escherich (1857 –1911) (Nguyễn Vĩnh Phước, 1974), (Nguyễn Lân Dũng, 1976), (Nguyễn Như Thanh và cs, 1997), (Lê Văn Tạo, 1997)

Vi khuẩn E coli thuộc họ Enterobacteriaceae, là họ vi khuẩn thường

trực ở trong ruột, chiếm tới 80% các vi khuẩn hiếu khí (Hoàng Thuỷ Nguyên

và cs, 1974), vừa là vi khuẩn cộng sinh thường trực ñường tiêu hoá, vừa là vi khuẩn gây nhiều bệnh ở ñường ruột và ở các cơ quan khác (Lê Văn Tạo, 1997)

Trong ñiều kiện bình thường, E coli khu trú thường xuyên ở phần sau của

ruột, ít khi có ở dạ dày hay ñoạn ñầu ruột non của ñộng vật Khi gặp ñiều kiện thuận lợi, chúng phát triển nhanh về số lượng, ñộc lực, gây loạn khuẩn, bội nhiễm ñường tiêu hoá và trở thành nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978)

1.2.1 ðặc ñiểm hình thái, cấu trúc của vi khuẩn

1.2.1.1 ðặc ñiểm hình thái

Vi khuẩn E coli là một trực khuẩn hình gậy ngắn, có kích thước 2 -

3µm x 0,3 - 0,6µm; ở môi trường nuôi cấy, trong canh khuẩn già, xuất hiện những trực khuẩn dài 4 - 8 µm Trong cơ thể người và ñộng vật, vi khuẩn

thường có hình cầu trực khuẩn, ñứng riêng lẻ, ñôi khi xếp thành chuỗi ngắn

Phần lớn vi khuẩn E coli có khả năng di ñộng do có lông ở xung quanh thân,

không sinh nha bào, có thể có giáp mô Vi khuẩn bắt màu gram âm, có thể bắt màu ñều hoặc sẫm ở hai ñầu, khoảng giữa nhạt hơn Nếu lấy vi khuẩn từ khuẩn lạc nhầy ñể nhuộm, có thể thấy giáp mô, nhưng khi soi tươi thì thường không nhìn thấy ñược

1.2.1.2 ðặc ñiểm cấu trúc

Vi khuẩn E coli ñược chia làm các serotype khác nhau dựa vào cấu

trúc kháng nguyên thân O, giáp mô K, lông H và kháng nguyên bám dính F Bằng phản ứng ngưng kết, các nhà khoa học ñã tìm ra ñược 250 serotype O,

89 serotype K, 56 serotype H và một số serotype F (Fairbrother, 1992) Khi

xác ñịnh serotype ñầy ñủ của 1 chủng vi khuẩn E coli thì phải xác ñịnh ñủ cả

3 loại kháng nguyên nói trên

- Kháng nguyên O (Kháng nguyên thân – Ohne Hauch) ñược coi như là một yếu tố ñộc lực có thể tìm thấy ở thành tế bào và có liên hệ trực tiếp với hệ

thống miễn dịch Kháng nguyên O khi gặp kháng huyết thanh tương ứng sẽ xảy ra phản ứng ngưng kết Ngưng kết kháng nguyên O tạo thành những hạt nhỏ, khó tan

- Kháng nguyên H (kháng nguyên lông - Hauch) là thành phần lông của vi khuẩn, có bản chất protein, kém bền vững hơn so với kháng nguyên O Kháng nguyên H không phải là yếu tố ñộc lực của vi khuẩn, nhưng có khả năng tạo miễn dịch mạnh Phản ứng miễn dịch xảy ra nhanh hơn so với kháng nguyên O

Kháng nguyên H của vi khuẩn E coli không có vai trò bám dính,

không có tính ñộc và cũng không có ý nghĩa trong ñáp ứng miễn dịch phòng vệ nên ít ñược quan tâm nghiên cứu, nhưng nó có ý nghĩa rất lớn trong xác ñịnh giống loài của vi khuẩn (Orskov, 1978)

- Kháng nguyên K (Kháng nguyên vỏ bọc - Capsular), còn ñược gọi là kháng nguyên bề mặt (OMP - Outer membrane protein) hoặc kháng nguyên

vỏ bọc (Capsular) Vai trò của kháng nguyên K chưa ñược thống nhất Có rất nhiều ý kiến cho rằng, nó không có ý nghĩa về ñộc lực của vi khuẩn, vì thấy

rằng ñộc lực của chủng E coli có kháng nguyên K cũng giống ñộc lực của

chủng không có kháng nguyên K (Orskov, 1978) Tuy nhiên, có ý kiến khác cho rằng, nó có ý nghĩa về ñộc lực vì nó tham gia bảo vệ vi khuẩn trước những yếu tố phòng vệ của vật chủ Tuy vậy, phần lớn các ý kiến ñều thống nhất kháng nguyên K có hai nhiệm vụ sau:

+ Hỗ trợ trong phản ứng ngưng kết của kháng nguyên O, nên thường ghi

liền công thức serotype của vi khuẩn là Ox:Ky như E coli O139: K88, O149:

K88

+ Tạo ra hàng rào bảo vệ cho vi khuẩn chống lại tác ñộng của ngoại cảnh

và hiện tượng thực bào, yếu tố phòng vệ của vật chủ

Tóm lại, dựa vào kháng nguyên O, E coli ñược chia làm nhiều nhóm; căn cứ vào cấu tạo kháng nguyên O, K, H, E coli lại chia làm nhiều type; mỗi

type ñều ñược ghi thứ tự các yếu tố kháng nguyên O, K, H

- Kháng nguyên F (Kháng nguyên Fimbriae- Kháng nguyên bám dính)

Hầu hết các chủng E coli gây bệnh ñều sản sinh ra một hoặc nhiều

kháng nguyên bám dính Các chủng không gây bệnh thì không có kháng nguyên bám dính Kháng nguyên bám dính giúp vi khuẩn bám vào các thụ thể ñặc hiệu trên bề mặt tế bào biểu mô ruột và trên lớp màng nhày ñể xâm nhập và gây bệnh, ñồng thời chống lại khả năng ñào thải vi khuẩn của nhu ñộng ruột

Một số loại kháng nguyên bám dính của vi khuẩn E coli thuộc nhóm ETEC (Enterotoxigenic E coli) gây bệnh chủ yếu cho lợn là F4 (K88), F5 (K99), F6

(987P), F18 và F41 (Cater và cs, 1995)

1.2.2 ðặc tính nuôi cấy, sinh vật, hoá học

1.2.2.1 ðặc tính nuôi cấy

Vi khuẩn E coli là trực khuẩn hiếu khí và yếm khí tùy tiện, có thể sinh

trưởng ở phổ nhiệt ñộ khá rộng (từ 5- 400C), nhiệt ñộ thích hợp là 370C và phổ pH rộng (pH từ 5,5 – 8,0), pH thích hợp nhất là từ 7,2-7,4

Vi khuẩn E coli phát triển dễ dàng trên các môi trường nuôi cấy thông

thường Khi nuôi cấy trên các môi trường, ñể trong tủ ấm ở 37oC và sau 24 giờ vi khuẩn sẽ phát triển như sau:

- Môi trường thạch thường: Hình thành những khuẩn lạc tròn, ướt, bóng láng không trong suốt, màu tro trắng nhạt, hơi lồi, ñường kính từ 2-3mm Nuôi lâu, khuẩn lạc có màu nâu nhạt và mọc rộng ra, có thể quan sát thấy cả những khuẩn lạc dạng R (Rough) và M (Mucous)

- Môi trường nước thịt: Phát triển rất nhanh, tốt, môi trường ñục ñều có

lắng cặn màu tro nhạt ở dưới ñáy, ñôi khi có màu xám nhạt, canh trùng có mùi phân thối

- Môi trường MacConkey: Khuẩn lạc có màu hồng cánh sen, tròn nhỏ, hơi lồi, không trầy, rìa gọn, không làm chuyển màu môi trường

- Môi trường thạch máu: khuẩn lạc to, ướt, lồi, viền không gọn, màu

xám nhạt, một số chủng có khả năng và gây ra hiện tượng tan máu

- Môi trường Simmon citrat: Khuẩn lạc không màu trên nền xanh lục

- Môi trường Endo: Khuẩn lạc màu ñỏ

- Trong môi trường EMB: Khuẩn lạc màu tím ñen

- Trong môi trường SS: Khuẩn lạc có màu ñỏ

1.2.2.2 ðặc tính sinh vật hoá học

- Phản ứng lên men ñường: Vi khuẩn E coli lên men sinh hơi các loại

ñường Lactose, Fructose, Glucose, Levulose, Galactose, Xylose, Manitol; lên men không chắc chắn các loại ñường Duncitol, Saccarose và Salixin

Hầu hết các chủng vi khuẩn E coli ñều lên men ñường Lactose nhanh và sinh hơi, ñây là ñặc ñiểm quan trọng ñể dựa vào ñó phân biệt vi khuẩn E coli và Samonella

- Một số phản ứng sinh hoá khác: Phản ứng Indol và MR dương tính, phản ứng H2S, VP, Urea âm tính

1.2.3 ðặc tính gây bệnh của vi khuẩn E coli

1.2.3.1 Cơ chế gây bệnh của vi khuẩn E coli

ðể có thể gây bệnh, trước hết vi khuẩn E coli phải bám dính vào tế bào

nhung mao ruột bằng các yếu tố bám dính như kháng nguyên F Sau ñó, nhờ các yếu tố xâm nhập (Invasion), vi khuẩn sẽ xâm nhập vào tế bào biểu mô của thành ruột Ở ñó, vi khuẩn phát triển, nhân lên, phá huỷ lớp tế bào biểu mô, gây viêm ruột, ñồng thời sản sinh ñộc tố ñường ruột Enterotoxin ðộc tố ñường ruột tác ñộng vào quá trình trao ñổi muối, nước, làm rối loạn chu trình này Nước từ cơ thể tập trung vào lòng ruột làm căng ruột, cùng với khí do lên men ở ruột gây nên một tác dụng cơ học, làm nhu ñộng ruột tăng, ñẩy nước và chất chứa ra ngoài, gây nên hiện tượng tiêu chảy Sau khi ñã phát triển ở thành ruột, vi khuẩn vào hệ lâm ba, ñến hệ tuần hoàn, gây nhiễm trùng máu Trong máu, vi khuẩn chống lại hiện tượng thực bào, gây dung huyết, làm cho

cơ thể thiếu máu Từ hệ tuần hoàn, vi khuẩn ñến các tổ chức cơ quan Ở ñây,

vi khuẩn lại phát triển nhân lên lần thứ hai, phá huỷ tế bào tổ chức, gây viêm

và sản sinh ñộc tố gồm Enterotoxin và Verotoxin, phá huỷ tế bào tổ chức, gây

tụ huyết và xuất huyết

1.2.3.2 Các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E coli

Các yếu tố gây bệnh của E coli bao gồm khả năng kháng khuẩn, yếu

tố bám dính, khả năng xâm nhập, yếu tố gây dung huyết và khả năng sản

xuất ñộc tố Các chủng vi khuẩn E coli không có các yếu tố trên thì không

có khả năng gây bệnh

Dựa vào các yếu tố gây bệnh nói trên, người ta ñã phân loại vi khuẩn

E coli thành các loại sau: Enterotoxigenic E coli (ETEC), Enteropathogenic

E coli (EPEC), Adherence Enteropathogenic E coli (AEEC) và Verotoxingenic E.coli (VTEC) (Lê Văn Tạo, 1997) Trong ñó, các chủng vi

khuẩn thuộc nhóm ETEC và VTEC thường gây bệnh tiêu chảy cho lợn con

sơ sinh và lợn sau cai sữa (Fairbrother, 1992)

* Yếu tố kháng khuẩn

Nhiều chủng vi khuẩn E coli có khả năng sản sinh ra chất kháng khuẩn

có tác dụng ức chế hoặc tiêu diệt các loại vi khuẩn khác, gọi là ColicinV Vì

vậy, yếu tố này cũng ñược coi là 1 trong các yếu tố ñộc lực của vi khuẩn E coli gây bệnh (Smith và cs, 1967)

* Yếu tố bám dính

ðể gây bệnh, các chủng ETEC phải bám dính lên trên tế bào biểu mô của ruột non Hầu hết các chủng ETEC ñều có mang 1 hoặc nhiều các yếu tố bám dính như: F4(K88), F5 (K99), F6(987P), F17, F18, F41, F42 và F165 Ở lợn, các chủng vi khuẩn ETEC gây bệnh tiêu chảy thường mang các yếu tố bám dính sau ñây:

- F4 (K88): F4 hay còn gọi là K88 và là một kháng nguyên không chịu

nhiệt Bằng việc sử dụng các kháng huyết thanh ñặc hiệu, (Orskov và cs, 1964)

ñã phân biệt ñược hai loại khác nhau của F4 là F4ab và F4ac Loại thứ 3 ñược

phát hiện bởi Guinee và Jansen ñược ñặt tên là F4ad (Guinee và cs, 1979) Sợi

F4giúp cho vi khuẩn bám ñược vào receptor tương ứng của nó trên tế bào biểu

mô của lông nhung ruột non, từ ñó vi khuẩn có thể xâm nhập cố ñịnh và phát

triển ñược ở thành ruột non Yếu tố bám dính F4 ñược mang trong vi khuẩn E coli thuộc nhóm ETEC, gây bệnh tiêu chảy ở lợn trước và sau cai sữa (Nagy và

cs, 1999)

- F5 (K99): F5 trước kia ñược cho là kháng nguyên bám dính của

E.coli chỉ gây bệnh ở bê, nghé và cừu Tuy nhiên, hiện nay chúng cũng ñược

tìm thấy với tỷ lệ thấp ở các chủng ETEC phân lập từ lợn tiêu chảy (Links và

cs, 1985) Sự sản sinh F5 phụ thuộc vào nhiều yếu tố của vi khuẩn như: Tốc

ñộ sinh trưởng, pha sinh trưởng, nhiệt ñộ và alanine trong môi trường Các gen

mã hóa cho sự tổng hợp F5 nằm trên ADN của plasmid (Isaacson, 1977)

- F6 (987p): Các nhà khoa học cho rằng, fimbriae này ñóng vai trò

quan trọng trong việc gây bệnh của ETEC F6 của ETEC ở lợn có thể giúp vi khuẩn bám vào cả các receptor cấu tạo bởi glycoprotein và glycolipid trên riềm trải của các tế bào biểu mô ruột (Dean và cs, 1989, 1994) F6 bám dính ở

màng nhầy ñể phân phối ñộc tố ñường ruột tối ña ñến vật chủ

- F18: F18 là tên ñặt cho nhân tố bám dính 8813 Bởi vậy, một loại

fimbriae mới ñã ñược ñề nghị công nhận là F18ab và F18ac (Rippinger và cs, 1995) Một nghiên cứu của (Nagy và cs, 1996) thấy rằng F18ab và F18ac khác nhau về mặt sinh học F18ab ít thấy thể hiện ở cả trong ñiều kiện thực tế

và trong phòng thí nghiệm Chúng thường thấy cùng với việc sản xuất SLT-2e

ở các chủng VTEC, trong khi F18ac thể hiện rất rõ ở cả trong thực tế và trong

phòng thí nghiệm, chúng mang các ñặc tính của các chủng ETEC

Một ñặc ñiểm ñáng chú ý ở F18ac là chúng không bám vào riềm bàn chải của lợn sơ sinh trong ñiều kiện thực tế và trong phòng thí nghiệm (Nagy và

cs, 1992), cũng không tập trung ở lớp màng nhầy của ruột ở lợn con mới sinh (Casey và cs, 1992) ðiều này ngược với F5 và F6, chúng bám vào các tế bào

biểu mô ruột Khả năng bám này ở lợn cai sữa nhiều hơn so với lợn sơ sinh

Lý do xác ñáng ñể giải thích về việc tăng sự mẫn cảm với bám dính của F18ab và F18ac theo tuổi của lợn vẫn chưa ñược làm rõ, nhưng có thể là do

sự tăng dần các receptor ñặc hiệu ở lông nhung của ruột lợn từ sơ sinh ñến 21 ngày tuổi Sự thiếu hụt các receptor của F18ab và F18ac ở lợn sơ sinh có thểgiải thích cho lý do vì sao chỉ thấy các chủng VTEC và ETEC ở lợn cai sữa (Nagy và cs, 1999)

* Yếu tố xâm nhập của vi khuẩn E coli: là một khái niệm dùng ñể chỉ quá trình chưa ñược xác ñịnh một cách rõ ràng mà nhờ ñó vi khuẩn E coli qua ñược

hàng rào bảo vệ của lớp màng nhầy (mucosa) trên bề mặt niêm mạc ñể xâm nhập vào tế bào biểu mô (Epithel), ñồng thời sinh sản và phát triển trong lớp tế bào này Trong khi ñó những vi khuẩn khác không có khả năng xâm nhập, không thể qua ñược hàng rào bảo vệ của lớp màng nhầy hoặc khi qua ñược hàng rào này, sẽ bị giữ lại bởi tế bào ñại thực bào của tổ chức hạ niêm mạc (Giannella

và cs, 1976)

* ðộc tố của vi khuẩn E coli

Vi khuẩn E coli sản sinh nhiều loại ñộc tố: Enterotoxin, Verotoxin,

Neurotoxin Mỗi loại ñộc tố gắn với một thể bệnh mà chúng gây ra

- Nhóm ñộc tố ñường ruột (Enterotoxin) (gồm hai loại)

+ ðộc tố chịu nhiệt (Heat Stable Toxin - ST): ðộc tố này chịu ñược

nhiệt ñộ 1000C trong vòng 15 phút ðộc tố ST chia thành hai nhóm STa và STb

dựa trên ñặc tính sinh học và khả năng hòa tan trong methanol STa kích thích

sản sinh ra cGMP mức cao trong tế bào, ngăn trở hệ thống chuyển Na+ và Cl-, làm giảm khả năng hấp thu chất ñiện giải và nước ở ruột STa thường thấy ở

ETEC gây bệnh ở lợn < 2 tuần tuổi và ở lợn lớn

STb kích thích vòng nucleotid phân tiết dịch ñộc lập ở ruột, nhưng phương thức tác dụng của STb vẫn chưa ñược hiểu rõ STb hoạt ñộng ở ruột non lợn, nhưng không hoạt ñộng ở ruột non chuột, bê và bị vô hoạt bởi

Trypsin STb tìm thấy ñược ở 75% các chủng vi khuẩn E coli phân lập từ lợn

con, 33% phân lập từ lợn lớn (Fairbrother và cs, 1992) Vai trò của STb trong tiêu chảy chưa ñược biết ñến, mặc dù ETEC sản sinh STb có thể kích thích gây tiêu chảy ở lợn con trong ñiều kiện thực nghiệm và STb làm teo lông nhung ruột lợn(Cater và cs, 1995)

Cả STa và STb ñều có vai trò quan trọng trong việc gây tiêu chảy do

các chủng E coli gây bệnh ở bê, nghé, dê, cừu, lợn con và trẻ sơ sinh

+ ðộc tố không chịu nhiệt (Heat Labile Toxin - LT): ðộc tố này bị vô hoạt ở nhiệt ñộ 600C trong vòng 15 phút LT cũng có hai nhóm phụ LT1 và LT2, nhưng chỉ có LT1 bị trung hòa bởi Anticholerae toxin LT là một trong những yếu tố quan trọng gây triệu chứng tiêu chảy (Fairbrother và cs, 1992)

Cả 2 loại ñộc tố ST và LT ñều bền vững ở nhiệt ñộ âm, thậm chí cả ở nhiệt ñộ

âm 200C

- Nhóm ñộc tố tế bào (Shiga /Verotoxin)

Konowalchuck và cs (1977) ñã phát hiện một loại ñộc tố hoạt ñộng trong môi trường nuôi cấy tế bào Vero (nên chúng ñược ñặt tên là ñộc tố tế bào

Vero), ñược sản sinh bởi vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy ở người, tiêu chảy

và bệnh phù ñầu ở lợn con Ảnh hưởng gây bệnh ở tế bào của ñộc tố Vero rất khác so với ảnh hưởng của ñộc tố ñường ruột không chịu nhiệt cổ ñiển ở nhóm

vi khuẩn E coli gây bệnh ñường ruột (ETEC) ðộc tố Vero (VTs) hay Shiga

(SLTs) là thuật ngữ ñược sử dụng trước ñây Gần ñây, các nhà khoa học ñã ñề nghị sử dụng tên ñộc tố Shiga (Stx) cho tất cả những ñộc tố tế bào này Stx sản

sinh bởi E coli bao gồm 2 nhóm: Stx1và Stx2 ðộc tố Shiga ở lợn là một loại

trong nhóm ñộc tố Stx2 với một số khác biệt trong ñặc tính sinh học Stx1 và Stx2 gây ñộc cho tế bào Hela Stx2e kém ñộc hơn, nhưng gây ñộc mạnh cho

tế bào Vero

* Vai trò gây bệnh của các loại kháng nguyên

Theo ý kiến của nhiều tác giả, mặc dù các vi khuẩn E coli có nhiều loại

kháng nguyên, trong ñó, có loại tạo miễn dịch phòng vệ cho vật chủ, có loại không tạo miễn dịch phòng vệ cho vật chủ nhưng ñều tham gia vào quá trình gây bệnh bằng cách tạo ñiều kiện cho vi khuẩn xâm nhập vào tế bào vật chủ và tham gia vào quá trình kháng lại các yếu tố phòng vệ tự nhiên của vật chủ Các kháng nguyên tham gia quá trình trên phải kể ñến là kháng nguyên O, kháng nguyên K, kháng nguyên F

* Yếu tố dung huyết (Hly)

ðể phát triển trong cơ thể, vi khuẩn E coli cần ñược cung cấp sắt Hầu hết những chủng E coli gây bệnh thường có khả năng gây dung huyết

ðể chiếm dụng sắt của vật chủ, vi khuẩn E coli tiết men Heamolyzin phá vỡ

hồng cầu, giải phóng sắt trong nhân HEM Có 4 kiểu dung huyết của vi khuẩn

E coli là: α-haemolysin, β-haemolysin, γ-haemolysin, ε-haemolysin, nhưng

quan trọng nhất là kiểu α-haemolysin và β-haemolysin (Ketyle và cs, 1975)

1.2.4 Khả năng mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn E coli

ðể trị bệnh ñường ruột, người ta sử dụng nhiều loại kháng sinh Kháng sinh còn ñược trộn vào thức ăn với tỷ lệ thấp ñể phòng bệnh và kích thích tăng trọng Vì vậy, khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn ñường ruột

nói chung và vi khuẩn E coli nói riêng ñang ngày một tăng, làm cho hiệu quả

ñiều trị giảm, thậm chí nhiều loại kháng sinh còn bị vô hiệu hóa hoàn toàn

Sở dĩ khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn nói chung và E coli

nói riêng tăng nhanh, lan rộng vì gen sản sinh yếu tố kháng kháng sinh nằm trong plasmid R (Resistance) Plasmid này có thể di truyền dọc và di truyền ngang cho tất cả quần thể vi khuẩn thích hợp (Falkow, 1975)

Sử dụng phương pháp kháng sinh ñồ, (Lê Văn Tạo, 1993) ñã xác ñịnh

ñược khả năng kháng kháng sinh của các chủng E coli phân lập từ bệnh phân trắng lợn con và kết luận vi khuẩn E coli có ñược khả năng này là do nhận

ñược bằng di truyền dọc và di truyền ngang qua plasmid Với những ý nghĩa trên, ngày nay việc nghiên cứu khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn

không còn ñơn thuần là việc lựa chọn kháng sinh mẫn cảm ñể ñiều trị bệnh do

E coli gây ra mà là nghiên cứu một yếu tố gây bệnh của vi khuẩn này

Phạm Khắc Hiếu và cs (1999) ñã tìm thấy chủng E coli kháng lại 11

loại kháng sinh, ñồng thời chứng minh khả năng di truyền tính kháng thuốc

giữa E coli và Salmonella qua plasmid

Bùi Xuân ðồng (2002) ñã tiến hành thử kháng sinh ñồ với các chủng

E coli phân lập ñược từ Hải Phòng và cho kết quả mẫn cảm với các loại

kháng sinh Chloramphenicol, Norfloxacin, Ampicilin; còn với các chủng tại Tiền Giang thì (Bùi Trung Trực, 2004) chỉ ra rằng chúng vẫn mẫn cảm mạnh với Norfloxacin và Colistin

Trương Quang và cs (2006) kiểm tra khả năng mẫn cảm với kháng

sinh của các chủng vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy cho bê, nghé ñã cho

thấy các loại Neomycin, Norfloxacin và Colistin có tác dụng tốt

Như vậy, có thể thấy, qua thời gian và ở các ñịa ñiểm khác nhau, tính

kháng kháng sinh của vi khuẩn E coli gây bệnh cũng khác nhau

1.2.5 Vai trò của vi khuẩn E coli trong hội chứng tiêu chảy

Bệnh tiêu chảy có ở hầu hết các nước trên thế giới cũng như ở Việt Nam, gây thiệt hại ñáng kể cho ngành chăn nuôi Trong chăn nuôi lợn, bệnh xảy ra ở mọi lứa tuổi và ñã có nhiều công trình nghiên cứu về bệnh Các tác

giả trong và ngoài nước ñều nhấn mạnh vai trò của vi khuẩn E coli trong hội

chứng tiêu chảy

Theo nhiều nhà nghiên cứu khoảng 20 – 50% lợn con chết trong những

ngày sơ sinh do E coli gây nên, ñôi khi tỷ lệ chết tới 10% (Niconxki, 1986)

ðể xác ñịnh vai trò của một E coli gây ra một bệnh nào ñó, cần kiểm tra ñộc lực và các yếu tố gây bệnh mà chủng E coli ñó có ñược Do vậy, kết quả những nghiên cứu về ñộc lực, yếu tố gây bệnh của E coli chính là ñánh

giá khả năng gây bệnh của nó (Lê Văn Tạo và cs, 2003)

Cù Hữu Phú và cs (2004) ñã kết luận: vi khuẩn E coli là nguyên nhân

chắnh gây bệnh tiêu chảy ở lợn con theo mẹ; các chủng E coli có thể mang tổ

hợp các yếu tố gây bệnh như: LT + STa + STb + K88 + Hly+ (29.29%); LT + STa + STb + Hly- (8.33%)

Khi nghiên cứu về vai trò gây bệnh của E coli trong hội chứng tiêu

chảy ở lợn 1 Ờ 60 ngày tuổi, tác giả (Trương Quang, 2005) ựã có kết luận:

100% mẫu phân của lợn bị tiêu chảy phân lập ựược E coli với số lượng gấp

2,46 Ờ 2,73 lần (ở lợn 1 Ờ 21 ngày tuổi) và 1,88 Ờ 2,1 lần (ở lợn 22 Ờ 60 ngày

tuổi) so với lợn không tiêu chảy Tỷ lệ các chủng E coli phân lập từ lợn bị

tiêu chảy có ựộc lực mạnh và các yếu tố gây bệnh cao hơn rất nhiều so với ở lợn không bị tiêu chảy Cụ thể: yếu tố bám dắnh: 93,33% so với 33,33%; khả năng dung huyết: 53,33% so với 25,92%; ựộc tố chịu nhiệt (LT): 90% - 11,11%, cả 2 loại ST + LT: 73,33% so với 1,4%, ựộc lực mạnh (giết chết 100% chuột): 90% so với 0%

Tìm hiểu nguyên nhân chủ yếu gây bệnh tiêu chảy lợn con, (Hồ đình

Soái và cs, 2005) ựã nhận xét: 100% mẫu phân lợn tiêu chảy phân lập ựược E coli với số lượng nhiều gấp 2,37 lần (1- 45 ngày tuổi) và gấp 2,31 lần (45 - 60 ngày tuổi) so với lợn bình thường không tiêu chảy độc lực của vi khuẩn E coli và Salmonella gây chết chuột từ 50 - 100%, thời gian gây chết 6 -36 giờ độc tố gây bệnh của vi khuẩn E coli gồm: 60% có ựộc tố STb, tỷ lệ LT, STa

và VT2 là 40%, 20% và 10%, có 4 chủng sinh ựộc tố EAST1, 2 chủng sản sinh 2 loại ựộc tố STb và LT, 2 chủng sản sinh 3 loại ựộc tố STa, STb và LT

1.3 Những nghiên cứu về vi khuẩn Samonella gây bệnh ựường tiêu hóa

Vi khuẩn Salmonella thuộc họ vi khuẩn ựường ruột ựược Salmon và Smith phát hiện vào năm 1886 khi xác ựịnh Salmonella choleraesuis là

nguyên nhân gây bệnh dịch tả lợn (Hog Cholera), một bệnh mà cho ựến 20 năm sau ựó, mới khẳng ựịnh là do virus gây nên (Lê Văn Tạo, 1997) Theo Tổ chức Y tế thế giới (W.H.O), các nhà khoa học ựã xác ựịnh ựược hơn 2200

serotype Salmonella khác nhau, trong ựó chỉ khoảng 5% serotype có khả năng

gây bệnh, số còn lại là vi khuẩn tự dưỡng hoặc hoại sinh

Vi khuẩn Salmonella thường ñược ñặt tên theo nơi phân lập ñược như:

S newsport, S dublin, hoặc theo triệu chứng, bệnh tích gây nên: S enteritidis,

S cholerasuis Ở Việt Nam, kết quả nghiên cứu bước ñầu của (Lê Văn Tạo

và cs, 1997) S choleraesuis chiếm 50%, S typhimurium chiếm 6,25%, S entertidis chiếm 12,5% và 31,25% thuộc các loại serotype khác

1.3.1 ðặc ñiểm hình thái cấu trúc của vi khuẩn

Salmonella là trực khuẩn hình gậy ngắn, hai ñầu tròn, có kích thước

khoảng 0,4 – 0,6 x 1 – 3 µm, không hình thành giáp mô và nha bào, có lông

và di ñộng ñược (trừ S pullorum gallinarum) Vi khuẩn bắt mầu gram âm Cấu trúc kháng nguyên của Salmonella rất phức tạp, gồm có: kháng

nguyên O, kháng nguyên K hoặc kháng nguyên OMP (Outer membrane protein)

và kháng nguyên H Kháng nguyên H có 2 pha, pha 1 ñặc hiệu, pha 2 không ñặc hiệu Kháng nguyên H và O không phụ thuộc vào nhau trong quá trình ñáp ứng miễn dịch, hiệu giá ngưng kết kháng thể H thường cao hơn hiệu giá ngưng kết kháng thể O

Những năm gần ñây, các nhà khoa học ñã phát hiện thêm kháng nguyên

Pili của Salmonella, yếu tố giúp vi khuẩn bám vào thành niêm mạc Kháng nguyên Pili của Salmonella thuộc nhóm CFA/I (Cholerae Factor Adherence)

và có quan hệ với phản ứng kháng nguyên Có tới 80% serotype Salmonella

sản sinh kháng nguyên Pili

1.3.2 ðặc tính nuôi cấy, sinh vật hoá học

1.3.2.1 ðặc tính nuôi cấy

Salmonella là trực khuẩn vừa hiếu khí, vừa yếm khí, nhiệt ñộ thích hợp

cho sự phát triển là 37oC, ñộ pH = 7,2 – 7,6 Vi khuẩn có sức chịu ñựng tốt với các ñiều kiện khắc nghiệt Chúng có thể phát triển ñược từ 7 - 45oC; tồn tại ñược ở trong băng ñá và ngay cả khi bị sấy khô qua nhiều tuần, tháng, vài năm ở trạng thái tiềm sinh

Vi khuẩn cũng có thể bị diệt bằng nhiệt ñộ, ánh sáng mặt trời, các chất sát trùng thông thường như phenol, formol hoặc crezyl

Trong phòng thí nghiệm, vi khuẩn ñược nuôi cấy trên các môi trường:

- Trên môi trường nước thịt: làm ñục, sinh cặn ở ñáy ống nghiệm, có màng mỏng và mùi thối

- Trên môi trường SS (Salmonella Shigella): do không lên men ñường

lactose, khuẩn lạc ở dạng trong hoặc không màu

- Môi trường Endo: khuẩn lạc có màu vàng

- Môi trường thạch EMB: khuẩn lạc có màu ñỏ

1.3.2.2 ðặc tính sinh vật hoá học

Vi khuẩn Salmonella không lên men ñường glucose, lactose, phản ứng

VP âm tính, không sản sinh Indol, không thủy phân Ure

1.3.3 Cơ chế gây bệnh

Quá trình gây bệnh ở trong ñường tiêu hoá của Salmonella lần ñầu tiên

ñược mô tả bởi một thí nghiệm trên chuột lang vào năm 1967 (Wilcock và Schwartz, 1992) Thí nghiệm cho thấy, qua một quá trình sinh sản trên bề mặt

thành ruột, Salmonella sẽ xuyên qua lớp màng và xâm nhập vào bên trong tế

bào biểu mô, ñặc biệt ở ñoạn hồi tràng Tại ñây, nó gây tổn thương các tế bào biểu mô ruột Trong giai ñoạn này, vi khuẩn bị thực bào, song các ñại thực bào không phá huỷ ñược vi khuẩn hoàn toàn Kết quả là sau 24 giờ xâm nhập,

vi khuẩn ñã phát triển trong ñại thực bào và mô lympho ruột ðồng thời với

sự phát triển nhanh về số lượng vi khuẩn là việc xuất hiện thể bệnh cấp tính,

sự tập trung các ñại thực bào, phản ứng viêm tạo thành huyết khối, gây rối loạn tuần hoàn cục bộ vi mạch ở lớp dưới niêm mạc Hậu quả là dẫn tới hoại

tử ở niêm mạc ruột tại ñiểm bị vi khuẩn tấn công ðặc ñiểm bệnh tích trên có

thể coi là 1 trong những dấu hiệu ñặc trưng bệnh do Salmonella gây ra

Như vậy, khả năng gây bệnh của Salmonella cũng giống như với vi khuẩn E coli ñó là khi gặp ñiều kiện bất lợi, làm giảm sức ñề kháng của con

vật thì vi khuẩn thường trực sẽ tăng ựộc tố và gây bệnh

1.3.4 Khả năng mẫn cảm với kháng sinh

Cũng như vi khuẩn E coli, Salmonella cũng kháng với nhiều loại

kháng sinh, mà nguyên nhân là do trong quá trình chăn nuôi, trong ựiều trị bệnh còn có nhiều thiếu sót về kỹ thuật như: dùng không ựúng liều lượng, không ựủ thời gian và khả năng di truyền tắnh kháng thuốc giữa các vi khuẩn với nhau

Các tác giả Nguyễn Quang Tuyên (1996), Phạm Khắc Hiếu và Bùi Thị

Tho (1999) chỉ ra rằng, Salmonella mẫn cảm mạnh với Chloramphenicol, mẫn

cảm trung bình với Neomycin và kháng mạnh với Chlotetracyclin, Penicillin, Ampicillin và Sulphonamide với 100% số chủng nghiên cứu

Nghiên cứu của Cù Hữu Phú và cs (1999) cho rằng: Salmonella mẫn

cảm mạnh với Neomycin và Nitrofurazolidon với 80 Ờ 90% số chủng phân lập ựược và kháng mạnh với Penicillin và Ampicillin

Như vậy, các loại thuốc như: Furazolidon, Chloramphenicol,

Nitrofurazolidon là thuốc có tắnh mẫn cảm cao với Salmonella Tuy nhiên,

hiện nay theo quy ựịnh của nhà nước, các loại thuốc này là loại thuốc cấm sử dụng trong phòng và trị bệnh cho vật nuôi Vì vậy, cần có những nghiên cứu

tắnh mẫn cảm của Salmonella với các loại kháng sinh khác

1.3.5 Vai trò của vi khuẩn Salmonella trong hội chứng tiêu chảy

Bệnh do Salmonella gây ra ở lợn con theo mẹ là rất ắt gặp Bởi vì, trong

máu của lợn con còn hàm lượng kháng thể cao do sữa ựầu của lợn mẹ cung cấp và có hoạt ựộng bảo hộ cho ựến khi những lợn con cai sữa Lợn sau cai sữa do không còn nguồn cung cấp globulin miễn dịch, nguồn thức ăn và pH ựường ruột thay ựổi, vì thế con con rất dễ bị nhiễm bệnh (Wilcock, 1978) Bergeland (1980), đào Trọng đạt và cs (1996) ựã nêu cụ thể: ựối với lợn con trong giai ựoạn theo mẹ, bệnh rất hiếm khi xảy ra, tỷ lệ mắc bệnh chỉ khoảng 0,1% so với tổng số ca bệnh tiêu chảy do các nguyên nhân khác

Wilcock.B.P, Schwartz.K.J (1992) cho rằng: bệnh truyền nhiễm do

Salmonella gây ra chủ yếu cho lợn con sau cai sữa với các triệu chứng ñiển

hình là nhiễm trùng huyết, nhiễm ñộc huyết và viêm ruột ỉa chảy Tác giả còn cho biết: vi khuẩn có thể gây bệnh cho lợn nuôi bởi nhiều serotype có trong tự nhiên, nhưng với bệnh tiêu chảy ở lợn con sau cai sữa thì chỉ phát hiện có 2

serotype là: S choleraesuis và S typhimurium Trong 2 chủng vi khuẩn Salmonella thường xuyên gây bệnh tiêu chảy cho lợn, S choleraesuis ñược phát hiện trên 95%, S typhimurium khoảng 4% và dưới 1% thuộc về những

serotype khác (Schwartz, 1992)

Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Nội và cs (1989), có tới 82,8% ñến

100% số lợn tiêu chảy phân lập ñược vi khuẩn Salmonella gây bệnh

Kết quả nghiên cứu của Lê Văn Tạo và cs (1993) ñã chỉ ra rằng trong số,

50 mẫu bệnh phẩm từ lợn tiêu chảy, ñã phân lập ñược 16 chủng Salmonella sp, trong ñó có 8 chủng thuộc S choleraesuis, 2 chủng S enteritidis và 1 chủng S.typhimurium

Nghiên cứu lợn tiêu chảy ở các cơ sở chăn nuôi tập trung của các tỉnh miền Bắc, Cù Hữu Phú và cs (2000), ñã cho thấy tỷ lệ phân lập ñược vi khuẩn

Salmonella gây bệnh tới 80% số mẫu xét nghiệm

Cũng như họ vi khuẩn ñường ruột, vi khuẩn Salmonella muốn trở thành

gây bệnh phải hội tụ ñủ 3 ñiều kiện là phải thực hiện ñược chức năng bám dính vào cơ thể vật chủ, sản sinh ñộc tố và có khă năng xâm nhập vào lớp tế bào biểu mô của nhung mao ruột ñể nhân lên Yếu tố bám dính của

Salmonella là fimbriae thuộc serotyp I (Cholerae Factor Adherence – CFA/I) ðộc tố ñường ruột của Salmonella gồm 2 thành phần cơ bản là: ñộc tố thẩm

xuất nhanh (RPF- Rapid Permeability Factor - ðộc tố chịu nhiệt) và ñộc tố thẩm xuất chậm (DPF – Delayed Permeability Factor - ðộc tố không chịu nhiệt)

CHƯƠNG 2 đỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 đối tượng

- đối tượng nghiên cứu: Vi khuẩn E.coli, Salmonella phân lập ựược từ

lợn mắc bệnh tiêu chảy sau cai sữa ở một số huyện ở Thành Phố Hà Nội

2.1.1 địa ựiểm nghiên cứu

- địa bàn nghiên cứu: Các trang trại, hộ gia ựình tại các huyện: Hoài đức, đông Anh và Phú Xuyên, thuộc Thành Phố Hà Nội

- địa ựiểm xét nghiệm mẫu: Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y Quốc gia

2.1.2 Thời gian nghiên cứu:

Từ 8/2012 - 8/2013

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Nghiên cứu một số ựặc ựiểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy ở lợn sau cai sữa nuôi tại Hà Nội

2.2.1.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại 3 huyện

2.2.1.2 Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo lứa tuổi

2.2.1.3 Tỷ lệ lợn tiêu chảy và chết do tiêu chảy theo mùa vụ trong năm

2.2.2 Nghiên cứu xác ựịnh vai trò của vi khuẩn E coli và Salmonella trong hội chứng tiêu chảy ở lợn

2.2.2.1 Phân lập, xác ựịnh tỷ lệ nhiễm vi khuẩn từ các mẫu bệnh phẩm và phân lợn tiêu chảy

2.2.2.2 Xác ựịnh số lượng vi khuẩn E coli và Salmonella trong phân lợn tiêu chảy và lợn bình thường

2.2.2.3 Giám ựịnh ựặc tắnh sinh hoá của các chủng vi khuẩn phân lập ựược 2.2.2.4 Xác ựịnh các yếu tố gây bệnh (ựộc tố và yếu tố bám dắnh) của các chủng vi khuẩn E coli phân lập ựược

2.2.2.5 Xác ựịnh ựộc lực của các chủng vi khuẩn E coli phân lập ựược trên

chuột bạch

2.2.2.6 Xác ñịnh tính mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn phân lập ñược

2.2.3 Thử nghiệm phác ñồ ñiều trị tiêu chảy cho lợn

2.3 Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu

2.3.1 Mẫu bệnh phẩm

- Mẫu bệnh phẩm là phủ tạng gồm: máu tim, gan, lách, ruột, hạch ruột,

… của lợn từ sau cai sữa mắc bệnh tiêu chảy vừa chết hoặc sắp chết

- Mẫu phân lợn tiêu chảy ñược lấy bằng tăm bông vô trùng ngoáy sâu vào trực tràng

2.3.2 Các loại môi trường, hoá chất

- Các loại môi trường dùng cho phân lập, nuôi cấy vi khuẩn ñường ruột, bao gồm: thạch máu, thạch MacConkey, thạch TSI, thạch DHL, thạch Brilliant Green, nước thịt BHI, nước thịt thường, nước thịt pepton, thạch Simmons citrate và các loại môi trường ñường Glucoze, Lactoze, Mannitol

do hãng Oxoid của Anh sản xuất

- Các loại giấy tẩm kháng sinh của hãng Oxoid (Anh)

- Kháng huyết thanh chuẩn dùng ñịnh type vi khuẩn phân lập ñược của Nhật và Úc

- Các hoá chất và dụng cụ phòng thí nghiệm khác dùng trong nghiên cứu vi khuẩn

2.3.3 ðộng vật thí nghiệm

- Chuột bạch khoẻ mạnh, có trọng lượng trung bình 18 - 20 g/con

2.4 Phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ

Sử dụng phương pháp nghiên cứu dịch tễ học mô tả (Descriptive study) dịch tễ học phân tích (Analytic study) và dịch tễ học thực nghiệm (Nguyễn Như Thanh, 2001), (Nguyễn Văn Thiện, 1997)

Chúng tôi dùng nghiên cứu cắt ngang tìm căn nguyên của bệnh So sánh tần suất của hội chứng tiêu chảy giữa các nhóm khác nhau Các cá thể trong cùng nhóm, cũng như các yếu tố nguy cơ, các thông tin khác ñều ñược tiến hành trong cùng thời ñiểm nghiên cứu

2.4.1.1 Chọn mẫu ñiều tra

Chọn mẫu theo phương pháp ngẫu nhiên, mẫu chùm nhiều bậc Chọn ngẫu nhiên mỗi huyện 2 xã; số thôn trong mỗi xã ñược chọn ngẫu nhiên; trong thôn ñiều tra các hộ chăn nuôi lợn sinh sản và lợn thịt

- Số huyện ñược ñiều tra: 3; số xã là: 5; số thôn, khu là: 8

- Số hộ: 164 hộ

- Số lợn ñược ñiều tra: 1.025 con

2.4.1.2 Phương pháp ñiều tra

- Trực tiếp quan sát ñể phát hiện lợn tiêu chảy Những lợn phân lỏng ñược coi là bị tiêu chảy

- Phỏng vấn chủ hộ chăn nuôi về những thông tin cần thiết

- Thông tin ñiều tra ñược ghi vào các phiếu ñiều tra

2.4.1.3 Nội dung ñiều tra, theo dõi

- Số lợn mắc tiêu chảy và chết do tiêu chảy tại các hộ, các trang trại chăn nuôi

- Các triệu chứng thường gặp ở lợn mắc tiêu chảy

- Các bệnh tích ở lợn mắc tiêu chảy khi tiến hành mổ khám, lấy mẫu bệnh phẩm

- Phương thức chăn nuôi và việc thực hiện vệ sinh chuồng trại

2.4.1.4 Các phương pháp ño lường trong dịch tễ

- Tỷ lệ lợn tiêu chảy (%) = x 100

Tổng số lợn ñiều tra

Số lợn tiêu chảy theo từng ñộ tuổi

- Tỷ lệ lợn tiêu chảy theo ñộ tuổi (%) = x 100

- Mẫu bệnh phẩm gồm: máu tim, lách, gan, hạch ruột, chất chứa ruột non, ruột già của lợn tiêu chảy

- Mẫu ñược bảo quản trong ñiều kiện lạnh 4oC, theo quy trình bảo quản mẫu của Bộ môn Vi trùng, Viện thú Y và ñược vận chuyển ngay ñến phòng thí nghiệm ñể tiến hành các xét nghiệm tiếp theo

2.4.2.2 Phân lập và giám ñịnh vi khuẩn

Các phương pháp nuôi cấy và giám ñịnh vi khuẩn ñược thực hiện theo quy trình nghiên cứu thường quy của Bộ môn Vi trùng, Viện Thú Y

Thạch DHL

Thạch DHL Thạch BG

37o 48h/hiếu khí

C/24-37o 48h/hiếu khí

37o 48h/yếm khí

C/24-C perfringens

Lên men

ñường

Lên men ñường

Lên men ñường

Lên men ñường

Mẫu (phủ tạng, phân, chất chứa)