nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng tác dụng của phế phẩm “ruvintat” trên bệnh nhân tăng huyết áp và bệnh nhân rối loạn lipid máu

HCM cấp ngày 24/12/2007 05 Chất lượng chế phẩm RUINTAT phải ổn định trong thời gian 12 tháng ở điều kiện tự nhiên Chế phẩm đạt độ ổn định chất lượng trong điều kiện tự nhiên Y đức trong

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM

TRÊN BỆNH NHÂN TĂNG HUYẾT ÁP

VÀ BỆNH NHÂN RỐI LOẠN LIPID MÁU

CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC

CƠ QUAN QUẢN LÝ: SỞ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ TP HCM

CƠ QUAN CHỦ TRÌ: TRUNG TÂM SÂM & DƯỢC LIỆU TP HCM

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

THÁNG 08/2009

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM

SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

BÁO CÁO NGHIỆM THU

(Đã chỉnh sửa theo góp ý của Hội đồng nghiệm thu)

TÊN ĐỀ TÀI:

NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM LÂM SÀNG TÁC DỤNG CỦA CHẾ PHẨM “RUVINTAT”

TRÊN BỆNH NHÂN TĂNG HUYẾT ÁP

VÀ BỆNH NHÂN RỐI LOẠN LIPID MÁU

CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI

ThS DƯƠNG THỊ MỘNG NGỌC

(Ký tên và đóng dấu xác nhận) (Ký tên và đóng dấu xác nhận)

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

THÁNG 08/2009

BÁO CÁO NGHIỆM THU

*****

1 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM LÂM SÀNG TÁC DỤNG CỦA CHẾ PHẨM “RUVINTAT” TRÊN BỆNH NHÂN TĂNG HUYẾT ÁP VÀ BỆNH NHÂN RỐI LOẠN LIPID MÁU

2 Chủ nhiệm đề tài: ThS Dương Thị Mộng Ngọc

3 Cơ quan chủ trì: Trung Tâm Sâm & Dược Liệu TP HCM

4 Thời gian thực hiện đề tài: 25/12/2005 đến 24/09/2008

5 Kinh phí được duyệt: 415.000.000đ

6 Kinh phí đã cấp đợt 1: 240.000.000đ theo TB số: 382/TB-SKHCN ngày

9 Mục tiêu: (Theo đề cương đã duyệt)

Đánh giá tác dụng ổn định huyết áp trên lâm sàng của chế phẩm

RUVINTAT

Đánh giá tác dụng ổn định lipid máu của chế phẩm RUVINTAT

Theo dõi tác dụng phụ của chế phẩm RUVINTAT trong quá trình sử dụng

10 Nội dung:(Theo đề cương đã duyệt)

Sản xuất 200.000 viên nang cứng RUVINTAT dùng thử lâm sàng

Kiểm nghiệm chất lượng chế phẩm RUVINTAT

Thử nghiệm lâm sàng giai đoạn I và giai đoạn II chế phẩm RUVINTAT

11 Sản phẩm nghiên cứu:

Báo cáo tổng kết (Tài liệu, CD)

200.000 viên nang RUVINTAT đạt tiêu chuẩn kiểm nghiệm cơ sở dùng thử

nghiệm lâm sàng

Báo cáo kết quả thử nghiệm lâm sàng của chế phẩm RUVINTAT

Những nội dung thực hiện (đối chiếu với hợp đồng đã ký):

Các nội dung đã đăng ký

01 Báo cáo tổng kết Bản báo cáo tổng kết đảm bảo

tính khoa học, trung thực

02 Sản xuất 200,000 viên nang cứng

RUVINTAT dùng thử lâm sàng Đã sản xuất 200.000 viên nang cứng RUVINTAT được sử

dụng để thử lâm sàng

03 Tiêu chuẩn kiểm nghiệm chế phẩm được Viện

Kiểm Nghiệm Thuốc TP HCM thuốc thẩm

định

Đã cĩ phiếu thẩm tra tiêu chuẩn kiểm nghiệm vào ngày

24/12/2007

04 Chất lượng chế phẩm phải được Viện Kiểm

Nghiệm Thuốc TP HCM chứng nhận Đã cĩ phiếu kiểm nghiệm chất lượng chế phẩm được Viện

Kiểm nghiệm thuốc TP HCM cấp ngày 24/12/2007

05 Chất lượng chế phẩm RUINTAT phải ổn định

trong thời gian 12 tháng ở điều kiện tự nhiên Chế phẩm đạt độ ổn định chất lượng trong điều kiện tự nhiên

Y đức trong Nghiên cứu Y Sinh Học của Bộ Y Tế

07 Kết quả thử nghiệm lâm sàng giai đoạn II

- Chế phẩm phải cĩ tác dụng hạ huyết áp đối

với bệnh nhân tăng HA độ 1

- Chế phẩm phải cĩ tác dụng điều trị bệnh

nhân rối loạn chuyển hĩa lipid

Đã hồn thành Bộ Hồ sơ xét duyệt, thẩm định và nghiệm thu kết quả thử nghiệm lâm sàng giai đọan II của Hội đồng Hội đồng Y đức trong Nghiên cứu Y Sinh Học của Bộ Y Tế

MUÏC LUÏC

Mục lục I Danh sách chữ viết tắt IV

1 Tổng quan về bệnh tăng huyết áp và rối loạn chuyển hóa lipid 01

2 Tổng quan về các dược liệu trong chế phẩm RUVINTAT 03

5 Ý nghĩa khoa học và khả năng áp dụng thực tiễn 11

1 Tiêu chuẩn hóa nguyên liệu 12

1.2 Phương pháp nghiên cứu 12

1.3 Các chỉ tiêu theo dõi chất lượng nguyên liệu 13

1.3.2 Ngưu tất 14

1.3.3 Dừa cạn 15 1.3.4 Câu Đằng 16

3 Sản xuất và kiểm nghiệm viên nang cứng RUVINTAT 26

3.2 Phương pháp thực hiện 26

4 Theo dõi độ ổn định của viên nang cứng RUVINTAT 31

4.2 Phương pháp thực hiện 31

4.4 Yêu cầu của nội dung theo dõi độ ổn định 32

5 Thử nghiệm lâm sàng tác dụng của chế phẩm RUVINTAT 32

5.1.2 Phương pháp nghiên cứu 32

5.1 4 Yêu cầu cần đạt đối với nội dung thử nghiệm lâm sàng giai đoạn I 33

.2.2 Phương pháp nghiên cứu 34

5.2.4 Sản phẩm cần đạt 40

1 Tiêu chuẩn hĩa nguyên liệu 41

2 Điều chế và kiểm nghiệm chất lượng cao RUVINTAT 80

2.2 Kết quả kiểm nghiệm chất lượng cao tồn phần theo tiêu chuẩn cơ sở 80

2.3 Đĩng gĩi và bảo quản 81

3 Sản xuất và kiểm nghiệm viên nang cứng RUVINTAT 82

3.2 Kết quả kiểm nghiệm viên nang cứng RUVINTAT 85

3.3 Đĩng gĩi - Nhãn - Bảo quản 86

4 Kết quả theo dõi độ ổn định chế phẩm RUVINTAT 87

5.2 Kết quả thử nghiệm lâm sàng giai đoạn II 96

5.2.1 Bệnh nhân rối loạn chuyển hóa lipid 96

5.2.3 Nhóm bệnh nhân vừa tăng HA vừa RLCH LIPID 110

Tài liệu tham khảo

Phụ lục

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIỆT

TT thuốc thử SKLM sắc ký lớp mỏng MeOH methanol

H2SO4 acid sulfuric

HA huyết áp HATT huyết áp tâm thu HATTr huyết áp tâm trương THA tăng huyết áp

RLCH rối loạn chuyển hóa

TG triglycerid

LDL Low Density Lipoprotein

YTNC yếu tố nguy cơ YHHĐ y học hiện đại YHCT y học cổ truyền

HC hồng cầu

BC bạch cầu DĐVN Dược Điển Việt Nam TCCS Tiêu chuẩn cơ sở

Hình 11 Cây Câu Đằng 55

Hình 13, 14 và 15 Sắc kí đồ của dịch chiết alkaloid TP trong Câu Đằng 58

Hình 17, 18 và 19 Sắc kí đồ của dịch chiết MeOH/ lá Muồng trâu 63

Hình 29 và 30 Sắc kí đồ dịch chiết MeOH/ râu Ngô 78

Hình 31 và 32 Sắc kí đồ của dịch chiết MeOH/cao RUVINTAT 81

Hình 33 Sắc kí đồ dịch chiết MeOH /thuốc RUVINTAT 85

DANH SÁCH BẢNG

TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG

Bảng 2: Phân loại theo ATP III về LDL-C, Cholesterol TP, HDL-C, TG 2

Bảng 5: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Ngưu tất 14

Bảng 6: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Dừa cạn 15

Bảng 7: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Câu đằng 16

Bảng 10: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Mã đề 19

Bảng 12: Phân loại kết quả điều trị bệnh nhân tăng HA 38

Bảng 13: Phân loại kết quả điều trị RLCH Lipid theo tiêu chuẩn theo

Bảng 20: Bảng theo dõi các chỉ số sinh hóa 94

Bảng 24: Phân bố bệnh nhân theo chỉ số cholesterol máu TP 98

Bảng 25: Phân bố bệnh nhân theo chỉ số LDL 98

Bảng 26: Phân bố bệnh nhân theo chỉ số HDL 99

Bảng 28: Tác dụng hạ cholesterol máu toàn phần sau mỗi 3 tuần 99

Bảng 29: Tác dụng hạ LDL máu sau mỗi 3 tuần 100

Bảng 30: Tác dụng hạ TG máu sau mỗi 3 tuần 101

Bảng 32 : Tác dụng lên nhóm có chỉ số cholesterol ≥ 6,2 mmol/L 102 Bảng 33: Tác dụng lên nhóm có chỉ số cholesterol 5,2 – 6,2mmol/L 102 Bảng 34: Tác dụng lên nhóm có chỉ số LDL ≥ 4,1mmol/L 103 Bảng 35: Tác dụng lên nhóm có chỉ số LDL 3,4 – 4,1mmol/L 103 Bảng 36: Tác dụng lên nhóm có chỉ số TG ≥ 2,3 mmol/L 104 Bảng 37: Tác dụng lên nhóm có chỉ số TG 1,7 – 2,3 mmol/L 104 Bảng 38: Phân loại kết quả sau điều trị 105

Bảng 42: Phân bố bệnh nhân theo loại nguy cơ 107 Bảng 43: Sự thay đổi HA sau 1 giờ và 2 giờ dùng thuốc 107 Bảng 44: Sự thay đổi HA tâm thu trong 2 tuần dùng thuốc 108 Bảng 45: Sự thay đổi HA tâm trương trong 2 tuần dùng thuốc 109

Bảng 47: Bảng phân loại bệnh nhân tăng HA theo (JNC VI) 110 Bảng 48: Thay đổi HA sau 1 giờ và 2 giờ dùng thuốc của nhóm THA

đơn thuần

110

Bảng 49: Sự thay đổi HA sau 1 giờ và 2 giờ dùng thuốc của nhóm

THA có RLCH lipid

Bảng 52: Sự thay đổi Triglycerid trước và sau điều trị giữa 2 nhóm

RLCH lipid đơn thuần và RLCH Lipid kết hợp THA

114

Bảng 53: Sự thay đổi LDL trước và sau điều trị giữa 2 nhóm RLCH

lipid đơn thuần và RLCH Lipid kết hợp THA

115

Bảng 54: Aûnh hưởng của thuốc trên triệu chứng cơ năng 116 Bảng 55: Sự thay đổi tần số tim trong thời gian dùng thuốc 116 Bảng 56: Sự thay đổi HATT trong thời gian dùng thuốc 117 Bảng 57: Sự thay đổi HATTr trong thời gian dùng thuốc 117 Bảng 58: Sự thay đổi của một số chỉ số huyết học và sinh hóa máu 118

DANH SÁCH SƠ ĐỒ

TÊN SƠ ĐỒ TRANG

Sơ đồ 2: Quy trình điều chế viên nang cứng RUVINTAT 84

DANH SÁCH BIỂU ĐỒ

Biểu đồ 1: Biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của mạch, nhịp tim và nhịp thở

Biểu đồ 2: Biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của huyết áp trong 24 giờ sau khi

dùng thuốc

92

Biểu đồ 3: Biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của chỉ số huyết học trước và sau

Biểu đồ 4: Biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của chỉ số sinh hĩa (Glucose và

Ure) trước và sau khi dùng thuốc

94

Biểu đồ 5: Biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của chỉ số sinh hĩa (Creatinin)

Biểu đồ 6: Biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của chỉ số sinh hĩa (GOT và

Biểu đồ 7: Phân bố bệnh nhân theo giới 97

Biểu đồ 8: Diễn biến cholesterol máu TP sau mỗi 3 tuần 100

Biểu đồ 9: Diễn biến LDL-C máu sau mỗi 3 tuần 101

Biểu đồ 10: Diễn biến triglycerid máu sau mỗi 3 tuần 101

Biểu đồ 13: Phân bố bệnh nhân theo giới 106 Biểu đồ 14: Sự thay đổi HA sau 1 giờ và 2 giờ dùng thuốc (n = 32) 108

Biểu đồ 15: Sự thay đổi HA bệnh nhân trong 2 tuần điều trị Ruvintat 109

Biểu đồ 16: Sự thay đổi HA thay đổi HA sau 1 giờ và 2 giờ dùng thuốc

Biểu đồ 17: Sự thay đổi HA sau 1 giờ và 2 giờ dùng thuốc của nhĩm THA

cĩ RLCH Lipid

112

Biểu đồ 18: Sự thay đổi Cholesterol tồn phần trước và sau điều trị giữa 2

nhĩm RLCH lipid đơn thuần và RLCH Lipid kết hợp THA 113

Biểu đồ 19: Sự thay đổi Triglycerid trước và sau điều trị giữa 2 nhĩm

RLCH lipid đơn thuần và RLCH Lipid kết hợp THA 114

Biểu đồ 20: Sự thay đổi LDL trước và sau điều trị giữa 2 nhóm RLCH

lipid đơn thuần và RLCH Lipid kết hợp THA

115 Biểu đồ 21: Sự thay đổi HATTr trong thời gian dùng thuốc 118

Biểu đồ 22: Sự thay đổi của một số chỉ số huyết học và sinh hóa máu 119

số mắc bệnh THA, trong đó ở độ tuổi nhỏ hơn 40 là 3,5-4%, độ tuổi 40 – 60 là 9,1 - 10,2%, độ tuổi 60 – 75 là 5,4 - 19,8%

Trong lĩnh vực điều trị, nhóm thuốc tim mạch chiếm tỷ trọng lớn nhất và là 22% tổng số thuốc mới của 40 công ty hàng đầu thế giới từ năm 1970 cho đến nay Tuy nhiên, giá thành của dược phẩm tây y vẫn còn cao và đặc biệt là thường gây các phản ứng phụ Vì vậy, xu hướng chung trên thế giới hiện đang trở dùng nguồn dược liệu trong thiên nhiên làm thuốc phòng và chữa bệnh Số liệu thống kê cho thấy thị trường thế giới về thuốc từ dược thảo đạt 20 tỷ USD vào năm 2003 tăng gần 10% so với năm

“Nghiên cứu chế phẩm RUVINTAT có tác dụng điều trị bệnh tim mạch từ hỗn

hợp các dược liệu” với mã số KHYD – 0226R Đây là giai đoạn nghiên cứu định

hướng về thành phần công thức, quy trình sản xuất, tiêu chuẩn chất lượng, khảo sát độc tính và đánh giá các tác dụng dược lý Các kết quả nghiên cứu đã được đánh giá và nghiệm thu vào ngày 04 tháng 07 năm 2001 tại Hội Đồng Khoa học và Công nghệ cấp

Bộ được thành lập theo Quyết định số: 2251/QĐ-BYT ngày 13 tháng 6 năm 2001 của

Bộ Trưởng bộ Y Tế Hội đồng đã đánh giá kết quả nghiên cứu của đề tài đạt loại: khá,

và đề nghị được Bộ cho tiếp tục nghiên cứu tiếp về lâm sàng thuốc RUVINTAT

Chế phẩm RUVINTAT có dạng viên nang cứng, các kết quả nghiên cứu dược lý đã chứng minh chế phẩm này có tác dụng ổn định huyết áp, ổn định cholesterol huyết, và lợi tiểu ở các mô hình thử nghiệm trên súc vật Đây là một ưu điểm nổi bật của chế phẩm RUVINTAT vì thể hiện các tác dụng ổn định huyết áp, ổn định cholesterol huyết

và lợi tiểu trong cùng một viên thuốc, rất thuận lợi khi sử dụng

Vấn đề được đặt ra là chế phẩm RUVINTAT có tác dụng ở các bệnh nhân tăng huyết áp và bệnh nhân rối loạn lipid huyết như thế nào? Đây là một yêu cầu không thể

thiếu theo quy định của Bộ Y tế “Về thử thuốc trên lâm sàng” (Ban hành kèm theo

Quyết định số 01/2007/QĐ-BYT ngày 11 tháng 01 năm 2007 của Bộ trưởng Bộ Y tế)

để hoàn thiện trong công tác nghiên cứu một dược phẩm mới Chính vì thế, chế phẩm RUVINTAT rất cần phải được khảo sát và đánh giá tác dụng ổn định huyết áp và ổn định cholesterol huyết ở các bệnh nhân tăng huyết áp và bệnh nhân rối loạn chuyển hóa lipid trên các thực nghiệm lâm sàng Đây cũng là cơ sở đảm bảo tính pháp lý và tính khoa học để chế phẩm RUVINTAT được Bộ Y Tế cho phép sản xuất và sử dụng dưới dạng dược phẩm nhằm phục vụ yêu cầu phòng và chữa bệnh cho nhân dân

là 32% ở các nước phát triển, trong đó: 50% số người chết ở tuổi lớn hơn 40, 80%

số người chết ở tuổi lớn hơn 65, cho đến năm 2008, tỷ lệ tử vong hàng năm do bệnh tim mạch trên thế giới là 17,5% Trong đó, bệnh mạch vành có khoảng 7 triệu người chết tại các nước đang phát triển Theo Hội tim mạch học TP.HCM năm

2004, thì ở VN có 14,9% dân số mắc bệnh THA, trong đó ở độ tuổi nhỏ hơn 40 là 3,5-4%, độ tuổi 40 – 60 là 9,1 - 10,2%, độ tuổi 60 – 75 là 5,4 - 19,8%

Nhiều nghiên cứu đã chứng minh có sự liên quan giữa rối loạn chuyển hoá lipid với tỷ lệ bệnh tim mạch rất chặt chẽ, các nghiên cứu đều thống nhất rối loạn chuyển hoá lipid là nguy cơ chính của nhiều bệnh nguy hiểm như: tăng huyết áp, nhồi máu cơ tim, tai biến mạch máu não, xơ vữa động mạch…

Phân loại đối với bệnh nhân tăng huyết áp

Phân loại đối với bệnh nhân tăng huyết áp theo JNC VI (Khuyến cáo của Liên

ủy ban Quốc gia về phòng ngừa, phát hiện, đánh giá và điều trị tăng huyết áp lần thứ 6-1997 từ 18 tuổi trở lên)

Bảng 1: Phân loại mức HA theo JNC VI

Phân lọai đối với bệnh nhân rối loạn chuyển hóa lipid

Để lựa chọn kế hoạch điều trị thích hợp, ngày nay người ta thường dựa trên báo cáo lần 3 của chương trình Giáo Dục Quốc Gia về Cholesterol tại Mỹ (NCEP-National Cholesterol Education Program) và của ủy Ban Điều Trị Tăng Cholesterol

ở người trưởng thành (ATP III- Adult Treatment Panel III)

Bảng 2: Phân loại theo ATP III về LDL-C, Cholesterol TP, HDL-C, TG

Thấp Tối ưu Gần tối ưu Giới hạn cao Cao Rất cao Cholesterol–TP

Những yếu tố nguy cơ làm thay đổi mục tiêu điều trị LDL

Trong quá trình điều trị bệnh nhân rối loạn chuyển hóa lipid, có những yếu tố nguy cơ có thể làm thay đổi mục tiêu điều trị LDL, những yếu tố nguy cơ chính (không

kể LDL-C) có thể liệt kê như:

2 Tổng quan về các dược liệu trong chế phẩm RUVINTAT [1, 19, 25, 28, 30]

Rutin trong hoa hòe có tác dụng tăng sức bền của mao mạch, dùng cho trường hợp bệnh nhân bị cao huyết áp mà mao quản dễ bị đứt vỡ, điều trị bệnh xơ cứng động mạch, phòng ngừa tai biến mạch máu não

Theo YHCT hoa hòe có vị đắng, tính bình, vào kinh can, đại tràng Có tác dụng lương huyết, thanh nhiệt, chỉ huyết

Ngưu tất

Dược liệu dùng là rễ đã chế biến và phơi hay sấy khô của cây ngưu tất

(Achyranthes bidentata Blume) thuộc họ Rau dền (Amaranthaceae)

Với thành phần hóa học rễ ngưu tất chứa saponin triterpen, có phần genin là acid oleanolic và phần đường kết hợp là: glucose, galactose, rhamnose Ngoài ra, trong ngưu tất còn có: các sterol ecdysteron và inokosterol, β - sitosterol, stigmasterol, polysaccarids và nhiều nguyên tố vi lượng, mà chủ yếu là kalium

Rễ ngưu tất có tác dụng hạ huyết áp rõ rệt, mức độ hạ huyết áp từ từ, thời gian tác dụng kéo dài Tác dụng của rễ ngưu tất trên mèo với liều 1g/kg cân nặng là tương đương với tác dụng của reserpin với liều 1mg/kg thể trọng Liều LD50 của rễ ngưu tất

là 99g/kg Hiện nay ngưu tất được dùng làm thuốc điều trị bệnh xơ mỡ động mạch phối hợp bệnh cao huyết áp của người lớn tuổi Liều dùng 3 - 9 g/ngày thuốc sắc hoặc nấu cao rễ ngưu tất hoặc phối vị các dược liệu khác

Theo YHCT, ngưu tất có vị đắng, chua mặn, tính bình, vào 2 kinh can và thận

Có tác dụng bổ can thận, mạnh cân cốt, phá ứ huyết

Dừa cạn

Tên khoa học là Catharanthus roseus (L.) G Don, thuộc họ Trúc đào

(Apocynaceae) Dừa cạn còn có tên khác: bông dừa; hoa hải đằng; trường xuân hoa

Thành phần chủ yếu là các alcaloid, rất phức tạp, hiện đã phát hiện được hơn 90

chất khác nhau Các alcaloid chính là: vinblastin (VBL) tức vincaleucoblastin (trong

lá) vincristin tức leurocristin (VCR) (trong lá, rễ), tetrahydroalstonin, vindolin (trong

lá), vindolinin (trong lá), catharanthin (trong lá, rễ), ajmalicin (trong rễ), serpentin

(trong rễ), reserpin (trong rễ)

Dừa cạn Việt Nam có tỷ lệ alcaloid toàn phần là 0,7 - 1,2%, rễ chứa 0,7- 2,4%,

thân 0,46%, và lá 0,37- 1,15%

Rễ dừa cạn có vị hơi đắng, vị mát, có tác dụng hoạt huyết, tiêu thũng, giải độc,

hạ huyết áp, an thần nhẹ Trong dân gian thường dùng chữa huyết áp cao, sốt rét kiết lỵ

(cấp và mãn tính), thông tiểu, chữa đi tiểu ra máu đỏ Ngoài vinblastin và vincristin là

2 chất có tác dụng chữa ung thư, ajmalicin có tác dụng điều trị các tai biến mạch máu

não, rối loạn tâm thần - cư xử do chứng suy não ở người già Rễ dừa cạn được dùng để

điều trị bệnh cao huyết áp, sốt rét, kiết lỵ, thông tiểu Ngày dùng 8 -12 gram dạng

thuốc sắc

Câu đằng

Tên khoa học là Uncaria rhynchophylla (Miq) Jack., thuộc họ Cà phê

(Rubiaceae), trong thành phần hoá học có 2 chất alcaloid: rhynchophylin và

isorhynchophylin

Liều nhỏ rhynchophylin có tác dụng hưng phấn trung khu hô hấp, làm dãn vi

huyết quản, làm cho huyết áp giảm xuống Hiện nay câu đằng được dùng làm thuốc

trấn kinh và trị bệnh cao huyết áp với liều dùng 6 - 15g/ngày dưới dạng thuốc sắc

Theo YHCT, câu đằng có vị ngọt, tính hàn, vào kinh can và tâm bào Có tác

dụng thanh nhiệt, bình can, chấn kinh

Mã đề

Tên khoa học Plantago major L , thuộc họ Mã đề ( Plantaginaceae)

Toàn cây chứa một glucozit gọi là aucubin Trong lá có chất nhầy, chất đắng,

caroten, vitamin C, vitamin K, acid citric Trong hạt có chất nhầy, acid plantenolic,

adenin và cholin Cho uống aucubin chiết từ chất nhầy không thấy có triệu chứng độc, tác dụng lợi tiểu, chữa ho, ngoài ra aucubin có khả năng bảo vệ gan chống viên gan trong mô hình gây viên gan bằng CCl4

Trên lâm sàng, mã đề còn dùng chữa bệnh cao huyết áp, làm thuốc thông tiểu liều 6 - 12g dạng thuốc sắc Vào năm 1990, từ dịch chiết nước toàn cây mã đề, các nhà khoa học đã trích ly được 6 phenylethanoid glycosides, plantainoside từ A - F với tác dụng chống viêm, lợi tiểu và khả năng chống oxy hóa mạnh

Theo YHCT, mã đề có vị ngọt, tính hàn, vào kinh can, thận và tiểu trường Có tác dụng lợi tiểu, thanh phế, can, phong nhiệt, trừ đàm, chỉ tả

Muồng trâu

Tên khoa học - Cassia alata L., thuộc họ Đậu - Fabaceae Trong lá, quả và rễ

muồng trâu đều có chứa các dẫn chất anthraquinon, có hàm lượng 0,15-0,2% ở lá, 2% ở quả Trong lá có chrysophanol, aloe emodin, rheine emodin, có flavonoid là kaempferol Ngoài ra còn có một steroid là sitosterol trong rễ cây

1,5-Theo YHCT, muồng trâu có vị đắng, tính mát Có tác dụng nhuận tràng, giải nhiệt, sát trùng, lợi tiểu, và thường dùng chữa táo bón, phù thủng với liều dùng 4-8g

Vông nem

Tên khoa học là Erythrina variegata L., thuộc họ Đậu – Fabaceae

Thân và lá vông nem chứa alcaloid erythrin, trong hạt có alcaloid erysotrine và erysodine, hypaphorin là chất có tác dụng ức chế hệ thần kinh trung ương, làm an thần, gây ngũ, hạ nhiệt, hạ huyết áp

Theo YHCT, vông nem có vị hơi đắng, tính bình Tác dụng thanh nhiệt, an thần, lợi tiểu, thường được dùng chữa tim hồi hộp, ngày dùng 4-6g dạng thuốc sắc

Râu ngô (vòi nhuỵ) và hạt - Stylum et Semen Zeae của cây Ngô Zea mays L., thuộc họ Lúa - Poaceae

Trong râu ngô có các chất sitosterol, stigmasterol, tinh dầu vitamin C, K , tỷ lệ muối kali cao: 20g râu ngô phơi khô chứa 0,028g canxi và 0,532g kali Râu ngô có tác dụng lợi tiểu trong các bệnh về tim, thận

Theo YHCT râu ngô có vị ngọt, tính bình Có tác dụng lợi tiểu, tiêu thũng, bình can, lợi mật

Bảng 3: Tóm tắt các vị thuốc theo YHCT

Hoa hòe Đắng nhạt, tính bình, vào

kinh can, đại tràng

Có tác dụng lương huyết, thanh nhiệt, chỉ huyết

Ngưu tất Chua, đắng, bình, vào kinh

can, thận và tiểu trường

Lợi tiểu, thanh phế, can, phong nhiệt, trừ đàm, chỉ tả

Muồng trâu Đắng, tính mát Nhuận tràng, giải nhiệt, sát trùng, lợi tiểu Vông nem Hơi đắng, tính bình Thanh nhiệt, an thần, lợi tiểu

Râu ngô Ngọt, tính bình Lợi tiểu, tiêu thũng, bình can, lợi mật

Theo lý thuyết , tổng hợp tính chất dược lý YHCT của từng vị thuốc trong 8 vị, chúng ta có nhận định về cơ chế tác động của viên nang như sau:

- 4 vị có tính bình : Hoa hòe, Ngưu tất, Vông nem, Râu ngô

- 2 vị có tính mát : Dừa cạn, Muồng trâu

- 2 vị có tính hàn : Câu đằng, Mã đề

Như vậy chế phẩm có tính hàn lương, có tác dụng thanh nhiệt, bình can, an thần, hoạt huyết, khử ứ, thông kinh, bổ can thận, lợi niệu, trừ đàm Có chỉ định trong các trường hợp: Can hỏa vượng, can thận âm hư, khí trệ huyết ứ, đàm thấp

Theo lý luận của YHCT thì không sử dụng thuốc hàn cho bệnh hàn Vậy không nên sử dụng bài thuốc này cho bệnh nhân ở thể hàn, như Tỳ dương hư, Thận dương

hư, Tỳ thận dương hư…

3 Tình hình nghiên cứu liên quan đến đề tài [22]

Vào năm 1997, Trung Tâm Sâm và Dược Liệu TP HCM đã đăng ký đề tài cấp Bộ

“Nghiên cứu chế phẩm RUVINTAT có tác dụng điều trị bệnh tim mạch từ hỗn

hợp các dược liệu” với mã số KHYD – 0226R Đây là giai đoạn nghiên cứu định

hướng về thành phần công thức, quy trình sản xuất, tiêu chuẩn chất lượng và giai đoạn thử nghiệm tiền lâm sàng và cho một số kết quả chính như sau:

Về mặt tiêu chuẩn hóa nguyên liệu

- Đã áp dụng các phương pháp đánh giá chất lượng nguyên liệu để đưa vào nghiên cứu, cụ thể như phương pháp kiểm nghiệm bằng nhận xét cảm quan, xác định độ

ẩm, độ tro, tạp chất, định tính các hợp chất hóa học bằng phản ứng hóa học, bằng sắc ký lớp mỏng, định lượng hàm lượng hoạt chất bằng phương pháp quang phổ tử ngoại khả kiến (đối với flavonoid toàn phần và saponin toàn phần trong nguyên liệu) và bằng phương pháp cân (đối với hàm lượng alcaloid toàn phần trong nguyên liệu)

- Đã tiêu chuẩn hóa các dược liệu nghiên cứu dựa vào các phương pháp đánh giá chất lượng đã nêu trên, và đã xác định được nguyên liệu đạt theo các tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam để có thể nghiên cứu

Tóm lại, các nguyên liệu nghiên cứu đều đạt tiêu chuẩn về độ tinh khiết, định tính, định lượng Do đó nguồn nguyên liệu đã được chứng minh là đảm bảo chất lượng để làm thuốc

Về mặt điều chế, tiêu chuẩn hóa và thử tác dụng dược lý cao toàn phần

- Đã áp dụng được các qui trình chiết xuất những hợp chất thiên nhiên từ các dược liệu thành một sản phẩm được gọi tên là “Cao toàn phần” với một tỷ lệ thích hợp là vừa có tính an toàn lại vừa có hiệu lực, với trang thiết bị đơn giản, dung môi, hóa chất dễ tìm, rẻ tiền, phù hợp với quy mô nghiên cứu cũng như triển khai sản xuất,

thu được hiệu suất chiết mong muốn và đạt được hiệu quả kinh tế đáng kể

- Đã xây dựng được các tiêu chuẩn kiểm nghiệm chất lượng của cao toàn phần về các mặt cảm quan, định tính, định lượng

- Đã thử tác dụng dược lý của cao toàn phần và thu được một số kết quả là:

- Cao toàn phần không thể hiện độc tính đường uống ở liều 15g/ kg thể trọng;

- Với liều 62,4mg/ kg thể trọng cao toàn phần có tác dụng hạ huyết áp, hạ cholesterol trên các mô hình thử nghiệm dược lý

Về mặt điều chế, tiêu chuẩn hóa và thử tác dụng dược lý chế phẩm

- Đã nghiên cứu bào chế được dạng chế phẩm viên bao đường

- Đã xây dựng được các tiêu chuẩn kiểm nghiệm chế phẩm RUVINTAT Dược Điển Việt Nam và đã đánh giá chất lượng chế phẩm về mặt định tính và định lượng các hợp chất flavonoid, saponin triterpen và alkaloid theo “Quy chế đánh giá tính an toàn và hiệu lực thuốc cổ truyền”

- Đã xác định hàm lượng rutin và acid oleanolic trong chế phẩm bằng phương pháp sắc ký chế hóa kết hợp với định lượng quang phổ tử ngoại, phương pháp này đã nâng cao độ nhạy khi phát hiện hàm lượng nhỏ rutin và acid oleanolic trong chế phẩm

- Đã khảo sát tính ổn định của chế phẩm trong điều kiện tự nhiên với thời gian 12 tháng, kết quả là chế phẩm vẫn đảm bảo chất lượng sau thời gian theo dõi

Chế phẩm đã được thử tác dụng dược lý theo “Quy chế đánh giá tính an toàn và hiệu lực thuốc cổ truyền” theo quyết định 371/BYT-QĐ (12/03/1996) và thu được một số kết quả bước đầu như sau:

Về độc tính cấp diễn đường uống

Chế phẩm không xác định được liều LD50, liều chế phẩm tối đa có thể bơm được theo đường uống cho súc vật là 10g/kg thể trọng đã không thấy tử vong, chứng tỏ chế phẩm không có độc tính cấp diễn đường uống

Về độc tính bán trường diễn

Chế phẩm “RUVINTAT” sử dụng dài ngày với liều 0,6g/kg súc vật thử nghiệm (tương đương với 20 lần liều sử dụng trên người) không ảnh hưởng đến các chỉ

số sinh học, huyết học, cũng như không ảnh hưởng đến cấu trúc tế bào gan và thận của chuột thử nghiệm Như vậy, chế phẩm không thể hiện độc tính bán trường diễn

Về tác dụng hạ cholesterol

- Ở súc vật thực nghiệm bị tăng cholesterol do dùng chế độ ăn hàng ngày nhiều cholesterol, tác dụng hạ dần cholesterol sau 7 ngày dùng thuốc với liều 0,3 g/kg thể trọng và ở giai đoạn điều trị 21 ngày, liều 0,3 g/kg vẫn giảm lượng cholesterol so với chứng Kết quả này thể hiện tác dụng điều trị của chế phẩm trong cơ địa bị tăng cholesterol Ngoài ra, chế phẩm còn có tác dụng dự phòng

và duy trì lượng cholesterol bình thường trong cơ thể do yếu tố nội sinh gây tăng

- Cùng với mô hình gây tăng cholesterol, hàm lượng triglycerid ở các lô thử nghiệm cũng tăng so với lô chứng, nhưng chế phẩm không ảnh hưởng đến kết quả điều trị của nó ở những giai đoạn thử nghiệm

Tác dụng hạ huyết áp

Chế phẩm có tác dụng làm hạ huyết áp (27 - 30%) ở liều 0,3 g/kg thể trọng sau

10 phút dùng thuốc và duy trì trong thời gian theo dõi (4 giờ), tương đương với liều 0,2mg/ kg thể trọng của biệt dược nifehexal

Về tác dụng trên hệ thần kinh trung ương

Chế phẩm có tác động kéo dài thời gian ngủ của natri barbital ở liều 0,3g/kg thể trọng và đã thể hiện tác dụng an thần của chế phẩm

Về tác dụng lợi tiểu

Chế phẩm RUVINTAT sử dụng ở liều 0,1 g/ kg thể trọng chuột thử nghiệm có tác dụng làm tăng lượng nước tiểu lên 59% so với lô chứng Tác dụng này là tương đương với lô đối chứng dùng Furosemid liều 16mg/ kg thể trọng Điều này chứng tỏ chế phẩm có tác dụng lợi tiểu ở liều 0,1g/ kg thể trọng

Những nghiên cứu về chế phẩm RUVINTAT (đề tài cấp bộ, mã số

KHYD-0226R) năm 1997 - 2001 đã được đánh giá và nghiệm thu vào năm

2001 tại Hội Đồng Khoa học và Công nghệ cấp Bộ được thành lập theo Quyết định số: 2251/QĐ-BYT ngày 13 tháng 6 năm 2001 của Bộ Trưởng bộ

Y Tế Hội đồng đã đánh giá kết quả nghiên cứu của đề tài đạt loại: khá, và đề nghị được Bộ cho tiếp tục nghiên cứu tiếp về lâm sàng thuốc RUVINTAT

4 Tính cấp thiết cần nghiên cứu của đề tài

Trong lĩnh vực điều trị, nhĩm thuốc tim mạch chiếm tỷ trọng lớn nhất và

là 22% tổng số thuốc mới của 40 cơng ty hàng đầu thế giới từ năm 1970 cho đến nay Tuy nhiên, giá thành của dược phẩm tây y vẫn cịn cao và đặc biệt là thường gây các phản ứng phụ Vì vậy, xu hướng chung trên thế giới hiện đang trở dùng nguồn dược liệu trong thiên nhiên làm thuốc phịng và chữa bệnh Số liệu thống kê cho thấy thị trường thế giới về thuốc từ thảo mộc đạt 20 tỷ USD vào năm 2003 tăng gần 10% so với năm 2000

Tại Việt Nam hầu hết các dược phẩm tây y điều trị bệnh tim mạch đều phải nhập ngoại, do đĩ việc nghiên cứu thuốc cĩ nguồn gốc dược liệu trong nước cĩ ý nghĩa rất to lớn Đây cũng là một định hướng phát triển cơ bản của ngành Y-Dược Việt Nam theo chủ trương của Nhà nước ta Hiện nay, nhu cầu

sử dụng dược liệu ở Nước ta là hơn 50.000 tấn trong một năm, trong đĩ thuốc y học cổ truyền chiếm 27% Từ năm 1990, Trung Tâm Sâm và Dược Liệu TP HCM đã tiến hành nghiên cứu phát triển một số chế phẩm cĩ nguồn gốc dược liệu để điều trị các bệnh tim mạch mà điển hình là tăng huyết áp và rối loạn chuyển hĩa lipid, trong đĩ cĩ chế phẩm RUVINTAT

Các kết quả nghiên cứu dược lý đã chứng minh chế phẩm RUVINTAT

cĩ tác dụng ổn định huyết áp, ổn định cholesterol huyết, và lợi tiểu ở các mơ hình thử nghiệm trên súc vật Đây là một ưu điểm nổi bật của chế phẩm vì thể hiện các tác dụng ổn định huyết áp, ổn định cholesterol huyết và lợi tiểu cùng một viên thuốc, rất thuận lợi khi sử dụng

Vấn đề được đặt ra là RUVINTAT có tác dụng trên lâm sàng như thế nào? Đây là một yêu cầu không thể thiếu theo quy định hiện hành của Bộ Y tế

để hoàn chỉnh một dược phẩm mới trước khi đưa vào sản xuất và sử dụng

Để giải quyết vấn đề này, vào năm 2005, Trung Tâm Sâm và Dược Liệu

TP HCM với vai trò là cơ quan nghiên cứu phát triển chế phẩm RUVINTAT,

đã thực hiện đề tài «Nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng tác dụng của chế phẩm RUVINTAT trên bệnh nhân tăng huyết áp và bệnh nhân rối loạn lipid máu» với

kinh phí do Sở Khoa học và Công nghệ TP.HCM cấp theo hợp đồng số: 351/ HĐ-SKHCN, ngày 27 tháng 12 năm 2005

Để thực hiện được các thử nghiệm lâm sàng chế phẩm RUVINTAT

theo quy định “Về thử thuốc trên lâm sàng” (Ban hành kèm theo Quyết định số

01/2007/QĐ-BYT ngày 11tháng 01 năm 2007 của Bộ trưởng Bộ Y tế), Trung

Tâm Sâm và Dược Liệu TP HCM đã phối hợp với đơn vị có chức năng là Bệnh Viện Y học Cổ truyền TP HCM trong nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng

5 Ý nghĩa khoa học và khả năng áp dụng thực tiễn

Hiện nay, nguồn thuốc điều trị bệnh tim mạch rất đắt, những bệnh nhân mắc bệnh tim mạch điển hình như rối loạn chuyển hóa lipid và tăng huyết áp, hầu như phải điều trị bằng thuốc suốt đời, nên tổng chi phí toàn xã hội rất cao

Vì vậy, viên nang cứng RUVINTAT, một chế phẩm mới được điều chế từ đông dược, tiện dùng, rẻ tiền và hiệu quả, một chế phẩm có 2 tác dụng là vừa ổn định được trị số huyết áp ở những bệnh nhân tăng huyết áp độ 1, vừa điều hòa lượng lipid huyết và bệnh nhân rối loạn lipid, sẽ mang lại nhiều lợi ích kinh tế, bảo vệ sức khỏe thiết thực cho người bệnh

Điều này có ý nghĩa thực tiễn rất lớn, hy vọng có thể tạo ra được một dược phẩm mới góp phần giảm tỷ lệ tử vong, tỷ lệ tàn phế do bệnh tim mạch gây ra, bảo vệ sức khỏe của người lao động, giảm chi phí điều trị chữa bệnh hay góp phần tăng nguồn thu nhập cho xã hội Đồng thời, tận dụng nguồn dược liệu

dễ trồng, dễ tìm, tăng hiệu quả kinh tế ngành sản xuất dược liệu

II Nội dung và phương pháp

1 Tiêu chuẩn hóa nguyên liệu [7, 8, 31, 32]

1.1 Nội dung

Chất lượng nguồn nguyên liệu sử dụng để điều chế chế phẩm RUVINTAT phải đạt tiêu chuẩn kiểm định để làm thuốc Nguồn nguyên liệu gồm các dược liệu được liệt kê dưới đây:

- Hòe: Bộ phận dùng là nụ hoa đã phơi hay sấy nhẹ đến khô của cây Hoè Sophora japonica (L.), họ Đậu (Fabaceae)

- Ngưu tất: Bộ phận dùng là rễ đã chế biến và phơi hay sấy khô của cây Ngưu tất

di thực (Achyranthes bidentata Blume), họ Rau dền (Amaranthaceae)

- Dừa Cạn: Bộ phận dùng là lá, thân và rễ phơi hay sấy khô của cây Dừa cạn

(Catharanthus roseus (L.) G Don), họ Trúc đào (Apocynaceace)

- Câu đằng: Bộ phận dùng là đoạn thân hoặc cành có gai hình móc câu đã phơi

hay sấy khô của cây Câu đằng (Uncaria sp.), họ Cà phê (Rubiaceae)

- Muồng trâu: Bộ phận dùng là lá đã phơi hoặc sấy khô của cây Muồng trâu

(Cassia alata L.), họ Đậu (Fabaceae)

- Vông nem: Bộ phận dùng là lá đã phơi khô của cây Vông nem (Erythrina

variegata L.), họ Đậu Fabaceae)

- Mã đề: Bộ phận dùng là lá đã phơi hoặc sấy khô của cây Mã đề (Plantago major L.) họ Mã đề (Plantaginaceae)

- Cây Ngô : Bộ phận dùng là râu ngô của cây Ngô Zea mays L., thuộc họ Lúa -

Poaceae

Tất cả các dược liệu được rửa, làm sạch tạp chất, phơi khô đến độ ẩm an toàn, sau đó các dược liệu xay thành bột, kích thước qua rây số 2000 (rây có kích thước 2mm), bột dược liệu được dùng để kiểm định chất lượng

1.2 Phương pháp thực hiện [7, 8, 31, 32]

Kiểm nghiệm chất lượng nguyên liệu chủ yếu dựa trên cơ sở các tiêu chuẩn qui định trong Dược Điển Việt nam III

1.3 Các chỉ tiêu theo dõi chất lượng nguyên liệu

- Các chỉ tiêu theo dõi chất lượng nguyên liệu được liệt kê cụ thể theo các bảng 4 đến bảng 11

1.3.1 Hoè (Hoa)

Bộ phận dùng là nụ hoa đã phơi hay sấy nhẹ đến khô của cây Hoè Sophora japonica (L.), họ Đậu (Fabaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam III - năm 2002, trang 378

Bảng 4: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Hòe Hoa

1 Mô tả Nụ hoa hình trứng, có cuống nhỏ, ngắn, một đầu hơi

nhọn, dài 0,3-0,6cm, rộng 0,1-0,2cm, màu vàng xám Hoa chưa nở dài từ 0,4 – 1cm, rộng 0,2-0,4cm Đài hoa hình chuông, màu vàng xám Cánh hoa chưa nở màu vàng Mùi thơm, vị đắng

2 Soi bột Có nhiều hạt phấn hình cầu, lông che chở đa bào, tế

bào ở đầu dài và thuôn nhọn, tế bào ở chân ngắn Mảnh biểu bì cánh hoa gồm những tế bào nhiều cạnh, nhiều vân nhỏ, xít nhau Mảnh biểu bì đài hoa gồm những tế bào nhiều cạnh có mang lỗ khí (kiểu thập tự)

và lông che chở Mảnh mạch xoắn

Quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng

=366nm, trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải

có vết cùng màu sắc và cùng giá trị Rf với vết rutin trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu

5 Độ tro toàn phần - Không được hơn 10%

6 Định lượng Hàm lượng rutin trong nụ Hòe không được ít hơn

20%

1.3.2 Ngưu tất (Radix Achyranthis Bidentatae)

Bộ phận dùng là rễ đã chế biến và phơi hay sấy khô của cây Ngưu tất di thực

(Achyranthes bidentata Blume), họ Rau dền (Amaranthaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam III - năm 2002, trang 430 và

Dược Điển Trung Quốc I - năm 2005, trang 185

Bảng 5: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Ngưu tất

1 Mô tả Rễ hình trụ, dài 15-30 cm, đường kính 0,3 – 1cm Đầu

trên mang vết tích củ gốc thân, đầu dưới thuôn nhỏ Mặt ngoài màu vàng nâu có nhiều nếp nhăn dọc nhỏ và vết tích của rễ con Mặt cắt ngang ngoài cùng có lớp bần mỏng, màu nâu, rồi đến phần mô mềm có nhiều chấm vàng nhạt Vị đắng, chua

2 Soi bột Mảnh bần vụn nát, màu vàng nâu, rời nhau hay tụ thành

đám, mảnh mô mềm màu vàng nhạt hơn, gồm những tế bào nhiều cạnh, màng mỏng Nhiều mạch điểm Tinh thể calci oxalat hình khối, rải rác có hạt tinh bột hình đầu hay hình mũ

có màu sắc và giá trị Rf tương đồng với vết trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu

4 Độ ẩm - Không được hơn 15%

5 Độ tro toàn phần - Không được hơn 9%

6 Tạp chất - Tỷ lệ gốc thân còn sót lại: Không quá 1%

- Tạp chất khác: Không quá 0,5%

7 Định lượng Hàm lượng chất chiết tan trong n- BuOH bảo hòa nước

trong dược liệu không được dưới 6,5%

1.3.3 Dừa cạn

Bộ phận dùng: lá, thân và rễ phơi hay sấy khô của cây Dừa cạn (Catharanthus roseus (L.) G Don), họ Trúc đào (Apocynaceace)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam III - năm 2002, trang 351

Bảng 6: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Dừa cạn

1 Mô tả Lá hình bầu dục dài, màu lục xám hay lục nhạt, đầu

hơi nhọn, gốc lá thuôn hẹp Phiến lá có mép nguyên, dài 3,5-5cm, rộng 5-3cm Gân hình lông chim, lồi ở mặt dưới lá Vị đắng, mùi hắc

2 Soi bột Mảnh bần, sợi dài không màu, màng dày, đứng riêng

lẻ hay xếp thành bó Các hạt tinh bột đơn hoặc kép đôi, kép ba Mảnh thân cây gồm tế bào màng mỏng, hình chữ nhật mang lông che chở đơn bào ngắn, đầu

tù Mảnh mạch vạch, mạch xoắn, mạch mạng Lông che chở, bề mặt lấm tấm hay sần si, đơn bào hay đa bào, gãy thành từng đoạn, đầu nhọn

3 Định tính:

Phản ứng hóa học

Sắc ký lớp mỏng Phản ứng hóa học của hợp chất alkaloid Trên sắc ký đồ, có các vết phát quang dưới đèn tử

ngoại ở bước sóng 366nm, trong các vết này, có một vết có giá trị Rf= 0,75 dương tính với thuốc thử Dragendorff

5 Độ tro toàn phần - Không được hơn 3%

6 Định lượng Hàm lượng alcaloid TP không được ít hơn 0,15%

1.3.4 Câu đằng

Bộ phận dùng đoạn thân hoặc cành có gai hình móc câu đã phơi hay sấy khô của

cây Câu đằng (Uncaria sp.), họ Cà phê (Rubiaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam III - năm 2002, trang 332

Bảng 7: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Câu đằng

1 Mô tả Thân vuông, màu nâu thẫm, được cắt đoạn 2-3cm,

đường kính 2-5mm Mấu thân có hai móc câu cong xuống hướng vào trong, đối diện nhau Các móc câu thường hình tròn hay hơi dẹt, đầu móc nhọn, đế tương đối rộng Chất cứng dai, ruột màu trắng vàng hoặc có

lỗ Không mùi, vị nhạt

2 Soi bột Bột có màu nâu Lông che chở đa bào, có 4 - 6 tế bào

Đầu tế bào thuôn nhọn Sợi tụ thành đám Tinh thể calci oxalat hình cầu gai, mảnh mạch vạch, mạch xoắn Nhiều đám mô cứng khoang rộng Tinh bột nằm rải rác

3 Định tính:

Phản ứng hóa học

Sắc ký lớp mỏng

Phản ứng hóa học của hợp chất alcaloid

Trên sắc ký đồ, có các vết phát quang dưới đèn tử ngoại ở bước sóng 366nm, trong các vết này, có một vài vết tắt quang khi soi đèn tử ngoại bước sóng 254nm và đa số các vết tắt quang đều dương tính với thuốc thử Dragendorff

4 Độ ẩm Không được hơn 12%

5 Tạp chất Đoạn thân có gai dài quá 3cm không được hơn 10%

6 Định lượng Hàm lượng alcaloid toàn phần ít nhất là 0,15%

1.3.5 Lá Muồng trâu

Bộ phận dùng: Lá đã phơi hoặc sấy khô của cây Muồng trâu (Cassia alata L.),

họ Đậu (Fabaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào (Dược Điển Việt Nam III - năm 2002, trang 420)

Bảng 8: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm lá Muồng trâu

1 Mô tả Lá chét hình trứng, dài 10-12cm, rộng 3-6cm, tù ở

gốc lá và đầu lá, cuống lá ngắn hơi phình to ở gốc Gân lá hình lông chim Mặt trên lá màu xanh đậm, mặt dưới lá màu xanh nhạt hơn Mép lá nguyên

2 Soi bột Bột màu xanh, chất xốp nhẹ Soi kính hiển vi thấy:

mảnh biểu bì trên và biểu bì dưới của lá có tế bào màng mỏng mang lông che chở đơn bào ngắn, lỗ khí kiểu song bào và u lồi cutin Mảnh biểu bì của cuống

lá và gân lá mang lông che chở đơn bào Mảnh lông đơn bào bị gảy, mảnh mô mềm Sợi kèm tinh thể calci oxalat hình khối lập phương riêng rẽ Mảnh mạch điểm, mạch mạng, mạch xoắn, mạch vạch

3 Định tính:

Phản ứng hóa học

Sắc ký lớp mỏng Phản ứng hóa học của hợp chất Anthraglycosid Trên sắc ký đồ, có các vết tắt quang khi soi đèn tử

ngoại bước sóng 254nm và có các vết dương tính với thuốc thử anisaldehyd (TT)

5 Độ tro toàn phần Không được hơn 5%

6 Tro không tan trong

dung dịch acid clohydric Không được hơn 0,7%

7 Tạp chất Không được hơn 0,5%

8 Định lượng Lá Muồng trâu phải chứa ít nhất 0,2% dẫn chất

anthranoid biểu thị bằng 1,2-dihydro anthraquinon

1.3.6 Vông nem

Lá đã phơi khô của cây Vông nem (Erythrina variegata L.), họ Đậu Fabaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam 3 - năm 2002, trang 503-504

Bảng 9: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm lá Vông nem

1 Mô tả Lá có cuống dài gồm 3 lá chét, mỗi lá chét hình

gần như 3 cạnh, đầu lá thuôn nhọn, đáy vát tròn, mép lá nguyên, mặt lá nhẵn Mỗi lá chét dài 6-13cm, rộng 6-15cm Lá chét giữ thường có chiều rộng lớn hơn chiều dài Lá khô có màu lục xám, nhăn nheo, nhàu nát Thường cắt bỏ cuống hoặc

để cuống dài dưới 1cm

2 Soi bột Mảnh biểu bì trên gồm tế bào nhiều cạnh, ngoằn

ngoèo Mảnh biểu bì dưới có lỗ khí kiểu cafe và lông tiết hình trứng đầu đa bào (gồm 4-6 tế bào chồng lên nhau), chân đơn bào rất ngắn, mảnh gân

lá tế bào hình chữ nhật màng mỏng, có chứa calci oxalat hình thoi và hình đa giác Mảnh mô mềm giậu, bó sợi màng hơi dày Mảnh mạch mạng, mach xoắn

3 Định tính:

Phản ứng hóa học

Sắc ký lớp mỏng Phản ứng hóa học của hợp chất alkaloid Trên sắc ký đồ, có các vết phát quang dưới đèn

tử ngoại ở bước sóng 366nm, trong các vết này, có một vài vết tắt quang dưới đèn tử ngoại

ở bước sóng 254nm

5 Độ tro toàn phần Không được hơn 8%

6 Tro không tan trong acid

hydrocloric

Không được hơn 2.5%

7 Tạp chất Không được hơn 1%

8 Định lượng Hàm lượng alcaloid toàn phần ít nhất là 0,15%

1.3.7 Mã đề

Bộ phận dùng: Lá và hạt đã phơi hoặc sấy khô của cây Mã đề (Plantago major L.)

họ Mã đề (Plantaginaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam 3 - năm 2002, trang 406

Bảng 10: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm lá và hạt Mã đề

1 Mô tả Lá nhăn nheo, nhàu nát, hình trái xoan, giống như

cái thìa, đỉnh tù, dài 7-10cm, rộng 5-7cm Mặt trên

lá có màu lục thẫm, mặt dưới lá màu lục nhạt, phiến

lá dày, nhẵn, mép lá nguyên có 3-5 gân lá hình cung, chạy dọc theo gân chính và chụm lại về phía đầu gốc

lá, gân lồi về mặt dưới lá rất rõ Cuống dài 5-10cm, rộng ra về phía gốc

2 Soi bột Bột màu xám nâu nhạt, vị hơi chát, hơi đắng, hơi

mặn Soi kính hiển vi thấy biểu bì trên và dưới gồm

tế bào màng mỏng ngoằn ngoèo mang lỗ khí và lông tiết Lông tiết có đầu 2 tế bào, chân đa bào đính trên

tế bào tròn, thành mỏng, xung quanh có nhiều đướng vân tỏa ra Có khi lông đã rụng , để lại vết tích của chân lông Mảnh cuống lá gồm tế bào hình nhiều cạnh mang lông tiết đầu 2 tế bào Mảnh mạch vạch, mạch xoắn Mảnh nội nhủ gồm những tế bào hình

đa giác thành rất dày và trong suốt, giữa tế bào có chất dự trữ lổn nhổn màu vàng nâu Hạt có nhiều giọt dầu

8 Định lượng Hàm lượng flavonoid TP trong dược liệu không ít hơn

0,2%

1.3.8 Râu ngô

Bộ phận dùng: Râu ngô tức là vòi và đầu nhụy của cây bắp ngô (Zea Mays L.), Họ lúa (Poaceae)

Xây dựng TCCS dựa vào Dược Điển Việt Nam III - năm 2002

Bảng 11: Tiêu chuẩn kiểm nghiệm Râu ngô

2 Soi bột Bó sợi màu vàng nâu Mảnh biểu bì sợi có mang lông

che chở đơn bào, đầu thuôn nhọn hay lông che chở đa bào, thường đã bị đứt gãy Mảnh mạch vạch Tinh thể oxalat calci hình khối

3 Định tính:

Sắc ký lớp mỏng Trên sắc ký đồ, có một vết có giá trị Rf = 0,525 phát

quang dưới đèn tử ngoại ở bước sóng 366nm Ngoài ra, các vết còn dương tính với thuốc thử anisaldehyd

5 Độ tro toàn phần Không được hơn 3%

1.4 Sản phẩm nội dung cần đạt

Nguồn nguyên liệu phải đạt chất lượng theo tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam III

và tiêu chuẩn cơ sở để điều chế chế phẩm RUVINTAT thử nghiệm lâm sàng

2 Chiết xuất và kiểm nghiệm chất lượng CAO RUVINTAT

2.1 Nội dung

- Hỗn hợp bột dược liệu được chiết xuất thành cao toàn phần gọi là cao RUVINTAT

và CAO RUVINTAT sẽ được kiểm định chất lượng trước khi sản xuất ra chế phẩm

RUVINTAT

2.2 Phương pháp thực hiện [3, 7, 8, 13, 14, 22, 31, 32]

- Chiết xuất các dược liệu theo phương pháp ngấm kiệt với ethanol

- Kiểm nghiệm chất lượng cao RUVINTAT dựa vào đặc tính chuyên biệt của từng

nhóm chức, sử dụng các phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng trên cơ sở Dược

Điển Việt Nam III

- Định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần tính theo rutin dựa vào phương pháp

tạo màu với dung dịch AlCl3 5% trong MeOH và đo quang ở máy quang phổ tử

ngoại khả kiến

2.3 Các chỉ tiêu theo dõi

a Thể chất: dạng cao khô

b Màu sắc: màu nâu nhạt, theo phương pháp kiểm tra bằng cảm quan

c Mùi: dược liệu, theo phương pháp kiểm tra bằng cảm quan

d Vị: hơi đắng, theo phương pháp kiểm tra bằng cảm quan

e Mất khối lượng do làm khô: Theo DĐVN III, mục 5.16, trang PL-98 (phương

pháp sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ 60oC, thời gian 4 giờ)

f Định tính

Định tính bằng các phản ứng hóa học

¾ Hợp chất flavonoid

- Lấy 2 mL dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt dung dịch FeCl3 5% , dung dịch có màu xanh rêu

- Lấy 2 mL dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm 2 giot dung dịch natri hydroxyd 20%, có sự tăng màu vàng của dịch thử

- Lấy 2 mL dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt dung dịch nhôm (III) clorid 5%, có sự tăng màu vàng của dung dịch thử

- Lấy 2 mL dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm 5 giọt HCl đậm đặc và ít bột magnesi, dung dịch chuyển dần từ màu vàng nhạt sang màu hồng rồi tím đỏ

Tiến hành:

- Tính tạo bọt:

Lấy khoảng 1g cao, thêm 10 mL dung dịch natri clorid 1% Đun sôi nhẹ trong 2

- 3 phút, lọc, dịch lọc cho vào ống nghiệm Lắc ống nghiệm theo chiều thẳng đứng, có lớp bọt bền xuất hiện

- Phản ứng Liebermann-Burchard:

Cân khoảng 2g cao, cho vào cốc có mỏ, thêm 30 mL methanol (TT) Chiết trong bể siêu âm trong vòng 15 phút, lọc qua giấy lọc thu dịch lọc, cô cách thủy đến cắn, cắn hòa với 10mL nước cất Cho dịch chiết vào bình lắng gạn 60mL và lắc với n-butanol bão hòa nước 3 lần (mỗi lần 10mL) Dịch n-butanol bảo hòa nước được cô đến cắn, dùng một ít cắn này cho vào sát đáy một ống nghiệm, thêm vào 1mL anhydrid acetic và vài giọt acid sulfuric đậm đặc theo thành ống nghiệm, mặt phân cách 2 chất lỏng phải có màu đỏ tím

2 lớp, gạn lấy lớp acid, cho vào các ống nghiệm, mỗi ống khoảng 3 mL dịch chiết acid, thực hiện các phản ứng:

- Ống nghiệm 1: thêm vài giọt thuốc thử Dragendorff, phải xuất hiện tủa màu đỏ cam

- Ống nghiệm 2: thêm vài giọt thuốc thử Bouchardat, phải xuất hiện tủa màu nâu

- Ống nghiệm 3: thêm vài giọt thuốc thử Meyer phải xuất hiện tủa màu trắng hoặc vàng nhạt

Định tính rutin bằng sắc ký lớp mỏng

Tiến hành sắc ký lớp mỏng theo DĐVN III, PL-4.4

- Chất hấp phụ: Bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 của hãng Merck

- Hệ dung môi khai triển: n-BuOH – CH3COOH – H2O (4: 1: 5) (lớp trên)

- Dung dịch chất chuẩn: Dung dịch 0,06% rutin chuẩn trong methanol Chấm 10

µL lên vị trí 1 của bản mỏng

- Dung dịch chất thử: Cân khoảng 1g cao, chiết với 10mL methanol trong bể chiết siêu âm trong 15 phút Chấm 10µL lên vị trí 2 của bản mỏng

- Triển khai bản mỏng theo DĐVN III, phụ lục 4.4, trang PL-86 Lấy bản mỏng

ra, để khô bản mỏng ở nhiệt độ phòng Quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 366nm

- Trên sắc đồ của dung dịch thử phải có vết cùng phát huỳnh quang màu nâu và cùng giá trị Rf với vết Rutin trên sắc đồ của dung dịch đối chiếu

g Định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần tính theo rutin

- Thuốc thử AlCl3 5% () trong methanol: cân chính xác 5g hòa tan trong khoảng 85mL methanol (PA), để trong vòng 24 giờ, sau đó cho vào bình định mức 100mL, bổ sung methanol vừa đủ 100mL

- Chất chuẩn: dung dịch 0,032% rutin chuẩn trong methanol

- Mẫu thử: Cân chính xác 0,15g cao (đã trừ ẩm) cho vào bình Soxhlet Thêm 120ml ether ethylic (TT), chiết tới khi dịch chiết không còn màu Để nguội và gạn bỏ ether Thêm 30mL methanol (TT), chiết trong bể chiết siêu âm trong vòng 15 phút, lọc, thu dịch lọc, cho vào cốc có mỏ 250 mL Bã cao được tiếp tục chiết 3 lần nữa, mỗi lần với 30mL methanol (TT) Tập trung dịch chiết methanol, lọc, rửa phểu lọc bằng 5

mL methanol (TT) Dịch lọc được cô trên bếp cách thủy đến cắn Cắn được hòa với khoảng 10mL methanol cho vào bình định mức 25mL, bổ sung methanol vừa đủ đến

vạch, lắc đều Lấy chính xác 0,5mL dung dịch này (dịch A) cho vào ống nghiệm có nắp vặn, thêm chính xác 10mL methanol (TT) và 1mL dung dịch nhôm chlorid 5% trong methanol, lắc đều (tiến hành 3 mẫu thử tương tự để lấy giá trị trung bình)

- Mẫu trắng thử: Lấy chính xác 0,5mL dịch A cho vào ống nghiệm có nắp vặn, thêm chính xác 11mL methanol (TT), lắc đều

- Mẫu chuẩn: Lấy chính xác 0,5mL dung dịch mẫu chuẩn đã pha ở trên cho vào ống nghiệm có nắp vặn, thêm chính xác 10mL methanol (TT) và 1mL dung dịch nhôm chlorua 5% trong methanol, lắc đều

- Tất cả các mẫu đều để ở nhiệt độ phòng lạnh , đậy kín ống nghiệm, sau 1 giờ tiến hành đo, thỉnh thoảng lắc nhẹ cho phản ứng xảy ra hoàn toàn

- Tiến hành đo độ hấp thu các mẫu ở đỉnh hấp thu cực đại λmax=433nm-434nm trên máy UV – Visible Spectrophotometre

Công thức tính hàm lượng flavonoid TP tính theo rutin trong cao RUVINTAT:

Trong đó:

A t : Độ hấp thu của mẫu thử

A’t : Độ hấp thu của mẫu trắng thử

Ac : Độ hấp thu của mẫu chuẩn

Cc : Hàm lượng chất chuẩn (%)

b : Khối lượng 100g cao đã trừ ẩm (g)

P : Khối lượng cao đem thử đã trừ ẩm (g)

Hàm lượng hoạt chất flavonoid toàn phần qui ra công thức rutin không được dưới 7,1%

, 0

25 (%)

'

x p

b x x xC A

A A