nghiên cứu sự phân bố các hợp chất ent-kauran ditecpenoit trong cây khổ sâm bắc bộ ( croton tonkinesis gagnep - euphorbiaceae

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HOÀI THANH NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ CÁC HỢP CHẤT ENT-KAURAN DITECPENOIT TRONG CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ (CROTON TONKINENSIS GAGNEP., EUPHORBIACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HOÀI THANH NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ CÁC HỢP CHẤT ENT-KAURAN DITECPENOIT TRONG CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ (CROTON TONKINENSIS GAGNEP., EUPHORBIACEAE) Chuyên ngành : Hóa hc hữu cơ Mã số : 60 44 27 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS. TS. Phan Minh Giang Hà Nội - 2011 Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 1 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU 1 Chƣơng 1: TỔNG QUAN 8 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHI CROTON (HỌ EUPHORBIACEAE) 8 1.2 CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ (CROTON TONKINENSIS GAGNEP.) 10 1.2.1 Thực vật học 10 1.2.2 Tác dụng dƣợc lý của cây Khổ sâm Bắc Bộ [1, 4] 11 1.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ 11 1.3.1 Các ent-kauran ditecpenoit từ chi Croton 11 1.3.2 Các kauran ditecpenoit từ cây Khổ sâm Bắc Bộ 12 1.3.3 Các flavonoit 17 1.3.4 Các ancaloit 18 1.3.5 Các thành phần hóa học khác 20 1.4 HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ 21 1.4.1 Tác dụng kháng kí sinh trùng sốt rét 21 1.4.2 Tác dụng kháng vi sinh vật 21 1.4.3 Tác dụng chống viêm 22 1.4.4 Tác dụng ức chế sự phát triển của tế bào ung thƣ 22 Chƣơng 2:NHIỆM VỤ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU CỦA LUẬN VĂN 25 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2.1 Phƣơng pháp chiết và phân tách các hợp chất từ nguyên liệu thực vật 25 2.2.2 Các phƣơng pháp phân tích, phân tách và phân lập sắc ký 26 2.2.3 Các phƣơng pháp nghiên cứu cấu trúc (các phƣơng pháp phổ) 27 Chƣơng 3: THỰC NGHIỆM 28 3.1 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 28 3.2 NGUYÊN LIỆU THỰC VẬT 28 3.3 ĐIỀU CHẾ CÁC PHẦN CHIẾT TỪ CÂY KHỔ SÂM 29 3.4 PHÂN TÍCH CÁC PHẦN CHIẾT BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG 30 Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 2 3.4.1 Phân tích phần chiết n-hexan (CTH) 30 3.4.2 Phân tích phần chiết điclometan (CTD) 31 3.4.3 Phân tích phần chiết etyl axetat (CTE) 33 3.5 PHÂN TÁCH CÁC PHẦN CHIẾT VÀ PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT 33 3.5.1 Phân tách phần chiết n-hexan (CTH) 33 3.5.2 Phân tách phần chiết điclometan (CTD) 35 3.5.3 Phân tách phần chiết etyl axetat (CTE) 36 3.5.4 Phân tách phần chiết nƣớc (CTW1) 36 3.6 HẰNG SỐ VẬT LÝ VÀ DỮ KIỆN PHỔ CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐƢỢC PHÂN LẬP 38 3.7 PHÂN TÍCH HPLC MẪU CHIẾT MEOH CÀNH NHỎ CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ 42 3.7.1 Nguyên liệu 42 3.7.2 Chuẩn bị mẫu phân tích: điều chế phần chiết metanol 42 3.7.3 Điều kiện phân tích sắc ký HPLC 42 Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 43 4.2 ĐIỀU CHẾ CÁC PHẦN CHIẾT TỪ CÂY KHỔ SÂM 43 4.3 PHÂN TÁCH CÁC PHẦN CHIẾT TỪ CÀNH KHỔ SÂM BẮC BỘ 46 4.3.1 Phân tách phần chiết n-hexan (CTH) 46 4.3.2 Phân tách phần chiết điclometan (CTD) 46 4.3.3 Phân tách phần chiết etyl axetat (CTE) 46 4.3.4 Phân tách phần chiết nƣớc (CTW) 47 4.4 CẤU TRÚC CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐƢỢC PHÂN LẬP 44 4.5 PHÂN TÍCH HPLC MẪU CHIẾT MEOH CÀNH NHỎ CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ 52 KẾT LUẬN 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 1 LỜI MỞ ĐẦU                      .                        ,      , ch,              .      2000 - 2005  20                 .                                       ,                  , ,                , ,          Croton tonkinensis              in vitro  ent-    Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 2   ent-kaura   ent-            ent- Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 3 Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHI CROTON (HỌ EUPHORBIACEAE) Chi Croton            Croton        Croton  Croton argygratus  Croton cascarilloidis  Croton oblongifolius  Croton delpyi  Croton caudatus  Croton maieuticus  Croton crassifolius  Croton glandulous  Croton poilanei  Croton roxburghianum  Croton thorelii  Croton potabilis  Croton tiglium   Croton   Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 4 Croton cajicara            Croton celtidifolius   Croton eluteria   Croton lechleri   Croton malambo             Croton draco               Croton oblongifolius    Croton sublyratus  Croton sublyratus   Croton crassifolim  Croton tonkinensis     Croton Croton hovarum  Croton tiglium    Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 5 1.2 CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ (CROTON TONKINENSIS GAGNEP.) 1.2.1 Thực vật học Croton tonkinensis     Hình 1Croton tonkinensis Gagnep., Euphorbiaceae) - --10 -   Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 Luận văn Thạc sĩ 2011 6                  1.2.2 Tác dụng dƣợc lý của cây Khổ sâm Bắc Bộ [1, 4]    -      - 25 g.     -      1.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ 1.3.1 Các ent-kauran ditecpenoit từ chi Croton [...]... đƣợc phân lập trong năm 2004 [38] Năm 2005, Phan Minh Giang và cộng sự tiếp tục công bố các ent-kauran ditecpenoit khác, ent-11α-acetoxy-7β,14α-dihydroxykaur-16-en-15-on (1 0), acid ent-kaur-16-en-15-on-18-oic (1 1), ent-18-hydroxykaur-16-en (1 2), ent-7β-acetoxy11α-hydroxykaur-16-en-15-on (1 3), ent-18-acetoxy-11α-hydroxykaur-16-en-15-on (1 4), acid ent-11α-acetoxykaur-16-en-18-oic (1 5), ent-15α,18-dihydroxykaur-16-en... cộng sự phân lập tiếp đƣợc 4 ent-kauran mới, ent-1α,14α-diacetoxy-7β-hydroxykaur-16-en-15-on (5 ), ent-1α,7β-diacetoxy14α-hydroxykaur-16-en-15-on (6 ), ent-18-acetoxy-14α-hydroxykaur-16-en-15-on (7 ) và ent -( 1 6S )-1 8-acetoxy-7β-hydroxykauran-15-on (8 ) [45, 48] 5 6 7 R1 OAc OAc H R2 H H OAc R3 R4 OH OAc OAc OH H OH 8 Một sản phẩm thủy phân nhóm 18-acetoxy của chất 1 là ent-7β-hydroxy-15oxokaur-16-en-18-ol (9 )... Nội tiếp tục công bố các thành phần ent-kauran ditecpenoit mới Năm 2003, Phan Minh Giang và cộng sự công bố một nghiên cứu phát hiện các ent-kauran ditecpenoit có hoạt tính chống viêm mạnh, ent-7α,14β-dihydroxykaur-16-en-15-on (2 ), ent-18-acetoxy-7 - hydroxykaur-16-en-15-on (1 ), ent-1β-acetoxy-7α,14β-dihydroxykaur-16-en-15-on (3 ) và ent-18-acetoxy-7α,14β-dihydroxykaur-16-en-15-on (4 ) [41] 1 2 3 Luận... K20 Các ent-kauran mới tiếp tục đƣợc phân lập trong các năm 2009, 2010 và 2011 khi phân tách phần chiết metanol với các phƣơng pháp sắc kí cột trên silica gel, Sephadex LH-20 và RP-18 là ent-11α-acetoxy-7β-hydroxykaur-16-en-15-on (2 4), ent-1α,7β,14α-triacetoxy-kaur-16-en-15-on (2 5), ent-11β-acetoxykaur-16-en18-ol (2 6), ent-11α-hydroxy-18-acetoxykaur-16-en (2 7), ent-14β-hydroxy-18acetoxykaur-16-en (2 8)... lacciferus - một loài cây ở Sri Lanka là ent-kaur-15-en-17-ol, ent-kaur-15-en-17hydoxy-3β-yl acetat, ent-kauran- 3β,16β,17-triol, ent-kauran- 16β,17-diol, acid 16αH -ent-kauran- 17-oic và ent-15β,16-epoxykauran-17-ol Hai chất sau đƣợc chỉ ra là có khả năng chống lại Aphis craccivora Ent-kauran- 16β,17-diol cũng đã đƣợc tìm thấy trong Croton sublyratus [21, 22] Các ent-kauran ditecpenoit đƣợc phát hiện rải rác trong. .. lá cây Khổ sâm Bắc OH Bộ của Việt Nam và phân lập đƣợc 10 ent-kauran trong số đó có các chất mới ent7β-hydroxy-16-kauren-15-on (1 9), ent-18-acetoxykaur-16-en-15-on (2 0), ent-18hydroxykaur-16-en-15-on (2 1) và hai chất mới có cấu trúc kauran diterpen là 14αhydroxykaur-16-en-7-on (2 2) (crotonkinin Α) và 14α-acetoxy-17-formylkaur-15en-18-ol (2 3) (crotonkinin B) [28] OH H O H 19 20 21 R1 R2 CH3 OH CH2OAc... ent-7α-hydroxy-18-acetoxykaur-16-en (2 9) [25, 26, 50] Các grayanan ditecpenoit 7α,10α-epoxy-14β-hydroxygrayanan- 1(2 ),1 6(1 7)-dien2,15-dion (3 0) và 7α,10α-epoxy-14β-hydroxygrayanan- 1(5 ),1 6(1 7)-dien-2,15-dion (3 1) là các hợp chất mới đáng chú ý khác trong nhóm ditecpenoit từ cây Khổ sâm Bắc Bộ [51] 24 25 26 27 28 Luận văn Thạc sĩ 29 11 2011 Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 30 31 Hai dimer của ent-kauran. .. 2:1 (v/v) đƣợc 31 phân đoạn, mỗi phân đoạn 100 ml Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau đƣợc gộp lại và cất loại dung môi dƣới áp suất giảm cho 9 nhóm phân đoạn CTH1 (các phân đoạn 1-6 ), CTH2 (7 -1 1), CTH3 (1 2-1 5), CTH4 (1 6-1 7), CTH5 (1 8-2 1), CTH6 (2 2-2 5), CTH7 (2 6-2 8), CTH8 (2 9-3 1) và CTH9 (3 2-3 4) Nhóm phân đoạn CTH3 (2 ,6 g) đƣợc rửa bằng n-hexan cho các tinh thể hình kim màu trắng CTH3 (chất I) (0 ,41... học Hóa K20 tonkinensis Gagnep. , Euphorbiaceae) đã đƣợc mở rộng dẫn đến sự phân lập ra nhiều chất thuộc nhóm ent-kauran ditecpenoit Khung kauran Khung ent-kauran Năm 2000, GS Phan Tống Sơn và cộng sự công bố cấu trúc hóa học đầu tiên của các ent-kauran ditecpenoit đƣợc phân lập từ lá cây Khổ sâm Bắc Bộ là ent-7βhydroxy-15-oxokaur-16-en-18-yl acetat (1 ) [39] Sau đó nhóm nghiên cứu của Đại học Quốc Gia... ent-15α,18-dihydroxykaur-16-en (1 6), ent-11α,18-diacetoxy-7β-hydroxykaur-16-en-15-on (1 7) và ent -( 1 6S )-1 α,14αdiacetoxy-7β-hydroxy-17-methoxykauran-15-on (1 8) [49] 9 10 13 14 17 Luận văn Thạc sĩ 9 R1 R2 H OH H OAc OAc H OAc OH R3 OH H H H R4 OAc OH OH OAc 2011 Nguyễn Thị Hoài Thanh Cao học Hóa K20 11 12 16 15 R1 H OH 18 NămH 2007, Kuo P C và cộng sự nghiên cứu thành phần lá cây Khổ sâm Bắc OH Bộ của Việt Nam và phân lập .  ent-kauran  ent--diacetoxy--hydroxykaur-16-en-15-on (5 ), ent--diacetoxy- -hydroxykaur-16-en-15-on (6 ), ent-18-acetoxy--hydroxykaur-16-en-15-on (7 ent -( 1 6S )-1 8-acetoxy--hydroxykauran-15-on. ent--acetoxy--hydroxykaur-16-en-15-on (2 4), ent--triacetoxy-kaur-16-en-15-on (2 5), ent--acetoxykaur-16-en- 18-ol (2 6), ent--hydroxy-18-acetoxykaur-16-en (2 7), ent--hydroxy-1 8- acetoxykaur-16-en. ent--acetoxy- -hydroxykaur-16-en-15-on (1 3), ent-18-acetoxy--hydroxykaur-16-en-15-on (1 4), acid ent--acetoxykaur-16-en-18-oic (1 5), ent--dihydroxykaur-16-en (1 6), ent--diacetoxy--hydroxykaur-16-en-15-on