Luận văn thạc sĩ theo dõi hàm lượng hoạt chất diterpenoit trong cây khổ sâm cho lá (croton tonkinensis gagnep ,)

1 MỞ ĐẦU Theo thống kê số lượng dược phẩm phép lưu hành 20 năm vừa qua cho thấy, hợp chất thiên nhiên coi nguồn cấu trúc để tạo dược phẩm Đặc biệt rõ ràng lĩnh vực thuốc chống ung thư có tới 60%, bệnh truyền nhiễm 70% có nguồn gốc tự nhiên Ý nghĩa to lớn hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học chỗ chúng không sử dụng trực tiếp làm thuốc chữa bệnh, mà quan trọng chúng chất mẫu, chất dẫn đường để phát triển thuốc chất dò sinh hoá để làm sáng tỏ nguyên lý dược lý học người Các nhà khoa học Viện nghiên cứu ung thư Quốc gia Hoa Kỳ coi kho tàng thuốc Trung Quốc nguồn khai thác chất mẫu, chất dẫn đường nhằm khám phá phát triển thuốc chống ung thư chống HIV tương lai Những năm gần có nhiều thuốc cổ truyền y học Trung Quốc đối tượng nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng điều trị ung thư, qua phát hàng loạt chất mới, nhiều chất có triển vọng trở thành chất dẫn đường Nhiều ent -kauran ditecpenoit thể hoạt tính kháng khuẩn, gây độc hại tế bào, chống khối u anti -HIV Đã có nhận xét rằng, hoạt chất số thuốc có tính kháng khuẩn, chống viêm, chống ung thư, hạ huyết áp, lợi tiểu thường có mặt ent -kauran ditecpenoit Cây Khổ sâm cho thuộc loại thuốc dân gian Việt Nam Cây mọc hoang dại nhiều nơi miền Bắc Việt Nam, trồng nhiều trạm xá đông y, y tế xã nhà dân, vùng đồng sơng Hồng, coi nguồn thuốc chỗ để chữa bệnh viêm nhiễm, Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn bệnh đường ruột cho người gia súc Nhân dân dùng tươi nhai sống, vò giã nát vắt lấy nước uống chữa bệnh đau bụng ngoài, chữa vết thương nhiễm trùng, chữa viêm loét hành tá tràng, đau dày, trị sốt rét Những kết nghiên cứu thành phần hoá học thử hoạt tính sinh học Khổ sâm khẳng định tính kháng khuẩn mạnh định ent -kauran ditecpen, đồng thời phát tính gây độc hại mạnh số dòng tế bào ung thư người chế phẩm từ Khổ sâm cịn có hoạt tính chống suy giảm miễn dịch gà bị nhiễm virus (gây suy giảm miễn dịch) Gumboro cường độc Chúng cho ent -kauran từ Khổ sâm có triển vọng chất dẫn đường nhiều hứa hẹn để tạo thuốc chống viêm, chống ung thư chống suy giảm miễn dịch có hiệu lực Để góp phần tìm hiểu đánh giá chất lượng nguồn nguyên liệu phong phú sử dụng rộng rãi dân gian, đề tài: “Theo dõi hàm lƣợng hoạt chất diterpenoit Khổ sâm cho (Croton tonkinensis Gagnep.,) họ Euphorbiaceae” nội dung luận văn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Những loài thuộc chi Croton L., công dụng y học Các thực vật chi Croton L., thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) có khoảng 700 lồi [26], gặp phổ biến vùng nhiệt đới, gặp vùng ơn đới vùng hàn đới châu Á có khoảng 50 lồi, riêng Đơng dương có 40 loài [35] Việt Nam, theo Phạm Hoàng Hộ chi Croton L có 18 lồi [1], cịn Nguyễn Nghĩa Thìn [13] thống kê 41 lồi, có tới 21 loài đặc hữu hệ thực vật nước ta Có nhiều lồi thuộc chi Croton L sử dụng y học dân gian nhiều dân tộc, khu vực Trung Nam Mỹ Đông Nam Á Y học cổ truyền Brasil dân tộc sinh sống vùng Amazon dùng lá, vỏ rễ C cajucara [36] để chữa trị nhiều loại bệnh sốt cao, chống viêm nhiễm, ỉa chảy, viêm loét dày, giảm cholesterol máu, chữa ung thư, hạ huyết áp, diệt trừ ốc sên, xua đuổi côn trùng [37] Nước sắc rễ C campestris Brasil dùng để chữa bệnh giang mai, viêm ống mật, thuốc sổ, trị ung thư [26] Equađo người ta dùng vỏ C eluteria chữa bệnh cao huyết áp, kiết lỵ, sốt rét, đau dày cịn có tác dụng bồi bổ sức khoẻ [45] Nhân dân nước vùng Trung Nam Mỹ Peru, Equađo dùng nhựa vỏ C.lechlerii có tính kháng sinh để chữa vết thương, trị ung thư [27] Nước sắc C schiedeanus y học dân gian Columbia chữa bệnh cao huyết áp, có tác dụng giãn mạch [29] Rễ C macrostachys Tanzania dùng để chữa bệnh tiểu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn đường [27] Một số nước vùng Đông Phi (Camơrun, Nigeria, Siraleon v.v ) dùng rễ vỏ thân C zambicus làm thuốc nhuận tràng, trị kiết lỵ chống co giật [39] Thái Lan người ta dùng vỏ, rễ C oblongifolius để chữa bệnh rối loạn tiêu hoá, kiết lỵ, loét dày, trị ung thư [44] dùng C sublyratus [33] để trị loét hành tá tràng nước ta có vài lồi thuộc chi Croton L., dùng y học dân gian Cây Lơpơté (C crassifolium) Tây Nguyên dùng để trị bệnh đường ruột [13], Khổ sâm cho (C tonkinensis) trị sốt rét, bệnh đường ruột [2], [12] Bên cạnh dùng làm thuốc y học dân gian, người ta biết số thuộc chi Croton L., có chứa độc tố châu Phi có nhiều Croton spp thuộc loại độc, thổ dân sử dụng đánh bắt cá, tẩm tên độc săn bắn vỏ C hovarum Madagasca thí dụ [34] Việt Nam có nói đến Ba đậu (C tiglium) [3] độc, dùng làm thuốc trừ sâu thảo mộc 1.2 Những nghiên cứu hoá thực vật chi Croton L., Cho đến có khoảng 50 lồi thực vật chi Croton L., nghiên cứu hoá thực vật [28], phân lập nhận dạng 271 chất, chủ yếu gồm ditecpenoit ancaloit 1.2.1 Các ancaloit Các ancaloit tìm thấy thực vật chi Croton L., có chứa dị vòng isoquinolin [41], tạo khung proaporphin (1), aporphin (2), morphinandienon (3) gần berbin (tetrahydroprotoberberin) (4) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.2.1.1 Ancaloit khung proaporphin (1) NH 6a H 13 12 10 11 O (1) Các ancaloit kiểu khung proaporphin (1) khác nhóm vị trí 1, 2, cấu hình hydro vị trí 6a 1.2.1.2 Ancaloit khung aporphin (2) Các ancaloit khung aporphin (2) thường khác biệt nhóm vị trí 1, 2, 6, 9, 10, 11 cấu hình hydro vị trí 6a 6a N6 H 11 10 (2) 1.2.1.3 Ancaloit khung morphinandienon A 11 12 13 C 10 B 14 15 D N 17 16 O (3) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Các ancaloit khung morphinandienon (3) khác biệt nhóm vị trí 2, 3, 4, 6, 8, 17 cấu hình vịng D 1.2.1.4 Ancaloit khung berbin (tetrahydroprotoberberin) (4) R2 R1 N R3 14 H 13 R4 10 12 R5 R6 (4) Các berbin (4) hay tetrahydroprotoberberin ancaloit ancaloit phát gần hai loài thực vật chi Croton L., ancaloit khác nhóm gắn vào vị trí 2, 3, 8, 10, 11 cấu hình proton vị trí C14 1.2.2 Các hợp chất ditecpenoit Các ditecpenoit chiếm tới 114/271 kiểu hợp chất phân lập nhận dạng từ loài thuộc chi Croton [28] Cách gọi tên cấu trúc hoá học chúng đa dạng, từ loại khung khơng vịng khung đa vịng giáp Kiểu khơng vịng phytan (5) (2,6,10,14-tetrametylhexadecan), loại vòng lớn cembran (6) (18,19,20-trimetyl-1-isopropylcyclotridecan) Kiểu hai vòng giáp labdan (7), clerodan (8) Ba vòng giáp pimaran (9), kauran (10), beyeran (11) Kiểu vòng giáp atisan (12), sarcopetelan (13), phorbol (14) Năm vòng trachyloban (15) 1.2.2.1 Ditecpen khơng vịng Phytan thuộc loại ditecpen khơng vịng, có cấu trúc hố học 2,6,10,14tetrametylhexadecan (5) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn (5) Các ditecpen loại khác số lượng, vị trí cấu hình nhóm hydroxy, xeton olefin 1.2.2.2 Ditecpen vòng lớn Cembran (6) Cembran thuộc loại ditecpenoit vịng lớn chung có cấu trúc hố học 4,8,12-trimetyl-1-isopropyl-cyclotridecan khác số lượng, vị trí cấu hình liên kết olefin 18 19 17 15 10 13 16 14 11 12 20 (6) 1.2.2.3 Ditecpen vòng 1.2.2.3.1 Khung labdan (7) 12 14 13 20 11 15 16 17 10 19 18 (7) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.2.2.3.2 Clerodan ditecpen (furanoditecpen) Các hợp chất ditecpen khung clerodan gặp phổ biến thiên nhiên, riêng chi Croton L đến phân lập 42 số 114 ditecpenoit từ thực vật vị trí 15, 16 hầu hết clerodan ditecpen đóng vịng epoxy để hình thành vịng furan, nên ditecpenoit loại gọi furanoditecpen 12 11 10 17 15 16 20 14 13 19 18 (8) 1.2.2.4 Ditecpen có vịng dính kết (pimaran) Các lồi thuộc chi Croton L nghiên cứu, thấy kiểu khung pimaran (9) 12 17 15 11 20 10 13 16 14 18 19 (9) 1.2.2.5 Ditecpen vịng dính kết Thường gặp kiểu khung kauran (10), beyeran (11), atisan (12), sarcopetelan (13) phorbol (14) ditecpen 1.2.2.5.1 Kauran ditecpen Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 12 13 11 20 17 14 10 HOOC 16 O 15 O 18 19 (10) (10.13) 8,15-seco-kauran 1.2.2.5.2 Các ditecpen kiểu khung beyeran (11), atisan (12) sarcopetelan (13) Các kiểu cấu trúc (11) (12) thường gặp nhiều họ thực vật, gần phát thấy Croton sarcopetalus đồng thời khám phá kiểu khung sarcopetelan ditecpen (13) Điều đáng ý rễ cịn tìm thấy dẫn xuất clerodan (8) pimaran (9) ditecpen 12 12 11 17 20 13 20 1 15 13 14 6 18 10 10 15 16 14 17 16 11 18 19 19 (11) (12) O 11 20 10 12 O 16 15 13 14 17 18 19 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên (13) http://www.lrc-tnu.edu.vn 10 1.2.2.5.3 Phorbol ditecpen R1O 11 18 19 OH O 16 10 17 14 OR2 15 12 13 HO 20 CH2OR3 (14) Các phorbol ditecpen có cấu trúc hố học 4,9 ,12 ,13 ,20pentahydroxy-1,6-tigliadien-3-one, chúng khác cấu hình nhóm hydroxyl vị trí nhóm chức khác, gặp cấu hình phorbol, cịn hầu hết cấu hình 1.2.2.6 Ditecpen vịng dính kết (trachyloban) Các dẫn xuất trachyloban thuộc loại vịng dính kết 12 11 20 10 13 14 17 16 15 18 19 (15) 1.2.3 Các hợp chất khác Thường gặp số hợp chất tritecpenoit -acetoxy-14taraxeren-28-oic acid (16.a) [32, 34, 36, 41], -O-axetoaxetyl-20(29)-lupeol (16.b) [28] Các hợp chất steroit (17) glucosid , 14 ,15 ,16 tetrahydroxypregnan-20-one glucosid (17.1) (17.2) C ruizianus [43] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 46 Bảng 3.4 : Tƣơng quan nồng độ diện tích tích phân nồng độ khác Crotonkin -2 Thời Diện tích STT Nồng độ thực nghiệm Diện tích lý thuyết gian (phút) Khối lƣợng phân tử [M]+ 0.001 40.21345 22.143177 21.1 376 0.005 42.04944 48.772285 21.6 376 0.01 69.21092 82.05867 21.6 376 0.05 363.3754 348.34975 21.6 376 0.1 677.5821 681.2136 21.6 376 0.2 1331.266 1346.9413 21.6 376 0.5 3349.907 3344.1244 21.6 376 Dựa vào phương pháp bình phương tối thiểu số liệu bảng 3.4 thu hệ số phương trình hồi qui Crotonkin -2 có a = 6657,277 ; b = 15, 48592 hệ số tương quan R = 0,9999391 Vậy phương trình tương quan Crotonkin -2 là: Y = 6657,277 XCT-2 + 15,48592 §-êng chuÈn cña CT1 4000 3500 Dien tich 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 0.1 0.2 0.3 0.4 Nång ®é (mg/ml) 0.5 0.6 Dien tich LT Hình 3.2: Đƣờng chuẩn Crotonkin - Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 47 Tính ổn định cao lần đo lặp lại tương quan chặt chẽ nồng độ chất chuẩn diện tích thu phổ LC -MS phản ánh hệ số tương quan R phương trình tương quan Crotonkin -1 (0,989968) Crotonkin -2 (0,999939) cao Như phép định lượng chất hỗn hợp phương pháp LC -MS ưu việt, đáp ứng yêu cầu nhanh, nhậy chọn lọc đánh giá chất lượng nguyên liệu bán thành phẩm thành phẩm trình nghiên cứu sản xuất 3.3.3 Xác định đường chuẩn tham số phương trình tương quan Crotonkin -3 Dùng 50mg Crotonkin -3 làm tương tự trên, số liệu thu ghi bảng 3.5 Bảng 3.5 : Tƣơng quan nồng độ diện tích tích phân nồng độ khác Crotonkin -3 Thời gian Píc phân tử Stt Nồng độ Diện tích pic (phút) [M+H-H2O]+ 0.1 27.603 24,01 345 0.2 84.366 24,01 345 0.4 197.892 24,01 345 0.5 254.655 24,01 345 0.8 424.944 24,01 345 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 48 §-êng chuÈn cđa D2 450 400 DiƯn tÝch pÝc 350 300 250 200 150 100 50 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Nång ®é D Hình 3.3: Đƣờng chuẩn Crotonkin - Dựa vào phương pháp bình phương tối thiểu số liệu bảng 3.5 thu hệ số phương trình hồi qui Crotonkin -3 có a = 567,63 ; b = 29, 16 hệ số tương quan R = 0,9740 Vậy phương trình tương quan Crotonkin -3 là: Y = 567,63 XD-2 + 29,16 y: Diện tích pic thu phổ LC -MS XD-2 : Hàm lượng (mg/ml) Crotonkin -3 Cũng Crotonkin -1 Crotonkin -2 tính ổn định cao lần đo Crotonkin -3 lặp lại tương quan chặt chẽ nồng độ chất chuẩn diện tích thu phổ LC -MS phản ánh hệ số tương quan R phương trình tương quan Crotonkin -3 (0,9740) cao 3.3.4 Xác định hàm lượng Crotonkin -1 Crotonkin -2 Khổ sâm Cân lấy khối lượng nguyên liệu (M) ngâm chiết thu cặn chiết giàu ent -kauran (m) Cân xác 1mg cặn chiết ghi máy LC -MS Từ phương trình tương quan (y = ax + b) diện tích tích phân LC -MS Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 49 chất tính khối lượng chất 1mg cặn chiết (m) hàm lượng (%)của Crotonkin ngun liệu tính theo cơng thứcc: % crotonkin = yCT - b x a m M x 100 (3.1) Trong yCT : diện tích tích phân phổ đồ LC -MS ứng với Rt Crotonkin a, b: Các hệ số phương trình tương quan crotonkin Crotonkin-1 có a = 7109,85, b = 126,87 Crotonkin-2 có a = 6657,28, b = 15,48 m: cặn chiết giàu ent -kauran thu đựơc từ khối lượng M M: khối lượng nguyên liệu đem phân tích Ví dụ cách tính: 200g (M) khơ nghiền nhỏ thu hồi tháng 5/2007 Sóc Sơn - Hà Nội ngâm chiết kiệt, làm giầu ent -kauran thu 23, 4g cặn thơ Cân xác 1mg cặn chiết đưa phân tích máy LC-MS thu sắc ký đồ ký hiệu M107 Trên sắc ký đồ M107 cho biết diện tích tích phân LC -MS tương ứng với Rt Crotonkin sau: yCT Rt Crotonkin-1 388,463 23,96 Crotonkin-2 196,815 21,60 Thay số vào công thức (3.1) ta có: % crotonkin-1 = 388,463-126,87 x 7109,86 % crotonkin-2 = 196,815-15,48 6657,28 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 23,4 x 100 = 0,43 200 x 23,4 x 100 = 0,32 200 http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 3.3.4.1 Xác định hàm lượng crotonkin cành Khổ sâm theo thời điểm khác Theo dõi biến động hàm lượng Crotonkin -1 Crotonkin -2 cành Khổ sâm trồng Sóc Sơn - Hà Nội cho kết ghi bảng 3.6 Bảng 3.6: Hàm lƣợng Crotonkin chủ yếu cành Khổ sâm thu Sóc Sơn - Hà Nội theo số thời điểm năm STT Thời gian lấy mẫu 4/2007 5/2007 11/2007 Bộ phận Lá Cành Lá Cành Lá Cành Hàm lƣợng (%) Crotonkin-1 Crotonkin-2 0,335 0,062 0,430 0,360 0,520 0,530 0,192 0,048 0,320 0,350 0,560 0,530 3.3.4.2 Xác định hàm lượng Crotonkin chủ yếu Khổ sâm vùng sinh trưởng khác Bảng 3.7: Hàm lƣợng số ent -kauran chủ yếu Khổ sâm thu số vùng khác Bộ phận Thời gian Hàm lƣợng (%) Hàm lƣợng (%) Địa điểm thu mẫu Crotonkin-1 Crotonkin-2 Lá Sóc Sơn 5/2007 0,43 0,32 Lá Ninh Bình 5/2006 0,74 0,50 Lá Phú Thọ 0,73 0,78 9/2007 Lá Ninh Bình 0,80 0,70 Lá Sóc Sơn 0,52 0,56 11/2007 Lá Hưng Yên 0,75 0,50 Từ cặn chiết giàu ent -kauran mẫu Khổ sâm theo phổ LC - Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 MS (xem phụ lục) Sau xử lý số liệu thu kết phân tích hàm lượng Crotonkin -1 Crotonkin -2 theo thời điểm năm (bảng 3.6) theo vùng nguyên liệu (bảng 3.7) Đánh giá số liệu bảng quan sát thấy hàm lượng Crotonkin chủ yếu Khổ sâm có biến động rõ rệt: Hàm lượng Crotonkin tăng dần từ mùa xuân hè đạt mức cao vào mùa thu hàng năm Hàm lượng Crotonkin -1 mùa xuân hè cao Crotonkin -2 từ 1, 74 đến 1, 34 lần l á, từ 1, 29 đến 1, 03 lần cành, sang mùa thu chênh lệch khơng đáng kể Những số liệu phân tích ban đầu cho thấy: khổ sâm thu vùng trung du (Bắc Giang, Phú Thọ, Ninh Bình) có hàm lượng ent -kauran ln cao trồng Sóc Sơn - Hà Nội Từ kết nghiên cứu sơ biến động hàm lượng hoạt chất Khổ sâm có sở để nói rằng: nguyên liệu tốt để chiết xuất Crotonkin -1 Crotonkin -2 dùng Khổ sâm vùng trung du thu hái vào mùa thu năm Đã xây dựng phép định lượng đồng thời hàm lượng Crotonkin-1 vµ Crotonkin-2 hỗn hợp Xác định đ-ợc thời điểm thu nguyên liệu ®Ĩ chiÕt xt ho¹t chÊt chÝnh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 52 KẾT LUẬN Đã xác định điều kiện thích hợp phương pháp LC /MS để phân tích số ent -kauran ditecpen làm sở cho việc định lượng đồng thời ditecpen toàn phần có hỗn hợp nghiên cứu Đã xây dựng phương pháp định lượng Crotonkin -1, Crotonkin-2, Crotonkin-3 đáp ứng yêu cầu nhanh, nhậy, chọn lọc cho phép định lượng đồng thời hàm lượng Crotonkin -1 Crotonkin -2 hỗn hợp Áp dụng phương pháp LC /MS để phân tích 18 mẫu ngun liệu có chứa ent -kauran ditecpen Crotonkin -1 Crotonkin -2 Các số liệu phân tích thành phần Crotokin -1 Crotonkin -2 thu số thời điểm khác cho biết nguyên liệu tốt để chiết xuất dùng nguyên liệu thu hái vào mùa thu hàng năm Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH Đà CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Pham Thi Hong Minh a, Nguyen Quyet Tien a , Nguyen Ngoc Tuana, Pham Hoang Ngoc a, Ngo Van Quanga, Nguyen Xuan Hoangb “Quantitative Determination of two diterpenoids in Croton tonkinensis Gagnep., by High Performance Liquid Chromatography Coupled with Diode Array Detector and Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry” International scientific conference on “Chemistry for development and intergration” 30th Anniversary of the Institute of Chemistry Vietnam Academy of Science and Technology Setember 12-14, 2008 Hanoi, Vietnam Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc VN trang 622-623, Nhà xuất Y học TP Hồ Chí Minh Phạm Hồng Hộ (1991), "Cây cỏ Việt Nam", Mekong Printing Đỗ Tất Lợi (1999), "Những thuốc vị thuốc Việt Nam", (in lần thứ 8), trang 907-908, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Thị Hồng Minh “Về thành phần hoá học hoạt chất Khổ sâm cho (Croton tonkinensis Gagnep.,) họ Euphorbiaceae“ Luận án tiến sĩ hoá học, Hà Nội 12/2003 Phạm Thị Hồng Minh, Phạm Hoàng Ngọc (2002), "Phân lập nhận dạng triterpen acetat Croton tonkinensis", Tạp chí Dược học, 2002, 12, 8-9 Phạm Thị Hồng Minh, Phạm Hồng Ngọc, Trần Quang Hưng, Chu Đình Kính (2003), "Phát berbin alcaloit khổ sâm cho (Croton tonkinensis", Tạp chí Phân tích lý, hố, sinh, 2004, (1), 38-41 Phạm Thị Hồng Minh, Lưu Thị Huế, Phạm Hồng Ngọc, Phạm Hữu Điển (2006), “Góp phần nghiên cứu thành phần ancaloit Khổ sâm cho (Croton tonkinensis) Tây Thiên -Tam Đảo ” Tạp chí khoa học Trường ĐHSP Hà Nội, KHTN 2006, trang 110-114 Phạm Thị Hồng Minh, Phạm Hồng Ngọc, Chu Đình Kính (2004), "Phân lập nhận dạng số flavonoit -C-glucosid từ khổ sâm cho (C tonkinensis) có Việt nam" Tạp chí Hố học , 2004, 42 (2), 187-190 Phạm Thị Hồng Minh, Nguyễn Thị Lan, Phạm Hữu Điển, Nguyễn Quyết Tiến, Phạm Hoàng Ngọc (2007), “Nghiên cứu thành phần ancaloit Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 55 Khổ sâm cho (Croton tonkinensis) thu hái Ninh Bình” Hội Nghị Hố học Hữu Toàn quốc10 /2007, 10 Phạm Thị Hồng Minh, Phạm Hoàng Ngọc, Đái Duy Ban, Lê Kim Xuyến, Hoàng Thị Minh Châu, Lê Trung Dũng, Phan Xuân Độc, Nguyễn Văn Vũ "Kết nghiên cứu khả tăng cường miễn dịch chế phẩm khổ sâm Croton tonkinensis Gagnep.," Tạp chí Y học Việt Nam, 2007, 333, 24-28 11 Chu Van Man (2003) “Informatic applications in biology” Tr 195201 National University of Hanoi Press 2003 12 Trương Văn Như Nghiên cứu Khổ sâm cho (Croton tonkinensis) đánh giá tác dụng ký sinh trùng sốt rét phương pháp thực nghiệm Luận văn PTS khoa học y dược Hà nội 1992 13 Nguyễn Nghĩa Thìn (1995), "Họ thầu dầu (Euphorbiaceae Juss hệ thực vật Việt Nam", Tạp chí Sinh học, 17(4), 7-30 14 Phan Tống Sơn, Văn Ngọc Hướng, Phan Minh Giang, Taylor W C (1999), "Đóng góp vào việc nghiên cứu hoạt chất sinh học từ câyKhổ sâm cho Croton tonkinensis Gagnep., Euphorbiaceae" Tạp chí Hố học, 27(4), tr 1-2 15 Pham Thi Hong Minh, Pham Hoang Ngoc, Đang Ngoc Quang, Hashimoto T., Takaoka S., Asakawa Y (2003), "A novel ent-1 -acetoxy7 ,14 -dihydroxy-16-kauren-15-on from the Croton tonkinensis", Chem Pharm Bull.51(5), 590-591 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 56 16 Phạm Thị Hồng Minh, Phạm Hoàng Ngọc (2003), "ent-(16S)-7 -hydroxy18-acetoxy kauran-15-on - kauran diterpen mới, phân lập từ khổ sâm cho Croton tonkinensis", Tạp chí Hố học, 41(2), 104-109 17 Perry N B., Burgess E J., Back S H., Weavers R T., Geis W., Manger A B., (1999) "11-Oxygenated cytotoxic 8,9-secokauranes from a New Zealand liverwort, Lepidolarena tayloric " Phytochemistry, 50 (9), 423-433 18 Phan Minh Giang, Hui Zi Lin, Phan Tong Son, Jeong Hyuny Lee, Yuong Soo Hong and Jung Joon Lee (2003) Ent-kauran diterpenoids from Croton tonkinensis inhibit LPS-inđuce NF -kB activation and no production J Nat Prod., 66 (9), 1217-1220 19 Pham Thi Hong Minh, Pham Hoang Ngoc, Nguyen Manh Cuong, Taylor W C, (2004) “A new ent-kauran diterpenoid from Croton tonkinensis Gagnep., leaves.” Fitoterapia, 75 (2), 552-556 20 Phan Minh Giang, Phan Tong Son, Lee, J J., and Otsuka, H., (2004) “entkauran diterpenoids from Croton tonkinensis Gagnep.,” Chem Pharm Bull., 52 (7), 879-882 21 Nagashima F., Kondoh M., Uematsu T., Nishiyama A., Saito S., Sato M., and Asakawa (2002) Chem Pharm Bull 50, 808-813 22 Gonzales A.G., Frega B.M., Hernandez M G., Luis J G., (1973) Phytochemistry, 12, 2721-2723 23 Monte F J G., Dantas E M G., Braz F R., (1988) Phytochemistry, 27, 3209-3212 24 Phan Minh Giang, Hideakii Otsuka, Phan Tong Son (2005) "The minor ent-kauran-16-en-15-on type diterpen from Croton tonkinensis" Journal of Chemistry, 43 (2), 263-264 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 57 25 Addae Mensah I., Achenbach H., Waibil R., and Mwangi J W (1992), "Epoxychiromodine and other constitutents of Croton megalocarpus" Phytochem., 31(6), 2055-2058 26 Barbili F E., Moulis C., Bon M Respand M J., Fouraste I (1998), "Three furanoditerpenes from the bark of Croton campestris” Phytochem., 48(1), 165-169 27 Cai Y., Chen Z P., and Phillipson J D (1993), "Clerodane diterpenoids from Croton lechleri" Phytochem., 34(1), 265-268 28 Chapman & Hall/CRC 1982-2006,From DNP on CD-ROM,Version 15:1 29 Chatterjee A., Banerjee A., and Bohlmann F (1978), "Isocrotocaudin, a new norclerodans-type diterpene from Croton caudatus", Phytochem., 17, 1777-1779 30 Gelpi E., “Contributions of liquid chromatography-mass spectrometry to “highlights” of biomedical research” J Chromatogr A, 1000, p 567-581 (2000) 31 He X G., “On-line identification of phytochemical constituents in botanical extracts by chromatographic-diode combined array high-performance detection-mass liquid spectrometric techniques” J Chromatogr A, 880, p 203-232 (2000) 32 Kapingu M C., Guillaume D., Mbwambo Z H., Moshi M J., Uliso F C., (2000), Mahunnah R L A "Diterpenoids from the roots of Croton macrostachys" Phytochem., 54, 767-770 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 33 Kitazawa E., Two diterpenes alcohols from Croton sublyratus (1981), Phytochem., 20(2), 287-289 34 Krebs H C., Ramiarantsoa H (1996), "Clerodan diterpenes and other constituents of Croton hovarum" Phytochem., 41(2), 561-563 35 LecomteH., “Flore general de L’Indochiene”, 1910-1931 Tom V., p.291 36 Maciel M A M., Pinto A C., Arruda A C., Pamploma S G S R., Vandelinde F A., Lapa A j., Echevarria A., Rao V S N (2000), "Ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology: a successful combination in the study of Croton cajucara" J Ethnopharm., 70, 41-55 37 Maciel M A M., Pinto A C., Brabo S N and Silva M D A (1998), "Terpenoids from Croton cajucara" Phytochem., 49(3), 823-828 38 Martins A.P., Salguerio L.R., Goncalves M.J., Vila R., Tomi F., (2000) Antimicrobial activity and chemical composition of the back oil of Croton stellulifea, an endemic species from S tome & Principe Planta Med., 66(7), 647-650 39 Ngadjui B T., Folefoc G G., Keumedjio F., Dongo E., Sondengam B L., Connolly J D (1999), "Crotonadiol, a labdane diterpenoids from the stem bark of Croton zambesicus" Phytochem., 51, 171-174 40 Nguyen Manh Cuong, Tran Van Sung, Ahn B.Z (2002) Cytotoxic compounds from Croton Cascarilloides Kor J Pharmacogn., 33(3), 207-210 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 59 41 Pelletier S W (1970) Chemistry of the alkaloids Van Nostrand Reihold company Newyork/Toronto/London/Melburn., p 31-82 42 Peres M T L P., Monache F D., Cruz A B., Pizzolati M G., Yunes R A (1997), "Chemical composition and antimicrobial activity of Croton urucurana Baillon (Euphorbiacea) J Ethnopharm., 56, 223-226 43 Piacente S., Belisario M A., Castillo H D., Pizza C., and Feo V D (1998), "Croton ruizianus: Platelet proaggregating activity of two new pregnane glucoside" J Nat Prod., 61, 318-322 44 Roengsumram S., Achayindee S., Petsom A., Vilaivani T (1998), "Two new cembranoids from Croton oblongifolius" J Nat Prod., 61, 652-654 45 Vigor C., Fabre N., Fourasté I and Moulis C (2002), Neoclerodane diterpenoids from Croton eluteria J Nat Prod., 65, 1180-1182 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 PHỤ LỤC Phổ Crotonkin -1 1.1 Phổ IR 1.2 Phổ MS 1.3 Phổ 1H-NMR 1.4 Phổ 3C-NMR DEPT Phổ Crotonkin -2 2.1 Phổ IR 2.2 Phổ 1H-NMR 2.3 Phổ 3C-NMR 2.4 Phổ DEPT Phổ Crotonkin -3 3.1 Phổ IR 3.2 Phổ MS 10 3.3 Phổ 1H-NMR 11 3.4 Phổ 3C-NMR 12 Phổ Crotonkin -5 13 4.1 Phổ 1H-NMR 13 4.2 Phổ 3C-NMR 14 4.3 Phổ DEPT 15 Các số liệu phân tích phổ LC /MS đường chuẩn Crotonkin -1 16 Các số liệu phân tích phổ LC /MS đường chuẩn Crotonkin -2 32 Một số đại diện phổ LC /MS mẫu thu Sóc Sơn 48 7.1 Phổ LC /MS mẫu khổ sâm thu 5/2007 48 7.2 Phổ LC /MS mẫu cành khổ sâm thu 5/2007 50 7.3 Phổ LC /MS mẫu khổ sâm thu 4/2007 52 7.4 Phổ LC /MS mẫu cành khổ sâm thu 4/2007 54 7.5 Phổ LC /MS khổ sâm thu Ninh Bình vào tháng 5/2007 56 7.6 Phổ LC /MS cành khổ sâm thu Ninh Bình 5/2007 58 Các số liệu phân tích phổ LC /MS đường chuẩn Crotonkin -3 60 Một số đại diện phổ LC /MS mẫu thu Tên Yên-Bắc Giang 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... phú sử dụng rộng rãi dân gian, đề tài: ? ?Theo dõi hàm lƣợng hoạt chất diterpenoit Khổ sâm cho (Croton tonkinensis Gagnep. ,) họ Euphorbiaceae” nội dung luận văn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học... nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng Khổ sâm cho (Croton tonkinensis Gagnep. ,) 1.3.1 Giới thiệu khổ sâm Cây Khổ sâm cho có tên khoa học Croton tonkinensis Gagnep. , họ Thầu dầu (Euphorbiaceae)... Xác định hàm lượng crotonkin cành Khổ sâm theo thời điểm khác Theo dõi biến động hàm lượng Crotonkin -1 Crotonkin -2 cành Khổ sâm trồng Sóc Sơn - Hà Nội cho kết ghi bảng 3.6 Bảng 3.6: Hàm lƣợng