Theo dõi hàmlƣợng hoạt chất diterpenoit trong cây Khổ sâm cho lá (Crotontonkinensis Gagnep.,) họ Euphorbiaceae

1 M U Theo thng kờ s lng cỏc dc phm mi c phộp lu hnh 20 nm va qua ó cho thy, cỏc hp cht thiờn nhiờn ó v c coi l ngun cu trỳc mi to cỏc dc phm mi c bit rừ rng nht l lnh vc thuc chng ung th cú ti 60%, bnh truyn nhim l 70% cú ngun gc t nhiờn í ngha to ln ca nhng hp cht thiờn nhiờn cú hot tớnh sinh hc l ch chỳng khụng ch c s dng trc tip lm thuc cha bnh, m quan trng hn l chỳng cú th l nhng cht mu, cht dn ng phỏt trin cỏc thuc mi hoc l cỏc cht dũ sinh hoỏ lm sỏng t cỏc nguyờn lý ca dc lý hc ngi Cỏc nh khoa hc Vin nghiờn cu ung th Quc gia Hoa K coi kho tng cõy thuc ca Trung Quc l ngun khai thỏc cỏc cht mu, cht dn ng mi nhm khỏm phỏ v phỏt trin cỏc thuc chng ung th v chng HIV tng lai Nhng nm gn õy cú nhiu cõy thuc c truyn ca y hc Trung Quc l i tng nghiờn cu thc nghim v lõm sng iu tr ung th, qua ú ó v ang phỏt hin hng lot cht mi, nhiu cht rt cú trin vng tr thnh nhng cht dn ng Nhiu ent -kauran d itecpenoit th hin hot tớnh khỏng khun, gõy c hi t bo, chng u v anti -HIV ó cú nhn xột rng, hot cht mt s cõy thuc cú tớnh khỏng khun, chng viờm, chng ung th, h huyt ỏp, li tiu v thng cú mt cỏc ent -kauran ditecpenoit Cõy Kh sõm cho lỏ thuc loi cõy thuc dõn gian Vit Nam Cõy mc hoang di nhiu ni trờn Bc Vit Nam, nhng cng c trng nhiu cỏc trm xỏ ụng y, y t xó v nh dõn, nht l vựng ng bng sụng Hng, vỡ c coi nh ngun thuc ti ch cha cỏc bnh viờm nhim, S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc -tnu.e du.v n bnh ng rut cho ngi v gia sỳc Nhõn dõn dựng lỏ ti nhai sng, vũ hoc gió nỏt vt ly nc ung cha bnh au bng i ngoi, cha cỏc vt thng nhim trựng, cha viờm loột hnh tỏ trng, au d dy, tr st rột Nhng kt qu nghiờn cu v thnh phn hoỏ hc v th hot tớnh sinh hc ca lỏ cõy Kh sõm ó khng nh tớnh khỏng khun mnh c quyt nh bi cỏc ent -kauran d itecpen, ng thi ó phỏt hin tớnh gõy c hi rt mnh i vi mt s dũng t bo ung th ngi v ch phm t cõy Kh sõm cũn cú hot tớnh chng suy gim dch g b nhim virus (gõy suy gim d ch) Gumboro cng c Chỳng tụ i cho rng cỏc ent -kauran t cõy Kh sõm rt cú trin vng l cht dn ng nhiu hn to cỏc thuc chng viờm, chng ung th v chng suy gim dch cú hiu lc gúp phn tỡm hiu v ỏnh giỏ cht lng ngun nguyờn liu phong phỳ ang c s dng rng rói dõn gian, ti: Theo dừi hm lng hot cht diterpenoit cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis Gagnep.,) h Euphorbiaceae l ni dung chớnh ca lun ny S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc -tnu.e du.v n CHNG TNG QUAN 1.1 Nhng loi cõy thuc chi Croton L., v cụng dng y hc Cỏc thc vt chi Croton L., thuc h Thu du (Euphorbiaceae) cú khong 700 loi [26], gp ph bin cỏc vựng nhit i, ớt gp vựng ụn i v rt him vựng hn i chõu cú khong 50 loi, r iờng ụng dng cú hn 40 loi [35] Vit Nam, theo Phm Hong H chi Croton L cú 18 loi [1], cũn Nguyn Ngha Thỡn [13] ó thng kờ c 41 loi, ú cú ti 21 loi c hu h thc vt nc ta Cú nhiu loi cõy thuc chi Croton L c s dng y hc dõn gian nhiu dõn tc, nht l khu vc Trung v Nam M cng nh ụng Nam Y hc c truyn Brasil v cỏc dõn tc sinh sng vựng Amazon dựng lỏ, v v r cõy C cajucara [36] cha tr nhiu loi bnh nh l st cao, chng viờm nhim, a chy, viờm loột d dy, gim cholestero l mỏu, cha ung th, h huyt ỏp, dit tr c sờn, xua ui cụn trựng [37] Nc sc r cõy C campestris Bras il c dựng cha bnh giang mai, viờm ng mt, thuc s, tr ung th [26] Equao ngi ta dựng v cõy C eluteria cha bnh cao huyt ỏp, kit l, st rột, au d dy v cũn cú tỏc dng bi b sc kho [45] Nhõn dõn cỏc nc vựng Trung v Nam M nh Peru, Equao dựng nha v v cõy C.lechlerii cú tớnh khỏng sinh cha cỏc vt thng, tr ung th [27] Nc sc lỏ cõy C schiedeanus c y hc dõn gian Columb ia cha bnh cao huyt ỏp, cú tỏc dng gión mch [29] R cõy C macrostachys Tanzania c dựng cha bnh tiu S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc -tnu.e du.v n ng [27] Mt s nc vựng ụng Phi (Camrun, Nigeria, S iraleon v.v ) dựng r v v thõn cõy C zambicus lm thuc nhun trng, tr kit l v chng co git [39] Thỏi Lan ngi ta dựng v, r cõy cng nh qu ca cõy C oblongifolius cha bnh ri lon tiờu hoỏ, kit l, loột d dy, tr ung th [44] hoc dựng cõy C sublyratus [33] tr loột hnh tỏ trng nc ta cng cú mt vi loi thuc chi Croton L., c dựng y hc dõn gian Cõy Lptộ (C crassifolium) Tõy Nguyờn c dựng tr bnh ng rut [13], cõy Kh sõm cho lỏ (C tonkinensis) tr st rột, bnh ng rut [2], [12] Bờn cnh nhng cõy c dựng lm thuc y hc dõn gian, ngi ta cng bit mt s cõy thuc chi Croton L., cú cha c t chõu Phi cú nhiu Croton spp thuc loi cõy c, c th dõn s dng ỏnh bt cỏ, tm tờn c sn bn nh v cõy C hovarum Madagasca l mt thớ d [34] Vit Nam cú núi n cõy Ba u (C tiglium) [3] l cõy c, dựng lm thuc tr sõu tho mc 1.2 Nhng nghiờn cu hoỏ thc vt v chi Croton L., Cho n cú khong trờn 50 loi thc vt chi Croton L., c nghiờn cu hoỏ thc vt [28], ó phõn lp v nhn dng c 271 cht, ch yu gm cỏc ditecpenoit v ancaloit 1.2.1 Cỏc ancaloit Cỏc ancaloit tỡm thy thc vt chi Croton L., u cú cha d vũng c bn l isoquinolin [41], to cỏc b khung proaporphin (1), aporphin (2), morphinandienon (3) v rt gn õy l berbin (tetrahydroprotoberberin) (4) S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc -tnu.e du.v n 1.2.1.1 Ancaloit khung proaporphin (1) NH 13 10 11 6a H 12 O (1) Cỏc ancaloit kiu khung proaporphin (1) khỏc bi cỏc nhúm th cỏc v trớ 1, 2, v cu hỡnh ca hydro v trớ 6a 1.2.1.2 Ancaloit khung aporphin (2) Cỏc ancaloit khung aporphin (2) thng khỏc bit bi nhúm th cỏc v trớ 1, 2, 6, 9, 10, 11 v cu hỡnh hydro v trớ 6a N6 6a H 11 10 (2) 1.2.1.3 Ancaloit khung morphinandienon 12 13 C 10 B 14 15 D N 17 16 O (3) S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc -tnu.e du.v n Cỏc ancaloit khung morphinand ienon (3) khỏc bit bi cỏc nhúm th v trớ 2, 3, 4, 6, 8, 17 v cu hỡnh ca vũng D 1.2.1.4 Ancaloit khung berbin (tetrahydroprotoberberin) (4) R2 R1 N 14 H R3 13 R4 10 12 R5 R6 (4) Cỏc berbin (4) hay tetrahydroprotoberberin ancalo it l nhng ancalo it mi phỏt hin rt gn õy hai loi thc vt chi Croton L., cỏc ancaloit ny khỏc bi cỏc nhúm th gn vo cỏc v trớ 2, 3, 8, 10, 11 v cu hỡnh ca proton v trớ C14 1.2.2 Cỏc hp cht ditecpenoit Cỏc ditecpenoit chim ti 114/271 kiu hp cht ó phõn lp v nhn dng c t cỏc loi thuc chi Croton [28] Cỏch gi tờn v cu trỳc hoỏ hc ca chỳng rt a dng, t loi khung khụng vũng cho n khung a vũng giỏp Kiu khụng vũng nh phytan (5) (2,6,10,14-tetrametylhexadecan), loi mt vũng ln nh cembran (6) (18,19,20-trimetyl-1-isopropylcyclotridecan) Kiu hai vũng giỏp nh labdan (7), clerodan (8) Ba vũng giỏp nh pimaran (9), kauran (10), beyeran (11) Kiu vũng giỏp nh atisan (12), sarcopetelan (13), phorbol (14) Nm vũng nh trachyloban (15) 1.2.2.1 Ditecpen khụng vũng Phytan thuc loi d itecpen khụng vũng, cú cu trỳc hoỏ hc 2,6,10,14- tetrametylhexadecan (5) (5) Cỏc ditecpen loi ny khỏc bi s lng, v trớ v cu hỡnh cỏc nhúm hydroxy, xeton v olefin 1.2.2.2 Ditecpen vũng ln Cembran (6) Cembran thuc loi d itecpenoit mt vũng ln chung cú cu trỳc hoỏ hc 4,8,12-trimetyl-1-isopropyl-cyclotridecan khỏc b i s lng, v trớ v cu hỡnh ca liờn kt olefin 18 19 17 15 10 13 11 16 14 12 20 (6) 1.2.2.3 Ditecpen vũng 1.2.2.3.1 Khung labdan (7) 12 20 13 11 15 16 17 10 19 14 18 (7) 1.2.2.3.2 Clerodan ditecpen (furanoditecpen) Cỏc hp cht ditecpen khung clerodan gp rt ph bin thiờn nhiờn, ch riờng chi Croton L n ó phõn lp c 42 s 114 ditecpenoit t nhng thc vt ny v trớ 15, 16 ca hu ht cỏc clerodan ditecpen úng vũng epoxy hỡnh thnh vũng furan, nờn cỏc ditecpenoit loi ny cũn c gi l furanoditecpen 12 11 10 20 13 14 15 16 17 19 18 (8) 1.2.2.4 Ditecpen cú vũng dớnh kt (pimaran) Cỏc loi thuc chi Croton L c nghiờn cu, mi ch thy kiu khung pimaran (9) 12 17 15 20 18 10 19 11 13 16 14 (9) 1.2.2.5 Ditecpen vũng dớnh kt Thng gp cỏc kiu khung kauran (10), beyeran (11), atisan (12), sarcopetelan (13) v phorbol (14) ditecpen 1.2.2.5.1 Kauran ditecpen 12 13 11 20 17 10 HOOC 16 14 O 15 O 18 19 (10) (10.13) 8,15-seco-kauran 1.2.2.5.2 Cỏc ditecpen kiu khung beyeran (11), atisan (12) v sarcopetelan (13) Cỏc kiu cu trỳc (11) v (12) thng gp nhiu h thc vt, nhng ch rt gn õy mi phỏt hin thy cõy Croton sarcopetalus v cng ng thi khỏm phỏ kiu khung sarcopetelan ditecpen (13) iu ỏng chỳ ý l r cõy ny cũn tỡm thy cỏc dn xut ca clerodan (8) v pimaran (9) ditecpen 12 12 11 10 16 10 15 15 18 19 19 (11) (12) O 18 20 10 19 11 12 16 O 13 14 15 17 (13) 13 18 17 20 14 16 11 13 20 17 14 1.2.2.5.3 Phorbol ditecpen R1O 18 19 O 16 10 17 15 14 OR2 12 13 11 OH 20 CH2OR3 HO (14) Cỏc phorbol ditecpen cú cu trỳc hoỏ hc 4,9 ,12 ,13 ,20pentahydroxy-1,6-tigliadien-3-one, chỳng ch khỏc v cu hỡnh ca nhúm hydroxyl v trớ v cỏc nhúm chc khỏc, cho n mi ch gp nht mt cu hỡnh ca phorbol, cũn hu ht l cu hỡnh 1.2.2.6 Ditecpen vũng dớnh kt (trachyloban) Cỏc dn xut ca trachyloban thuc loi vũng dớnh kt 12 11 18 20 10 19 13 14 17 16 15 (15) 1.2.3 Cỏc hp cht khỏc Thng gp mt s hp cht tritecpenoit nh l -acetoxy-14taraxeren-28-oic acid (16.a) [32, 34, 36, 41], -O-axetoaxetyl-20(29)-lupeol (16.b) [28] Cỏc hp cht steroit (17) glucosid nh l , 14 ,15 ,16 - tetrahydroxypregnan-20-one glucosid (17.1) v (17.2) cõy C ruizianus [43] 49 ca mi cht s tớnh c kh i lng ca cht ú 1mg cn chit (m) v hm lng (%)ca Crotonkin nguyờn liu tớnh theo cụng thcc: % crotonkin = yCT - b a x m M x 100 (3.1) Trong ú yCT : din tớch tớch phõn trờn ph LC -MS ng vi Rt ca Crotonkin a, b: Cỏc h s phng trỡnh tng quan ca crotonkin Crotonkin-1 cú a = 7109,85, b = 126,87 Crotonkin-2 cú a = 6657,28, b = 15,48 m: cn chit giu ent -kauran thu c t lng M M: kh i lng nguyờn liu em phõn tớch Vớ d cỏch tớnh: 200g (M) lỏ khụ nghin nh thu h i thỏng 5/2007 Súc Sn - H N i c ngõm chit kit, lm giu ent -kauran thu c 23, 4g cn thụ Cõn chớnh xỏc 1mg cn chit v a phõn tớch trờn mỏy LC -MS thu c sc ký ký hiu M107 Trờn sc ký M107 cho bit d in tớch tớch phõn LC -MS tng ng vi Rt ca Crotonkin nh sau: yCT Rt Crotonkin-1 388,463 23,96 Crotonkin-2 196,815 21,60 Thay bng s vo cụng thc (3.1) ta cú: % crotonkin-1 = % crotonkin-2 = 388,463-126,87 7109,86 196,815-15,48 6657,28 x x 23,4 200 23,4 200 x 100 = 0,43 x 100 = 0,32 50 3.3.4.1 Xỏc nh hm lng ca crotonkin lỏ v cnh Kh sõm theo cỏc thi im khỏc Theo dừi s bin ng hm lng cỏc Crotonkin -1 v Crotonkin -2 cnh v lỏ cõy Kh sõm trng Súc Sn - H Ni cho kt qu ghi bng 3.6 B ng : Hm lng Crotonkin ch yu ca lỏ v cnh Kh sõm thu Súc Sn - H Ni theo mt s thi im nm STT Thi gian ly mu 4/2007 5/2007 11/2007 B phn Hm lng (%) Crotonkin-1 Crotonkin-2 0,335 0,062 0,430 0,360 0,520 0,530 0,192 0,048 0,320 0,350 0,560 0,530 Lỏ Cnh Lỏ Cnh Lỏ Cnh 3.3.4.2 Xỏc nh hm lng ca Crotonkin ch yu ca lỏ Kh sõm cỏc vựng sinh trng khỏc B ng : Hm lng mt s ent -kauran ch yu ca lỏ Kh sõm thu mt s vựng khỏc B phn Thi gian Hm lng (%) Hm lng (%) a im cõy Crotonkin-1 Crotonkin-2 thu mu Lỏ Súc Sn 5/2007 0,43 0,32 Lỏ Ninh Bỡnh 5/2006 0,74 0,50 Lỏ Phỳ Th 0,73 0,78 9/2007 Lỏ Ninh Bỡnh 0,80 0,70 Lỏ Súc Sn 0,52 0,56 11/2007 Lỏ Hng Yờn 0,75 0,50 T cn chit giu ent -kauran ca cỏc mu Kh sõm theo cỏc ph LC - 51 MS (xem ph lc) Sau x lý s liu ó thu kt qu phõn tớch hm lng Crotonkin -1 v Crotonkin -2 theo cỏc thi im nm (bng 3.6) v theo vựng nguyờn liu (bng 3.7) ỏnh giỏ cỏc s liu bng ny ó quan sỏt thy hm lng cỏc Crotonkin ch yu ca cõy Kh sõm cú s bin ng rừ rt: Hm lng ca cỏc Crotonkin cõy tng dn t xuõn hố v t mc cao nht vo thu hng nm Hm lng Crotonkin -1 xuõn hố luụn cao hn Crotonkin -2 t 1, 74 n 1, 34 ln l ỏ, v t 1, 29 n 1, 03 ln cnh, nhng sang thu thỡ chờnh lch khụng ỏng k Nhng s liu phõn tớch ban u cho thy: lỏ cõy kh sõm thu cỏc vựng trung du (Bc Giang, Phỳ Th, Ninh Bỡnh) cú hm lng ent -kauran luụn cao hn nhng cõy trng Súc Sn - H Ni T nhng kt qu nghiờn cu s b v s bin ng hm lng hot cht ca cõy Kh sõm ó cú c s núi rng: nguyờn liu tt nht chit xut Crotonkin -1 v Crotonkin -2 l dựng lỏ cõy Kh sõm vựng trung du thu hỏi vo thu hng nm ó xõy dng c phộp nh lng ng thi hm lng Crotonkin1 Crotonkin-2 hỗn hợp Xác định đợc thời điểm thu nguyên liệu để chiết xuất hoạt chất 52 KT LUN ó xỏc nh c cỏc iu kin thớch hp i vi phng phỏp LC /MS phõn tớch mt s ent -kauran ditecpen chớnh lm c s cho vic nh lng ng thi cỏc ditecpen ton phn cú hn hp nghiờn cu ó xõy dng phng phỏp nh lng Crotonkin -1, Crotonkin-2, Crotonkin-3 ỏp ng cỏc yờu cu nhanh, nhy, chn lc v cho phộp nh lng ng thi hm lng Crotonkin -1 v Crotonkin -2 hn hp p dng phng phỏp LC /MS phõn tớch 18 mu nguyờn liu cú cha ent -kauran ditecpen chớnh l Crotonkin -1 v Crotonkin -2 Cỏc s liu phõn tớch thnh phn Crotokin -1 v Crotonkin -2 thu c mt s thi im khỏc cho bit nguyờn liu tt nht chit xut l dựng nguyờn liu thu hỏi vo thu hng nm 53 DANH MC CC CễNG TRèNH CễNG B LIấN QUAN N LUN VN a a Pham Thi Hong Minh , Nguyen Quyet Tien , Nguyen Ngoc a a a Tuan , Pham Hoang Ngoc , Ngo Van Quang , Nguyen Xuan b Hoang Quantitative Determination of two diterpeno ids in Croton tonkinensis Gagnep., by High Performance Liquid Chromatography Coupled with Diode Array Detector and Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry International scientific conference on Chemistry for development th and intergration 30 Anniversary of the Institute of Chemistry Vietnam Academy of Science and Technology Setember 12-14, 2008 Hano i, Vietnam 54 TI LIU THAM KHO Vừ Vn Chi (1997), T in cõy thuc VN trang 622-623, Nh xut bn Y hc TP H Chớ Minh Phm Hong H (1991), "Cõy c Vit Nam", Mekong Printing Tt Li (1999), "Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam", (in ln th 8), trang 907-908, Nh xut bn Y hc, H Ni Phm Th Hng Minh V thnh phn hoỏ hc v cỏc hot c ht ca cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis Gagnep.,) h Euphorbiaceae Lun ỏn tin s hoỏ hc, H Ni 12/2003 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc (2002), "Phõn lp v nhn dng cỏc triterpen acetat cõy Croton tonkinensis", Tp Dc hc, 2002, 12, 8-9 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc, Trn Quang Hng, Chu ỡnh Kớnh (2003), "Phỏt hin cỏc berbin alcaloit cõy kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis", Tp Phõn tớch lý, hoỏ, sinh, 2004, (1), 38-41 Phm Th Hng Minh, Lu Th Hu, Phm Hong Ngc, Phm Hu in (2006), Gúp phn nghiờn cu thnh phn ancalo it cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis) Tõy Thiờn -Tam o Tp khoa hc Trng HSP H Ni, cỏc KHTN 2006, trang 110-114 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc, Chu ỡnh Kớnh (2004), "Phõn lp v nhn dng mt s flavonoit -C-glucosid t cõy kh sõm cho lỏ (C tonkinensis) cú Vit nam" Tp Hoỏ hc , 2004, 42 (2), 187-190 Phm Th Hng Minh, Nguyn Th Lan, Phm Hu in, Nguyn Quyt Tin, Phm Hong Ngc (2007), Nghiờn cu thnh phn ancaloit 55 cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis) thu hỏi Ninh Bỡnh Hi Ngh Hoỏ hc Hu c Ton quc10 /2007, 10 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc, ỏi Duy Ban, Lờ Kim Xuyn, Hong Th Minh Chõu, Lờ Trung Dng, Phan Xuõn c, Nguyn Vn V "Kt qu nghiờn cu kh nng tng cng dch ca cỏc ch phm kh sõm Croton tonkinensis Gagnep.," Tp Y hc Vit Nam, 2007, 333, 24-28 11 Chu Van Man (2003) Informatic applications in biology Tr 195201 National Univers ity of Hanoi Press 2003 12 Trng Vn Nh Nghiờn cu cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis) v ỏnh giỏ tỏc dng trờn ký sinh trựng st rột bng phng phỏp thc nghim Lun PTS khoa hc y dc H ni 1992 13 Nguyn Ngha Thỡn (1995), "H thu du (Euphorbiaceae Juss h thc vt Vit Nam", Tp Sinh hc, 17(4), 7-30 14 Phan Tng Sn, Vn Ngc Hng, Phan Minh G iang, Taylor W C (1999), "úng gúp vo vic nghiờn cu hot cht sinh hc t cõyKh sõm cho lỏ Croton tonkinensis Gagnep., Euphorbiaceae" Tp Hoỏ hc, 27(4), tr 1-2 15 Pham Thi Hong Minh, Pham Hoang Ngoc, ang Ngoc Quang, Hashimoto T., Takaoka S., Asakawa Y (2003), "A novel ent-1 -acetoxy7 ,14 -dihydroxy-16-kauren-15-on from the Croton tonkinensis", Chem Pharm Bull.51(5), 590-591 56 16 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc (2003), "ent-(16S)-7 -hydroxy18-acetoxy kauran-15-on - mt kauran d iterpen mi, phõn lp t cõy kh sõm cho lỏ Croton tonkinensis", Tp Hoỏ hc, 41(2), 104-109 17 Perry N B., Burgess E J., Back S H., Weavers R T., Geis W., Manger A B., (1999) "11-Oxygenated cytotoxic 8,9-secokauranes from a New Zealand liverwort, Lepidolarena tayloric " Phytochemistry, 50 (9), 423-433 18 Phan Minh Giang, Hui Zi Lin, Phan Tong Son, Jeong Hyuny Lee, Yuong Soo Hong and Jung Joon Lee (2003) Ent-kauran d iterpeno ids from Croton tonkinensis inhib it LPS-inuce NF -kB activation and no production J Nat Prod., 66 (9), 1217-1220 19 Pham Thi Hong Minh, Pham Hoang Ngoc, Nguyen Manh Cuong, Taylor W C, (2004) A new ent-kauran d iterpenoid from Croton tonkinensis Gagnep., leaves. Fitoterapia, 75 (2), 552-556 20 Phan Minh Giang, Phan Tong Son, Lee, J J., and Otsuka, H., (2004) ent- kauran diterpenoids from Croton tonkinensis Gagnep., Chem Pharm Bull., 52 (7), 879-882 21 Nagashima F., Kondoh M., Uematsu T., Nishiyama A., Saito S., Sato M., and Asakawa (2002) Chem Pharm Bull 50, 808-813 22 Gonzales A.G., Frega B.M., Hernandez M G., Luis J G., (1973) Phytochemistry, 12, 2721-2723 23 Monte F J G., Dantas E M G., Braz F R., (1988) Phytochemistry, 27, 3209-3212 24 Phan Minh G iang, Hideakii Otsuka, Phan Tong Son (2005) "The minor ent-kauran-16-en-15-on type diterpen from Croton tonkinensis" 57 Journal of Chemistry, 43 (2), 263-264 58 25 Addae Mensah I., Achenbach H., Waib il R., and Mwangi J W (1992), "Epoxychiromodine and of other constitutents Croton megalocarpus" Phytochem., 31(6), 2055-2058 26 Barb ili F E., Moulis C., Bon M Respand M J., Fouraste I (1998), "Three furanoditerpenes from the bark of Croton campestris Phytochem., 48(1), 165-169 27 Cai Y., Chen Z P., and Phillipson J D (1993), "Clerodane d iterpeno ids from Croton lechleri" Phytochem., 34(1), 265-268 28 Chapman & Hall/CRC 1982-2006,From DNP on CD-ROM,Vers ion 15:1 29 Chatterjee A., Banerjee A., and Bohlmann F (1978), "Isocrotocaudin, a new norclerodans-type diterpene from Croton caudatus", Phytochem., 17, 1777-1779 30 Gelp i E., Contributions of liquid chromatography-mass spectrometry to highlights of biomedical research J Chromatogr A, 1000, p 567-581 (2000) 31 He X G., On-line identification of phytochemical constituents in botanical extracts chromatographic-diode by combined array high-performance detection-mass liquid spectrometric techniques J Chrom atogr A, 880, p 203-232 (2000) 32 Kapingu M C., Guillaume D., Mbwambo Z H., Moshi M J., Uliso F C., (2000), Mahunnah R L A "Diterpenoids from the roots of 59 Croton macrostachys" Phytochem., 54, 767-770 58 33 Kitazawa E., Two diterpenes alcohols from Croton sublyratus (1981), Phytochem., 20(2), 287-289 34 Krebs H C., Ramiarantsoa H (1996), "Clerodan diterpenes and other constituents of Croton hovarum" Phytochem., 41(2), 561-563 35 LecomteH., Flore general de LIndochiene, 1910 -1931 Tom V., p.291 36 Maciel M A M., Pinto A C., Arruda A C., Pamploma S G S R., Vandelinde F A., Lapa A j., Echevarria A., Rao V S N (2000), "Ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology: a successful combination in the study of Croton cajucara" J Ethnopharm., 70, 41-55 37 Maciel M A M., Pinto A C., Brabo S N and Silva M D A (1998), "Terpenoids from Croton cajucara" Phytochem., 49(3), 823-828 38 Martins A.P., Salguerio L.R., Goncalves M.J., Vila R., Tomi F., (2000) Antimicrobial activity and chemical composition of the back oil of Croton stellulifea, an endemic species from S tome & Principe Planta Med., 66(7), 647-650 39 Ngad jui B T., Folefoc G G., Keumedjio F., Dongo E., Sondengam B L., Connolly J D (1999), "Crotonadiol, a labdane d iterpeno ids from the stem bark of Croton zambesicus" Phytochem., 51, 171-174 40 Nguyen Manh Cuong, Tran Van Sung, Ahn B.Z (2002) Cytotoxic compounds from Croton Cascarilloides Kor J Pharmacogn., 33(3), 207-210 59 41 Pelletier S W (1970) Chemistry of the alkalo ids Van Nostrand Reiho ld company Newyork/Toronto/London/Melburn., p 31-82 42 Peres M T L P., Monache F D., Cruz A B., Pizzolati M G., Yunes R A (1997), "Chemical composition and antimicrobial activity of Croton urucurana Baillon (Euphorbiacea) J Ethnopharm., 56, 223-226 43 Piacente S., Belisario M A., Castillo H D., Pizza C., and Feo V D (1998), "Croton ruizianus: P latelet proaggregating activity of two new pregnane glucoside" J Nat Prod., 61, 318-322 44 Roengsumram S., Achayindee S., Petsom A., Vilaivani T (1998), "Two new cembrano ids from Croton oblongifolius" J Nat Prod., 61, 652-654 45 Vigor C., Fabre N., Fourastộ I and Moulis C (2002), Neoclerodane diterpeno ids from Croton eluteria J Nat Prod., 65, 1180-1182 60 PH LC Ph ca Crotonkin -1 1.1 Ph IR 1.2 Ph MS 1.3 Ph H-NMR 3 1.4 Ph C-NMR v DEPT Ph ca Crotonkin -2 2.1 Ph IR 2.2 Ph H-NMR 2.3 Ph C-NMR 2.4 Ph DEPT Ph ca Crotonkin -3 3.1 Ph IR 3.2 Ph MS 10 3.3 Ph H-NMR 11 3.4 Ph C-NMR 12 Ph ca Crotonkin -5 13 4.1 Ph H-NMR 13 4.2 Ph C-NMR 14 4.3 Ph DEPT 15 Cỏc s liu phõn tớch ph LC /MS v ng chun ca Crotonkin -1 16 Cỏc s liu phõn tớch ph LC /MS v ng chun ca Crotonkin -2 32 Mt s i din ph LC /MS ca mu thu ti Súc Sn 48 7.1 Ph LC /MS ca mu lỏ kh sõm thu 5/2007 48 7.2 Ph LC /MS ca mu cnh kh sõm thu 5/2007 50 7.3 Ph LC /MS ca mu lỏ kh sõm thu 4/2007 52 7.4 Ph LC /MS ca mu cnh kh sõm thu 4/2007 54 7.5 Ph LC /MS ca lỏ kh sõm thu ti Ninh Bỡnh vo thỏng 5/2007 56 7.6 Ph LC /MS ca cnh kh sõm thu ti Ninh Bỡnh 5/2007 58 Cỏc s liu phõn tớch ph LC /MS v ng chun ca Crotonkin -3 60 61 Mt s i din ph LC /MS ca mu thu ti Tờn Yờn-Bc Giang 72 [...]... nhóm chất điển hình nêu trên, trong các thực vật chi Croton rất thường gặp taspin (18), nhưng chỉ xuất hiện ở nhựa cây tiết ra tại nơi b ị thương tổn do yếu tố ngoại lai [38], Julocrotine (19) là những ancalo it khá đặc biệt và gây độc tế bào [40] 1.3 Những nghiên cứu về thành phần hoá học và tác dụng của cây Khổ sâm cho lá (Croton tonkinensis Gagnep.,) 1.3.1 Giới thiệu cây khổ sâm Cây Khổ sâm cho lá. .. của cây khổ sâm Cây Khổ sâm cho lá mọc hoang dại ở nhiều nơi trên miền Bắc Việt Nam, nên có nhiều tên gọ i khác nhau như là Cổ sâm, Sâm nam, ở vùng Tây Thiên, Tam Đảo, Vĩnh Phúc nhân dân gọi là cây kẻ chỉ Thường gặp nhiều ở các vùng Ninh Bình, Hoà Bình, Vĩnh Phúc, Thái Nguyên, Bắc Giang, Thanh Hoá [6] Hiện nay, cây khổ sâm được trồng nhiều ở các trạm xá đông y, y tế xã và nhà dân Cây này thuộc loại cây. .. cứu về thành phần hoá học cây Khổ sâm Những nghiên cứu hoá học về cây khổ sâm đã cho biết thành phần trong đó rất phong phú và đa dạng bao gồm nhiều nhóm chất khác nhau như: steroit, tritecpenoit, flavonoit, ancaloit, và d itecpenoit [4] 1.3.3.1 Các ditecpenoit Cho đến nay đã biết 13 ent -kauran ditecpen phân lập được từ cây Khổ sâm (Croton tonkinensis) hầu hết chúng là chất mới thuộc dẫn xuất hydroxy... LC /MS trong phân tích các chất Việc sử dụng cây cỏ làm thuốc đóng vai trò quan trọng và có hiệu quả trong sức khỏe cộng đồng Đó là những nguồn gốc thiên nhiên với thành phần hoạt chất rất nhỏ trong cây cỏ thực vật được sử dụng có hiệu quả trong các bệnh viện y học cổ truyền Theo đó để đảm bảo tính ổn định cũng như hiệu quả sử dụng cây cỏ trong việc khám chữa bệnh, cần có hệ thống đánh giá chất lượng... phân lập một số ent - kauran d itecpen của cây Khổ sâm cho lá và theo dõi sự biến đổi hàm lượng ent -kauran d itecpenoit chính ở một số thời gian s inh trưởng của cây trong năm 2.1 Đối tƣợng và phƣơng pháp nghiên cứu 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu Nguyên liệu để nghiên cứu là mẫu cành và lá khô Mẫu cành, lá tươi được thu theo các tháng 1,3,4,5/2008 tại Tân Yên, Bắc... vùng Sóc Sơn, Ninh Bình, Phú Thọ, Hưng Yên Các mẫu nói trên đã được TS Ninh Khắc Bản (Viện Sinh thái và Tài nguyên S inh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam) giám đ ịnh là đồng nhất về mặt thực vật và định danh là Croton tonkinensis Gagnep., họ Euphorbiaceae Ảnh 2.1: Hoa và quả cây Khổ sâm Ảnh 2.2: Lá và quả cây Khổ sâm 26 Mẫu cây tươi lấy về được sấy ngay ở 110 C trong 10 phút để d iệt men, sau... sâm cho lá có tên khoa học là Croton tonkinensis Gagnep., họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) [1, 2], thuộc loại cây nhỏ, cao khoảng 0,72,0m, mọc thành bụi, lá mọc so le, nhìn gần như đối nhau, có khi mọc thành vòng giả có từ 3 đến 6 lá Lá có hình mũi mác, cả 2 mặt đều có lông óng ánh như lá cây nhót ở mặt dưới lá có 3 gân toả ra từ cuống, lá có tuyền hoa nhỏ, trắng, mọc thành chùm ở kẽ lá hay đầu cành Hoa đơn... phận của cây sẽ có 2 loại chiết phẩm được ký hiệu là: F1 và F2 Kết quả thu nhận các dịch chiết từ cây Khổ sâm cho lá ở Tân Yên, Bắc Giang được nêu trong bảng 2.1 và 2.2 B ả ng 2 1 : các Khối lƣợng cặn chiết lá cây C.tonkinensis thu theo thời điểm khác nhau tại Tân Yên - Bắc Giang Thời gian thu hái Bộ phận Khối lượng (g) Khối lượng cặn chiết (g) F1 F2 Tháng 1/08 Lá 240 16.4 12.1 Tháng 3/08 Lá 200 19.7... C.tonkinensis theo các thời điểm khác nhau tại Sóc Sơn -Hà Nội Khối lượng cặn Thời gian thu hái Tháng 4/07 Tháng 5/07 Tháng 11/07 Bộ phận Khối lượng (g) chiết (g) F1 Lá 200 16,1 Cành 200 16,3 Lá 200 23,4 Cành 200 17,1 Lá 200 18,1 Cành 200 15,2 2.4 Phân lập và tinh chế các chất 2.4.1.Các dịch chiết CHCl 3 của cây Khổ sâm thu vào tháng 1/2008 2.4.1.1.Các dịch chiết CHCl 3 của lá cây Khổ sâm (dịch chiết... thử hoạt tính sinh học của cây Khổ sâm đã khẳng định tính kháng khuẩn mạnh được quyết định bởi các ent -kauran d itecpen, đồng thời đã phát hiện tính gây độc hại rất mạnh đối với một số dòng tế bào ung thư người [4] và chế phẩm từ cây 13 Khổ sâm còn có hoạt tính chống suy giảm miễn dịch ở gà b ị nhiễm virus (gây suy giảm miễn dịch) Gumboro cường độc [10] 1.3.3 Những nghiên cứu về thành phần hoá học cây ... dihydroxykaur-16-en15-on ent-1a,14a-diacetoxy- 01/03/2004 20 -hydroxykaur-16-enTên khoa học 37 15-on ent-1a,7 -diacetoxy14a -hydroxykaur-16en-15-on ent-18-axetoxy-14ahydroxykaur-16-en-15on ent-11a -axetoxy7... ent-18a-axetoxy7a,14 dihydroxykaur-16en-15-on C20H30O3 ent-7 ,18dihydroxykaur-16en-15-on C24H34O6 ent-1a,14adiacetoxy-7 hydroxykaur-16-en15-on C24H34O6 ent-1a,7 -diacetoxy14a -hydroxykaur16-en-15-on... ent-16(S )-1 8-axetoxy- 13/02/2003 16,20 -hydroxykaur-15-on 01/3/2004 ent-7 ,14a9/7/1998 17,18 dihydroxykaur-16-en- 28/3/2003 15-on ent-18a-axetoxy28/03/2003 18 7a,14 -dihydroxykaur16-en-15-on ent-7