Theo dõi hàm lƣợng hoạt chất diterpenoit trong cây Khổ sâm cho lá (Croton tonkinensis Gagnep.,) họ Euphorbiaceae

Header Page of 166 M U Theo thng kờ s lng cỏc dc phm mi c phộp lu hnh 20 nm va qua ó cho thy, cỏc hp cht thiờn nhiờn ó v c coi l ngun cu trỳc mi to cỏc dc phm mi c bit rừ rng nht l lnh vc thuc chng ung th cú ti 60%, bnh truyn nhim l 70% cú ngun gc t nhiờn í ngha to ln ca nhng hp cht thiờn nhiờn cú hot tớnh sinh hc l ch chỳng khụng ch c s dng trc tip lm thuc cha bnh, m quan trng hn l chỳng cú th l nhng cht mu, cht dn ng phỏt trin cỏc thuc mi hoc l cỏc cht dũ sinh hoỏ lm sỏng t cỏc nguyờn lý ca dc lý hc ngi Cỏc nh khoa hc Vin nghiờn cu ung th Quc gia Hoa K coi kho tng cõy thuc ca Trung Quc l ngun khai thỏc cỏc cht mu, cht dn ng mi nhm khỏm phỏ v phỏt trin cỏc thuc chng ung th v chng HIV tng lai Nhng nm gn õy cú nhiu cõy thuc c truyn ca y hc Trung Quc l i tng nghiờn cu thc nghim v lõm sng iu tr ung th, qua ú ó v ang phỏt hin hng lot cht mi, nhiu cht rt cú trin vng tr thnh nhng cht dn ng Nhiu ent -kauran ditecpenoit th hin hot tớnh khỏng khun, gõy c hi t bo, chng u v anti -HIV ó cú nhn xột rng, hot cht mt s cõy thuc cú tớnh khỏng khun, chng viờm, chng ung th, h huyt ỏp, li tiu v thng cú mt cỏc ent -kauran ditecpenoit Cõy Kh sõm cho lỏ thuc loi cõy thuc dõn gian Vit Nam Cõy mc hoang di nhiu ni trờn Bc Vit Nam, nhng cng c trng nhiu cỏc trm xỏ ụng y, y t xó v nh dõn, nht l vựng ng bng sụng Hng, vỡ c coi nh ngun thuc ti ch cha cỏc bnh viờm nhim, Footer Page 166 S húa1 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 bnh ng rut cho ngi v gia sỳc Nhõn dõn dựng lỏ ti nhai sng, vũ hoc gió nỏt vt ly nc ung cha bnh au bng i ngoi, cha cỏc vt thng nhim trựng, cha viờm loột hnh tỏ trng, au d dy, tr st rột Nhng kt qu nghiờn cu v thnh phn hoỏ hc v th hot tớnh sinh hc ca lỏ cõy Kh sõm ó khng nh tớnh khỏng khun mnh c quyt nh bi cỏc ent -kauran ditecpen, ng thi ó phỏt hin tớnh gõy c hi rt mnh i vi mt s dũng t bo ung th ngi v ch phm t cõy Kh sõm cũn cú hot tớnh chng suy gim dch g b nhim virus (gõy suy gim dch) Gumboro cng c Chỳng tụi cho rng cỏc ent -kauran t cõy Kh sõm rt cú trin vng l cht dn ng nhiu hn to cỏc thuc chng viờm, chng ung th v chng suy gim dch cú hiu lc gúp phn tỡm hiu v ỏnh giỏ cht lng ngun nguyờn liu phong phỳ ang c s dng rng rói dõn gian, ti: Theo dừi hm lng hot cht diterpenoit cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis Gagnep.,) h Euphorbiaceae l ni dung chớnh ca lun ny Footer Page 166 S húa2 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 CHNG TNG QUAN 1.1 Nhng loi cõy thuc chi Croton L., v cụng dng y hc Cỏc thc vt chi Croton L., thuc h Thu du (Euphorbiaceae) cú khong 700 loi [26], gp ph bin cỏc vựng nhit i, ớt gp vựng ụn i v rt him vựng hn i chõu cú khong 50 loi, riờng ụng dng cú hn 40 loi [35] Vit Nam, theo Phm Hong H chi Croton L cú 18 loi [1], cũn Nguyn Ngha Thỡn [13] ó thng kờ c 41 loi, ú cú ti 21 loi c hu h thc vt nc ta Cú nhiu loi cõy thuc chi Croton L c s dng y hc dõn gian nhiu dõn tc, nht l khu vc Trung v Nam M cng nh ụng Nam Y hc c truyn Brasil v cỏc dõn tc sinh sng vựng Amazon dựng lỏ, v v r cõy C cajucara [36] cha tr nhiu loi bnh nh l st cao, chng viờm nhim, a chy, viờm loột d dy, gim cholesterol mỏu, cha ung th, h huyt ỏp, dit tr c sờn, xua ui cụn trựng [37] Nc sc r cõy C campestris Brasil c dựng cha bnh giang mai, viờm ng mt, thuc s, tr ung th [26] Equao ngi ta dựng v cõy C eluteria cha bnh cao huyt ỏp, kit l, st rột, au d dy v cũn cú tỏc dng bi b sc kho [45] Nhõn dõn cỏc nc vựng Trung v Nam M nh Peru, Equao dựng nha v v cõy C.lechlerii cú tớnh khỏng sinh cha cỏc vt thng, tr ung th [27] Nc sc lỏ cõy C schiedeanus c y hc dõn gian Columbia cha bnh cao huyt ỏp, cú tỏc dng gión mch [29] R cõy C macrostachys Tanzania c dựng cha bnh tiu Footer Page 166 S húa3 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 ng [27] Mt s nc vựng ụng Phi (Camrun, Nigeria, Siraleon v.v ) dựng r v v thõn cõy C zambicus lm thuc nhun trng, tr kit l v chng co git [39] Thỏi Lan ngi ta dựng v, r cõy cng nh qu ca cõy C oblongifolius cha bnh ri lon tiờu hoỏ, kit l, loột d dy, tr ung th [44] hoc dựng cõy C sublyratus [33] tr loột hnh tỏ trng nc ta cng cú mt vi loi thuc chi Croton L., c dựng y hc dõn gian Cõy Lptộ (C crassifolium) Tõy Nguyờn c dựng tr bnh ng rut [13], cõy Kh sõm cho lỏ (C tonkinensis) tr st rột, bnh ng rut [2], [12] Bờn cnh nhng cõy c dựng lm thuc y hc dõn gian, ngi ta cng bit mt s cõy thuc chi Croton L., cú cha c t chõu Phi cú nhiu Croton spp thuc loi cõy c, c th dõn s dng ỏnh bt cỏ, tm tờn c sn bn nh v cõy C hovarum Madagasca l mt thớ d [34] Vit Nam cú núi n cõy Ba u (C tiglium) [3] l cõy c, dựng lm thuc tr sõu tho mc 1.2 Nhng nghiờn cu hoỏ thc vt v chi Croton L., Cho n cú khong trờn 50 loi thc vt chi Croton L., c nghiờn cu hoỏ thc vt [28], ó phõn lp v nhn dng c 271 cht, ch yu gm cỏc ditecpenoit v ancaloit 1.2.1 Cỏc ancaloit Cỏc ancaloit tỡm thy thc vt chi Croton L., u cú cha d vũng c bn l isoquinolin [41], to cỏc b khung proaporphin (1), aporphin (2), morphinandienon (3) v rt gn õy l berbin (tetrahydroprotoberberin) (4) Footer Page 166 S húa4 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 1.2.1.1 Ancaloit khung proaporphin (1) NH 6a H 13 12 10 11 O (1) Cỏc ancaloit kiu khung proaporphin (1) khỏc bi cỏc nhúm th cỏc v trớ 1, 2, v cu hỡnh ca hydro v trớ 6a 1.2.1.2 Ancaloit khung aporphin (2) Cỏc ancaloit khung aporphin (2) thng khỏc bit bi nhúm th cỏc v trớ 1, 2, 6, 9, 10, 11 v cu hỡnh hydro v trớ 6a 6a N6 H 11 10 (2) 1.2.1.3 Ancaloit khung morphinandienon A 11 12 13 C 10 B 14 15 D N 17 16 O (3) Footer Page 166 S húa5 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 Cỏc ancaloit khung morphinandienon (3) khỏc bit bi cỏc nhúm th v trớ 2, 3, 4, 6, 8, 17 v cu hỡnh ca vũng D 1.2.1.4 Ancaloit khung berbin (tetrahydroprotoberberin) (4) R2 R1 N R3 14 H 13 R4 10 12 R5 R6 (4) Cỏc berbin (4) hay tetrahydroprotoberberin ancaloit l nhng ancaloit mi phỏt hin rt gn õy hai loi thc vt chi Croton L., cỏc ancaloit ny khỏc bi cỏc nhúm th gn vo cỏc v trớ 2, 3, 8, 10, 11 v cu hỡnh ca proton v trớ C14 1.2.2 Cỏc hp cht ditecpenoit Cỏc ditecpenoit chim ti 114/271 kiu hp cht ó phõn lp v nhn dng c t cỏc loi thuc chi Croton [28] Cỏch gi tờn v cu trỳc hoỏ hc ca chỳng rt a dng, t loi khung khụng vũng cho n khung a vũng giỏp Kiu khụng vũng nh phytan (5) (2,6,10,14-tetrametylhexadecan), loi mt vũng ln nh cembran (6) (18,19,20-trimetyl-1-isopropylcyclotridecan) Kiu hai vũng giỏp nh labdan (7), clerodan (8) Ba vũng giỏp nh pimaran (9), kauran (10), beyeran (11) Kiu vũng giỏp nh atisan (12), sarcopetelan (13), phorbol (14) Nm vũng nh trachyloban (15) 1.2.2.1 Ditecpen khụng vũng Phytan thuc loi ditecpen khụng vũng, cú cu trỳc hoỏ hc 2,6,10,14tetrametylhexadecan (5) Footer Page 166 S húa6 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 (5) Cỏc ditecpen loi ny khỏc bi s lng, v trớ v cu hỡnh cỏc nhúm hydroxy, xeton v olefin 1.2.2.2 Ditecpen vũng ln Cembran (6) Cembran thuc loi ditecpenoit mt vũng ln chung cú cu trỳc hoỏ hc 4,8,12-trimetyl-1-isopropyl-cyclotridecan khỏc bi s lng, v trớ v cu hỡnh ca liờn kt olefin 18 19 17 15 10 13 16 14 11 12 20 (6) 1.2.2.3 Ditecpen vũng 1.2.2.3.1 Khung labdan (7) 12 14 13 20 11 15 16 17 10 19 18 (7) Footer Page 166 S húa7 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 1.2.2.3.2 Clerodan ditecpen (furanoditecpen) Cỏc hp cht ditecpen khung clerodan gp rt ph bin thiờn nhiờn, ch riờng chi Croton L n ó phõn lp c 42 s 114 ditecpenoit t nhng thc vt ny v trớ 15, 16 ca hu ht cỏc clerodan ditecpen úng vũng epoxy hỡnh thnh vũng furan, nờn cỏc ditecpenoit loi ny cũn c gi l furanoditecpen 12 11 10 17 15 16 20 14 13 19 18 (8) 1.2.2.4 Ditecpen cú vũng dớnh kt (pimaran) Cỏc loi thuc chi Croton L c nghiờn cu, mi ch thy kiu khung pimaran (9) 12 17 15 11 20 10 13 16 14 18 19 (9) 1.2.2.5 Ditecpen vũng dớnh kt Thng gp cỏc kiu khung kauran (10), beyeran (11), atisan (12), sarcopetelan (13) v phorbol (14) ditecpen 1.2.2.5.1 Kauran ditecpen Footer Page 166 S húa8 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 12 13 11 20 17 14 10 HOOC 16 O 15 O 18 19 (10) (10.13) 8,15-seco-kauran 1.2.2.5.2 Cỏc ditecpen kiu khung beyeran (11), atisan (12) v sarcopetelan (13) Cỏc kiu cu trỳc (11) v (12) thng gp nhiu h thc vt, nhng ch rt gn õy mi phỏt hin thy cõy Croton sarcopetalus v cng ng thi khỏm phỏ kiu khung sarcopetelan ditecpen (13) iu ỏng chỳ ý l r cõy ny cũn tỡm thy cỏc dn xut ca clerodan (8) v pimaran (9) ditecpen 12 12 11 17 20 13 20 1 15 13 14 6 18 10 10 15 16 14 17 16 11 18 19 19 (11) (12) O 11 20 10 12 O 16 15 13 14 17 18 19 Footer Page 166 S húa9 biof Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn (13) http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 10 of 166 10 1.2.2.5.3 Phorbol ditecpen R1O 11 18 19 OH O 16 10 17 14 OR2 15 12 13 HO 20 CH2OR3 (14) Cỏc phorbol ditecpen cú cu trỳc hoỏ hc 4,9 ,12 ,13 ,20pentahydroxy-1,6-tigliadien-3-one, chỳng ch khỏc v cu hỡnh ca nhúm hydroxyl v trớ v cỏc nhúm chc khỏc, cho n mi ch gp nht mt cu hỡnh ca phorbol, cũn hu ht l cu hỡnh 1.2.2.6 Ditecpen vũng dớnh kt (trachyloban) Cỏc dn xut ca trachyloban thuc loi vũng dớnh kt 12 11 20 10 13 14 17 16 15 18 19 (15) 1.2.3 Cỏc hp cht khỏc Thng gp mt s hp cht tritecpenoit nh l -acetoxy-14taraxeren-28-oic acid (16.a) [32, 34, 36, 41], -O-axetoaxetyl-20(29)-lupeol (16.b) [28] Cỏc hp cht steroit (17) glucosid nh l , 14 ,15 ,16 tetrahydroxypregnan-20-one glucosid (17.1) v (17.2) cõy C ruizianus [43] Footer Page of 166 S húa10 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 46 of 166 46 Bng 3.4 : Tng quan gia nng v din tớch tớch phõn cỏc nng khỏc ca Crotonkin -2 Thi Din tớch STT Nng thc nghim Din tớch lý thuyt gian (phỳt) Khi lng phõn t [M]+ 0.001 40.21345 22.143177 21.1 376 0.005 42.04944 48.772285 21.6 376 0.01 69.21092 82.05867 21.6 376 0.05 363.3754 348.34975 21.6 376 0.1 677.5821 681.2136 21.6 376 0.2 1331.266 1346.9413 21.6 376 0.5 3349.907 3344.1244 21.6 376 Da vo phng phỏp bỡnh phng ti thiu v cỏc s liu bng 3.4 ó thu c cỏc h s phng trỡnh hi qui ca Crotonkin -2 cú a = 6657,277 ; b = 15, 48592 v h s tng quan R = 0,9999391 Vy phng trỡnh tng quan ca Crotonkin -2 l: Y = 6657,277 XCT-2 + 15,48592 Đ-ờng chuẩn CT1 4000 3500 Dien tich 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 0.1 0.2 0.3 0.4 Nồng độ (mg/ml) 0.5 0.6 Dien tich LT Hỡnh 3.2: ng chun Crotonkin - Footer Page of 166 S húa46 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 47 of 166 47 Tớnh n nh cao cỏc ln o lp li cng nh s tng quan cht ch gia cỏc nng cht chun v din tớch thu c c trờn ph LC -MS c phn ỏnh bi h s tng quan R phng trỡnh tng quan ca Crotonkin -1 (0,989968) v ca Crotonkin -2 (0,999939) l rt cao Nh vy phộp nh lng mi cht hn hp bng phng phỏp LC -MS l u vit, ỏp ng cỏc yờu cu nhanh, nhy v chn lc ỏnh giỏ cht lng nguyờn liu bỏn thnh phm cng nh thnh phm quỏ trỡnh nghiờn cu v sn xut 3.3.3 Xỏc nh ng chun v cỏc tham s phng trỡnh tng quan ca Crotonkin -3 Dựng 50mg Crotonkin -3 v lm tng t nh trờn, cỏc s liu thu c ghi bng 3.5 Bng 3.5 : Tng quan gia nng v din tớch tớch phõn cỏc nng khỏc ca Crotonkin -3 Thi gian Pớc phõn t Stt Nng Din tớch pic (phỳt) [M+H-H2O]+ 0.1 27.603 24,01 345 0.2 84.366 24,01 345 0.4 197.892 24,01 345 0.5 254.655 24,01 345 0.8 424.944 24,01 345 Footer Page of 166 S húa47 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 48 of 166 48 Đ-ờng chuẩn D2 450 400 Diện tích píc 350 300 250 200 150 100 50 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Nồng độ D Hỡnh 3.3: ng chun Crotonkin - Da vo phng phỏp bỡnh phng ti thiu v cỏc s liu bng 3.5 ó thu c cỏc h s phng trỡnh hi qui ca Crotonkin -3 cú a = 567,63 ; b = 29, 16 v h s tng quan R = 0,9740 Vy phng trỡnh tng quan ca Crotonkin -3 l: Y = 567,63 XD-2 + 29,16 y: Din tớch pic thu c trờn ph LC -MS XD-2 : Hm lng (mg/ml) ca Crotonkin -3 Cng nh Crotonkin -1 v Crotonkin -2 tớnh n nh cao cỏc ln o Crotonkin -3 lp li cng nh s tng quan cht ch gia cỏc nng cht chun v din tớch thu c trờn ph LC -MS c phn ỏnh bi h s tng quan R phng trỡnh tng quan ca Crotonkin -3 (0,9740) l rt cao 3.3.4 Xỏc nh hm lng Crotonkin -1 v Crotonkin -2 cõy Kh sõm Cõn ly mt lng nguyờn liu (M) ngõm chit v thu cn chit giu ent -kauran (m) Cõn chớnh xỏc 1mg cn chit v ghi trờn mỏy LC -MS T phng trỡnh tng quan (y = ax + b) v din tớch tớch phõn LC -MS Footer Page of 166 S húa48 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 49 of 166 49 ca mi cht s tớnh c lng ca cht ú 1mg cn chit (m) v hm lng (%)ca Crotonkin nguyờn liu tớnh theo cụng thcc: % crotonkin = yCT - b x a m M x 100 (3.1) Trong ú yCT : din tớch tớch phõn trờn ph LC -MS ng vi Rt ca Crotonkin a, b: Cỏc h s phng trỡnh tng quan ca crotonkin Crotonkin-1 cú a = 7109,85, b = 126,87 Crotonkin-2 cú a = 6657,28, b = 15,48 m: cn chit giu ent -kauran thu c t lng M M: lng nguyờn liu em phõn tớch Vớ d cỏch tớnh: 200g (M) lỏ khụ nghin nh thu hi thỏng 5/2007 Súc Sn - H Ni c ngõm chit kit, lm giu ent -kauran thu c 23, 4g cn thụ Cõn chớnh xỏc 1mg cn chit v a phõn tớch trờn mỏy LC-MS thu c sc ký ký hiu M107 Trờn sc ký M107 cho bit din tớch tớch phõn LC -MS tng ng vi Rt ca Crotonkin nh sau: yCT Rt Crotonkin-1 388,463 23,96 Crotonkin-2 196,815 21,60 Thay bng s vo cụng thc (3.1) ta cú: % crotonkin-1 = 388,463-126,87 x 7109,86 % crotonkin-2 = 196,815-15,48 6657,28 Footer Page of 166 S húa49 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn 23,4 x 100 = 0,43 200 x 23,4 x 100 = 0,32 200 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 50 of 166 50 3.3.4.1 Xỏc nh hm lng ca crotonkin lỏ v cnh Kh sõm theo cỏc thi im khỏc Theo dừi s bin ng hm lng cỏc Crotonkin -1 v Crotonkin -2 cnh v lỏ cõy Kh sõm trng Súc Sn - H Ni cho kt qu ghi bng 3.6 Bng 3.6: Hm lng Crotonkin ch yu ca lỏ v cnh Kh sõm thu Súc Sn - H Ni theo mt s thi im nm STT Thi gian ly mu 4/2007 5/2007 11/2007 B phn Lỏ Cnh Lỏ Cnh Lỏ Cnh Hm lng (%) Crotonkin-1 Crotonkin-2 0,335 0,062 0,430 0,360 0,520 0,530 0,192 0,048 0,320 0,350 0,560 0,530 3.3.4.2 Xỏc nh hm lng ca Crotonkin ch yu ca lỏ Kh sõm cỏc vựng sinh trng khỏc Bng 3.7: Hm lng mt s ent -kauran ch yu ca lỏ Kh sõm thu mt s vựng khỏc B phn Thi gian Hm lng (%) Hm lng (%) a im cõy thu mu Crotonkin-1 Crotonkin-2 Lỏ Súc Sn 5/2007 0,43 0,32 Lỏ Ninh Bỡnh 5/2006 0,74 0,50 Lỏ Phỳ Th 0,73 0,78 9/2007 Lỏ Ninh Bỡnh 0,80 0,70 Lỏ Súc Sn 0,52 0,56 11/2007 Lỏ Hng Yờn 0,75 0,50 T cn chit giu ent -kauran ca cỏc mu Kh sõm theo cỏc ph LC - Footer Page of 166 S húa50 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 51 of 166 51 MS (xem ph lc) Sau x lý s liu ó thu kt qu phõn tớch hm lng Crotonkin -1 v Crotonkin -2 theo cỏc thi im nm (bng 3.6) v theo vựng nguyờn liu (bng 3.7) ỏnh giỏ cỏc s liu bng ny ó quan sỏt thy hm lng cỏc Crotonkin ch yu ca cõy Kh sõm cú s bin ng rừ rt: Hm lng ca cỏc Crotonkin cõy tng dn t xuõn hố v t mc cao nht vo thu hng nm Hm lng Crotonkin -1 xuõn hố luụn cao hn Crotonkin -2 t 1, 74 n 1, 34 ln l ỏ, v t 1, 29 n 1, 03 ln cnh, nhng sang thu thỡ chờnh lch khụng ỏng k Nhng s liu phõn tớch ban u cho thy: lỏ cõy kh sõm thu cỏc vựng trung du (Bc Giang, Phỳ Th, Ninh Bỡnh) cú hm lng ent -kauran luụn cao hn nhng cõy trng Súc Sn - H Ni T nhng kt qu nghiờn cu s b v s bin ng hm lng hot cht ca cõy Kh sõm ó cú c s núi rng: nguyờn liu tt nht chit xut Crotonkin -1 v Crotonkin -2 l dựng lỏ cõy Kh sõm vựng trung du thu hỏi vo thu hng nm ó xõy dng c phộp nh lng ng thi hm lng Crotonkin-1 Crotonkin-2 hỗn hợp Xác định đ-ợc thời điểm thu nguyên liệu để chiết xuất hoạt chất Footer Page of 166 S húa51 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 52 of 166 52 KT LUN ó xỏc nh c cỏc iu kin thớch hp i vi phng phỏp LC /MS phõn tớch mt s ent -kauran ditecpen chớnh lm c s cho vic nh lng ng thi cỏc ditecpen ton phn cú hn hp nghiờn cu ó xõy dng phng phỏp nh lng Crotonkin -1, Crotonkin-2, Crotonkin-3 ỏp ng cỏc yờu cu nhanh, nhy, chn lc v cho phộp nh lng ng thi hm lng Crotonkin -1 v Crotonkin -2 hn hp p dng phng phỏp LC /MS phõn tớch 18 mu nguyờn liu cú cha ent -kauran ditecpen chớnh l Crotonkin -1 v Crotonkin -2 Cỏc s liu phõn tớch thnh phn Crotokin -1 v Crotonkin -2 thu c mt s thi im khỏc cho bit nguyờn liu tt nht chit xut l dựng nguyờn liu thu hỏi vo thu hng nm Footer Page of 166 S húa52 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 53 of 166 53 DANH MC CC CễNG TRèNH CễNG B LIấN QUAN N LUN VN Pham Thi Hong Minh a, Nguyen Quyet Tien a , Nguyen Ngoc Tuana, Pham Hoang Ngoc a, Ngo Van Quanga, Nguyen Xuan Hoangb Quantitative Determination of two diterpenoids in Croton tonkinensis Gagnep., by High Performance Liquid Chromatography Coupled with Diode Array Detector and Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry International scientific conference on Chemistry for development and intergration 30th Anniversary of the Institute of Chemistry Vietnam Academy of Science and Technology Setember 12-14, 2008 Hanoi, Vietnam Footer Page of 166 S húa53 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 54 of 166 54 TI LIU THAM KHO Vừ Vn Chi (1997), T in cõy thuc VN trang 622-623, Nh xut bn Y hc TP H Chớ Minh Phm Hong H (1991), "Cõy c Vit Nam", Mekong Printing Tt Li (1999), "Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam", (in ln th 8), trang 907-908, Nh xut bn Y hc, H Ni Phm Th Hng Minh V thnh phn hoỏ hc v cỏc hot cht ca cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis Gagnep.,) h Euphorbiaceae Lun ỏn tin s hoỏ hc, H Ni 12/2003 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc (2002), "Phõn lp v nhn dng cỏc triterpen acetat cõy Croton tonkinensis", Tp Dc hc, 2002, 12, 8-9 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc, Trn Quang Hng, Chu ỡnh Kớnh (2003), "Phỏt hin cỏc berbin alcaloit cõy kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis", Tp Phõn tớch lý, hoỏ, sinh, 2004, (1), 38-41 Phm Th Hng Minh, Lu Th Hu, Phm Hong Ngc, Phm Hu in (2006), Gúp phn nghiờn cu thnh phn ancaloit cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis) Tõy Thiờn -Tam o Tp khoa hc Trng HSP H Ni, cỏc KHTN 2006, trang 110-114 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc, Chu ỡnh Kớnh (2004), "Phõn lp v nhn dng mt s flavonoit -C-glucosid t cõy kh sõm cho lỏ (C tonkinensis) cú Vit nam" Tp Hoỏ hc , 2004, 42 (2), 187-190 Phm Th Hng Minh, Nguyn Th Lan, Phm Hu in, Nguyn Quyt Tin, Phm Hong Ngc (2007), Nghiờn cu thnh phn ancaloit Footer Page of 166 S húa54 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 55 of 166 55 cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis) thu hỏi Ninh Bỡnh Hi Ngh Hoỏ hc Hu c Ton quc10 /2007, 10 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc, ỏi Duy Ban, Lờ Kim Xuyn, Hong Th Minh Chõu, Lờ Trung Dng, Phan Xuõn c, Nguyn Vn V "Kt qu nghiờn cu kh nng tng cng dch ca cỏc ch phm kh sõm Croton tonkinensis Gagnep.," Tp Y hc Vit Nam, 2007, 333, 24-28 11 Chu Van Man (2003) Informatic applications in biology Tr 195201 National University of Hanoi Press 2003 12 Trng Vn Nh Nghiờn cu cõy Kh sõm cho lỏ (Croton tonkinensis) v ỏnh giỏ tỏc dng trờn ký sinh trựng st rột bng phng phỏp thc nghim Lun PTS khoa hc y dc H ni 1992 13 Nguyn Ngha Thỡn (1995), "H thu du (Euphorbiaceae Juss h thc vt Vit Nam", Tp Sinh hc, 17(4), 7-30 14 Phan Tng Sn, Vn Ngc Hng, Phan Minh Giang, Taylor W C (1999), "úng gúp vo vic nghiờn cu hot cht sinh hc t cõyKh sõm cho lỏ Croton tonkinensis Gagnep., Euphorbiaceae" Tp Hoỏ hc, 27(4), tr 1-2 15 Pham Thi Hong Minh, Pham Hoang Ngoc, ang Ngoc Quang, Hashimoto T., Takaoka S., Asakawa Y (2003), "A novel ent-1 -acetoxy7 ,14 -dihydroxy-16-kauren-15-on from the Croton tonkinensis", Chem Pharm Bull.51(5), 590-591 Footer Page of 166 S húa55 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 56 of 166 56 16 Phm Th Hng Minh, Phm Hong Ngc (2003), "ent-(16S)-7 -hydroxy18-acetoxy kauran-15-on - mt kauran diterpen mi, phõn lp t cõy kh sõm cho lỏ Croton tonkinensis", Tp Hoỏ hc, 41(2), 104-109 17 Perry N B., Burgess E J., Back S H., Weavers R T., Geis W., Manger A B., (1999) "11-Oxygenated cytotoxic 8,9-secokauranes from a New Zealand liverwort, Lepidolarena tayloric " Phytochemistry, 50 (9), 423-433 18 Phan Minh Giang, Hui Zi Lin, Phan Tong Son, Jeong Hyuny Lee, Yuong Soo Hong and Jung Joon Lee (2003) Ent-kauran diterpenoids from Croton tonkinensis inhibit LPS-inuce NF -kB activation and no production J Nat Prod., 66 (9), 1217-1220 19 Pham Thi Hong Minh, Pham Hoang Ngoc, Nguyen Manh Cuong, Taylor W C, (2004) A new ent-kauran diterpenoid from Croton tonkinensis Gagnep., leaves. Fitoterapia, 75 (2), 552-556 20 Phan Minh Giang, Phan Tong Son, Lee, J J., and Otsuka, H., (2004) entkauran diterpenoids from Croton tonkinensis Gagnep., Chem Pharm Bull., 52 (7), 879-882 21 Nagashima F., Kondoh M., Uematsu T., Nishiyama A., Saito S., Sato M., and Asakawa (2002) Chem Pharm Bull 50, 808-813 22 Gonzales A.G., Frega B.M., Hernandez M G., Luis J G., (1973) Phytochemistry, 12, 2721-2723 23 Monte F J G., Dantas E M G., Braz F R., (1988) Phytochemistry, 27, 3209-3212 24 Phan Minh Giang, Hideakii Otsuka, Phan Tong Son (2005) "The minor ent-kauran-16-en-15-on type diterpen from Croton tonkinensis" Journal of Chemistry, 43 (2), 263-264 Footer Page of 166 S húa56 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 57 of 166 57 25 Addae Mensah I., Achenbach H., Waibil R., and Mwangi J W (1992), "Epoxychiromodine and other constitutents of Croton megalocarpus" Phytochem., 31(6), 2055-2058 26 Barbili F E., Moulis C., Bon M Respand M J., Fouraste I (1998), "Three furanoditerpenes from the bark of Croton campestris Phytochem., 48(1), 165-169 27 Cai Y., Chen Z P., and Phillipson J D (1993), "Clerodane diterpenoids from Croton lechleri" Phytochem., 34(1), 265-268 28 Chapman & Hall/CRC 1982-2006,From DNP on CD-ROM,Version 15:1 29 Chatterjee A., Banerjee A., and Bohlmann F (1978), "Isocrotocaudin, a new norclerodans-type diterpene from Croton caudatus", Phytochem., 17, 1777-1779 30 Gelpi E., Contributions of liquid chromatography-mass spectrometry to highlights of biomedical research J Chromatogr A, 1000, p 567-581 (2000) 31 He X G., On-line identification of phytochemical constituents in botanical extracts by chromatographic-diode combined array high-performance detection-mass liquid spectrometric techniques J Chromatogr A, 880, p 203-232 (2000) 32 Kapingu M C., Guillaume D., Mbwambo Z H., Moshi M J., Uliso F C., (2000), Mahunnah R L A "Diterpenoids from the roots of Croton macrostachys" Phytochem., 54, 767-770 Footer Page of 166 S húa57 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 58 of 166 58 33 Kitazawa E., Two diterpenes alcohols from Croton sublyratus (1981), Phytochem., 20(2), 287-289 34 Krebs H C., Ramiarantsoa H (1996), "Clerodan diterpenes and other constituents of Croton hovarum" Phytochem., 41(2), 561-563 35 LecomteH., Flore general de LIndochiene, 1910-1931 Tom V., p.291 36 Maciel M A M., Pinto A C., Arruda A C., Pamploma S G S R., Vandelinde F A., Lapa A j., Echevarria A., Rao V S N (2000), "Ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology: a successful combination in the study of Croton cajucara" J Ethnopharm., 70, 41-55 37 Maciel M A M., Pinto A C., Brabo S N and Silva M D A (1998), "Terpenoids from Croton cajucara" Phytochem., 49(3), 823-828 38 Martins A.P., Salguerio L.R., Goncalves M.J., Vila R., Tomi F., (2000) Antimicrobial activity and chemical composition of the back oil of Croton stellulifea, an endemic species from S tome & Principe Planta Med., 66(7), 647-650 39 Ngadjui B T., Folefoc G G., Keumedjio F., Dongo E., Sondengam B L., Connolly J D (1999), "Crotonadiol, a labdane diterpenoids from the stem bark of Croton zambesicus" Phytochem., 51, 171-174 40 Nguyen Manh Cuong, Tran Van Sung, Ahn B.Z (2002) Cytotoxic compounds from Croton Cascarilloides Kor J Pharmacogn., 33(3), 207-210 Footer Page of 166 S húa58 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 59 of 166 59 41 Pelletier S W (1970) Chemistry of the alkaloids Van Nostrand Reihold company Newyork/Toronto/London/Melburn., p 31-82 42 Peres M T L P., Monache F D., Cruz A B., Pizzolati M G., Yunes R A (1997), "Chemical composition and antimicrobial activity of Croton urucurana Baillon (Euphorbiacea) J Ethnopharm., 56, 223-226 43 Piacente S., Belisario M A., Castillo H D., Pizza C., and Feo V D (1998), "Croton ruizianus: Platelet proaggregating activity of two new pregnane glucoside" J Nat Prod., 61, 318-322 44 Roengsumram S., Achayindee S., Petsom A., Vilaivani T (1998), "Two new cembranoids from Croton oblongifolius" J Nat Prod., 61, 652-654 45 Vigor C., Fabre N., Fourastộ I and Moulis C (2002), Neoclerodane diterpenoids from Croton eluteria J Nat Prod., 65, 1180-1182 Footer Page of 166 S húa59 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 60 of 166 60 PH LC Ph ca Crotonkin -1 1.1 Ph IR 1.2 Ph MS 1.3 Ph 1H-NMR 1.4 Ph 3C-NMR v DEPT Ph ca Crotonkin -2 2.1 Ph IR 2.2 Ph 1H-NMR 2.3 Ph 3C-NMR 2.4 Ph DEPT Ph ca Crotonkin -3 3.1 Ph IR 3.2 Ph MS 10 3.3 Ph 1H-NMR 11 3.4 Ph 3C-NMR 12 Ph ca Crotonkin -5 13 4.1 Ph 1H-NMR 13 4.2 Ph 3C-NMR 14 4.3 Ph DEPT 15 Cỏc s liu phõn tớch ph LC /MS v ng chun ca Crotonkin -1 16 Cỏc s liu phõn tớch ph LC /MS v ng chun ca Crotonkin -2 32 Mt s i din ph LC /MS ca mu thu ti Súc Sn 48 7.1 Ph LC /MS ca mu lỏ kh sõm thu 5/2007 48 7.2 Ph LC /MS ca mu cnh kh sõm thu 5/2007 50 7.3 Ph LC /MS ca mu lỏ kh sõm thu 4/2007 52 7.4 Ph LC /MS ca mu cnh kh sõm thu 4/2007 54 7.5 Ph LC /MS ca lỏ kh sõm thu ti Ninh Bỡnh vo thỏng 5/2007 56 7.6 Ph LC /MS ca cnh kh sõm thu ti Ninh Bỡnh 5/2007 58 Cỏc s liu phõn tớch ph LC /MS v ng chun ca Crotonkin -3 60 Mt s i din ph LC /MS ca mu thu ti Tờn Yờn-Bc Giang 72 Footer Page of 166 S húa60 bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn ... đề tài: Theo dõi hàm lƣợng hoạt chất diterpenoit Khổ sâm cho (Croton tonkinensis Gagnep.,) họ Euphorbiaceae nội dung luận văn Footer Page 166 Số hóa2 bởiof Trung tâm Học liệu – Đại học Thái... Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 12 of 166 12 1.3 Những nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng Khổ sâm cho (Croton tonkinensis Gagnep.,) 1.3.1 Giới thiệu khổ. .. thực vật định danh Croton tonkinensis Gagnep., họ Euphorbiaceae Ảnh 2.1: Hoa Khổ sâm Footer Page of 166 Số hóa25 Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Ảnh 2.2: Lá Khổ sâm http://www.lrc-tnu.edu.vn