NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHÓM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHÓM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE) ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM - NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHÓM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE) Chuyên ngành : Hoá hữu Mã số : 60.44.27 LUẬN V ĂN THẠ C SĨ HOÁ HỌC LUẬN V ĂN THẠ C SĨ HOÁ HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM VĂN THỈNH THÁI NGUYÊN - 2008 THÁI NGUYÊN - 2008 LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số Tôi xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Phạm Văn Thỉnh - Người thầy tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố công trình khác suốt trình học tập, nghiên cứu thực luận văn Tôi xin chân trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Quyết Tiến, TS Phạm Thị Hồng Minh, Th.S Vũ Anh Tuấn, Th.S Hứa Văn Thao người thầy động viên giúp đỡ bước trình nghiên cứu thực Tác giả luận văn Xin chân thành cảm ơn phòng hoạt chất sinh học trường Đại học Y Thái Nguyên sở sản xuất kinh doanh thuốc thành phẩm Bác sĩ Hoàng Sầm, phòng nghiên cứu cấu trúc - Viện Hóa học tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành kế hoạch nghiên cứu Nhân dịp này, xin chân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban lãnh đạo Khoa Hóa, Khoa Sau đại học - Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn Thái Nguyên, tháng năm 2008 Tác giả Ngô Đức Trọng NGÔ ĐỨC TRỌNG DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN SKLM : Sắc kí lớp mỏng UV : Ultraviolet spectrocopy MS : Mass Spectroscopy EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy Bảng 2.2: Phát nhóm chất chó đẻ cƣa…………………27 LC-MS : Liqud chromatography - Mass Spectroscopy Bảng 2.3: Kết thử hoạt tính sinh học dịch chiết thô từ chó đẻ FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy NMR : Nuclear Magnetic Resonance : 1H-Nuclear Magnetic Resonance H-NMR Bảng 2.1: Khối lƣợng chất tổng số đƣợc chiết phân đoạn chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………………… ……….26 cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………… ……………… … 29 Bảng 2.4: Số liệu phổ 13C-NMR (CDCl3, 125Mhz) chất PH-1 chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………… ……… ….30 13 : C- Nuclear Magnetic Resonance Bảng 2.5: Phổ 1H-NMR 13C-NMR chất PE-3………… ……………….32 DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Bảng 3.1: Số liệu phổ COSY : Correlated Spectroscopy HSQC : Heteronuclear Spectroscopy- Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation HIV : Human Immunodeficiency Virus đvC : Đơn vị Cacbon C-NMR 13 Trang 13 C-NMR (CDCl3, 125Mhz) PH-1 chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L) phổ  -sitosterol [15]….… 40 Bảng 3.2: Số liệu phổ NMR PE-1 số liệu phổ NMR phần mềm ACD/NMR 5-hidroxymetylfufural 44 Bảng 3.3: Số liệu phổ NMR PE-2 số liệu phổ NMR phần mềm ACD/NMR axit gallic 48 Bảng 3.4: Số liệu phổ NMR PE-3 số liệu phổ phần mềm ACD/NMR chất kampherol 52 DANH MỤC CÁC HÌNH MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn Hình 1.1: Cây chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L, Euphorbiaceae Lời cam đoan Hình 2.1: Đƣờng kính vùng ức chế xung quanh giếng thạch (mm) theo phƣơng Danh mục chữ viết tắt dùng luận văn phƣơng pháp khuyếch tán thạch 28 Danh mục bảng Hình 3.1: Phổ FT-IR -sitosterol (PH-1) .36 Danh mục hình sơ đồ Hình 3.2: Phổ 1H-NMR -sitosterol (PH-1) 37 MỞ ĐẦU Hình 3.3: Phổ 13C-NMR ATP  -sitosterol (PH-1) 38 Hình 3.4: Phổ 1H-NMR-DMSO PE-1 42 Hình 3.5: Phổ 13C-NMR-DMSO PE-1 43 Hình 3.6: Phổ 1H-NMR-DMSO PE-2 46 Hình 3.7: Phổ 13C-NMR-DMSO PE-2 47 Hình 3.8: Phổ 1H-NMR-AcetoneD6 PE-3 50 Hình 3.9: Phổ 13C-NMR-AcetoneD6 PE-3 51 CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật 1.2 Tác dụng sinh học chi Phyllanthus 1.2.1 Một số công dụng chi Phyllanthus 1.2.2 Một số tác dụng dƣợc lý chi Phyllanthus .5 1.3 Tình hình nghiên cứu hoá học thực vật chi Phyllanthus 1.3.1 Một số đại diện nhóm tecpenoit 1.3.2 Một số đại diện khung axit 1.3.3 Một số đại diện Lignan .9 1.3.4 Một số đại diện khung flavonoit 11 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ 1.3.5 Một số hợp chất phenolic khác 12 1.3.6 Một số hợp chất nhóm ankaloit .15 Sơ đồ 2.1: Quy trình ngâm chiết mẫu 26 1.4 Tình hình nghiên cứu hóa học loài Phyllanthus urinaria L 16 CHƢƠNG II THỰC NGHIỆM 23 2.1 Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học phƣơng pháp xử lý mẫu 23 2.1.2 Phƣơng pháp phân lập hợp chất từ dịch chiết 23 2.1.3 Phƣơng pháp khảo sát xác định cấu trúc hoá học hợp chất 24 MỞ ĐẦU 2.2 Dụng cụ, hoá chất thiết bị nghiên cứu 24 2.2.1 Dụng cụ hoá chất 24 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 25 2.3 Các dịch chiết từ chó đẻ cƣa (Phyllanthus urinaria L) 25 2.3.1 Các dịch chiết .25 2.3.2 Khảo sát định tính dịch chiết 27 2.3.3 Thử hoạt tính sinh học 27 2.4 Phân lập, tinh chế chất từ 29 2.4.1 Dịch chiết n-hexan 29 Từ xưa đến nay, thuốc dân gian đóng vai trò quan trọng đời sống hàng ngày người Từ trước có đời thuốc tây, nhiều loài cỏ tự nhiên sử dụng dân gian để chữa bệnh có hiệu Rất nhiều loại bệnh tật chữa khỏi nhờ thảo dược Ngày hợp chất tự nhiên phân lập từ cỏ ứng dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chúng 2.4.2 Dịch chiết etylaxetat (PE) .31 dùng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên 2.4.2.1 Chất PE-1 31 liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm v.v Mặc dù công nghệ 2.4.2.2 Chất PE-2 31 tổng hợp hoá dược ngày phát triển mạnh mẽ, tạo biệt dược khác 2.4.2.3 Chất PE-3 32 sử dụng công tác phòng, chữa bệnh Điều góp phần làm tăng CHƢƠNG III THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 tuổi thọ người, song nhu cầu sử dụng cỏ để làm thuốc ngày 3.1 Nguyên tắc chung 34 tăng lên, khoa học đại soi sáng, chúng có chứa biệt 3.2 Xác định định tính nhóm chất thiên nhiên 34 dược khó tổng hợp Mặt khác việc dùng thuốc nam không gây 3.3 Phân lập nhận dạng hợp chất 35 tác dụng phụ 3.3.1 -sitosterol (PH-1) .35 Có nhiều môn khoa học nghiên cứu thuốc đời Việc 3.3.2 5-Hydroxymetylfufural (PE-1) .41 nghiên cứu thuốc giúp cho hiểu rõ thành phần cấu trúc 3.3.3 Axit gallic (PE-2) 45 hóa học, hoạt tính sinh học, tác dụng dược lí thuốc Trên sở 3.3.4 Kampherol (PE-3) 49 nghiên cứu tạo chất có hoạt tính sinh học cao mong 3.4 Thử hoạt tính sinh học 53 KẾT LUẬN 55 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC .62 muốn để làm thuốc chữa bệnh Cây chó đẻ cưa thuốc sử dụng từ lâu giới Việt Nam Trong Y học dân tộc nhân dân dùng làm thuốc để chữa nhiều loại bệnh như: đau viêm họng, đinh râu, mụn nhọt, viêm da lở ngứa, sản hậu ứ huyết đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má, bệnh viêm gan,… có hiệu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Thực vật chó đẻ cưa có nhiều ứng dụng quan trọng gần CHƢƠNG I TỔNG QUAN nhà khoa học nước quan tâm chọn làm đối tượng nghiên cứu, nước ta có công trình nghiên cứu thành phần hóa học dược lí học chó đẻ cưa 1.1 Mô tả thực vật Với mục đích nghiên cứu tìm hiểu thành phần hóa học hợp chất có hoạt tính sinh học chó đẻ cưa, góp phần làm tăng thêm Cây chó đẻ cưa gọi diệp hạ châu, diệp hoè thái, lão nha châu, trân châu thảo, cam kiềm, rút đất, khao ham (Tày), prakphle (Campuchia) hiểu biết nguồn thực vật làm thuốc phong phú quý giá Việt Nam Tên khoa học là: Phyllanthus urinaria L, thuộc họ thầu dầu (Euphorbiaceae) Chúng chọn chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L.) làm đối tượng Phân bố địa lý: Cây chó đẻ cưa phân bố rộng khắp vùng nghiên cứu cho công trình nghiên cứu Tên đề tài là: “Nghiên cứu hóa học nhận dạng số nhóm chất có chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L., Euphorbiaceae)” nhiệt đới cận nhiệt đới Ở Việt Nam, chó đẻ cưa thường thấy mọc tự nhiên hầu hết tỉnh thành nước, điển hình như: Thái Nguyên, Bắc Ninh, Nghệ An, Hà Giang,… Trên giới loại mọc nhiều nước Châu Á như: Trung Quốc, Ấn Độ, Malaysia, Philippin, Inđonexia, Myanma, Thái Lan,… Châu Mĩ như: Brazil, Argentina,…[5] Hình 1.1: Cây chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L, Euphorbiaceae) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Đặc điểm sinh trưởng phát triển: Một số thuốc dùng chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L) Cây chó đẻ cưa loại cỏ mọc hàng năm, cao chừng 30 cm, thân gần nhẵn, mọc thẳng đứng, mang cành, thường có màu đỏ tía Cây có vị Lá mọc so le lưỡng hệ hay có cuống ngắn Hoa mọc kẽ lá, đơn tính, màu đỏ nâu Hoa đực hoa gốc Hoa đực đầu cành, hoa cuối cành Hoa cuống có cuống ngắn Quả nang không cuống hình cầu dẹt Đường kính đạt tới 2mm Hạt ba cạnh hình trứng màu nâu nhạt có vân ngang [5] [5], [6]: Nhân dân ta thường dùng toàn hái làm thuốc, mùa thu hái quanh năm tốt vào mùa hạ Thường dùng tươi có phơi khô, ngày uống 20-40g tươi, khô, sắc đặc, uống thay nước Chữa suy gan (do sốt rét, sán lá, lỵ amip, ứ mật, nhiễm độc): Chó đẻ cưa khô 20g, cam thảo đất khô 20g Sắc nước uống hàng ngày Đối với bệnh da: Cây tươi dã nát với muối đắp da 1.2 Tác dụng sinh học chi Phyllanthus với liều lượng không hạn chế 1.2.1 Một số công dụng chi Phyllanthus Các loài thuộc chi Phyllanthus (Euphorbiaceae) sử dụng rộng rãi y học dân tộc nhiều nước để chữa bệnh thận, bệnh tiểu 1.2.2 Một số tác dụng dƣợc lý chi Phyllanthus Năm 1961, phòng Đông Y Viện Vi trùng Việt Nam, nghiên cứu tác đường, bệnh viêm gan B…[7] Các loài dùng làm thuốc nhiều dụng kháng sinh chó đẻ cưa thấy kết tác dụng kháng sinh loài Phyllanthus urinaria L, Phyllanthus niruri L Phyllanthus amarus sau: Tụ cầu trùng (0,5 cm), Typhi (0,9 cm), Flexneri (1,1cm), Sonnei (0 Schum et Thonn [4] cm), Shiga (1cm), Subtilis (0,4 cm), Coli (0 cm) Một số thuốc dùng chó đẻ đắng (Phyllanthus amarus Schum et Năm 1977, nhóm bác sĩ Việt Nam, khoa Tiêu hoá, Gan, Mật sử dụng thuốc gia truyền Lương y Trần Xuân Thiện gồm vị chó đẻ Thonn) [6]: Chữa viêm gan virus: Chó đẻ đắng khô 20g, sắc nước lần đắng, xuyên tâm liên, dành dành để điều trị cho người có kết Trộn chung nước sắc Thêm 50g đường, đun sôi cho tan đường Chia làm xét nghiệm HBsAg (+) Sau thời gian điều trị, kết xét nghiệm âm tính lần uống ngày Khi kết xét nghiệm HBsAg (-) ngừng thuốc coi khỏi Tỷ lệ đạt 26/98 bệnh nhân Ngoài ra, thuốc giúp thể Chữa xơ gan cổ trướng thể năng: Chó đẻ đắng khô 100g sắc nước lần Trộn chung nước sắc, thêm 150g đường, đun sôi cho tan đường, chia nhiều lần uống ngày (thuốc đắng), liệu trình 30-40 ngày Khẩu phần ăn hàng ngày phải hạn chế muối, tăng đạm (thịt, cá, trứng, đậu phụ) Riêng chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L) y học dân tộc nhân dân dùng để chữa đau viêm họng, đinh râu, mụn nhọt, viêm da, lở ngứa, sản hậu ứ huyết đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má, chữa bệnh trung bình 4-5 tháng [6] Năm 1988 tác giả Blunberg Thiogarajan công bố điều trị 37 bệnh nhân viêm gan siêu vi B chó đẻ cưa Phyllanthus amarus Phyllanthus niruri đạt kết âm tính 22/37 bệnh nhân sau 30 ngày Các tác giả chứng minh Phyllanthus amarus có chứa chất làm ức chế men pelymerase DNA virus viêm gan siêu vi B [5] gan, sốt, rắn rết cắn có hiệu Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên người dùng sản xuất kháng thể chống HBsAg (59/98 người) Liều điều trị http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Năm 2002, Nguyễn Bá Kinh cộng công bố kết nghiên cứu Theo [39], từ loài Phyllanthus oxyphyllus tách được: 29-nor-3,4- lâm sàng Bệnh viện Thanh Nhàn (Hà Nội), sử dụng chế phẩm LIV/94 seco-friedelan tritecpen (axit 29-nor-3,4-seco-friedelan-4(23),20(30)-dien-3- (chó đẻ cưa thành phần thuốc) điều trị cho oic) secquitecpen guaiane secquitecpen (5-hydroxy-6,9- bệnh nhân viêm gan mãn tính năm (2001-2002) đạt kết tốt Thuốc epoxyguaiane) Những hợp chất đánh giá có khả chống oxi có tác dụng làm giảm HBsAg bệnh nhân [6] hóa tốt nồng độ thử nghiệm IC50 = 0.017 ± 0.001 mM Những công trình nghiên cứu hóa học gần loài Phyllanthus phát vài lignan, flavonoit tanin thủy phân có tác dụng bảo vệ gan, có khả làm phần lớn kháng nguyên HBsAg, ức chế mạnh HIV transcriptase ngược [21] O Các thí nghiệm in vitro chó đẻ với kháng nguyên HBsAg HOOC HO với tổn thương gan cacbontetraclorit gây nên chứng minh chó đẻ có khả chống virus viêm gan B Cây chó đẻ cưa có tác dụng kháng khuẩn 29-nor-3,4-seco-friedelane tritecpen Guaiane secquitecpen tụ cầu vàng, trực khuẩn mủ xanh, trực khuẩn Coli, Shigella Từ loài Phyllanthus reticulates phân lập hợp chất dysenteriae, S flexneri, S shigae, Moraxella kháng nấm 21α-hydroxyfriedel-4(23)-en-3-one vài triterpenoit khác, biết là: Aspergillus fumigatus [1] friedelin, sitosterol, friedelan-3β-ol, glochidonol 21α-hydroxyfriedelan - 1.3 Tình hình nghiên cứu hoá học thực vật chi Phyllanthus - on [47] Cho đến người ta phát chi Phyllanthus L họ thầu dầu Theo tài liệu [46], từ loài Phyllanthus plyanthus Châu Phi tác giả (Euphorbiaceae) có 700 loài, gồm từ thân thảo đến bụi hay tìm số tritecpenoit: phyllanthol, phyllanthone, (20S)-3β- gỗ nhỏ Thành phần hoá học chi phong phú đa dạng [11] Ở acetoxy-24-methylenedammaran-20-ol, δ-amyrin acetate, lupenone (20S)- Việt Nam có 44 loài, loài đáng ý nhiều Phyllanthus 3α-acetoxy-24-methylenedammaran-20-ol urinaria L (chó đẻ cưa), Phyllanthus niruri L (chó đẻ thân xanh) HO Phyllanthus amarus Schum et Thonn (chó đẻ đắng hay diệp hạ châu đắng) H 1.3.1 Một số đại diện nhóm tecpenoit H Từ loài Phyllanthus flexuosus phân lập tritecpen mới, cấu trúc là: olean-12-en-3β,15α-diol; lup-20 (29)-en-3β,24-diol; olean-12-en-3β,24-diol; oleana-11:13(18)-dien-3β,24-diol olean-12-en3β,15α,24-triol hai chất biết là: tritecpen diol betulin [33]; lup-20(29)- H CH3OCO H (20S)-3β-acetoxy-24-methylenedammaran-20-ol en-3β,15α-diol [41] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Từ loài Phyllanthus acidus tách hai pentacyclic tritecpenoit, là: phyllanthol olean-12-en-3β-ol (β-amyrin) [35] 1.3.3 Một số đại diện Lignan Trong loài Phyllanthus discoides người ta tách phyllanthin Từ loài Phyllanthus niruri tách acyclic tritecpen, cấu trúc dự đoán dựa phương pháp phân tích phổ là: C14H17O2N, phyllantin C13H15O3N [27] phyllantidin C 13H15O2N [20] Trong loài Phyllanthus niruri L có phyllanthin C 24H34O6, 3,7,11,15,19,23-hexamethyl-2Z,6Z,10Z,14E,18E,22E-tetracoshexen-1-ol [10] hypophyllanthin C 24H30O7, niranthin C24H30O7 (cấu trúc niranthin Từ loài Phyllanthus watsonii tách hợp chất tritecpen mới: 26- (+)3,4,3′,4′,9,9′-hexamethoxy-8:8′-butyrolignan), nirtetralin C24H30O7 Nor-D:A-friedooleanane tritecpen với lupenyl palmitate, friedelin, phyllteralin C24H34O6 [8] Dựa liệu phổ khối lượng phổ cộng epifriedelanol, glochidone, glochidonol, lupeol, lup-20(2) [29] hưởng từ hạt nhân, cấu trúc nirtetralin phyltetralin 1- 1.3.2 Một số đại diện khung axit phenyl tetralins Từ loài Phyllanthus amarus phân lập axit thiobarbituric, axit H H RO CH2OCH3 H3CO CH2OCH3 H3CO ascorbic [42] Từ dịch chiết n-hexan loài Malaysia tách axit oleanolic axit ursolic [16], axit amariinic, axit repandusinic A, R1O CH2OCH3 CH2OCH3 H axit geraniinic B chất 1-O-galloyl-2,4-dehydrohexahydroxydiphe H H R2 noyl -glucopyranozơ elaeocarpusin [26] OCH3 Từ loài Phyllanthus emblica tách axit phyllaemblic [52], axit ascorbic [23] Từ loài Phyllanthus fraternus tách axit indole-3-butyric, axit 1naphthaleneacetic [31] axit trichadenic B có cấu trúc axit 3β-hydroxyD: A-friedooleanan-27-oic, xác định dựa vào phương pháp phân tích X- OCH3 O OCH3 O 5a Phyllanthin R= R =CH3, R2 =H Hypophyllantin 5b Niranthin R+R1= -CH2 -R2 = OCH3 ray [38] H H CH2OCH3 CH2OCH3 O HOOC O H CH2OCH3 H H HO H3CO CH2OCH3 H OCH3 H OCH3 OCH3 OCH3 Axit trichadenic B Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nirtetralin http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên OCH3 Phyllteralin http://www.lrc-tnu.edu.vn 10 11 Cũng từ phần dịch chiết n-hexan loài này, người ta tách 1.3.4 Một số đại diện khung flavonoit Từ dịch chiết etanol loài Phyllanthus emblica L phân lập quecxetin triacontanal triacontanol [40] Các chất hypophyllanthin, phyllanthin phân lập cặn catechin Đây hai chất có hoạt tính chống oxi hóa tốt [49] n-hexan phương pháp sắc kí lỏng trung áp (MPLC) từ loài Phyllanthus niruri L vùng Đình Bảng, Từ Sơn, Bắc Ninh nước ta [4], hai lignan OH HO HO O O chứng minh có hoạt tính bảo vệ gan mô hình gây độc tế bào gan CCl4 D- GalN/ TNF- [3], [45] OH OH Theo tài liệu [34], từ loài Phyllanthus niruri tách OH diarylbutane lignan mới, chúng coi sản phẩm chuyển hóa thuộc hệ chuyển hóa từ axit veratrylidene piperonylidene succinic, (10a) chuyển hóa từ axit veratrylidene 3,4,5-trimethoxy benzylidene succinic (10b) chuyển hoá từ (10a) OH OH O 11 Quecxetin thống 5′ -desmethoxy niranthin Trong hai chất (9a) (9b) sản phẩm OH * * OH 12 Catechin Cũng vấn đề nghiên cứu khả chống oxi hóa, nhà khoa học khảo sát khả từ dịch chiết methanol loài phyllanthus đặc biệt từ Ấn Độ là: Phyllanthus debilis, Phyllanthus debilis, Phyllanthus urinaria, Phyllanthus virgatus, Phyllanthus maderaspatensis, Phyllanthus amarus Tất O CH2OR RO CH2OMe CH2OR RO CH2OMe dịch chiết cho kết tốt [22] Từ loài Phyllanthus sellowianus phân lập rutin isoquercitrin O hai flavonoit chiếm thành phần chủ yếu [19] OMe OMe OMe OH OMe OMe HO O OH 9a R=H; 9b R=CH3 HO OH O 10a R=H; 10b R=CH3 OH Từ loài Phyllanthus polyphyllus L tách lignan arylnaphthalide, phyllamyricin C, justicidin B diphyllin [51] Từ loài Phyllanthus anisolobus tách ichtyotoxic lignan justicidin B O -Ramnozo -glucozo OH O 13 Rutin OH O 14 isoquercitrin Theo tài liệu [36], từ loài Phyllanthus niruri tách flavanon: lignan-glucozit phyllanthostatin A [43] 8-(3-metyl-but-2-enyl)-2-phenyl chroman-4-on (15) 2-(4-hydroxyphenyl)- Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 73 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 74 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 75 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 76 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 77 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 78 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 79 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 80 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 81 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 82 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 83 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 84 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 85 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 86 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 87 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 88 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 89 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 90 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 91 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 92 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 93 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 94 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 95 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 96 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 97 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 98 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 99 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 100 101 TRƯỜNG ĐH Y KHOA TN CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM BỘ MÔN VI SINH Độc lập - Tự - Hạnh phúc KẾT QUẢ KIỂM TRA DƢỢC TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DƢỢC LIỆU Ngày kiểm tra: 19/05/2008 Kết quả: Đƣờng kính vùng ức chế xung quanh giếng thạch (mm) Dƣợc liệu Staphylococcus aureus E.coli Salmonella typhi cặn EtOAc 34 23 40 (Trọng) cặn nƣớc 29 18 32 (Trọng) - Kết luận: Các dịch chiết thô có hoạt tính với vi sinh vật kiểm định Cụ thể là: - - Dịch chiết nước dịch chiết etylaxetat chó đẻ cưa có hoạt tính mạnh với khuẩn Staphylococcusauresu (Tụ cầu vàng), E.coli (Thực khuẩn đường ruột) Salmonella typhi (Thương hàn) - Dịch chiết nước có hoạt tính mạnh so với dịch chiết etylaxetat - Dịch chiết nước có hoạt tính mạnh với khuẩn Salmonella typhi (Thương hàn) Thái Nguyên, ngày 20 tháng 05 năm 2008 Phó trƣởng môn Vi sinh Ts Nguyễn Đăng Trung Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn [...]... Chung (2003), “Phân lập một số hoạt chất từ cây chó đẻ răng cưa , Tạp chí Dược học, số 9 năm 43, tr.12-15 4 Nguyễn Văn Đậu, Trần Thị Thu Hà (2007), “Ngiên cứu hóa thực vật cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus uticulatus niruri L)” Tạp chí dược học, số 369 năm 47, tr.15-18 5 Đỗ Tất Lợi (1997), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr.65-67 6 Nguyễn Thượng Dong và đồng tác giả (2001),... định tính đã khẳng định trong cây chó đẻ răng cưa có những lớp chất: đường khử, ankaloit, steroit, flavonoit, poliphenol, cumarin và saponin 3 Đã phân lập và xác định được cấu trúc hóa học của 4 hợp chất là: βSitosterol, 5-hidroxymetylfufural, axit gallic và kampherol 4 Đã thử hoạt tính sinh học của các dịch chiết tổng của cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L) cho thấy có tác dụng kháng các khuẩn... pháp nghiên cứu 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu Nguyên liệu để nghiên cứu gồm toàn bộ phần trên mặt đất của cây chó COO- đẻ răng cưa, thu hái vào tháng 11 năm 2007 tại vùng giáp ranh giữa Huyện 51 Phyllurine Đồng Hỷ và Thành Phố Thái Nguyên Chất này (51) được nhận dạng là tương tự như phyllanthurinolacton Cây chó đẻ răng cưa còn gọi là cây diệp hạ châu, dân địa phương... cấu trúc hóa học của các chất đã phân lập được từ các đối tượng nghiên cứu nói trên Việc phân lập các thành phần hóa học từ cây chó đẻ răng cưa được thực hiện như sơ đồ 2.1 và đã thu được các hợp chất sạch gồm các nhóm chất: tritecpenoit, furan, axit gallic và flavonoit 3.2 Xác định định tính các nhóm chất thiên nhiên Phân tích định tính các hợp chất hữu cơ thiên nhiên trong các mẫu nghiên cứu là việc... chiết trong nước và dịch chiết etylaxetat của cây chó đẻ răng cưa đều có hoạt tính khá mạnh với các khuẩn Staphylococcusauresu (Tụ cầu vàng), E.coli (Thực khuẩn đường ruột) và Salmonella typhi (Thương hàn) - Dịch chiết nước có hoạt tính mạnh hơn so với dịch chiết etylaxetat - Dịch chiết nước có hoạt tính mạnh nhất với khuẩn Salmonella typhi (Thương hàn) 2 Từ thân và lá cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria. .. sau khi glycozit tim có trong các mẫu thử Từ kết quả phân tích định tính cũng sơ bộ thu mẫu và sấy khô ở điều kiện thích hợp cho thấy cây chó đẻ răng cưa là một loài thực vật chứa nhiều chất có hoạt tính Về nguyên tắc việc ngâm chiết mẫu thực vật có thể tiến hành theo 2 3.3 Phân lập và nhận dạng các hợp chất có trong các dịch chiết khác cách phổ biến sau 1 Chiết và phân lập các hợp chất từ mẫu thực vật... 4,50 56,63 4,70 trò trong quá trình chuyển hoá chất trong cơ thể sinh vật Trong cây chó đẻ 4 O 3 5-Hidroxymetylfufural Ngày nay chất 5-hidroxymetylfufural đã được phân lập từ một số cây răng cưa (Phyllanthus urinaria) , chất 5-hidroxymetylfufural lần đầu tiên được 1 Phân tích phổ H-NMR, HMBC cho thấy tín hiệu H-1 (δ = 9,54 ppm) là độ chuyển dịch hóa học của hiđtro liên kết với nhóm C=O có tương tác xa với... Văn Thỉnh (2008), Nghiên cứu hóa học thực vật cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L.) mọc hoang tại Thái Nguyên (Chemical studies on the constituents of Phyllanthus urinaria L growing wildly in Thai Nguyen province)”, Tạp chí Khoa học & Công nghệ Đại học Thái Nguyên, số 2 (46), tr 75-79 Nam, NXB Khoa học và Kĩ thuật, Hà Nội 2 Nguyễn Văn Đàn (1997), Các phương pháp nghiên cứu cây thuốc, NXB YDược,... tổng số trong nước nóng KẾT LUẬN Mẫu 2: Dịch chiết trong EtOAc (đã loại bỏ hết phần chất tan trong n-hexan) Kết quả thử hoạt tính với vi sinh vật kiểm định của dịch chiết cây chó 1 Lần đầu tiên, cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L) mọc hoang tại đẻ răng cưa nêu trong bảng 2.3, cho biết các dịch chiết thô đều có hoạt tính Thái Nguyên được nghiên cứu sàng lọc hóa thực vật, đã thiết lập được quy... 2,2) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 3' 1' 2 4' OH 10 162,30 8,15 (1H, dd, O 7 9 1 2' 1 8 5' 3 C 4 6/ OH O Kampherol hay 3,5,7,4/-tetrahidroxi flavon Kampherol là một flavonoit có trong nhiều thực vật, nó không độc và có tác dụng sinh học quan trọng Lần đầu tiên chất này được phân lập từ cây chó đẻ răng cưa (phyllanthus urinaria) thu hái tại Thái Nguyên 3.4 Thử hoạt tính sinh học