Nghiên cứu xây dựng phương pháp phổ hồng ngoại gần và trung bình kết hợp với thuật toán hồi quy đa biến để định lượng đồng thời một số hoạt chất có trong thuốc kháng sinh thuộc họ β-Lactam

Header Page of 148 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHỔ HỒNG NGOẠI GẦN VÀ TRUNG BÌNH KẾT HƠP VỚI THUẬT TỐN HỒI QUY ĐA BIẾN ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ HOẠT CHẤT CÓ TRONG THUỐC KHÁNG SINH THUỘC HỌ β –LACTAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2015 Footer Page of 148 Header Page of 148 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHỔ HỒNG NGOẠI GẦN VÀ TRUNG BÌNH KẾT HƠP VỚI THUẬT TOÁN HỒI QUY ĐA BIẾN ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ HOẠT CHẤT CÓ TRONG THUỐC KHÁNG SINH THUỘC HỌ β –LACTAM Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã Số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người Hướng Dẫn Khoa Học: TS Phan Thị Tuyết Mai TS Bùi Xuân Thành Hà Nội – 2015 Footer Page of 148 Header Page of 148 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn TS.Phan Thị Tuyết Mai, TS.Bùi Xuân Thành tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Tạ Thị Thảo thầy giảng dạy Khoa Hóa phân tích hết lịng giúp đỡ em q trình học tập nghiên cứu Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc hộ trợ kinh phí thiết bị máy móc từ đề tài nghị định thư với Cộng hòa Pháp Lotus 2014- 2016, mã số 39/2014/HD- NĐT Cuối em xin gửu lời cảm ơn tới gia đình bạn học viên,sinh viên mơn Hóa Phân tích giúp đỡ em thời gian làm luận văn Hà nội, ngày 19 tháng năm 2015 Học viên Nguyễn Thị Ánh Tuyết Footer Page of 148 Header Page of 148 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH BẢNG KÍ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN .2 1.1 Tổng quan nhóm kháng sinh β-lactam 1.1.1 Khái niệm phân loạinhóm β-lactam 1.1.1.1 Nhóm penicillin 1.1.1.2.Nhóm cephalosporin .4 1.1.1.3.Các kháng sinh β-lactam khác 1.1.2 1.2 Tính chất vật lývà hóa học kháng sinh nhóm β- Lactam Các phương pháp phân tích định lượng nhóm kháng sinh β-lactam 1.2.1 Phương pháp đo quang .9 1.2.2 Các phương pháp sắc ký 11 1.2.3 Phương pháp phổ hồng ngoại 13 1.2.3.1.Nguyên tắc phương pháp phổ hồng ngoại FTIR 13 1.2.3.2 Cách chuẩn bị mẫu đo hồng ngoại 16 1.2.3.2 Ứng dụng phương pháp phổ dao động 18 1.3.Ứng dụng phương pháp phổ hồng ngoại để xác định nhóm kháng sinh βLactam 19 1.3.1 Kỹ thuật đo hồng ngoại định lượng hoạt chất thuốc .19 1.3.2 Các ứng dụng phổ hồng ngoại kết hợp với Chemometric để định lượng thuốc kháng sinh β – lactam 20 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM .23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.1 Footer Page of 148 Chất phân tích 23 Header Page of 148 2.1.2 Mẫu phân tích .23 2.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm .25 2.2.1 Hóa chất 25 2.2.2 Dụng cụ trang thiết bị đo .26 2.3 Nội dung nghiên cứu .26 2.4 Phương pháp định lượng phổ hồng ngoại gần .26 2.4.1 Nguyên tắc phương pháp phân tích 26 2.4.2 Nội dung phương pháp .27 2.4.3 Quy trình phân tích 27 2.5 Phương pháp phân tích đối chứng Penicillin Cephalexin 28 2.6 Chương trình máy tínhcủa phương pháp phổ hồng ngoại gần kết hợp với thuật toán hồi qui cấu tử ( PCR) 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THỰC NGHIỆM 32 3.1 Khảo sát điều kiện đo phổ hồng ngoại xác định đồng thời Penicillin Cephalexin hỗn hợp 32 3.1.1 Khảo sát phổ hấp thụ hoạt chất penicillin cephalexin 32 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng tá dược 35 3.1.3 Khảo sát tỷ lệ khối lượng mẫu/KBr 37 3.1.4 Khảo sát độ lặp lại trình ép viên 38 3.2 Xây dựng mơ hình hồi qui đa biến tuyến tính phân tích hoạt chất Penicillin 39 3.2.1 Mơ hình đường chuẩn đa biến xác định hoạt chất Penicillin có chứa tá dược 39 3.2.2 Đánh giá tính phù hợp phương trình hồi quy 42 3.3 Xây dựng mơ hình hồi qui đa biến tuyến tính phân tích hoạt chất Cephalexin .44 3.3.1 Mơ hình đường chuẩn đa biến xác định hoạt chất Cephlexin có chứa tá dược 44 3.3.2 Đánh giá tính phù hợp phương trình hồi qui .46 Footer Page of 148 Header Page of 148 3.4 Xây dựng mơ hình hồi qui đa biến tuyến tính phân tích đồng thời hoạt chất Penicillin Cephalexin hỗn hợp 48 3.4.1 Xây dựng mơ hình đường chuẩn đa biến xác định đồng thời Penicillin Cephalexin có chứa tá dược 48 3.4.2 Đánh giá tính phù hợp mơ hình hồi qui PCR xác định đồng thời hoạt chất Penicillin Cephalexin có chứa tá dược 50 3.4.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng phép đo (LOQ) xác định đồng thời Penicillin, cephalexin tá dược phương pháp PCR 52 3.4.4.Định tính mẫu thực tế 54 3.4.5 Định lượng mẫu thực tế 59 3.4.5.1 Xử lý mẫu sơ .59 3.4.5.2 Phân tích mẫu 60 CHƯƠNG 4.KẾT LUẬN 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 Footer Page of 148 Header Page of 148 DANH MỤC BẢNG Bảng1.1 Công thức cấu tạo số hoạt chất nhóm Penicillin Bảng 1.2.Cơng thức cấu tạo hoạt chất nhóm cephalosporin .6 Bảng 1.3.Các hệ Cephalosporin .7 Bảng 3.4.Kết ảnh hưởng tỷ lệ khối lượng mẫu/KBr đến độ hấp thụ quang số sóng đặc trưng 37 Bảng 3.5 Khảo sát độ lặp lại trình ép mẫu theo độ hấp thụ theo diện tích píc 39 Bảng 3.6.Ma trận chuẩn hàm lượng penicillin tá dược hỗn hợp 40 Bảng 3.7.Ma trận hàm lượng penicillin tá dược để kiểm tra độ mơ hình hồi qui PCR 43 Bảng 3.8.Kết sai số tương đối (%) xác định đồng thời penicillin tá dược mẫu kiểm tra phương pháp PCR 43 Bảng 3.9 Ma trận chuẩn hàm lượng Cephalexin tá dược hỗn hợp 45 Bảng 3.10 Ma trận kiểm tra cephalexin tá dược có hỗn hợp 47 Bảng 3.11.Kết sai số tương đối Cephalexin tá dược phương pháp PCR 47 Bảng 3.12 Ma trận chuẩn hàm lượng cấu tử PEN,CEP tá dược hỗnhợp .49 Bảng 3.13 Ma trận kiểm tra hàm lượng cấu tử PEN,CEP tá dược để đánh giá tính phù hợp mơ hình hồi qui 51 Bảng 3.14 Kết (%)sai số tương đối xđ đồng thời CEP,PEN tá dược phương pháp PCR .52 Bảng 3.15.Giá trị LOD, LOQ xác định đồng thời cấu tử PEN, CEP tá dược phương pháp PCR 53 Bảng 3.16 Thông tin mẫu thuốc thực tế 59 Bảng 3.17.Khối lượng mẫu bột thực tế cephalexin tá dược thêm vàohỗn hợp 60 Bảng 3.18 Khối lượng mẫu bột thực tế penicillin tá dược thêm vào hỗn hợp 61 Bảng 3.19 Hàm lượng hoạt chất CEP thực tế tìm thấy mẫu thực tế 61 Bảng 3.20 Hàm lượng hoạt chất PEN thực tế tìm thấy mẫu thực tế 62 Footer Page of 148 Header Page of 148 DANH MỤC HÌNH Hinh 1.1: Thuốc kháng sinh penicillin 24 Hình 1.2: thuốc kháng sinh cephalexin .24 Hình 3.3: Phổ hồng ngoại trung Cephalexin vùng 4000-400 cm-.1 33 Hình 3.4: Phổ hồng ngoại trung Penicillin vùng 4000-400 cm-.1 .33 Hình 3.5: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần Cephalexin vùng 7500-2800 cm-1 .34 Hình 3.6.Phổ hấp thụ hồng ngoại gần Penicillin vùng 7500-2800 cm-1 34 Hình 3.7: phổ hồng ngoại tinh bột sắn penicillin cephalexin 35 Hình 3.8: Phổ hồng ngoại Magie stearat, penicilin, cephalexin .36 Hình 3.9: Phổ hồng ngoại Talc, penicillin, cephalexin 36 Hình 3.10: Phổ tự tạo Penicillin thư viện tham chiếu .55 Hình 3.11:Phổ tự tạo cephalexin thư viện tham chiếu 55 Hình 3.12: Phổ định tính mẫu thực tế penicillin 56 Hình 3.13: Phổ định tính mẫu thực tế penicillin 56 Hình3.14 : Phổ định tính mẫu thực tế penicillin 57 Hình 3.15: Phổ định tính mẫu thực tế Cephalexin 57 Hinh 3.16: Phổ định tính thực tế Cẹphalexin 58 Hình 3.17: Phổ định tính thực tế Cephalexin .58 Footer Page of 148 Header Page of 148 BẢNG KÍ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT CLS Bình phương tối thiểu thơng thường (classical least square) ILS Bình phương tối thiểu nghịch đảo (inverse least square) PLS Bình phương tối thiểu phần (partial least square) PC Cấu tử (Principal component) UI EtOH Đơn vị quốc tế chuẩn hóa (international unit) Ethanol KLTB Khối lượng trung bình viên PCR Hồi qui cấu tử (principal component regression) PEN Penicillin AMO Amoxicillin CEP Cephalexin Tbot Tinh bột CLO Cloxacillin SPE Chiết pha rắn ACN axetonitril AMP Ampicillin Footer Page of 148 Header Page Luận 10 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Footer Page 10 of 148 Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học Header Page Luận 67 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học mau thuc te penicillin 1.4 Absorbance 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 3600 3550 3500 3450 3400 3350 3300 3250 3200 Wavenumber 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hình3.14 : Phổ định tính mẫu thực tế penicillin 2.2 mau thuc te cephalexin 2.1 2.0 Absorbance 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hình 3.15: Phổ định tính mẫu thực tế Cephalexin Chun ngành hóa phân tích Footer Page 67 of 148 57 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 68 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học 2.4 mau thuc te ce phalexin 2.3 2.2 Absorbance 2.1 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hinh 3.16: Phổ định tính thực tế Cẹphalexin 2.0 mau thuc te cephalexin 1.9 1.8 Absorbance 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hình 3.17: Phổ định tính thực tế Cephalexin Từ kết hình ảnh phổ bảng liệu phổ thu từ mẫu thực tế, nhận thấy có giống mẫu thực tế so với mẫu tự tạo Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 68 of 148 58 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 69 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học phổ thư viện tham chiếu Chứng tỏ mẫu thực tế có chứa hoạt chất cần nghiên cứu, tiến hành định lượng mẫu thực tế phương pháp nghiên cứu 3.4.5 Định lượng mẫu thực tế 3.4.5.1 Xử lý mẫu sơ Mẫu thuốc thu thập từ hiệu thuốc ghi lại thông tin mẫu bao gồm tên thuốc, nhà sản xuất, số đăng ký, tuổi thọ thành phần thuốc Bảng 3.16 Thơng tin mẫu thuốc thực tế Kí hiệu Tên thuốc Nhà sản xuất Hoạtchất – Hàm lượng Tuổi thọ Số đăng ký Cephalexin 500mg viên nang 24 tháng VD- 7067 - 09 Cephalexin Công ty cổ phần xuất nhập y tế DOMESCO Cephalexin 500mg viên nang 36 VD – 21430 - 14 tháng Công ty cổ phần Dược phẩm IMEXPHARM VIỆT NAM Cephalexin 500mg viên nang 24 tháng VD-1438-06 Ospen 1000 Sandoz GmbH 1000000UI 48 tháng VD – 2021 - 07 Penicillin V Kali Công ty dược TƯ VIDIPHA Penicillin V Kali 1000000UI Cơng ty CP Dược VTX Thanh Hóa C1 C2 Cephalexin Cơng ty cổ phần MKP hóa dược Mekohar C3 Ospexin P1 P2 P3 Phenoxymethylp enicillin Penicillin 1000000UI 1000,000UI 36 VD – 20475 - 14 tháng 24 tháng 12486 – 10 Các thuốc thu thập dạng bột đem trộn Thuốc dạng viên nén bao phim, hãng lấy 20 viên đem cân, tính khối lượng trung bình viên, đem nghiền, trộn Sau loại thuốc cân lấy lượng thích hợp có hàm lượng Chun ngành hóa phân tích Footer Page 69 of 148 59 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 70 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học nằm khoảng hàm lượng khảo sát, bổ sung thêm thành phần tá dược tương ứng với hoạt chất thu mẫu cần đo 3.4.5.2 Phân tích mẫu Mỗi mẫu thuốc lấy dạng bột mịn, cân lượng xác lượng mẫu bột cần phân tích, thêm lượng tá dược có bảng số liệu bảng 3.17 3.18 dạng ma trận (9x2) Sau tiến hành nghiền trộn đồng mẫu khoảng 10 phút, lấy 3mg mẫu trộn với 97mg KBr cối mã não, lấy khoảng 15mg mẫu đo vùng phổ hồng ngoại từ 4000-2800 cm-1 Các kết thu biểu diễn dạng ma trận độ hấp thụ quang có kích thước (9x101) ma trận tín hiệu đo độ hấp thụ quang A đo 101 số sóng, chuyển ma trận vào phần mềm matlab tính tốn Bảng 3.17.khối lượng mẫu bột thực tế cephalexin tá dược thêm vàohỗn hợp Khối lượng STT mbột viên (mg) mTá dược (mg) trung bình HL mẫu bột Tá dược thêm viên(mg) thực tế vào Lần 32,2 74,5 Lần 35,9 68,5 Lần 42,7 66,3 Lần 45,6 63,7 Lần 49,1 62,8 Lần 50,3 67,4 Lần 55,4 62,1 Lần 48,7 65,8 Lần 57,1 60,1 573,8 561,1 569,7 Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 70 of 148 Số lần đo 60 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 71 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học Bảng 3.18 Khối lượng mẫu bột thực tế penicillin tá dược thêm vào hỗn hợp STT Khối lượng trung bình viên(mg) 715,2 723,3 718,5 m bột viên (mg) mTá dược (mg) Số lần đo HL mẫu bột thực tế Tá dược thêm vào Lần 61,5 38,5 Lần 53,4 46,6 Lần 58,7 41,3 Lần 55,9 35,8 Lần 44,7 55,3 Lần 66,8 33,2 Lần 53,6 46,4 Lần 47,9 52,1 Lần 45,6 54,4 Để xác định hàm lượng thuốc tìm thấy mẫu thật có với hàm lượng mà nhà sản xuất công bố, tiến hành phân tích hai hoạt chất Penicillin cephalexin hãng sản xuất khác theo phương pháp phổ hồng ngoại gần kết hợp với thuật toán hồi qui đa biến, thu bảng kết sau: Bảng 3.19 Hàm lượng hoạt chất CEP thực tế tìm thấy mẫu thực tế Hàm lượng CEP (mg / viên) Mẫu PP hồng ngoại PP đối chứng (HPLC) HL bao bì C1 446, 3± 0,9 477,5 ± 0,4 500 C2 478,2 ± 2,1 473,9 ± 0,2 500 C3 459,4 ± 2,2 468,5 ± 0,5 500 Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 71 of 148 61 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 72 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học Bảng 3.20 Hàm lượng hoạt chất PEN thực tế tìm thấy mẫu thực tế Hàm lượng PEN (mg / viên) Mẫu PP hồng ngoại PP đối chứng (HPLC) HL bao bì P1 576,4 ± 1,6 613,1 ± 0,9 625 P2 571,9 ± 1,1 610,0 ± 0,5 625 P3 596,3 ± 2,0 604,3 ± 0,4 625 Từ kết bảng cho thấy độ chệnh phương pháp nghiên cứu hoạt chất Penicillin theo phương pháp phổ hồng ngoại gần so với kết đối chiếu bao bì lần lượt: 7,7%; 8,4%; 4,5% so với phương pháp đối chứng là: 5,9%;6,24%;1,3% Độ chệch Cephalexin so với phương pháp phổ hồng ngoại gần 10,7%;12,5%;8,7% so với phương pháp đối chứng là: 5,9%; 6,2%; 1,3% Do độ chệch qua mẫu tương đối tốt dao động vùng sai số cho phép phép đo.Vì vậy, sử dụng mơ hình PCR kết hợp phương pháp phổ hồng ngoại gần để định lượng hoạt chất thuộc nhóm thuốc kháng sinh β – lactam Từ cho thấy nghiên cứu phương pháp có ưu điểm so với phương pháp truyền thống khác trình xử lý mẫu nhanh, đơn giản, giảm chi phí phân tích sử dụng lượng nhỏ dung môi giảm tác động dung mơi đến mơi trường sống Chun ngành hóa phân tích Footer Page 72 of 148 62 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 73 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học CHƯƠNG 4.KẾT LUẬN Với mục tiêu đặt luận văn xác định mơ hình hóa tối ưu điều kiện xác định đồng thời số hoạt chất thuộc họ β – lac tam phương pháp phổ hồng ngoại gần trung kết hợp với kĩ thuật hồi quy đa biến, sau thời gian nghiên cứu đạt số kết sau: Đã lựa chọn điều kiện tối ưu xác định đồng thời Penicillin Cephalexin hỗn hợp: vùng số sóng khảo sát phổ 4000 – 2800 cm-1 Tỷ lệ khối lượng mẫu/ KBr = 3: 97 Đã xây dựng mơ hình hồi qui đa biến tuyến tính PCR xác định cho hoạt chất PEN,CEP dựa mơ hình chuẩn đánh giá tính phù hợp cho mơ hình Đã tiến hành xây dựng mơ hình hồi qui PCR xác định đồng thời hoạt chất PEN CEP hỗn hợp có mặt tá dược, kết sai số thu từ mơ hình phần lớn có sai số ≤ 10% (có sai số nằm giới hạn cho phép) Do dùng mơ hình để định lượng nhanh mẫu thuốc thực tế Giá trị LOD, LOQ cho xác định đồng thời hoạt chất PEN CEP nhỏ , giá trị LOD,LOQ thu đối PEN: 0,42 1,3 ; CEP: 0,13 0,44 Đã ứng dụng mơ hình hồi qui tuyến tính PCR kết hợp với phương pháp phổ hồng ngoại gần để xác định nhanh mẫu thuốc thực tế lưu hành thị trường Qua phân tích mẫu thực tế cho ta thấy.Từ kết bảng cho thấy độ chệnh phương pháp nghiên cứu hoạt chất Penicilli theo phương pháp phổ hồng ngoại gần so với kết đối chiếu bao bì lần lượt: 7,7%; 8,4%; 4,5% so với phương pháp đối chứng là: 5,9%;6,24%;1,3% , Độ chệch Cephalexin so với phương pháp phổ hồng ngoại gần 10,7%;12,5%;8,7% so với phương pháp đối chứng là: 5,9%; 6,2%; 1,3 Chun ngành hóa phân tích Footer Page 73 of 148 63 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 74 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y Tế (2000), Dược điển Việt Nam, xuất lần thứ 3, Nhà xuất Y học, Đại học Quốc Gia Hà Nội Bộ Y Tế (1998), Hóa dược, tập 2, nhà xuất Y học Hà Nội, Hà nội Trần Anh Duy, Tống Quốc Huy, Từ Tôn Q, Tơn Thất Thắng, Lê Thị Tiễn,Trần Minh Hồng Vũ , Tô Thị Xuân (2011), Phương pháp phổ hồng ngoại ứng dụng thực phẩm, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, Tp.Hồ Chí Minh Huỳnh Kim Diệu (2010), Thuốc kháng sinh thuộc Beta- Lactam, Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Thị Như Hoa (2012), Phân tích beta-lactam mẫu dược phẩm sinh học phương pháp HPLC, Luận văn thạc sĩ khoa học,Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên – Đại học Quốc gia Hà nội Vũ Thị Huệ (2015), Nghiên cứu định lượng số hoạt chất thuốc kháng sinh nhóm Sunfamid phương pháp phổ kế hồng ngoại gần trung bình, Luận văn thạc sĩ khoa học,Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên – Đại học Quốc gia Hà nội Nguyễn Thị Liên (2010), Nghiên cứu điều kiện tách định lượng kháng sinh họ β- lactam kỹ thuật chiết pha rắn kết hợp với phương pháp trắc quang, Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên - Đại học Quốc gia Hà nội Bùi Thị Ngát ( 2011), Nghiên cứu điều kiện tách số kháng sinh họ β – lactam kỹ thuật chiết pha rắn kết hợp với phương pháp đo phổ hấp thụ phân tử, Khóa luận tốt nghiệp,Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên Đại học Quốc gia Hà nội Nguyễn Đình Luyện (1999), Hóa dược, Nhà xuất Đại học Dược Hà Nội Chun ngành hóa phân tích Footer Page 74 of 148 64 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 75 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học 10 Nguyễn Đình Thành (2011), Cơ sở phương pháp phổ ứng dụng hóa học, Nhà xuất khoa học kỹ thuật 11 Tạ Thị Thảo, Phạm Hồng Quân, Nguyễn Xuân Trung (2010), Ứng dụng phương pháp thống kê đa biến hệ thống thông tin địa lý để đánh giá ô nhiễm kimloại nặng nước ngầm xã Nam Tân, Nam Sách, Hải Dương, 48(4), tr576-582 12 Tạ Thị Thảo (2005), Bài giảng chun đề thống kê hóa phân tích, Đại học Quốc gia Hà Nội 13 Trần Quang Thủy (2009), Xác định lượng dư Penicillin G V thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, nhà xuất Bộ Y Tế 14 Nguyễn Đình Luyện (1999), Hóa dược, Nhà xuất Đại học Dược Hà Nội 15 Tiêu chuẩn Việt Nam (1990), Thịt sản phẩm thịt – Phương pháp xác định hàm lượng Penicillin, Trung tâm kiểm dịch động vật xuất nhập Hà Nội 16 Phạm Thị Ngọc Yến, Ngô Hữu tình, Lê Tần Hùng, Ngơ Thị Lan Hương (2007), Cơ sở Matlab ứng dụng, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Tiếng Anh 17 A.P.P Cione, M.J Liberale, P.M Silva (2010), “Development and validation of analytical method for determination of an association of ampicillins in lyophilized powder for injectionby HPLC”,Química Nova, vol.33,pp.203-27 18 A.H.Moreno, H.R.N Salgado (2012), “Development and Validation of the Quantitative Analysis of Ceftazidime in Powder for Injection by Infrared Spectroscopy”,Physical Chemistry , 2(1),pp 6-11 19 A.F S.Aliments(1999), “Multiresidue analytical method for the determination of eight penicillin antibiotics in muscle tissue by ion-pair reversed-phase HPLC after precolumn derivatization”, Fresenius J Anal Chem, 82(5),pp 1083-95 20 D Vieira, P.C Ricarte, H R N.Salgado (2012), “Development and Validation of the Quantitative Analysis of Cefuroxime Sodium in Powder for Injection Chun ngành hóa phân tích Footer Page 75 of 148 65 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 76 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học by Infrared Spectroscopy”,Advances in Analytical Chemistry, 2(6), pp 8087 21 E.G.Tótoli, H Salgado (2012), “Development and Validation of the Quantitative Analysis of Ampicillin Sodium in Powder for Injection by Fourier-transform Infrared Spectroscopy (FT-IR)”,Physical Chemistry, 2(6), pp 103-108 22 E.Benito – dena, A.I Dar Ful – Rodera, M.E Leon – Gonzalez, M.C.Mereno – Rondi (2005), “Evaluation of mixed mode solid phase extration cartridges for the preconcentration of beta lactam antibio in wastewater using liquid chromatography with UV – DAD detection”, Analytical chimica acta, 556 (2), pp 415-422 23 E.F.Holthoon.P J Mulder, E O van Bennekom, H Heskamp,T Zuidema,H.A Rhijn (2010), “Quantitative analysis of penicillins in porcine tissues.milk and animal feed using derivatisation with piperidine and stable isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry”, Anal Bioanal Chem,396(8), pp 3027–3040 24 G.ParisottoI, M.F.FerrãoII, C FurtadoII, R.F.MolzII (2007),“Determination of amoxicillin content in powdered pharmaceutical formulations using DRIFTS and PLS”, Origninal papers , vol.31, Brasil 25 H.A.Martins-JúniorI, T.A KussumiI, A.Y WangII (2007), “A rapid method to determine antibiotic residues in milk using liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry”, On-line version ISSN 1678-4790 ,vol.18 no.2 São Paulo.Brazil 26 F A Iđóna, S Garriguesb, M Guardia (2006), “Combination of mid- and near-infrared spectroscopy for the determination of the quality properties of beers”,Analytica Chimica Acta, 57(2),pp 167–174 27 J.M Cha, S Yang, K.H Carlson (2006), “trace determination of beta-lactam antibiotics in surface Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 76 of 148 water and 66 urban wastewater using liquid Trường ĐHKHTN Header Page Luận 77 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học chromatography combined with electrospray tandem mass spectrometry”, J Chromatogr A, 1115(1-2), pp 46-57 28 L.K Hearn, P.P Subedi (2009), “Determining levels of steviol glycosides in the leaves of Stevia rebaudiana by near infrared reflectance spectroscopy”, Journal of Food Composition and Analysis, 22, pp 165–168 29 M.A.M Silva, M H Ferreira, J W.B Braga, M Sena (2012),“Development and analytical validation of a multivariate calibration method for determination of amoxicillin in suspension formulations by near infrared spectroscopy”, Talanta, 89 ,pp 342– 351 30 M.C Sarraguc, S O Soares, J A.Lopes (2011),“ Anear-infrared spectroscopy method to determine aminoglycosides in pharmaceutical formulations”.Vibrational Spectroscopy,56,pages 184–192 31 M.Dračková1,P.Navrátilová1,L.Hadra2,L.Vorlová1,L.Hudcová1(2009),“Deter mination Residues of Penicillin G and Cloxacillin in Raw Cow Milk Using Fourier Transform Near Infrared Spectroscopy ”,Acta Veterinaria Brno,78 ,pp 685-690 32 Msagati, T.A.M Nindi (2007),“Determination of β-lactam residues in foodstuffs of animal origin using supported liquid membrane extraction and liquid chromatography-mass spectrometry”, Food Chemistry,100 (2),Pages 836–844 33 M.J Abedin, J Fedlmnn and A.A Meharg (2002),“Uptake Kinetics of Arsenic Species in Rice Plants”, plan Physiology,Vol.128,1120 – 1128 34 S.T.H Sherazi, M Ali, S.A Mahesar (2011), “Application of Fouriertransform infrared (FT-IR) transmission spectroscopy for the estimation of roxithromycin in pharmaceutical formulations”,Vibrational Spectroscopy, 55, pages 115–118 35 S M.A ghannam (2008), “Spectrophotometric and Atomic Absorption Spectrometric Determination of Cephalexin and Cephradine in Dosage Forms ”,Journal of Food and Drug Analysis, Vol 16 No 2, Pages 19-25 Chun ngành hóa phân tích Footer Page 77 of 148 67 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 78 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học 36 W Liu, Z Zang, Zouqiu (2007).“Dertermination of lactam antibiotics in milk using micro flow chemiluminiscence sytem with on – line solid phase extraction”,Analytical Chimica Acta, 592 (2), pp 187-192 37 YanYun Li (2013), “spectral ranges of near-infrared diffuse reflectance spectroscopy of cefazolin sodium and the construction of a quantitative model for the determination of cefazolin sodium content in different crystal forms”, Science China Chemistry, vol.56, pp 789-798 Chun ngành hóa phân tích Footer Page 78 of 148 68 Trường ĐHKHTN Header Page Luận 79 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học PHỤ LỤC 1.05 3050.343 3.521 3275.673 2.133 1:99 3215.078 2.220 2918.022 0.166 2883.074 0.704 1.00 3432.162 0.436 4.714 0.95 Absorbance 0.90 0.85 0.80 0.75 0.70 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hình 1: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần mẫu có tỉ lệ khối lượng mẫu/KBr = 1:99 1.7 3048.260 8.371 3:97 3274.120 5.315 1.6 3214.056 5.320 2945.792 0.199 0.190 2914.809 2882.779 1.644 1.5 1.4 3421.558 38.518 Absorbance 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 Hình 2: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần mẫu với tỉ lệ khối lượng mẫu/KBr = 2:99 Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 79 of 148 69 Trường ĐHKHTN 2800 Header Page Luận 80 of 148 văn Thạc sỹ khoa học Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học 1.7 3048.260 8.371 3:97 3274.120 5.315 1.6 3214.056 5.320 2945.792 0.199 0.190 2914.809 2882.779 1.644 1.5 1.4 3421.558 38.518 Absorbance 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hình 3: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần mẫu với tỉ lệ khối lượng mẫu/KBr = 3:99 1.9 3050.845 10.562 4:96 3274.689 6.530 3212.711 6.030 1.8 2882.711 1.721 1.7 1.6 3421.82813.743 0.900 3434.724 Absorbance 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 Hình 4: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần mẫu với tỉ lệ khối lượng mẫu/KBr = 4:99 Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 80 of 148 70 Trường ĐHKHTN 2800 Header Page Luận 81 of 148 văn Thạc sỹ khoa học 2.6 Nguyễn Thị Ánh Tuyết- K23 Hóa Học 3043.697 16.524 6:94 3273.461 10.108 3214.716 9.940 2.4 2882.084 3.271 2.2 Absorbance 2.0 3396.121 0.672 3418.942 30.457 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 Hình 5: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần mẫu với tỉ lệ khối lượng mẫu/KBr = 6:99 3044.138 9.669 8:92 3278.504 8.136 3213.304 0.823 0.794 3186.662 2.6 2957.648 0.530 2881.242 0.682 2861.852 1.611 2.4 3419.910 3396.101 34.0770.763 2.2 Absorbance 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 3950 3900 3850 3800 3750 3700 3650 3600 3550 3500 3450 3400 3350 Wavenumber 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 Hình 6: Phổ hấp thụ hồng ngoại gần mẫu với tỉ lệ khối lượng mẫu/KBr = 8:99 Chuyên ngành hóa phân tích Footer Page 81 of 148 71 Trường ĐHKHTN 2800 ... với thuật toán hồi quy đa biến để định lượng đồng thời s? ?hoạt chất có thuốc kháng sinh thuộc họ βLactam” Với mục tiêu nghiên cứu quy trình phân tích nhóm β-Lactam phương pháp phổ hồng ngoại gần. .. ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHỔ HỒNG NGOẠI GẦN VÀ TRUNG BÌNH KẾT HƠP VỚI THUẬT TỐN HỒI QUY ĐA BIẾN ĐỂ... dụng phương pháp phổ hồng ngoại để xác định nhóm kháng sinh βLactam 19 1.3.1 Kỹ thuật đo hồng ngoại định lượng hoạt chất thuốc .19 1.3.2 Các ứng dụng phổ hồng ngoại kết hợp với