Nghiên cứu định lượng một số hoạt chất trong thuốc bằng phương pháp phổ hồng ngoại gần và trung bình

TR I H C QU C GIA HÀ N I NG I H C KHOA H C T NHIÊN - OÀN TH HUY N NGHIÊN C U NH L NG M T S HO T CH T TRONG THU C B NG PH NG PHÁP PH H NG NGO I G N VÀ TRUNG BÌNH Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã s : 60442901 TÓM T T LU N ÁN TI N S HịA H C Hà N i - 2016 Công trình đ Tr Ng ih ng c hoàn thành t i i h c Khoa h c T nhiên - ng d n khoa h c: i h c Qu c gia Hà N i PGS.TS T Th Th o TS Bùi Xuân Thành Ph n bi n 1: PGS.TS Nguy n Xuân Trung Ph n bi n 2: TS Duy Tiên Lu n án s đ H p t i tr ng c b o v tr c H i đ ng ch m lu n án ti n s c p c s i h c Khoa h c T nhiên, HQG Hà N i vào h i: .gi .phút, ngày .tháng .n m 2016 Có th tìm hi u lu n án t i: - Th vi n Qu c gia Vi t Nam - Trung tâm thông tin - th vi n i h c Qu c gia Hà N i M U Hi n nay, đ có th phát tri n b n v ng đòi h i hóa h c ph i phát tri n theo xu h ng “s ch” Trong nh ng n m 1990, khái ni m v “Hóa h c xanh” đ c đ xu t, phát tri n ph ng pháp ph h ng ngo i đ c xem m t nh ng ph ng pháp phân tích thân thi n v i môi tr ng d n tr thành ph ng pháp u vi t l nh v c phân tích hóa h c xanh Nhu c u phát tri n l nh v c hóa h c xanh t ng lên đáng k tr thành m t thách th c l n cho nhà hóa h c đ t o s n ph m m i, quy trình d ch v đ t đ c yêu c u m c tiêu xã h i, kinh t môi tr ng c p thi t s t ng nh n th c v an toàn môi tr ng, ki m tra ô nhi m môi tr ng, b n v ng sinh thái công nghi p công ngh s n xu t s ch h n toàn th gi i Cùng th i gian xu h ng phát tri n công ngh phân tích trình (PAT-Process Analytical Technology) r t đ c khuy n khích b i nhà hi p h i qu n lí d c th c ph m (FDA-Food and Drug Administration) PAT đ c xem s k t h p phân tích v i ngành công nghi p đ s n ph m m i công ngh s n xu t hi u qu PAT h th ng thi t k , phân tích ki m soát trình s n xu t, d a phép đo k p th i, quan tr ng đ đ m b o ch t l ng thu c tính c a nguyên li u, đ m b o ch t l ng cao c a s n ph m hoàn thành quy trình s n xu t PAT bao g m trình thi t k d a khoa h c xác đ nh phép đo xác c a ch t l ng s n ph m bi n trình quan tr ng có nh h ng đ n ch t l ng, thi t b đo l ng thích h p, công c công ngh thông tin th ng kê trình ki m soát làm vi c v i đ đ m b o s n xu t s n ph m cu i v i ch t l ng mong mu n M t s k thu t quang ph đ c s d ng đ xác đ nh ho t ch t tá d c khâu đ nh l ng nguyên li u ph n đ u c a trình s n xu t theo dõi b c pha tr n trình s n xu t sau trình s n xu t đ theo dõi trình Trong nhi u n m g n đây, k thu t phân tích quang ph h ng ngo i k t h p v i ph ng pháp h i quy đa bi n tr thành m t k thu t phân tích có tính ng d ng cao cho ngành công nghi p d c ph m b i m t ph ng pháp phân tích nhanh, không c n phá h y m u, không s d ng hóa ch t dung môi đ c h i ây lí l a ch n đ tài: “Nghiên c u đ nh l ng nhanh m t s ho t ch t thu c kháng sinh b ng ph ng pháp ph k h ng ngo i g n trung bình” Lu n án m t ph n ch ng trình h p tác qu c t gi a Vi t Nam Pháp v i m c đích nghiên c u phát tri n ph nag pháp quang ph h ng ngo i g n trung k t h p v i ph ng pháp h i quy đa bi n đ xác đ nh nhanh ch t l ng thu c Nghiên c u s góp ph n kh ng đ nh xu h ng đ a phép phân tích kh i nghiên c u đ n thu n áp d ng nhanh th c t , đ ng th i cho phép ti t ki m th i gian, hóa ch t đ c bi t góp ph n phát tri n k thu t phân tích xanh N i dung nghiên c u xây d ng qui trình xác đ nh ho t ch t b ng ph ng pháp ph h ng ngo i k t h p v i ph ng pháp th ng kê đa bi n, n i dung nghiên c u ch y u c a lu n án g m: Kh o sát tìm u ki n t i u c a phép đo ph h ng ngo i vùng g n trung v i ho t ch t m u t t o, m u th c t Nghiên c u l a ch n mô hình h i qui đa bi n phù h p đ xác đ nh m t ho t ch t có m t tá d c m u nghiên c u xác đ nh đ ng th i ho t ch t nhóm ch t b ng m t mô hình h i qui đa bi n n tính ánh giá thông s c a m t qui trình phân tích nhanh c s xây d ng mô hình h i qui đa bi n n tính t m u t t o có ch a ho t ch t tá d c th ng dùng ng d ng qui trình phân tích xây d ng đ c đ phân tích m t s m u thu c kháng sinh l u hành th tr ng hi n so sánh k t qu v i ph ng pháp tiêu chu n qui đ nh D c n i m m i, nh ng đóng góp m i v m t khoa h c th c ti n c a lu n án  V m t khoa h c - L n đ u tiên xây d ng đ c quy trình phân tích nhanh ho t ch t nhóm sulfamid m t s ch t thu c nhóm beta lactam (ampicillin, cefixim, cefaclor, ceftriaxone, cefotaxim) b ng ph ng pháp ph h p th h ng ngo i vùng g n trung c s s d ng mô hình h i quy đa bi n PLS PCR Quy trình cho phép phân tích không c n phá h y m u, không s d ng dung môi đ c h i, nhanh cho k t qu phù h p vi c sàn l c nguyên li u phân tích nhanh s n ph m thu c - ã xây d ng đ c quy trình phân tích đ ng th i ho t ch t nhóm thu c sulfamid beta lactam Quy trình cho phép xác đ nh đ c b t k m t ch t thu c b ng m t mô hình h i quy đa bi n, giúp cho vi c xây d ng ph n m m thi t b c m tay đ c thu n l i  V m t th c ti n - Quy trình phân tích nhanh, không t n dung môi, không đ c h i (tuy nhiên ch a lo i tr đ c nh h ng c a đ m môi tr ng) phù h p có th ng d ng sàn l c nguyên li u các s n ph m thu c M h ng nghiên c u m i đ i t ng ph c t p h n nh th c ph m ch c n ng, m u sinh h c th c ph m B c c c a lu n án Lu n án g m n m ph n là: m đ u, ch ng 1: t ng quan, ch ng 2: th c nghi m, ch ng 3: k t qu th o lu n, k t lu n Trong m i ph n có hình nh b ng bi u minh h a t ng ng, phù h p Ngoài lu n án g m đ y đ ph n: m c l c, danh m c ký hi u ch vi t t t, danh m c b ng, danh m c hình, danh m c công trình khoa h c c a tác gi liên quan đ n lu n án, tài li u tham kh o ti ng Vi t, ti ng Anh ph l c liên quan Ch ng 1: T NG QUAN 1.1 Gi i thi u v nhóm thu c kháng sinh nghiên c u 1.1.1 Nhóm thu c kháng sinh Sulfamid Các sulfamid kháng khu n d n ch t c a p- aminobenzensulfonamid, có công th c c u t o chung là: R2 HN SO2 NH R1 Hình 1.1: Công th c c u t o chung c a nhóm Sulfamid Trong th ng g p R2 H, c ng ch R2 H sulfamid m i có ho t tính kháng khu n, R2 ≠H, ch t ti n thu c R1 có th m ch th ng, d vòng Tuy nhiên, n u R1 d vòng hi u l c kháng khu n m nh h n, thông th ng d vòng – d t Khi R1 R2 đ u g c hidro thu đ c sulfamid có c u t o đ n gi n nh t (sulfanilamid) Sulfamid d ng tinh th màu tr ng ho c màu vàng nh t tr prontosil, không mùi, th ng tan n c, benzen, chloroform Sulfamid tan dung d ch acid vô c loãng hydroxyd ki m (tr sulfaguanidin) H u h t Sulfamid đ u có tính ch t l ng tính: tính acid th hi n có H Namid linh đ ng (tr sulfaguanidin) có tính baz có nhóm amin th m t do, nên tan dung d ch acid 1.1.2 Nhóm thu c kháng sinh h - lactam Các kháng sinh mà phân t có c u trúc azetidin-2-on (vòng -lactam)m t amid vòng c nh G m nhóm : penicillin, cephalosporin, monobactam, cacbapenem Trong nhóm s d ng ph bi n l n nh t penicillin cephalosporin Hình 1.2: Công th c c u t o c a Azetidin-2-on( beta-lactam) Nhóm penicillin: Các penicillin đ u có c u trúc c b n g m vòng: vòng thiazolidin, vòng -lactam S R CO N H CH3 N CH3 O COOM Hình 1.3: Công th c c u t o chung c a kháng sinh nhóm penicillin Nhóm cephalosporin Các cephalosporin c u trúc chung g m vòng: vòng -Lactam c nh g n v i d vòng c nh, nh ng cacbon b t đ i có c u hình 6R, 7R Khác b i g c R R2 S R1 CO N H N5 O R3 COOM Hình 1.4: Công th c c u t o chung c a kháng sinh nhóm cephalosporin D a vào kh kháng khu n, chia cephalosporin thành th h Các cephalosporin th h tr c tác d ng vi khu n gram d ng m nh h n, nh ng gram âm y u h n th h sau Các -lactam th ng d ng b t k t tinh màu tr ng ngà, d ng axit tan n c, d ng mu i natri kali d tan; tan đ c metanol m t s dung môi h u c phân c c v a ph i Tan dung d ch axit ki m loãng đa ph n ch a đ ng th i nhóm -COOH -NH2, có C b t đ i t o góc quay c c D, có kh n ng th UV ng d ng TLC, HPLC (đ nh tính, th tinh t, t p liên quan, đ nh l ng) có h p th h ng ngo i ch a nhi u nhóm ch c c c đ i h p th ch y u nhân phenyl, tùy vào c u trúc khác làm d ng ph thay đ i (đ nh ph , vai, s d ch chuy n sang b c sóng ng n ho c dài, gi m đ h p th ) 1.2 Các ph ng pháp phân tích đ nh tính ho t ch t kháng sinh thu c Ph ng pháp s c ký l p m ng 1.3 Các ph ng pháp phân tích đ nh l ng ho t ch t kháng sinh thu c 1.3.1 Ph ng pháp chu n đ th tích Quy trình t n nhi u th i gian, n u nguyên li u hay ch ph m có l n t p ch t s nh h ng đ n k t t a có tính ch n l c không cao Tuy nhiên ph ng pháp d th c hi n phòng thí nghi m v i quy mô nh 1.3.2 Ph ng pháp tr c quang Ph ng pháp đo quang ph ng pháp phân tích d a tính ch t quang h c c a ch t c n phân tích nh tính h p th quang tính phát quang Các ph ng pháp đ n gi n d ti n hành thông d ng đ c ng d ng nhi u xác đ nh -lactam đ c bi t d c ph m nhiên đ ch n l c không cao, đ nh y kém, n ng đ ch t phân tích cao 1.3.3 Ph ng pháp n hóa M t s ph ng pháp n hóa đ c ng d ng đ phân tích lactam nh ng không ph bi n nhi u Ph ng pháp có tính ch n l c cao, gi i h n phát hi n th p, đ xác cao nh ng khó ng d ng phân tích đ ng th i 1.3.4 Ph ng pháp n di mao qu n- capillary electrophoresis (CE) Ph ng pháp đ c ng d ng đ tách xác đ nh kháng sinh lactam nhi u m u đ i t ng khác Ph ng pháp có đ thu h i cao, gi i h n phát hi n th p, đ l ch chu n th p nh ng vi c chu n b m u ph c t p 1.3.5 Ph ng pháp s c kí l ng hi u n ng cao Ph ng pháp s c ký l ng hi u n ng cao ph ng pháp ph bi n có kh n ng tách đ nh l ng đ ng th i ch t có đ phân c c g n nhau,có đ xác, đ nh y cao, gi i h n phát hi n th p đ c áp d ng r ng rãi đ xác đ nh ho t ch t kháng sinh s n ph m d c ph m Tuy nhiên ph ng pháp đ c s d ng thi t b đ t ti n, t n dung môi, th i gian làm s ch n đ nh sau m i l n ch y lâu 1.4 Ph ng pháp phân tích ph h ng ngo i k t h p v i thu t toán h i quy đa bi n phân tích ho t ch t kháng sinh thu c 1.4.1 Nguyên t c c a ph ng pháp đo ph h ng ngo i 1.4.1.1 S xu t hi n c a ph h ng ngo i Ph h ng ngo i ph c a phân t nhóm phân t xu t hi n d i tác d ng c a chùm sáng kích thích có n ng l ng phù h p ( t ng tác không đàn h i) n m vùng h ng ngo i (IR), làm cho n t hóa tr liên k t c a nguyên t phân t b kích thích, chuy n lên m c n ng l ng cao E1 ng th i, phân t , nhóm phân t , nguyên t quay dao đ ng Ba trình sinh ph h p th h ng ngo i c a ch t d i tác d ng c a chùm sáng kích thích 1.4.1.2 Nguyên t c c a phép đo ph h ng ngo i Các ch t tr ng thái r n, l ng, khí,khi b kích thích b ng m t chùm sáng có n ng l ng phù h p( t ng tác không đàn h i) có th sinh ph h ng ngo i IR c a Do đó, mu n đo ph IR c a m t ch t ta ph i th c hi n qua b c:  Chu n b m u đo:  Ngu n kích thích ph  Máy đo ph  ánh giá ph + Các y u t nh h ng đ n tín hi u đo ph h ng ngo i Có nhi u y u t gây nh h ng đ n tín hi u đo ph h ng ngo i bao g m nh h ng c u trúc c a phân t ( h ng s l c hóa tr , s thay th đ ng v , hi u ng electron, y u t không gian, liên k t hidro n i phân t ), nh h ng t ng tác gi a phân t , nh h ng c a quy trình chu n b m u nh h ng c a môi tr ng Tuy nhiên, v i tr ng thái t n t i khác c a m u y u t nh h ng tác đ ng đ n m u đo khác V i m u r n vi c chu n b m u r t quan tr ng Do m u r n có hi n t ng tán x ánh sáng làm gi m c ng đ h p th c a m u làm m t nh ng thông tin hóa h c Vì v y vi c làm gi m tán x c a m u đ n m c t i thi u c n thi t Khi chu n b m u ta ph i đ m b o yêu c u c a m u đo có kích th c h t nh , phân tán đ ng đ u, b m t nh n, trong, m ng M t khác, đ i v i ph truy n qua thông th ng đ c áp d ng b ng đ nh lu t Beer, nh ng v i ph ng pháp phân tích ph h ng ngo i cho m u r n có s sai l ch đáng k n ng đ c a ch t h p th cao n m kho ng n tính c a đ nh lu t Ngay c n ng đ th p kho ng n tính c a đ nh lu t hi n t ng tán x ánh sáng c ng gây nên s sai khác nên đ th thu đ c bi u di n m i t ng quan gi a n ng đ đ h p thu quang c ng hi m qua g c t a đ M t nguyên nhân n a n đ nh lu t Beer không th áp d ng vi c đ nh l ng m u r n b ng ph ng pháp ph h ng ngo i ph h p th c a ch t n m vùng h p ch a đ nh đ c tr ng nên th ng h p h n d i ph h ng ngo i đ c l a ch n đo đ nh l ng có s sai l ch phi n ánh sáng Khi hi u ch nh b ng h i quy đa bi n vi c hi u ch nh t t nh t cho bi n n ng đ cao hay th p ti n g n đ n giá tr trung bình ta ph i phân b t p s li u đ ng đ u Do đó, l p ma tr n n ng đ c n phân b đ ng đ u n ng đ t cao đ n th p Ngoài ra, y u t nh h ng c a đ m môi tr ng xu t hi n pic c a n c vùng sóng 3450cm-1 nên chu n b m u đo c n gi m u đo ch t n n khô i v i m u khí l ng nh h ng hi n t ng tán x ánh sáng r t ít, mà tín hi u đo l i b nh h ng c a liên k t hidro n i phân t , hi u ng electron, y u t không gian, nh h ng t ng tác gi a phân t , nh h ng c a đ m n c t o li n k t hidro hay t ng tác v i ch t phân tích làm gi m c ng đ đ nh đ c tr ng làm m t thông tin hóa h c liên quan đ n ch t phân tích 1.4.2 nh l ng ch t b ng ph ng pháp ph h ng ngo i k t h p v i chemometrics Ph ng pháp ph h ng ngo i k t h p v i chemometric m m t k nguyên m i cho phép phân tích nhanh, hi u qu , thân thi n v i môi tr ng- công ngh hóa h c xanh Tuy nhiên, v n m t h ng nghiên c u kh m i m th gi i T i n c nh M , Anh c ng có gi i thi u thi t b c m tay đ xác đ nh thu c gi Các thi t b đ u có u m g n nh , nh ng có h n ch đo ch t n n khác th ng không đ a đ c k t qu có đ xác cao Ph n m m c s d li u c a chúng l i không cho phép can thi p nên khó kh n vi c b sung thêm c s d li u Do vi c nghiên c u phát tri n ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n trung bình k t h p v i thu t toán h i quy đa bi n đ ki m tra nhanh ch t l ng thu c m t v n đ vô c n thi t Hi n t i ch a có m t nghiên c u v đ nh l ng nhanh nhóm Sulfamid b ng ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n trung bình đ c công b ây c s đ l a ch n ti n hành nghiên c u đ nh l ng m t s ho t ch t thu c kháng sinh thu c nhóm Sulfamid b ng ph ng pháp quang ph k h ng ngo i g n trung bình Nh v y, đ đ nh l ng nhanh ho t ch t thu c b ng ph ng pháp ph h ng ngo i ta ph i k t h p v i chemometric có nhi u y u t nh h ng đ n tín hi u ph trình chu n b m u, nh h ng đáng k c a tá d c, nh h ng c a đ m môi tr ng s sai l ch c a đ nh lu t Lambe – Bia Vi c đ nh l ng c n ti n hành m u chu n m u t t o có tá d c ho c m u chu n đ c xác đ nh hàm l ng b ng HPLC K thu t đo đ c áp d ng k thu t đo h p th bi n đ i Fourier Ch ng 2: TH C NGHI M 2.1 Hóa ch t thi t b 2.2 i t ng, n i dung nghiên c u ph ng pháp nghiên c u 2.2.1 i t ng nghiên c u - Các ho t ch t: + Nhóm lactam penicilin: Penicilin, Ampicillin, Amoxicillin + Nhóm lactam cephalosporin: Th h 1: Cefadroxil, Cephalexin Th h 2: Cefaclor Th h 3: Cefixime, Ceftriaxon, Cefotaxime + Nhóm sulfamid: Sulfaguanidin, Sulfamethoxazol +Ho t ch t kèm v i nhóm sulfamid Trimethoprim - Các đ i t ng m u th c t ti n hành nghiên c u 2.2.2 Ph ng pháp nghiên c u 2.2.2.1 Nguyên t c phân tích đ nh l ng b ng h ng ngo i g n trung bình xác đ nh hàm l ng ho t ch t thu c c n ph i ti n hành tu n t b c sau: Chu n b m u chu n t t o d ng r n đ xác đ nh t ng ho t ch t: cân ho t ch t tá d c khác v i t l kh i l ng phù h p, sau nghi n tr n đ u đ đ ng nh t Ti n hành đo ph h p th h ng ngo i truy n qua c a m u chu n u ki n phù h p vùng ph h ng ngo i g n trung thu đ c ma tr n tín hi u đ h p th quang A theo s sóng Xây d ng mô hình h i qui đ xác đ nh ho t ch t thu c d a mô hình đ c xây d ng t ma tr n đ h p th quang c a 20-30 m u chu n dùng đ xây d ng mô hình h i qui đa bi n ma tr n n ng đ có ch a ch t phân tích tá d c Trên ph n m m matlab, x lí s li u theo ph ng pháp PCR, CLS, ILS PLS Ki m tra đ xác c a mô hình thông qua phân tích 10-15 m u chu n t t o, đánh giá sai s t ng đ i h s t ng quan đ l a ch n mô hình phù h p Phân tích m u th c t c s vecto đ h p th quang mô hình đa bi n n tính + Nhóm Cefalosporin: magie stearate, b t talc, natriglycolat starch, natrilaurysulfat, lactose Ti n hành l y l n l t mg t ng tá d c tr n v i 98 mg KBr, nghi n m n đ ng nh t t ng m u c i mã não 10 phút L y kho ng 15 mg l ng b t v a nghi n đ c cho vào b ép viên đ thu đ c m u viên c a tá d c, sau đem đo ph h ng ngo i c a m u vùng ph t 3600-2800 cm- Quan sát ph h p th h ng ngo i ta th y, tá d c kh o sát đ u có h p th h ng ngo i vùng ph kh o sát 3600-2800 cm-1 Do không th xác đ nh riêng r ho t ch t có m t c a lo i tá d c nh h ng c a tá d c vùng kh o sát s đ c lo i tr b ng cách phân tích đ ng th i c tá d c ho t ch t m u s d ng thu t toán h i qui đa bi n 3.1.3 Kh o sát t l kh i l ng m u /KBr kh o sát l a ch n t l kh i l ng m u/ KBr phù h p ti n hành kh o sát v i m u thu c ch a m t ho t ch t ( m u thu c viên Cephalexin – ch a ho t ch t Cephalexin 500mg m t viên) m u thu c ch a hai ho t ch t (m u thu c viên Bisepton - ch a hàm l ng sulfamethoxazol 400 mg trimethoprim 80 mg m t viên) Ti n hành tr n b t thu c c a m u thu c viên v i KBr theo t l kh i l ng m u KBr x/y v i x= 1-10 y = 100- x Chúng nh n th y t l kh i l ng m u/ KBr t ng đ h p th quang c a m u viên c ng t ng lên Tuy nhiên đ h p th quang cao đ l p l i c a phép đo M t khác, n u l ng m u đ a vào nh d gây sai s trình cân, l a ch n t l m u/ KBr 2/98 cho nh ng nghiên c u ti p theo 3.1.4 Kh o sát kh i l ng m u đem ép viên đ l p l i c a trình ép viên L ng m u ép viên nh h ng đ n b dày viên, có nh h ng tr c ti p đ h p th quang c a ho t ch t Trong nghiên c u này, có kh o sát l ng m u đem ép viên t 10mg, 15mg, 17mg 20 mg Nh n th y r ng, l ng m u đem ép viên t ng kéo theo đ h p th t ng Tuy nhiên, cân l ng ép viên 10mg , viên b r n, n t V i l ng m u đem ép viên l n (20mg) đ h p th quang cao gây sai s Vì v y, ch n l ng m u đem ép viên 15 mg 11 3.1.5 Nghiên c u đánh giá nh h ng c a đ m m u m không khí m t nh ng y u t quan tr ng gây nh h ng tr c ti p đ n kh n ng h p th h ng ngo i c a ch t Ti n hành kh o sát nh h ng đ m b ng cách chu n b m u t t o g m Cefixim tá d c có thành ph n kh i l ng nh Trong đó, m u đ c chu n b t i nhi t đ , đ m c a phòng (45%, 30C) m t m u sau chu n b v i u ki n v i m u 1, đ c s y chân không( 50C, 500MPa ) Sau kh o sát đ m đ i t ng Cefixim th y r ng đ m làm t ng giá tr đ h p th quang A Do đó, có th k t lu n đ m m u có nh h ng đ n k t qu đo K t lu n: T kh o sát u ki n t i u cho phép đo l a ch n đ c: - Vùng ph đo m u: 3600 -2800 cm-1 - T l kh i l ng m u/KBr = 2/98 dày viên: 15mg - Tá d c thành ph n m u đo: + Nhóm Sulfamid: Tinh b t s n, maltodextrin canxiphosphat + Nhóm Penicillin: Sodium starch glycolate, magiesi stearate + Nhóm Cefalosporin: Magie stearate, b t talc, natriglycolat starch, natrilaurysulfat, lactose m không khí 30- 45% 3.2 Nghiên c u l a ch n mô hình h i quy đa bi n xác đ nh t ng ho t ch t kháng sinh thu c K t qu kh o sát u ki n đo m c 3.1 cho th y ho t ch t nghiên c u đ u h p th ánh sáng m nh vùng sóng 3600 - 2800cm-1, tá d c đóng góp đáng k vào giá tr đ h p th quang đo đ c Ngoài ra, đ đ ng đ u, kích th c h t, b m t nh n c a viên, đ dày viên ép khác làm cho tín hi u đo c a m t m u sau m i l n đo không l p l i Vì v y, đ đ nh l ng nhanh ho t ch t kháng sinh có l n tá d c ph i k t h p phân tích ph h ng ngo i k t h p v i h i quy đa bi n T nguyên t c c a mô hình h i quy đa bi n ta nh n th y r ng mô hình CLS tính toán d a giá tr đ h p th quang theo s sóng toàn d i ph t p s li u thô ban đ u, v i mô hình ILS phù h p v i t p s li u nh ch s d ng m t s giá tr đ h p th t i m t s s sóng đ c tr ng khác V i hai mô hình PCR PLS tính toán c s t i u hóa c s d li u, lo i b nhi u b ng cách tìm s PC phù h p Sau x lí t p d li u theo mô hình h i quy, d a h s t ng quan R2, RMSE đ đánh giá l a ch n mô hình phù h p đ phân tích đ nh l ng 12 3.2.1 Ma tr n m u chu n ma tr n m u ki m tra xác đ nh ho t ch t cefixim có m t tá d c Ti n hành chu n b 30 m u chu n (g m 20 m u chu n làm ma tr n chu n 10 m u chu n đ làm ma tr n ki m tra) ch a h n h p g m cefixim v i b n tá d c magie stearate, b t talc, natriglycolat starch, natrilaurysulfat theo nh quy trình phân tích m c 2.2 v i hàm l ng (%) kh i l ng thay đ i theo b ng 3.6 3.7 o ph h ng ngo i h p th c a m u vùng ph t 3600-2800 cm-1, ghi l i đ h p th quang c a t ng m u theo s sóng L u l i k t qu d i d ng ma tr n tín hi u đo có kích th c (20x417) (10x417) đ xây d ng mô hình h i qui D li u đ h p th quang đ c ghi vào đ a CD – ph l c 3.2.2 Nghiên c u xác đ nh cefixim có tá d c b ng ph ng pháp CLS ILS CLS tính toán t p s li u ban đ u đ tìm ma tr n h s K: Y0nxk = X0nxm Kmxk Trong n s m u đ xây d ng mô hình h i quy đa bi n (n=20), k s sóng (k=417), m s c u t c n phân tích (m=1); K ma tr n h s , v i h i qui đa bi n K đ c tính nh sau: K= (X0tX0)-1X0tY0 X0t ma tr n chuy n v c a ma tr n X T ng t ILS tính toán t p ma tr n tín Y0 hi u đ h p th quang A đ tìm ma tr n h s K theo công th c X0nxm =Y0nxk Pkxm Trong n s m u n=20, m s c u t m=1, k s b c sóng k=417, P ma tr n h s đ c tính P=(Y0tY0)-1Y0tX0 Sau x lí s li u th y r ng ph ng pháp CLS, đ c tính s li u đ h p th quang s li u thô ban đ u nên k t qu phân tích s b nh h ng tr c ti p b i đ l n giá tr đ h p th quang A Các k t qu cho th y, s sai khác gi a hàm l ng th c hàm l ng tính đ c t mô hình không l n v i m u ki m tra có th thành ph n tá d c m u gi ng v i m u chu n có tín hi u t ng ng v i mô hình h i qui nên Tuy nhiên, phân tích m u th c t , n u nhà s n xu t thay đ i thành ph n tá d c k t qu sai s s t ng lên V i ph ng pháp ILS, hàm l ng thu đ c s âm ch ng t d i gi i h n phát hi n c a ph ng pháp i u có th mô hình ch s d ng m t s giá tr đ h p th t i m t s s sóng ch n ng u nhiên (mà có th t i tín hi u đo) nên gây ngu n sai s l n 13 Do v y không nên s d ng hai ph ng pháp CLS ILC phân tích đ nh l ng b ng ph IR 3.2.3 Nghiên c u xác đ nh cefixim có l n tá d c theo ph ng pháp PCR PCR tính toán theo b c sau :  X lý PCA: - Tìm ma tr n tr ng s (PCAloading) ma tr n tr s (PCAscore) t ma tr n tín hi u (đ h p th quang) - Tìm s PC phù h p c a ma tr n tín hi u X - Tìm ph ng trình h i qui bi u di n m i quan h gi a ma tr n hàm l ng ma tr n tr ng s , ma tr n tr s c a PC - Tính l i hàm l ng c a ho t ch t cefixim m u chu n t t o - Ki m tra tính xác c a mô hình h i qui đa bi n C n c vào k t qu x lí s li u th y r ng k t qu t t, l p l i ma tr n ban đ u v i s PC b ng ma tr n đ o hàm b c v i s PC Các ma tr n đ u có th s d ng làm mô hình chu n v i s PC t i u khác đ đ nh l ng nhanh cefixim có l n tá d c m u thu c thành ph m 3.2.4 Xác đ nh cefixim có l n tá d c theo ph ng pháp pháp PLS Tính toán PLS theo b c sau : Tìm ma tr n tr s (score matrices) ma tr n tr ng s (loading matrices), tìm h s h i quy “BETA” - Tìm s PC theo ma tr n X Y - Tìm m i t ng quan gi a X Y theo s PC v a tìm đ c ta đ c “BETA” - Tính l i hàm l ng cefixim m u chu n t t o - Ki m tra tính xác c a mô hình h i qui đa bi n V i mô hình PLS xây d ng t p s li u l ma tr n ph đ o hàm b c m t ma tr n b c hai cho ta k t qu kh quan h n r t nhi u s PC=2, có s phù h p l n v hàm l ng tìm đ c v i hàm l ng ban đ u ma tr n chu n nh ng sai khác r t l n ma tr n ki m tra Khi s PC b ng k t qu đ u t t m u chu n m u ki m tra V y ta có th l a ch n mô hình đ o hàm b c mô hình đ o hàm b c v i s PC b ng ho c theo ph ng pháp PLS làm mô hình chu n xác đ nh cefixim thu c thành ph m 14 Nh v y đ i v i h p ch t b t k , đ xác đ nh b ng ph ng pháp ph IR két h p v i thu t toán PLS, vi c xây d ng mô hình chu n c n ti n hành theo b c sau đây: - S d ng ma tr n hàm l ng (c a m u chu n t t o) ma tr n tín hi u ban đ u tìm s PC tính l i hàm l ng ho t ch t m u chu n b t đ u v i s PC cho t ng ph ng sai tích l y đ t 95%, cho đ n h s t ng quan h s bi n thi n (RMSES) đ t yêu c u (R>0,9 RMSES 0,95 Khi xác đ nh sulfaguanidin m u chu n ki m tra (t t o) v i s PC t i u theo ph ng pháp PLS, h s t ng quan hàm l ng tìm đ c v i hàm l ng bi t tr c R> 0,95 v i ma tr n ban đ u không c n đ o hàm 23 Hai thu t toán h i qui đa bi n PCR PLS c ng đ c s d ng thành công đ xác đ nh đ ng th i m t s kháng sinh nhóm ch t, g m: sulfaguanidin, sulfamethoxazol trimethoprim; cephalexin, cefaclor cefadroxil; penicilin, ampicilin amoxicilin; cefotaxim ceftriaxon; cefixim cefadroxil; v i h s t ng quan R bi u th hàm l ng tìm đ c hàm l ng bi t tr c m u chu n ki m tra đ t t 0,83 đ n 0,99 Các mô hình đ c b t đ u v i s PC t (thông th ng ch n t PC mà t ng % ph ng sai tích l y đ t 95% tr lên) cho đ n cho h s t ng quan R >0,95 N u ch a đ t s ti n hành v i ma tr n tín hi u đ o hàm b c b c hai Các đ u cho k t qu r t phù h p v i hàm l ng bi t tr c m u ki m tra mà không c n đ o hàm ph Riêng phép xác đ nh đ ng th i penicilin cephalexin c n ti n hành ph đ o hàm b c v i s PC=5 m i cho k t qu phù h p ã xây d ng đ c qui trình đ nh tính đ nh l ng nhanh ho t ch t kháng sinh thu c viên nén thu c b t pha tiêm b ng ph ng pháp IR c s mô hình xác đ nh đ ng th i M u r n ch c n nghi n nh , tr n v i KBr đo ph IR mà không c n x lý m u D li u ph IR toàn ph n vùng ph kh o sát đ c chuy n vào ph n m m Matlab R2015 v i câu l nh t l p K t qu áp d ng mô hình h i quy đa bi n n tính PCR PLS cho th y đ l ch k t qu tìm đ c b ng ph ng pháp nghiên c u v i ph ng pháp đ i ch ng theo d c n Vi t Nam ho c ph ng pháp tham chi u LC-MS ch kho ng 0,2%-11,8% tùy m u Nghiên c u cho th y có th xây d ng m t mô hình h i qui ch a đ ng th i ch t nh ng xác đ nh đ c m t ho t ch t thu c  H ng phát tri n ti p c a đ tài: Các k t qu nghiên c u ban đ u b ng cách ghép s li u ma tr n hàm l ng c a 12 ch t làm vào m t ma tr n hàm l ng (trong m u chu n ch t phân tích hàm l ng nh p vào b ng 0) v i ma tr n s li u đ h p th quang t ng ng cho th y có s phù h p r t t t gi a k t qu phân tích v i hàm l ng bi t tr c m u ki m tra i u m h ng phát tri n ti p theo c a đ tài v vi c xây d ng ngân hàng m u chu n theo cách c p nh t thông tin ph t ng m u đ xác đ nh ch t khác m u r t thu n l i đ có th phát tri n thi t b đo hi n tr ng Thành công c a nghiên c u góp ph n vào vi c phát tri n m t ph ng pháp phân tích đ n gi n, nhanh, x lí m u đ n gi n không s d ng dung môi đ c h i h ng t i t ch t o đ c thi t b phân tích t i hi n tr ng 24 DANH M C CÁC CÔNG TRÌNH KHOA H C C A TÁC GI LIÊN QUAN N LU N ÁN T Th Th o, oàn Th Huy n, Bùi Xuân Thành (4/2016) ng d ng ph ng pháp h i quy đa bi n n tính đ phân tích đ ng th i ch t h n h p, K y u h i th o khoa h c tr ng ih c S ph m Hà N i, tr.364-376 oàn Th Huy n, T Th Th o, Bùi Xuân Thành, V Th Hu Nghiên c u phát tri n ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n đ nh l ng nhanh ho t ch t Sulfaguanidin thu c viên nén T p chí phân tích Hóa, Lý Sinh h c, 21(1/2016), tr.153-162 T Th Th o, Bùi Xuân Thành, V Th Hu , oàn Th Huy n nh l ng đ ng th i Sulfaguanidin, Sulfamethoxazol Trimethoprim thu c viên nén s d ng mô hình h i quy c u t (PCR) t d li u ph h ng ngo i g n T p chí phân tích Hóa, Lý Sinh h c, 21(2/2016), tr.127-134 oàn Th Huy n, Nguy n Thu Th o, Bùi Xuân Thành, T Th Th o nh l ng đ ng th i cefotaxime Ceftriaxone thu c b t pha tiêm b ng ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n k t h p v i mô hình bình ph ng t i thi u t ng ph n(PLS), T p chí khoa h c, i h c H Qu c Gia Hà N i, Vol 32, No tr.167-174 oàn Th Huy n, Nguy n Ph ng Hoa, Bùi Xuân Thành, T Th Th o Nghiên c u đ nh l ng nhanh cefadroxil, cephalexin, cefaclor thu c viên nén b ng ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n đ i ch ng b ng ph ng pháp s c kí l ng kh i ph LC MS, T p chí Hóa, lý Sinh h c, 21(3/2016), tr.94-101 XUAN-THANH BUI, THI HUYEN DOAN,ANH-TUYET THI NGUYEN,THI-THAO TA,DOUGLAS N RUTLEDGE,SI-HUNG LE “FTIR combined with chemometric for fast simultaneous determination of Penicillin and Cefalexin in medicine” Indian Chemical Society (đã xác nh n đ ng) ... ngo i g n trung bình Lu n án m t ph n ch ng trình h p tác qu c t gi a Vi t Nam Pháp v i m c đích nghiên c u phát tri n ph nag pháp quang ph h ng ngo i g n trung k t h p v i ph ng pháp h i quy... vi c nghiên c u phát tri n ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n trung bình k t h p v i thu t toán h i quy đa bi n đ ki m tra nhanh ch t l ng thu c m t v n đ vô c n thi t Hi n t i ch a có m t nghiên. .. Sulfamid b ng ph ng pháp quang ph h ng ngo i g n trung bình đ c công b ây c s đ l a ch n ti n hành nghiên c u đ nh l ng m t s ho t ch t thu c kháng sinh thu c nhóm Sulfamid b ng ph ng pháp quang ph