Phần chiết n-hexan (15 g) đƣợc phân tách bằng sắc ký cột thƣờng (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 µm). Mẫu đƣợc đƣa lên cột theo phƣơng pháp tẩm mẫu trên silica gel. Rửa giải sắc ký với n-hexan và hệ dung môi gradient n-hexan-axeton
với các tỷ lệ 49:1, 29:1, 19:1, 12:1, 9:1, 3:1 và 2:1 (v/v) đƣợc 31 phân đoạn, mỗi phân đoạn 100 ml. Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau đƣợc gộp lại và cất loại dung môi dƣới áp suất giảm cho 9 nhóm phân đoạn CTH1 (các phân đoạn 1-6),
CTH2 (7-11), CTH3 (12-15), CTH4 (16-17), CTH5 (18-21), CTH6 (22-25),
CTH7 (26-28), CTH8 (29-31) và CTH9 (32-34).
Nhóm phân đoạn CTH3 (2,6 g) đƣợc rửa bằng n-hexan cho các tinh thể hình kim màu trắng CTH3 (chất I) (0,41 g).
Nhóm phân đoạn CTH5 (5,06 g) đƣợc rửa bằng n-hexan sau đó rửa với hệ dung môi n-hexan-axeton 5:1, sau đó kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim không màu CTH5 (chất II) (27 mg).
Dịch rửa của nhóm phân đoạn CTH5 đƣợc tinh chế bằng sắc kí cột nhanh (FC) gradient trên silica gel với n-hexan và n-hexan-axeton 19:1, 12:1, 9:1, 5:1 và 3:1. Các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau đƣợc gộp lại thành 4 nhóm phân đoạn từ CTH5.1 đến CTH5.4. Nhóm phân đoạn CTH5.2 (0,43 g)đƣợc rửa bằng n-
hexan-axeton, sau đó đƣợc kết tinh lại trong axeton cho tinh thể hình kim không màu CTH5.2. Phân tích TLC và co-TLC cho thấy chất CTH5.2 là chất II (33 mg).
Nhóm phân đoạn CTH6 (2,02 g) đƣợc tinh chế bằng Mini-C trên silica gel (40-63 µm) với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton 4:1, 3:1 và 1:1. Qua phân tích TLC các phân đoạn đƣợc gộp thành 5 nhóm phân đoạn từ CTH6.1 đến CTH6.5. Nhóm phân đoạn CTH6.4 đƣợc rửa với hệ dung môi n-hexan-axeton, sau đó kết tinh lại trong hệ dung môi điclometan-axeton cho tinh thể hình kim màu trắng
CTH6.4 (chất III) (15 mg).
Nhóm phân đoạn CTH9 đƣợc rửa bằng MeOH cho chất bột màu trắng, khó tan trong các loại dung môi CTH9 (chất IV) (73,4 mg).
Quá trình phân tách phần chiết n-hexan đƣợc trình bày trong Sơ đồ 2, Mục 4.3, Chƣơng 4: Kết quả và Thảo luận.