Phần chiết điclometan (CTD) (9 g) đƣợc phân tách bằng sắc ký cột (CC) trên silica gel (Merck, 0,063-0,2 mm), kích thƣớc cột 2 x 30 cm. Mẫu đƣợc đƣa lên cột theo phƣơng pháp tẩm mẫu trên silica gel. Rửa giải sắc ký với n-hexan và hệ dung môi gradient n-hexan-axeton 27:1, 19:1, 12:1, 9:1, 6:1 và 3:1 (v/v) cho 67 phân đoạn, mỗi phân đoạn 20 ml. Các phân đoạn có TLC giống nhau đƣợc gộp lại và cất loại dung môi dƣới áp suất giảm cho 6 nhóm phân đoạn CTD1 (các phân đoạn 2-6),
CTD2 (7-15), CTD3 (16-26), CTD4 (27-41), CTD5 (42-58) và CTD6 (59-67). Nhóm phân đoạn CTD1 (0,9 g) đƣợc rửa bằng n-hexan để loại bớt dầu, sau đó đƣợc tinh chế nhiều lần bằng Mini-C trên silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải với
n-hexan và hệ dung môi n-hexan-axeton 49:1, 19:1, 9:1, 6:1 và 3:1 cho các chất
CTD1.1 (chất V) (7,5 mg) và CTD1.2 (chất VI) (5 mg) dƣới dạng tinh thể màu trắng.
Nhóm phân đoạn CTD2 (0,86 g) đƣợc rửa bằng n-hexan cho các tinh thể hình kim màu trắng CTD2 (0,47 g). Phân tích TLC và co-TLC cho thấy chất này là chất I đƣợc phân lập từ CTH3.
Nhóm phân đoạn CTD4 (0,65 g) đƣợc rửa bằng n-hexan và hệ dung môi n-
hexan-axeton sau đó đƣợc kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim không màu CTD4 (0,21 g). Phân tích TLC cho thấy các tinh thể này là chất II đã đƣợc phân lập từ nhóm phân đoạn CTH5.
Nhóm phân đoạn CTD5 (1,5 g) đƣợc tinh chế trên silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau đƣợc gộp lại cho 5 nhóm phân đoạn từ CTD5.1
đến CTD5.5. Nhóm phân đoạn CTD5.2 (0,18 g) đƣợc rửa với hệ dung môi n-
hexan-axeton cho các tinh thể hình kim màu trắng CTD5.2.1 (chất VII) (2 mg). Phần dịch rửa tiếp tục đƣợc tinh chế tiếp bằng Mini-C trên silica gel cỡ hạt 15-40 µm, với hệ dung môi gradient điclometan-axeton 19:1, 12:1, 9:1, 6:1 và 4:1 cho 2
chất là CTD5.2.1 (VII) (2,8 mg) và CTD5.2.2 (5 mg). So sánh TLC và co-TLC cho thấy CTD5.2.2 là chất III đƣợc phân lập từ CTH6.
Nhóm phân đoạn CTD6 (4,06 g) đƣợc rửa bằng MeOH, sau đó đƣợc tinh chế Mini-C trên silica gel 40-63 µm, hệ dung môi gradient n-hexan-axeton 3:1, 2:1 và 1:1 cho chất bột màu trắng là CTD6 (54 mg). So sánh TLC cho thấy CTD6 là chất
IV nhận đƣợc ở phân đoạn CTH9.
Quá trình phân tách phần chiết điclometan đƣợc trình bày trong Sơ đồ 2, Mục 4.3, Chƣơng 4: Kết quả và Thảo luận.