Kiểm định nguồn gốc thực phẩm : Kỹ thuật miễn dịch enzyme

NGUY Ễ N TH Ị TH Ả O K Ỹ THU Ậ T MI Ễ N D Ị CH ENZYME ENZYME IMMUNOASSAY ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay Direct ELISA ELISA trực tiếp ELISA gián tiếp Indirect ELISA Sandwich EL

KI Ể M ĐỊ NH NGU Ồ N G Ố C TH Ự C PH Ẩ M

BF5320

KỸ THUẬT ENZYME

TS NGUY Ễ N TH Ị TH Ả O

K Ỹ THU Ậ T MI Ễ N D Ị CH ENZYME (ENZYME

IMMUNOASSAY)

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

Direct ELISA (ELISA trực tiếp)

ELISA gián tiếp (Indirect ELISA)

Sandwich ELISA

ELISA cạnh tranh (competitive ELISA)

http://www.vbs.ac.vn/print.php?post=211

peptides, protein, antibodies, hormone,…

EIA (Enzyme ImmunoAssay)

• Kĩthuật ELISA gồm ba thành phần tham gia phảnứng

là: kháng nguyên, kháng thể và chất tạo màu; thực

hiện qua hai bước:

• Phảnứng miễn dịch học: Là sựkết hợp giữa kháng

nguyên và kháng thể

• Phảnứng hóa học: Thông qua hoạt tính xúc tác của

enzyme làm giải phóng oxy nguyên tử[O] từH2O2để

oxy hóa cơchất chỉthịmàu, dođó làm thayđổi màu

của hỗn hợp trong dung dịch thí nghiệm

nitrophenol phosphate

Ư u đ i ể m: Có thể phát hiện sự khác

biệt nhỏ giữa các kháng nguyên

nếu sử dụng kháng thể bắt và

kháng thể phát hiện khác nhau.

Chuyên biệt hơn Direct sanwich ELISA do

antispecies kháng thể được gắn enzyme

không phản ứng với kháng thể bắt kháng

nguyên.

Ư u đ i ể m: Đơn giản nhất

Nh ượ c đ i ể m:

• Độ đặc hiệu bịgiới hạn vì thường thì kháng nguyên

có ít nhất là 2 epitope (trình diện kháng nguyên) mà

phương pháp này chỉsửdụng 1 kháng thểgắn vào

một epitope

• Phảiđánh dấu cho từng kháng thểchuyên biệt với

từngđối tượng

• Ư u đ i ể m:

Kháng thểgắn enzyme có thể sử dụngđể đánh

dấu cho nhiều loại kháng nguyên nên tiện lợi và

kinh tếhơn, dễdàng thương mại hóa

• Nhượ c đ i ể m:

Độ đặc hiệu của từng kháng huyết thanh là khác

nhau.Điều này dẫnđến kết quảkhác nhau giữa

các thí nghiệm và dođó cần phải thửnghiệm với

nhiều kháng huyết thanh khác nhauđểkết quảcó

thểtin tưởngđược

Direct ELISA (ELISA trực tiếp)

ELISA gián tiếp (Indirect ELISA)

ELISA cạnh tranh (competitive ELISA)

Các yếu tố ảnh hưởngđếnđộnhạy của phảnứng

ELISA

• Sốlượng kháng thểthứnhấtđược gắn vàođáy

giếng

• Ái lực của kháng thể thứ nhất đối với kháng

nguyên

• Ái lực của kháng thểthứhaiđối với kháng nguyên

Ứ ng d ụ ng ph ươ ng pháp enzyme immunoassay

Kháng nguyên Giới hạn phát hiện

Huyết thanh, albumin (Lợn) 1-10%

Dịch chiết cơ xương (Lợn, Gà) 250 ppm (Thịt lợn)

126 ppm (Gia cầm)

Huyết thanh (Bò) <10%

Protein cơ đã gia nhiệt (Lợn) 0.5%

Huyết thanh albumin (Bò, Ngựa, Lợn) 3%

Albumin (Bò, Ngựa, Lợn, Gà) 0.6%

Dịch chiết Sarcoplasmatic (Lợn) 1%

Protein cơ hòa tan (Gà) 1%

Glycoprotein (Lợn) 0.06%

Protein cơ (Lợn) 1%

IgG (Lợn, Gà, Bò) <1%

Huyết thanh Protein (Trâu, Dê, Lừa) 0.1-1%

Th t và s n ph m t th t

S a và s n ph m t s a

Kháng nguyên Giới hạn phát hiện

β-Lactoglobulin 0.5% sữa bò

IgG Bò 0.0008% sữa bò tươi

Whey Protein Bò 1% sữa bò

Whey Protein Dê 0.5% sữa bò

β-lactoglobulin Bò 0.0001% sữa bò

8

Các chất có thể phân tích bằng phương pháp enzyme

Đường Axit/Muối Alcohol Chất khác

D-fructose Acetate Cholesterol Acetaldehyde

D-galactose L-ascorbate Ethanol Ammonia

D-glucose Citrate Glycerol Urea

Lactose Formate D-sorbitol

Maltose D-gluconate Xylitol

Tinh bột L-glutamate

Sucrose D-3-hydroxybutyrate

D-isocitrate

D-và L-lactate

Ammonia