Kiểm định nguồn gốc thực phẩm dư lượng kháng sinh trong thủy sản

Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Mục lục Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Phần I Thủy sản tổng quan chung ngành a Thủy sản Khái niệm Những nguồn lợi, sản vật đem lại cho người từ môi trường nước người khai thác, nuôi trồng thu hoạch sử dụng làm thực phẩm, nguyên liệu bày bán thị trường Thông dụng hoạt động đánh bắt, nuôi trồng khai thác loại cá b Phân loại Nhóm cá : Có thể cá nước hay cá nước lợ Ví dụ: cá tra, cá bống tượng, cá chình,… Nhóm giáp xác : Phổ biến nhóm giáp xác mười chân Ví dụ: Tôm xanh, tôm sú, tôm thẻ, tôm đất, cua bi Nhóm động vật thân mềm : Có vỏ vôi, nhiều nhóm hai mảnh vỏ Đa số sống biển (nghêu, sò huyết, hàu, ốc hương, ) , số sống nước (trai, trai ngọc) Nhóm rong : Thực vật bậc thấp, đơn bào, đa bào, có loài có kích thước nhỏ, có loài có kích thước lớn Nhóm bò sát lưỡng cư : Bò sát động vật bốn chân có màng ối (ví dụ: cá sấu) Lưỡng cư loài sống cạn lẫn nước (ví dụ: ếch, rắn) a Sản lượng tiêu thụ - xuất nhập gần Ở Việt Nam Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Theo Báo cáo Tổng cục Thủy sản tổng sản lượng thủy sản sản xuất năm 2016 đạt 6,7 triệu tấn, tăng 2,5% so với năm 2015 Xuất thủy sản nước năm 2016 ước đạt 7,1 tỷ USD, tăng 0,6 tỷ USD so với kỳ năm 2015 Năm 2016, sản phẩm thủy sản xuất sang 160 nướ vùng lãnh thổ thị trường Mỹ 20,6%, Châu ÂU 17,3%, Nhật Bản 15,7%) Về nhập khẩu, năm 2016 Việt Nam trì mức nhập khâu thủy sản với giá trị 1,1 tỷ USD tăng 3,6% so với năm 2017 Trong đó, tôm chiến tỷ trọng lớn với 34% giá trị ~ 376 triệu USD,cá ngừ chiếm gần 20% với 217 triệu USD b Trên giới Báo cáo tổng hợp triển vọng ngành sản xuất thương mại thủy sản giới năm 2022 Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Theo tổ chức Hợp tác Phát triển kinh tế (OECD) Tổ chức Nông lương Liên Hợp Quốc (FAO) Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Phần II Tổng quan gian lận thủy sản “Gian lận thủy sản hành động phổ biến khắp châu Âu yếu hệ thống truy xuất nguồn gốc cá, thiếu kiểm tra giám sát quan chịu trách nhiệm cho việc ghi nhãn với thủy sản Thực tế không chứng tỏ vô trách nhiệm với người tiêu dùng, mà làm suy yếu nỗ lực bảo tồn toàn giới việc tạo lỗ đen thị trường, nơi mà sản lượng đánh bắt bất hợp pháp đem tiêu thụ” Theo Maria Jose Cornax - Giám đốc chiến dịch thủy sản Oceana châu Âu cho biết thông cáo báo chí Tổ chức bảo vệ môi trường quốc tế Oceana lưu ý 90% thủy sản tiêu thụ Mỹ ngày nhập khẩu, chưa đầy 1% số kiểm tra phủ Oceana phát 18% cá lấy mẫu bán Seattle bị dán sai nhãn 35% tôm thị trường Mỹ, cửa hàng thực phẩm, nhà hàng gian lận nhãn mác Ngoài ra, Oceana kiểm tra 20 mẫu tôm, phát loại tôm lạ không danh mục thực phẩm cho người bày bán tràn lan tôm "dọn bể", ăn xác loài ký sinh san hô, dùng nuôi cảnh bể thủy sinh Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Cục Quản lý Thực Phẩm dược phẩm Mỹ (FDA) phân tích 700 mẫu thủy sản nhập 14 bang nước Mỹ, thấy 15% thủy sản gian lận nhãn mác Tại chợ bán buôn thủy sản New York, 43% tôm chợ gian lận nhãn mác Câu hỏi đặt cho nhà chuyên môn: “Biện pháp phát phòng chống gian lận thủy sản ?” Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Phần III Kiểm định tồn dư chất kháng sinh thủy sản a Nguyên nhân – mục đích sử dụng – tác hại Nguyên nhân Lượng tồn dư kháng sinh sản phẩm thủy sản chủ yếu nguyên nhân sau: - Sử dụng loại kháng sinh không rõ nguồn gốc Sử dụng sai nguyên tắc có chủ đích: • Không có đơn thuốc bác sĩ thú y • Không tuân thủ liều • Thời gian dừng thuốc Sử dụng chất cấm b - Mục đích sử dụng Phòng bệnh cho vật nuôi Kích thích tăng trưởng Tăng thời gian bảo quản thủy sản Trị bệnh cho vật nuôi - Tác hại nguy tiềm tàng - Ít loại kháng sinh có khả gây độc cấp tính - Các loại kháng sinh cấm có khả gây bệnh (ung thư, c quái thai, đột biến gen, ) - Gây dị ứng - Mất cân hệ đường ruột - Gây nhờn thuốc, kháng thuốc: • Xuất loại vi khuẩn kháng thuốc • Vô hiệu loại kháng sinh Sơ đồ phân tích chung Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Các công đoạn phân tích tồn dư kháng sinh Chuẩn bị mẫu Tách chiết Tinh chế, cô đặc Đo định tính, định lượng Phân tích dư lượng Chloramphenicol thủy sản a Choramphenicol - Là chất kháng sinh phát đồng thời ba nhóm - nghiên cứu độc lập với nhau: nhóm Ehrlich (Parke Davis Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Comp, 1947), nhóm Gottib (Univ.of Illinois, 1948), nhóm Umezawa (1948) Họ Chloramphenicol coi kháng sinh có cấu trúc đơn giản từ phát nhiều nhà khoa học tập trung nghiên cứu chất kháng sinh Nhờ vòng năm người ta xác định cấu trúc phân tử triển khai thành công nghệ sản xuất loại thuốc kháng sinh Chloramphenicol Trong đó: Chloramphenicol có R: Nitrophenycol có R: Corynecin I có R: Corynecin II có R: Corynecin III có R: - Tính chất Là kháng sinh phổ biến Cl2CHOHCH3COCH3CH2CO(CH3)2CHCOvà trước để sử dụng để điều trị có hiệu bệnh G- G+ khác Nhưng số hiệu ứng phụ không mong muốn nên việc ứng dụng Chloramphenicol điều trị có xu hướng giảm dần Đồng thời, việc sử dụng phát dư lượng chất thực phẩm trở thành vấn đề nhạy cảm, quy định chặt chẽ tiến hành giám sát nghiêm ngặt nhiều nước, đặc biệt nước công nghiệp phát triển Chloramphenicol chất độc màu trắng có ánh vàng, không mùi, vị đắng, tan nước, tan nhiều Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm cồn chất béo, dung dịch chloramphenicol bền vững môi trường axit hay trung tính, bền vững nhiệt, chịu nhiệt độ đến 100OC - Tác hại sử dụng Chloramphenicol Khi sử dụng chăn nuôi, phần kháng sinh chưa đào thải tồn dư sang sản phẩm thực phẩm gây nguy hại đến thể người lượng đáng kể thức ăn thừa thoát lắng đọng môi trường, theo thời gian dẫn tới biến dổi hệ sinh thái Gây ô nhiễm môi trường, làm cho vật nuôi người kháng lại thuốc sử dụng thực phẩm có nhiễm thuốc, làm cho vi khuẩn gây bệnh nhờn thuốc thể người hay vật nuôi bị nhiễm loại vi khuẩn nhờn thuốc thuốc chữa trị Chloramphenicol vào thể trẻ sơ sinh gây hội chứng “xanh tím xám” đặc biệt trẻ sinh non Trẻ bị xanh tái dần trụy tim mạch tử vong Chloramphenicol gây ngộ độc cho tủy xương dùng kéo dài Ngoài ra, chloramphenicol gây suy tủy, thiếu máu không hồi phục Bị nhiễm kháng sinh thuộc nhóm chloramphenicol làm giảm bạch cầu, vàng da Chloramphenicol không tiêu diệt vi khuẩn gây bệnh đường ruột diệt vi khuẩn có lợi cho ruột gây tiêu chảy dẫn đến thiếu nước nghiêm trọng làm xuất bệnh thiếu vitamin Phơi nhiễm chất độc hại lương thực, mặt hàng thủy sản nuôi trồng (tôm, lươn, cá Basa ) Báo cáo môn học 10 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm chloramphenicol, nitrofuran, vào thể người gây tổn hại nghiêm trọng đến hệ miễn nhiễm, làm khả kháng thuốc tích tụ lâu ngày có khả gây đột biến, rối loạn nội tiết Báo cáo môn học 11 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm b Phân tích dư lượng chloramphenicol thủy sản kit ELISA thông qua phân tích khẳng định LC – MS/MS Giới thiệu Các phương pháp phân tích có sử dụng sắc kí có ghép khối phổ GC – MS, GC – MS/MS, LC – MS, LC – MS/MS đáp ứng yêu cầu quan có thẩm quyền nước nhập chấp nhận Tuy nhiên phương pháp đòi hỏi chi phí cao thiết bị, chi phí vận hành, kĩ trình độ kiểm nghiệm viên Do không phù hợp với phòng thí nghiệm quy mô nhỏ hay phòng kiểm nghiệm địa phương Và từ yêu cầu đó, có cách tiếp cận phương pháp phân tích dựa phản ứng kháng nguyên – kháng thể (Enzyme – Linked Immunosorbent Assay (ELISA)) trở thành công cụ hữu hiệu quan thẩm quyền chấp nhận cho phép sử dụng với mục đích sàng lọc Liên minh châu Âu (EU) cho phép sử dụng ELISA phân tích dư lượng hóa chất kháng sinh cấm Đối tượng Cá loại thủy sản như: cá, tôm, cua, ghẹ, nhuyển thể, thủy sản tẩm bột, thủy sản khô, chả giò, há cảo, mắm hải sản loại Phương pháp phân tích Tóm tắt quy trình thử nghiệm ELISA - Kit thử ELISA: Kit thử hãng R – Biopharm TAPB  Báo cáo môn học 12 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm - Quy trình chuẩn bị mẫu: Dư lượng chloramphenicol 3g mẫu trích ly 6ml ethyl acetate Dịch chiết cô đến khô 50oC dòng N Cặn khô hòa tan 1ml đệm làm 1ml hexan Lượng chloramphenicol dịch chiết phân tích với kit thử ELISA - Quy trình thử nghiệm với ELISA: quy trình xác định hàm lượng chloramphenicol dịch chiết ELISA tuân thủ theo hướng dẫn nhà sản xuất - Giới hạn phát hiện: 0,1 ppb  Phân tích khẳng định LC – MS/MS - Trong 13418 mẫu thủy sản qua phân tích sàng lọc ELISA có 167 mẫu dương tính giả, chiếm 1,3% so với mẫu Điều cho thấy ELISA công cụ hiệu cho việc sàng lọc mẫu thủy sản tiêu Chloramphenicol - Tỷ lệ dương tính giả ELISA Bảng tổng hợp kết phân tích sàng lọc CAP ELISA khẳng định LC – MS/MS Trong tổng số 13418 mẫu thủy sản loại qua phân tích sàng lọc ELISA có 167 mẫu dương tính giả, Báo cáo môn học 13 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm chiếm 1,3% tổng số mẫu phân tích Điều cho thấy, ELISA công cụ hữu hiệu cho việc sàng lọc mẫu thủy sản tiêu CAP Tỷ lệ dương tính giả nhóm sản phẩm thủy sản tẩm bột, chả giò – há cảo cao (12,2% 13,8%) so với đối tượng mẫu thủy sản loại dạng chưa phối chế (tôm, cá, mực, ghẹ) ( 0,3ppb tỷ lệ chấp nhận cho tất loại mẫu khác c Phương pháp kiểm định nhanh Chloramphenicol Nguyên lý Nguyên tắc xét nghiệm phản ứng kháng nguyên- kháng thể Xét nghiệm nhanh bước xét nghiệm miễn dịch cạnh tranh, chất dò bao gồm mảnh vàng keo tráng phủ kháng thể kháng Chloramphenicol tinh khiết lực Chất phát phức hợp Chloramphenicol-protein đính màng dụng cụ xét nghiệm Trong trình xét nghiệm, mẫu rddi qua màng này, có nhiều chất phân tích mẫu thử , chúng cạnh tranh với Chloramphenicol đính màng để gắn kết với kháng thể chất dò( có số lượng hạn) Chloramphenicolneeus tồn mẫu thử với hàm lượng 0,1 ppb ngăn chặn gắn kết chất dò với Chloramphenicol đính màng, cho kết dương tính Báo cáo môn học 16 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Ưu điểm - Sử dụng đơn giản, tiết kiệm thời gian - Không cần trang bị thiết kế đặc biệt, cần đọc kỹ hướng dẫn sử dụng trước thực - Rẻ tiền, không cần thiết bị đắt tiền - Có thể thực điểm thu mua, than tra - Kết dễ xem đánh giá - Phát xác đến ngưỡng thiết bị thông dụng - Sạch an toàn - Dễ bảo quản Thiết bị - Dụng cụ phát nhanh dư lượng Chloramphenicol - Chất đệm PBST - Ống nhỏ giọt sử dụng lần Xử lí mẫu - Mẫu thử nên để nơi mát, tránh ánh sáng trực tiếp - Làm đồng lấy lượng hợp lý mẫu thử Cân gam mẫu tử bỏ vào ống ly tâm 50 ml, thêm 10ml - ethyl acetate lắc 5-10 phút - Ly tâm 5-10 phút/4000rpm/ nhiệt độ phòng - Lấy 7ml ethyl acetate phía cho vào bình cô quay làm bay ethyi acetate 50°C khí Nitơ Báo cáo môn học 17 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm - Hòa tan chất cặn 0,3 ml dung dịch PBST, thêm 0,3 ml dung dịch n-hexan trộn phút - Chuyển dung dịch vào ống nghiệm dùng 100µl lớp dung dịch phía để đưa vào xét nghiệm Quy trình thực Để dụng cụ xét nghiệm mẫu thử ổn định nhiệt độ phòng trước xét nghiệm - Chuẩn bị mẫu thử - Lấy dụng cụ phát nhanh dư lượng Chloramphenicol khỏi bao bì - Giữ ống nhỏ giọt thẳng đứng nhỏ giọt đầy dung dịch thử vào giếng thử (S) dụng cụ bắt đầu tính thời gian, tránh đưa bọt khí vào giếng thử - Chờ vạch màu đỏ lên, nên đọc kết vòng 3-5 phút Cần ý màng thử dụng cụ phải hoàn toàn trước đọc kết Đọc kết Báo cáo môn học 18 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Âm tính Vạch thử (T) đậm màu vạch chuẩn (C), kết cho biết hàm lượng Chloramphenicol mẫu thử 0,01 ppb Dương tính Vạch thử (T) nhạt vạch chuẩn (C) không thấy vạch thử, kết cho biết hàm lượng Chloramphenicol mẫu thử 0,1 ppb Kết sai vạch chuẩn không xuất Báo cáo môn học 19 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Kết lượng mẫu thử khôn đủ quy trình kỹ thuật thực sai, xem lại quy trình làm lại xét nghiệm với dụng cụ Nếu gặp trục trặc, ngừng việc sử dụng dụng cụ thử Phần IV Tổng kết Thủy sản sản phẩm chủ lực, mang lại hiệu kinh tế cao cho nhà nước, nhiên việc gian lận nhiều Do đó, cần kiểm định chặt chẽ để bảo đảm quyền lợi cho người tiêu dùng cho thị trường xuất Có nhiều phương pháp xác định lượng dư kháng sinh thủy sản, phương pháp ELISA dụng cụ test nhanh có hiệu độ xác cao Báo cáo môn học 20 Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Tài liệu tham khảo 1, Tiếp cận vấn đề phát tồn dư kháng sinh có nguồn gốc động vật (PHẠM KIM ĐĂNG - Khoa Chăn nuôi Nuôi trồng thuỷ sản – Học Viện Nông nghiệp Việt Nam) 2, Kháng sinh sử dụng thức ăn chăn nuôi, tồn dư tính kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh (PGS.TS Dương Thanh Liêm - Bộ môn Dinh dưỡng Khoa Chăn nuôi – Thú y Trường Đại học Nông Lâm) 3, Website Hiệp hội chế biến xuất thủy sản Việt Nam http://vasep.com.vn/ 4, Cổng thông tin điện tử Nông nghiệp phát triển nông thôn http://wcag.mard.gov.vn/pages/home.aspx Báo cáo môn học 21 ... dùng nuôi cảnh bể thủy sinh Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Cục Quản lý Thực Phẩm dư c phẩm Mỹ (FDA) phân tích 700 mẫu thủy sản nhập 14 bang nước Mỹ, thấy 15% thủy sản gian lận nhãn... tồn dư chất kháng sinh thủy sản a Nguyên nhân – mục đích sử dụng – tác hại Nguyên nhân Lượng tồn dư kháng sinh sản phẩm thủy sản chủ yếu nguyên nhân sau: - Sử dụng loại kháng sinh không rõ nguồn. .. nước (ví dụ: ếch, rắn) a Sản lượng tiêu thụ - xuất nhập gần Ở Việt Nam Báo cáo môn học Kiểm định nguồn gốc thực phẩm Theo Báo cáo Tổng cục Thủy sản tổng sản lượng thủy sản sản xuất năm 2016 đạt