xác định dư lượng thuốc kháng sinh trong thịt và các sản phẩm từ thịt

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - - TIỂU LUẬN MÔN HỌC KIỂM ĐỊNH VÀ TRUY SUẤT NGUỒN GỐC Đề tài: “ Xác định dư lượng thuốc kháng sinh thịt sản phẩm từ thịt” Giáo viên hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Thảo Th.S Hoàng Quốc Tuấn Nhóm sinh viên thực : Nguyễn Thị Hạnh - 20131299 Dương Thị Lệ Hằng - 20131334 Nguyễn Thị Mến Hà Nội Ngày 28 tháng năm 2017 - 20132564 NỘI DUNG Phần 1: Tổng quan gian lận thịt sản phẩm từ thịt 1.1 Vai trò thịt sản phẩm từ thịt 1.2 Thực trạng gian lận liên quan đến thịt sản phẩm từ thịt 1.3 Việc sử dụng quy định liên quan đến thuốc kháng sinh 1.4 Các phương pháp xác định dư lượng thuốc kháng sinh Phần 2: Xác định dư lượng Streptomycin phương pháp đo quang 2.1 Nguyên tắc 2.2 Hóa chất thiết bị cần sử dụng 2.3 Các bước thực 2.4 Ưu, nhược điểm phương pháp Phần 3: Kết luận tài liệu tham khảo PHẦN 1: TỔNG QUAN VỀ GIAN LẬN THỰC PHẨM 1.1 Vai trò thịt sản phẩm từ thịt Thịt sản phẩm từ thịt ăn phổ biến bữa cơm gia đình Trong thịt gia súc, gia cầm có chứa lượng lớn chất dinh dưỡng thể người : − Protein: Thịt chưa đầy đủ acid amin cần thiết với tỷ lệ cân đối, hợp lý để hỗ trợ cho ngũ cốc (protein ngũ cốc thiếu lysin) Giá trị sinh học protid thịt 74%; độ đồng hóa 96-97% Protein thịt chứa đầy đủ acid amin cần thiết cho thể, đóng vai trò quan trọng chức sinh lý Nếu thiếu hụt protein từ thịt có ảnh hưởng lớn đến phát triển thể − Vitamin: Thịt nguồn vitamin nhóm B chủ yếu B1 tập trung phần thịt nạc, vitamin tan chất béo − Khoáng chất: Thịt nguồn cung cấp phospho, Kali, canxi, đặc biệt sắt kẽm 40% chất sắt thịt dạng heme dễ hấp thụ Nếu trẻ em không ăn đủ thịt, có nghĩa thiếu lượng sắt, vitamin, magnesium, không phát triển tốt trở nên ốm còi, thiếu chiều cao, dẫn đến bệnh suy dinh dưỡng dễ mắc bệnh tật , Người lớn thiếu protein có tượng teo dần dần, thiếu máu thiếu sắt, tim não hoạt động tốt Ngoài sản phẩm thịt tươi sống thit số sản phẩm đồ hộp chế biến từ thịt ngày phát triển, đáp ứng yêu cầu lượng lớn người tiêu dùng, giúp người nội trợ tiết kiệm thời gian chế biến mà cung cấp đủ chất cần thiết từ thịt Bởi mà phủ nhận vai trò thịt sản phẩm từ thịt 1.2 Thực trạng gian lận thịt sản phẩm từ thịt Hiện nay, tình hình gian lận thịt sản phẩm thịt nhằm mục đích tăng lợi nhuận xảy nhiều có xu hướng tăng dần Việc làm cho thịt trở nên chất lượng chí gây độc ăn phải sản phẩm gian lận Một số vụ gian lận thực phẩm: - 2016, Ông Lê Văn Quyết, Phó chủ tịch Hiệp hội Chăn nuôi gia cầm Đông Nam Bộ cho biết giá đùi gà Mỹ nhập cảng Việt Nam có giá 7-9 nghìn đồng/kg, thị trường Mỹ tiêu thụ đùi gà với giá cao 4-5 USD/kg Và cho khả mặt hàng nhập gần hết hạn sử dụng, chí hết hạn sử dụng (nguồn Vietnamnet.vn) - Ngày 6/3/2017, đội liên ngành Trạm Kiểm dịch động vật Thủ Đức phối hợp đội Cảnh sát giao thông Rạch Chiếc kiểm tra phát tổng trọng lượng tang vật gồm 4110kg sản phẩm động vật , 46 gà, vịt không rõ nguồn gốc Những sở thường dùng saltpatre khiến thịt ôi thiu trở thành thịt tươi (nguồn tinmoi.com) - 10/2016 Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia cho biết giám sát chủ động 109 mẫu thực phẩm giới thiệu thịt bò số thực phẩm có nguyên liệu từ thịt bò kết kiểm nghiệm cho thấy số 44 mẫu thịt bò lấy phân tích có 35 mẫu thịt bò, mẫu thịt trâu, mẫu thịt heo (nguồn thoibao.today) - 2015, Bộ NN PTNT điều tra tình hình sử dụng kháng sinh sở chăn nuôi tỉnh: Đồng Nai, Bà Rịa - Vũng Tàu, Bình Dương, Thái Bình Nam Định: Kết cho thấy 100% có sử dụng kháng sinh phòng điều trị bệnh cho lợn; 68% có sử dụng thức ăn chăn nuôi chứa kháng sinh để phòng bệnh kích thích tăng trưởng; 24,4% tự trộn kháng sinh vào thức ăn chăn nuôi để phòng bệnh kích thích tăng trưởng (nguồn tinmoi.vn) - Xét nghiệm mẫu thịt lấy trực tiếp chợ TP HCM phát 26 loại kháng sinh khác rong loại sử dụng nhiều chloramphenicol (chiếm 15,35%), tylosin (15%), colistin (13,24%), norfloxacin (10%), gentamycin (8,35%), nhóm tetracylin (7,95%), ampicillin (7,24%) Trong đó, chloramphenicol kháng sinh bị cấm sử dụng nhiều quốc gia - Trong 149 mẫu thịt gà kiểm tra, phân tích có đến 44,96% số mẫu có dư kháng sinh vượt mức quy định cho phép từ 2,5 đến 1.100 lần so với tiêu chuẩn ngành Trong đó, loại kháng sinh chloramphenicol chiếm tỷ lệ cao đến 87,50%, flumequin chiếm 83,33%, chlortetracyline chiếm 62,50%, amoxillin chiếm 60% - 1.3 Năm 2016 Bộ NN&PTNT xử lý 5800 vụ liên quan đến việc sử dụng hóa chất, thuốc kháng sinh, thuốc bảo vệ thực vật chăn nuôi (Nguồn: phapluatplus.vn) Việc sử dụng quy định liên quan đến thuốc kháng sinh Streptomycin - Người chăn nuôi sử dụng Streptomycin nhằm mục đích trị huyết trùng, viêm đường tiết niệu, bệnh đường hô hấp, kích thícg tăng trưởng…cho vật nuôi Nhưng thay dùng thuốc kháng sinh vật nuôi bị bệnh, người nông dân phòng bệnh cách trộn thuốc kháng sinh trực tiếp vào thức ăn vật nuôi không theo liều lượng hướng dẫn cán thú y Vì dư lượng thuốc kháng sinh tồn dư thịt gia súc, gia cầm ngày cao khó kiểm soát - Khi dư lượng Steptomycin thịt đi vào thể, đào thải mà tích tụ lượng định gây suy giảm thính lực, sỏi thận, lờn thuốc,… - Theo thông tư 24/2013/TT-BYT quy định mức giới hạn tối đa dư lượng thuốc thú y thực phẩm: Tổng dihydrostreptomycin Streptomycin Loại sản phẩm ADI (µg/kg thể MRL(µg/kg) trọng/ngày) 0-50 Thịt trâu, bò 600 Thịt gà 600 Thịt lợn 600 Thịt cừu 600 1.4 Các phương pháp xác định dư lượng kháng sinh có sản phẩm thịt - Xác định đồng thời dư lượng kháng sinh Chloramphenicol (CAP), Florphenicol (FF), Thiamhenicol (TAP) số sản phẩm động vật pp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) - Xác định quinolone phương pháp trắc quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - Xác định dư lượng kháng sinh streptomycin phương pháp đo mật độ quang PHẦN 2: XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC KHÁNG SINH STREPTOMYCIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO MẬT ĐỘ QUANG • Giới thiệu thuốc kháng sinh Steptomycin: − − Streptomycin bazơ hữu chiết từ nấm streptomyces globisporus streptomyxini hay từ loài sinh vật khác có phương pháp tổng hợp Các streptomycin tạo muối với axit vô Các loại muối kháng sinh thường sunfat, clohydrat, photphat có phức chất canxiclorua streptomycin clohydrat Các muối tan nước, không tan clorofooc, cồn ête Thuốc kháng sinh Streptomycin tổng hợp sử dụng rỗng rãi y học, thú y bảo vệ thực vật Chúng thuộc nhóm kháng sinh ức chế tổng hợp protein vi khuẩn phổ rộng, vi khuẩn Gram(+) cà vi khuẩn Gram(-) Steptomycin có công thức hóa học: Sự cần thiết việc xác định dư lượng thuốc kháng sinh thịt sản phẩm thịt Việc lạm dụng thuốc kháng sinh chăn nuôi ngày cảng trở thành vấn đề nghiêm trọng cần kiểm tra giám sát Thay việc chữa bệnh cho vật nuôi chúng bị bệnh, người dân trộn trực tiếp thuốc kháng sinh vào thức ăn vật nuôi với liều lượng thời gian không theo hướng dẫn quan chức việc tồn dư thuốc kháng sinh thịt không kiểm soát Thuốc kháng sinh Streptomycin sử dụng phổ biến chăn nuôi dư lượng loại thuốc kháng sinh thịt tương đối phổ biến Khác với gian lận thực phẩm khác liên quan đến thịt thịt giả, thịt bị ôi thiu,… người tiêu dùng nhận biết qua số phương pháp cảm quan gian lận dư lượng thuốc kháng sinh người tiêu dùng nhận biết Vì cần phải có biện pháp kiểm tra, định lượng từ quan chức • − − − − − xác định loại thuốc kháng sinh có thịt hay không có với hàm lượng Nên việc xác định dư lượng thuốc kháng sinh thịt nói chung dư lượng Streptomycin nói riêng cần thiết Chính vậy, nhóm em xin đề xuất phương pháp để xác định dư lượng thuốc kháng sinh Streptomycin thịt là: phương pháp đo mật độ quang Nguyên tắc Trong môi trường axit, Streptomycin thủy phân hoàn toàn thành Maltol (Methyl-3-hydroxy-7pyron) nên hàm lượng streptomycin mẫu thịt xác định việc định lượng maltol Maltol sinh tách khỏi hỗn hợp thủy phân cách dùng clorofom để chiết khỏi dung dịch mẫu môi trường axit, sau giải chiết maltol dung dịch kiềm nước Cho maltol tác dụng với phèn sắt (III) amonium, dung dịch 2% sinh phức màu đỏ tía đặc trưng đo mật độ quang phức màu sóng 525 nm để xác định streptomycin (Ta tiến hành xử lý mẫu để thu dịch chiết Dịch chiết đưa đo mật độ quang máy đo quang UV-VIS bước sóng 525 nm Nồng độ Steptomycin định lượng đường chuẩn xây dựng Hóa chất thiết bị cần thiết 2.1: Hóa chất − HCl 1M − NaOH 1N − Nước − Clorofom: CHCl3 − Phèn sắt III ammonium NH4 Fe(SO4)2.12H 2O( hình Hình 2% axit sunfuric Hình 1N: − Dung dịch gốc Steptomycin sunfat C21H39N7O12.3H2SO4 10µg/ml ( hình 2) 2.2: Các loại thiết bị mục đích sử dụng − Máy xay: để làm nhỏ mẫu thịt cần phân tích để chiết đượng toàn lượng thuốc kháng sinh mẫu thịt − Các định định mức dung tích 50ml, 20ml: để định mức dịch chiết đến thể tích mong muốn − Máy ly tâm lắng cặn: tách phần dịch phần bã thịt − Bình chiết: thuận tiện trình chiết − Pipet loại: hút dịch vào bình ống cuvet − Cuvet( sử dụng cuvet có bề dày 2cm) − Máy đo quang UV- VIS: xác định mật độ quang mẫu + + + Nguyên tắc hoạt động thiết bị đo quang UV-VIS: Dựa vào xạ điện từ phát bị, đặc tính xạ phát hay hấp thụ cường độ chúng mà người ta định tính định lượng thành phần chất mẫu Trong phổ sóng điện từ thiết bị, miền khả biến chia làm vùng hẹp với màu sắc khác nhau: tím(400-430nm); xanh dương(430-490nm); xanh lá(490-560nm); vàng(560-600nm); cam(600-650); đỏ(650-800nm) Phương pháp đo quang thường để định tính định lượng chất có liên quan đến liên kết C-N; C-O,… Các bước tiến hành Mẫu chuẩn Steptomycin sunfat với nồng độ khác Mẫu trắng (Nước) Mẫu thịt cần phân tích nhay Tiến hành xử lý mẫu Đo mật độ quang máy đo quang UV-VIS bước sóng 525nm Đo mật độ quang mẫu chuẩn Xây dựng đường chuẩn Mật độ quang mẫu thịt Tính toán nồng độ Steptomycin 3.1: Chuẩn bị xử lý mẫu a Mẫu thịt(20g) − Sơ đồ tiến trình thực biến đổi trình thực − Mẫu thịt cần phân tích thái nhỏ ,trộn cân lượng 20g cho vào máy xay − Thêm 10 ml nước cất vào cho máy chạy phút − Chuyển mẫu vào bình định mức , bổ sung ml axit clohydric M định mức đến 50 ml nước cất − Chuyển hỗn hợp vào máy li tâm lắng cặn để tách chiết phần dung dịch bã − Tác lấy phần dung dịch bổ sung thêm 2ml NaOH 1M − Đưa mẫu đun bếp cách thuỷ sôi 10 phút để streptomycin thủy phân hoàn toàn thành maltol − Sau để nguội, chuyển dung dịch vào phễu chiết thêm 10ml clorofom lắc 10 phút − Sau để yên 15 phút cho dung dịch phân lớp hoàn toàn phễu chiết lách phần dung dịch vào phễu chiết khác Bổ sung thêm 4ml phèn sắt (III) ammonium 2% axit nước cất đến 20ml để tạo phức màu đỏ tía đặc trưng Lắc mạnh 30 phút, sau để yên 20 phút tách lấy phần dung dịch nước Các biến đổi hóa học bước thực trên: Thủy phân hoàn toàn môi trường kiểm Maltol Phức màu đỏ tía Maltol Phèn sắt III amonium − Sau ta huyển lượng dung dịch vừa đủ vào cuvet để chuẩn bị cho trình đo quang b Mẫu trắng − Thay 20g thịt 20g nước sau tiến hành xử lý điều kiện tương tự mẫu thịt c Mẫu chuẩn • • − − − − − Từ mẫu chuẩn có Steptomycin sunfat nồng độ 10 µg/ml, ta tiến hành pha loãng để sau xử lý mẫu thi dung dịch mẫu chuẩn với nồng độ khác : 0,1 - 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 µg/ml Cách pha mẫu chuẩn Chuẩn bị bình định mức tích 20ml có đánh số từ 1-6 Cho vào bình lượng sau: 0,2 - 1,2 – 2,0 – 3,0 – 4,0 – 5,0 ml dung dịch Steptomycin sunfat 10µg/ml Thêm vào bình 1ml NaOH 1N định mức nước cất đến 10ml, Đun cách thủy cho sôi để thủy phân 10 phút Để nguội nhiệt độ phòng thêm 4ml thuốc thử phèn sắt( III) ammonium 2% axit, lắc kĩ định mức nước cất đến 20ml Như vậy, ta dãy dung dịch chuẩn có nồng độ : 0,1 - 0,5 - 1,0 - 1,5 2,0 -2,5 µg/ml 3.2: Tiến hành đo mật độ quang thiết bị đo quang UV-VIS − − − Bật máy, đặt bước sóng 525nm để máy chạy ổn định Lần lượt đo mật độ quang mẫu chuẩn mẫu phân tích Đặt mẫu trắng vào kênh so sánh Mỗi mẫu nên đo lần để giảm sai số − Kết quả: Mẫu chuẩn có mật độ quang lần lượt: D1 ; D2 ; D3; D4; D5; D6  Mẫu thịt có mật độ quang: Dx 3.3: Xử lý kết • Vẽ đường chuẩn − Từ mật độ quang lần lượt: D1 ; D2 ; D3; D4; D5; D6 Tương ứng với nồng độ 0,1 - 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 -2,5 µg/ml − Ta xác định đường chuẩn dạng sau: Dx Cx Xác định nồng độ Cx Từ mật độ qung Dx mẫu thịt đo được, ta tiến hành xác định nồng độ Cx Hàm lượng streptomycin mẫu phân tích tính theo công thức sau: o C0 = (Cx V) / a (g/g) (Theo TCVN 5148-1990) − Trong đó: a lượng mẫu cân (ở a = 20 g)  V thể tích pha mẫu (V = 20 ml)  Cx nồng độ streptomycin xác định theo đường chuẩn Đánh giá phương pháp • − − Như cách tiến hành ta thấy, muốn xác định nồng độ hay hàm lượng của kháng sinh Streptomicin ta cần tiến hành đo mật độ quang xác định dựa vào phương pháp đường chuẩn Phương pháp có ưu, nhược điểm sau: • Ưu điểm: - Nhanh, dễ làm, không tốn - Với đường chuẩn cho phép phân tích hàng loạt mẫu • - Dung dịch không đòi hỏi phải tuân theo định luật Beer cách nghiêm ngặt Nhược điểm: - Dễ mắc phải sai số - Có sai số trình pha dung dịch chuẩn với nồng độ khác trình xác định nồng độ Cx dựa vào đường chuẩn - Không loại ảnh hưởng mẫu dung dịch mẫu bị nhiễm tạp Phần 3: KẾT LUẬN Trong xã hội phát triển ngày nay, gian lận thực phẩm ngày trở thành vấn đề quan tâm không riêng Việt Nam mà nước giới việc gian dối, lừa lọc sản phẩm thực phẩm chất lượng, nguồn gốc… ngày tăng cao đe dọa sống người Trong dư lượng thuốc kháng sinh loại thịt nói chung ảnh hưởng không nhỏ đến sức khỏe người tiêu dùng Bởi việc xác định, phân tích định lượng dư lượng thuốc kháng sinh trở thành việc cần thiết, giúp phát loại thịt đảm bảo không đảm bảo theo quy định dư lượng kháng sinh cho phép thịt Từ đưa biện pháp xử lý kịp thời hợp lý Trong báo cáo này, chúng em nêu tình trạng tình thực tế xã hội để minh chứng cho trạng gian lận thực phẩm tràn lan Đồng thời, chúng em sâu phân tích loại kháng sinh Steptomycin đặc tính phương pháp tiến hành để xác định lượng Steptomycin có thịt, theo phương pháp đo mật độ quang dựng đường chuẩn Rồi sau đó, chúng em trình bày cách xử lý kết đo để tính hàm lượng Steptomycin nhằm mục đích so sánh với tiêu chuẩn quy định có liên quan đánh giá tính an toàn mẫu thịt cần phân tích Để hạn chế chất kháng sinh ta phải áp dụng tối đa biện pháp phòng tránh chất kháng sinh, mà đặc biệt cấm sử dụng dư chất kháng sinh nuôi trồng gia súc, gia cầm, thủy hải sản Ngoài ra, phải tăng cường phổ biến thông tin, nâng cao lực người nông dân vấn đề chăn nuôi, ý thức người nông dân doanh nghiệp nhằm phòng tránh trường hợp bị nhiễm nhiều thuốc kháng sinh, gây hại cho người tiêu dùng TÀI LIỆU THAM KHẢO • • • • Giáo trình “ Kiểm định truy xuất nguồn gốc thực phẩm” Nguyễn Thị Minh Tú, Hoàng Quốc Tuấn, Nguyễn Thị Thảo, Nguyễn Hoàng Dũng, Vũ Hồng Sơn, Đỗ Biên Cương, Trương Quốc Phong TCVN 4833 TCVN 5148 – 1990 Thông tư số 24/2013/TT-BYT “ Quy định mức giới hạn tối đa dư lượng thuốc thú y thực phẩm” • • Suckhoedinhduong.nld.com.vn Provet.com.vn/ ... gian lận thịt sản phẩm từ thịt 1.1 Vai trò thịt sản phẩm từ thịt 1.2 Thực trạng gian lận liên quan đến thịt sản phẩm từ thịt 1.3 Việc sử dụng quy định liên quan đến thuốc kháng sinh 1.4 Các phương... 600 Thịt cừu 600 1.4 Các phương pháp xác định dư lượng kháng sinh có sản phẩm thịt - Xác định đồng thời dư lượng kháng sinh Chloramphenicol (CAP), Florphenicol (FF), Thiamhenicol (TAP) số sản phẩm. .. việc xác định dư lượng thuốc kháng sinh thịt nói chung dư lượng Streptomycin nói riêng cần thiết Chính vậy, nhóm em xin đề xuất phương pháp để xác định dư lượng thuốc kháng sinh Streptomycin thịt