XÁC ĐỊNH dư LƯỢNG THUỐC TRỪ sâu TRONG RAU

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ HĨA HỌC  MƠN HỌC – PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG ĐỘC TỐ TRONG SẢN PHẨM NÔNG NGHIỆP ĐỀ TÀI: XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC TRỪ SÂU TRONG RAU KHÁI KHÁI QUÁT QUÁT THUỐC THUỐC BẢO BẢO VỆ VỆ THỰC THỰC VẬT VẬT THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT LÀ GÌ?  Thuốc bảo vệ thực vật: loại hóa chất dùng nông nghiệp  Công dụng: diệt sâu, bệnh, cỏ dại, côn trùng gây hại động vật gậm nhấm để bảo vệ trồng, kho lương thực hàng hóa… KHÁI KHÁI QUÁT QUÁT THUỐC THUỐC BẢO BẢO VỆ VỆ THỰC THỰC VẬT VẬT TÁC HẠI CỦA THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT Đối với người: − Gây nhiễm độc cấp tính: bỏng mắt cấp tính, hủy hoại da, ảnh hưởng thần kinh, gan − Khi bị nhiễm độc mãn tính ảnh hưởng đến tủy xương (thiếu máu bất sản loạn tạo máu); ảnh hưởng đến sinh sản (vô sinh nam, sảy thai, thai dị dạng ); gây độc thần kinh; ảnh hưởng đến chế miễn dịch − Biểu nhiều mức độ: giảm sút sức khỏe, gây rối loạn hoạt động hệ thần kinh, tim mạch, tiêu hóa hơ hấp, tiết, gây tổn thương bệnh lý quan từ mức độ nhẹ tới nặng, chí tàn phế tử vong KHÁI KHÁI QUÁT QUÁT THUỐC THUỐC BẢO BẢO VỆ VỆ THỰC THỰC VẬT VẬT MỘT SỐ NHÓM THUỐC TRỪ SÂU 19 Aldicard sulfoxide 20 aldicarb sunfone 21 THUỐC TRỪ SÂU HỌ CACBAMAT aldicarb 22 propoxur 23 Methiocarb 24 Methomyl 25 oxamyl 26 Carbaryl 27 Carbofuran 28 – hydroxyl carbofuran XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC TRỪ SÂU TRONG RAU PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU Thông thường 12 mẫu đơn lấy trải ruộng cách hệ thống theo hình chữ W, X chữ S kiểu Ziczac Ngồi mẫu lấy hồn tồn ngẫu nhiên Khơng lấy góc vị trí đầu ruộng Thời điểm lấy mẫu: thời điểm thu hoạch thông thường Dụng cụ lấy mẫu, phương pháp lấy mẫu, lưu mẫu, bảo quản mẫu phải đảm bảo khơng có tác động ảnh hưởng tới dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Không rửa cũng dùng dụng cụ để làm rau Không cắt gọt nông sản trừ việc loại bỏ già úa bên ngồi nơng dân thực Bất việc sử dụng dao kéo vào nông sản cũng phải ghi lại XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC TRỪ SÂU TRONG RAU LẤY MẪU RAU CÁC LOẠI Đối với rau ăn nói chung: thu Nếu mẫu ban đầu chưa đủ 1kg tăng số mẫu đơn Đối với rau ăn quả: Lấy 12 từ 12 khác Lấy mẫu vị trí bị che khuất vị trí khơng bị che khuất phun thuốc Nếu nhỏ lấy - 10 quả/cây để tổng khối lượng mẫu khoảng 1kg Đối với loại đậu đỗ: Khối lượng mẫu tối thiểu cần lấy 1kg Lấy mẫu vị trí bị che khuất vị trí không bị che khuất phun thuốc Các loại rau ăn nhỏ rau gia vị: khối lượng mẫu tối thiểu cần lấy 0,5kg Đối với rau trồng chậu, khay: lấy mẫu từ 12 chậu, khay khác XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU NGUYÊN TẮC Dựa vào đặc tính khơng bền nhóm Carbamat môi trường kiềm Sau loại Carbamat tách cột sắc ký pha đảo, thủy phân mơi trường bazơ sinh methyl amin, sau methyl amin phản ứng với thuốc thử O – phthalaldehyde (OPA) – mercaptoethanol tạo dẫn xuất huỳnh quang – hydroxytylthio – – metylisoindol Phân hủy carbamat môi trường bazơ O R O C NH CH3 aq alkali Phản ứng methyl amin với thuốc thử O CH3NH2 + R OH + H2CO3 methyl amin SCH2CH2OH H + CH3NH2 H + HSCH2CH2OH aq alkali N CH3 hydro xyetylthio - - metylisoindol O XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU HĨA CHẤT VÀ THIẾT BỊ Hỡn hợp chuẩn 10 loại carbamat 10ppm pha methanol Supelco cung cấp Tất dung môi nước đạt tiêu chuẩn sử dụng cho HPLC lọc qua màng lọc 0.45m Hệ thống HPLC shimadzu với hệ phản ứng sau cột, đầu dò huỳnh quang (FD), cột phân tích C18, máy lọc nước trao đổi ion millipore Hệ thống tim mẫu tự động SIL – 20A Shimadzu, đầu dò huỳnh quang RF – 10Axl có tạo dẫn xuất sau cột Đầu dò MS Cột phân tích HRC – ODS AS0678 kích thước 20cm x 4.6nm x 5m Cột bảo vệ GHRC – ODS FU3445 Injector tiêm tự động SIL – 20A Bộ điều nhiệt CRB – 6A Một số thiết bị khác XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU CÁC THÔNG SỐ HỆ HPLC Tiêm 10l mẫu, pha động MeOH nước, tốc độ 1000ml/phút, chế độ gradient Bước sóng kích thích: 340nm Bước sóng phát xạ: 445nm Nhiệt độ lò phản ứng: 95 – 102oC VOPA: 0.15ml/phút VNaOH: 0.2ml/phút Nồng độ OPA: 0.25mM Nồng độ  - mercapropionic: 125ppm Nồng độ NaOH: 50mM Nồng độ đệm: 80 – 100mM Tổng thời gian chạy: 60 phút để làm cột XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU CÁC THÔNG SỐ HỆ HPLC XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU CÁC THÔNG SỐ HỆ HPLC Tiêm 10l mẫu, pha động MeOH nước, tốc độ 1000ml/phút, chế độ gradient: Bước sóng kích thích: 340nm Bước sóng phát xạ: 445nm Nhiệt độ lò phản ứng: 95 – 102oC VOPA: 0.15ml/phút VNaOH: 0.2ml/phút Nồng độ OPA: 0.25mM Nồng độ  - mercapropionic: 125ppm Nồng độ NaOH: 50mM Nồng độ đệm 80 – 100mM Tổng thời gian chạy: 60 phút để làm cột XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU PHƯƠNG PHÁP NỘI CHUẨN Cho dung dich chuẩn từ đầu bắt đầu hút mẫu Tính nồng độ ml dung dịch Cho độ xác cao mẫu phải sạch, loại bay dung mơi suốt q trình chiết Ưu điểm: loại ảnh hưởng dung mơi cao q trình chiết tách mang lại hiểu qua cao tăng độ xác Nhược điểm: khó tìm chất thích hợp chất chuẩn bằng phương pháp có giá thành cao khó tìm chất phức tạp XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU TÍNH KẾT QUẢ Axd/A nc + x A Y= b Trong đó: •Axd: diện tích peak chất chuẩn Cppb •Anc: diện tích peak chất ngoại chuẩn •Cppb: nồng độ chất chuẩn Lặp phương trình biểu diễn mối quan hệ nồng độ chất chuẩn với tỷ lệ diện tích peak chất chuẩn diện tích peak ngoại chuẩn Y = aX + b XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU ĐÔI NHẠY VÀ ĐỘ TIN CẬY CỦA PHƯƠNG PHÁP Độ nhạy cao, giới hạn định lượng vài ppb Độ tuyến tính 0.9980 – 0.9995 Chất phân tích S N S/N LOD (ppb) LOQ (ppb) Aldicard Sulfoxide 413 59 0.51 1.69 Adicarb Sulfone 337 16 21 1.43 4.76 Oxamyl 255 17 15 2.00 6.67 Methomyl 419 10 42 0.71 2.38 – Hydroxy carbofuran 284 18 16 1.88 6.25 Aldicarb 267 10 27 1.11 3.70 Popoxur 247 12 21 1.43 4.76 Carbofuran 208 14 15 2.00 6.67 Sevin (Carbaryl) 186 17 11 2.73 9.09 ... sản cũng phải ghi lại XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC TRỪ SÂU TRONG RAU LẤY MẪU RAU CÁC LOẠI Đối với rau ăn nói chung: thu Nếu mẫu ban đầu chưa đủ 1kg tăng số mẫu đơn Đối với rau ăn quả: Lấy 12 từ 12... 80 – 100mM Tổng thời gian chạy: 60 phút để làm cột XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU CÁC THÔNG SỐ HỆ HPLC XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU CÁC THÔNG SỐ HỆ HPLC Tiêm 10l mẫu, pha động... phun thuốc Các loại rau ăn nhỏ rau gia vị: khối lượng mẫu tối thiểu cần lấy 0,5kg Đối với rau trồng chậu, khay: lấy mẫu từ 12 chậu, khay khác XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CARBAMAT TRONG RAU NGUN TẮC Dựa