Luận văn thạc sĩ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ NĂNG LƯỢNG TRAO ĐỔI (ME), NĂNG LƯỢNG THUẦN CHO DUY TRÌ (NEm) CỦA MỘT SỐ LOẠI THỨC ĂN CHO BÒ SỮA

Luận văn thạc sĩ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ NĂNG LƯỢNG TRAO ĐỔI (ME), NĂNG LƯỢNG THUẦN CHO DUY TRÌ (NEm) CỦA MỘT SỐ LOẠI THỨC ĂN CHO BÒ SỮA

Bộ giáo dục v đ o tạo TRƯờNG ĐạI HọC NÔNG NGHIệP Hà NộI - - TR N BÁ ð C GIÁM SÁT S LƯU HÀNH VIRUS CÚM A/H5N1 TRÊN ðÀN V T NUÔI T I T NH NAM ð NH LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P HÀ N I - 2011 Bé giáo dục v đ o tạo TRƯờNG ĐạI HọC NÔNG NGHIƯP Hµ NéI - - TR N BÁ ð C GIÁM SÁT S LƯU HÀNH VIRUS CÚM A/H5N1 TRÊN ðÀN V T NUÔI T I T NH NAM ð NH LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành: Thú y Mã s : 60.62.50 Ngư i hư ng d n khoa h c: TS Tr n Th Lan Hương HÀ N I - 2011 L I CAM OAN Tôi xin cam đoan rằng: - Các kết nghiên cứu luận văn trung thực, khách quan cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn đà đợc cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn đà đợc rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 10 năm 2011 giả luậ vă Tác giả luận văn Trầ Đức Trần Bá Đức Tr ng i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… i L I C M ƠN Trong su t năm h c t p hoàn thành lu n văn, v i n l c c a b n thân tơi nh n đư c s giúp ñ , hư ng d n t n tình c a nhi u cá nhân t p th , cho phép tơi đư c t lịng bi t ơn c m ơn chân thành t i: Ban Giám hi u Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i; Vi n ðào t o Sau ð i h c; B môn Vi sinh v t - Truy n nhi m, Khoa Thú y th y giáo giúp đ , t o ñi u ki n ñ h c t p, ti p thu ki n th c c a chương trình h c Ti n sĩ Tr n Th Lan Hương, ngư i tr c ti p hư ng d n th c hi n lu n văn t t nghi p Tôi xin chân thành c m ơn Phịng D ch t , Trung tâm Ch n đốn thú y Trung ương - C c Thú y; Chi c c Thú y t nh Nam ð nh ñã giúp đ tơi hồn thành chương trình h c t p hoàn thành lu n văn t t nghi p Nhân d p hoàn thành lu n văn, cho phép tơi đư c g i l i c m ơn sâu s c t i gia đình, ngư i thân b n bè ñã ñ ng viên giúp đ tơi vư t qua m i khó khăn su t trình h c t p, nghiên c u, th c hi n ñ tài Xin chân thành c m ơn! Hà N i, tháng 10 năm 2011 Tác gi Tr n Bá ð c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… ii DANH M C CÁC CH VI T T T AI: Avian Influenza ARN: Axit Ribonucleic FAO: Food and Agriculture Organization of the United Nations Ig: Immunoglobulin GETS: Gathering Evidence for a Transitional Strategy GIS: Geographic Infomation System HI: Hemagglutination inhibition test HPAI: Highly Pathogenic Avian Influenza IVPI: Intravenous Pathogenicity Index LPAI: Low Pathogenic Avian Influenza OIE: Office Internationale des Epizooties PBS: Phosphate Buffered Saline Re: Reassortant Avian Influenza RRT-PCR: Realtime Reverse Transcription - Polymerase Chain Reaction WHO: World Health Organization Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… iii M CL C L I CAM ðOAN L I C M ƠN DANH M C CÁC CH VI T T T M CL C DANH M C CÁC B NG DANH M C CÁC HÌNH M ð U 1.1 ð t v n ñ 1.2 M c tiêu nghiên c u 1.3 Ý nghĩa khoa h c c a ñ tài T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Gi i thi u chung v b nh cúm gia c m 2.2 L ch s b nh cúm gia c m 2.3 Tình hình d ch cúm gia c m th gi i t i Vi t Nam 2.3.1 Tình hình d ch cúm gia c m th gi i 2.3.2 Tình hình d ch cúm gia c m Vi t Nam 2.4 ð c tính sinh h c c a virus cúm type A 2.4.1 Hình thái c u trúc 2.4.2 ð c tính kháng ngun 2.4.3 Thành ph n hóa h c 2.4.4 Quá trình nhân lên c a virus 2.4.5 ð c l c c a virus 2.4.6 Phân lo i virus 2.4.7 Danh pháp 2.4.8 Nuôi c y lưu gi virus cúm 2.4.9 Mi n d ch ch ng b nh c a gia c m 2.5 D ch t h c b nh cúm gia c m 2.5.1 Phân b d ch b nh 2.5.2 ð ng v t c m nhi m 2.5.3 ð ng v t mang virus 2.5.4 S truy n lây Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… i ii iii iv vi vii 1 2 3 5 10 10 15 15 15 17 18 19 20 20 24 24 24 25 25 iv 2.5.5 S c ñ kháng c a virus cúm 2.5.6 Mùa v phát b nh 2.5.7 T l m c, t lê ch t 2.6 Tri u ch ng, b nh tích c a b nh cúm gia c m 2.6.1 Tri u ch ng lâm sàng 2.6.2 B nh tích đ i th c a b nh cúm gia c m 2.6.3 B nh tích vi th 2.7 Ch n đốn b nh 2.8 Ki m soát b nh 2.9 Vacxin cúm gia c m ð I TƯ NG, N I DUNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 3.1 ð i tư ng, ñ a ñi m th i gian nghiên c u 3.2 N i dung nghiên c u 3.3 Nguyên li u d ng c 3.4 Phương pháp nghiên c u K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 4.1 Tình hình chăn ni, d ch b nh cúm gia c m t i t nh Nam ð nh 4.1.1 Tình hình chăn ni gia c m t nh Nam ð nh t 2008 - 2011 4.1.2 Tình hình d ch cúm gia c m t i t nh Nam ð nh 4.2 Xây d ng b n ñ d ch t b nh cúm gia c m c a t nh Nam ð nh 4.3 K t qu xác ñ nh hàm lư ng kháng th cúm sau tiêm phòng 4.3.1 K t qu tiêm vacxin cúm cho v t t i Nam ð nh t 2008 - 2010 4.3.2 Hàm lư ng kháng th cúm c a v t sau tiêm phòng năm 2010 4.4 Giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m ñàn v t 4.4.1 Giám sát s lưu hành virus cúm tháng 12/2009 tháng 01/2010 4.4.2 Giám sát virus cúm gia c m ñàn v t ch báo 4.4.3 Giám sát s lưu hành c a virus cúm t i ch 4.4.4 Giám sát cúm gia c m d ch nghi ng K T LU N VÀ ð NGH 5.1 K t lu n 5.2 ð ngh TÀI LI U THAM KH O PH L C M T S HÌNH MINH H A Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 26 26 27 27 27 27 28 28 29 30 32 32 32 32 33 39 39 39 41 43 47 47 50 58 59 63 70 71 75 75 76 77 v DANH M C CÁC B NG B ng 2.1: Th ng kê s lư ng ngư i nhi m, ch t cúm A/H5N1 B ng 2.2: Các phân type virus cúm A 19 B ng 4.1: S lư ng gia c m c a t nh Nam ð nh t năm 2008 - 2011 39 B ng 4.2: S lư ng gia c m ch t, tiêu h y d ch cúm t i Nam ð nh 42 B ng 4.3: S xã có d ch cúm gia c m t i t nh Nam ð nh t 2004 - 2011 44 B ng 4.4: T l tiêm vacxin cúm cho ñàn v t t i Nam ð nh t 2008 - 2010 49 B ng 4.5: Hàm lư ng kháng th v t sau tiêm vacxin H5N1 ñ t năm 2010 51 B ng 4.6: Hàm lư ng kháng th v t sau tiêm vacxin H5N1 ñ t năm 2010 55 B ng 4.7: T l b o h c a v t sau tiêm phịng đ t đ t năm 2010 57 B ng 4.8: Giám sát s lưu hành virus cúm A/H5N1 ñàn v t (12/2009) 60 B ng 4.9: Giám sát s lưu hành virus cúm A/H5N1 ñàn v t (01/2010) 62 B ng 4.10: Phân b ñàn v t ch báo t i huy n, thành ph 64 B ng 4.11: K t qu giám sát huy t cúm gia c m ñàn v t ch báo 66 B ng 4.12: Giám sát s lưu hành c a virus cúm ñàn v t ch báo 69 B ng 4.13: K t qu kh o sát cúm gia c m t i ch , ñi m gi t m gia c m 71 B ng 4.14: K t qu xác ñ nh virus cúm gia c m t m u b nh ph m 73 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… vi DANH M C CÁC HÌNH Hình 2.1: C u trúc virus H5N1 13 Hình 2.2: C u trúc Haemagglutinin Neuraminidase 13 Hình 4.1: B n đ d ch cúm gia c m t nh Nam ð nh t năm 2004 - 2011 45 Hình 4.2: S xu t hi n ch ng virus cúm A/H5N1 m i t i xã Nghĩa An 47 Hình 4.3: T l b o h c a v t sau tiêm phòng v c xin đ t năm 2010 53 Hình 4.4: T l b o h c a v t sau tiêm phịng v c xin đ t năm 2010 55 Hình 4.5: T l b o h c a v t sau tiêm phịng đ t đ t năm 2010 58 Hình 4.6: K t qu ñi u tra sàng l c d ch cúm sau đ t ki m tra 63 Hình 4.7: Các xã có đàn v t ch báo t i Nam ð nh năm 2010 - 2011 65 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… vii M ð U 1.1 ð t v n ñ B nh cúm gia c m th ñ c l c cao (Highly Pathogenic Avian Influenza HPAI) m t b nh truy n nhi m nguy hi m gia c m gây b i virus cúm type A thu c h Orthomyxoviridae Cu i năm 2003, cúm gia c m type A/H5N1 l n ñ u tiên xu t hi n t i Vi t Nam, t đ n d ch liên t c x y t i nhi u ñ a phương c nư c tr thành v n ñ d ch t ph c t p xu t hi n nh ng phân dòng (clade) virus m i có đ c l c m nh T i t nh Nam ð nh, t d ch cúm gia c m A/H5N1 ñ u tiên ñư c phát hi n vào tháng 01/2004 ñ n d ch ñã làm ch t, tiêu hu hàng trăm nghìn gia c m, gây thi t h i hàng t ñ ng cho n n kinh t nh hư ng tr c ti p ñ n ñ i s ng, s c kho nhân dân ð phòng, ch ng b nh cúm gia c m bên c nh nhi u bi n pháp k thu t khác gi i pháp tiêm vacxin phịng b nh ñã ñư c t ch c qu c t t ch c Nông nghi p Lương th c liên h p qu c (FAO), t ch c Thú y th gi i (OIE) Chính ph ñ ng ý th c hi n t i Vi t Nam t năm 2005 ñã thu ñư c nh ng k t qu nh t ñ nh vi c phòng ch ng d ch, gi m thi t h i kinh t d ch cúm gây Tuy nhiên, d ch cúm gia c m v n x y ñã xu t hi n nh ng phân dịng virus cúm A/H5N1 m i có kh gây b nh cho c gia c m đư c tiêm phịng b i chúng có c u trúc gen khơng tương đ ng v i virus dùng s n xu t vacxin Hi n nay, d ch cúm gia c m ñ a bàn t nh Nam ð nh t m th i n ñ nh, năm 2009 tồn t nh khơng x y d ch nguy tái phát d ch v n cịn cao ð ch đ ng xây d ng chi n lư c phòng ch ng b nh cúm gia c m ñi u ki n hi n t i v n ñ b c thi t ñ t c n có thêm nh ng nghiên c u, tìm hi u v s lưu hành c a virus cúm gia c m t i th c đ a t có s khoa h c đ đưa gi i pháp phịng ch ng d ch phù h p, h n ch th p nh t thi t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… B ng 4.14: K t qu xác ñ nh virus cúm gia c m t m u b nh ph m t i Nam ð nh t tháng 9/2009 - 3/2011 b ng phương pháp RRT-PCR Gà S ñàn gia c m nghi m c b nh S m u ki m tra S m u (+) 02/2010 Nam Tr c 3/2010 H i H u 11/2010 Ý Yên Vt T l (%) S m u ki m tra S m u (+) T l (%) 0 3 100,0 0 0 0 9 100,0 01/2011 V B n 0 3 100,0 02/2011 Ý Yên 0 3 100,0 3/2011 Nam Tr c 3 100,0 0 3/2011 Ý Yên 3 100,0 0 75,0 18 18 100,0 Th i gian Tên huy n C ng Nh n xét: - Nh ng ca b nh nghi ng cúm xu t hi n c gà v t T ng c ng có m u ph t ng gà 18 m u ph t ng v t m, ch t ñư c l y K t qu xét nghi m có m u gà 15 m u v t dương tính v i virus cúm gia c m, t l dương tính tương ng 75% v i gà 100% v i v t - D ch cúm gia c m ñã tái phát t i huy n Ý Yên Nam Tr c ð c bi t huy n Nam Tr c d ch tái phát t i m t xã sau năm xã Nghĩa An Virus cúm phân l p ñư c t m u b nh ph m d ch c a xã Nghĩa An ñã đư c phân tích gi i trình t gen K t qu cho th y ñây nhánh virus cúm gia c m H5N1 khác nhau, nhánh virus m i xu t hi n 2.3.2-B r t ñ c v i gà Trong th c t m t s trư ng h p d a tri u ch ng lâm sàng, m khám b nh tích đ c m d ch t thu th p ñư c Chi c c Thú y t nh ñã Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 73 có nh n đ nh sơ b đàn gia c m b nhi m virus cúm gia c m th đ c l c cao đ ngh quy n đ a phương ch h chăn ni t ch c tiêu h y ñàn gia c m nhi m b nh chưa có k t qu xét nghi m b nh ph m, ñ ng th i hư ng d n ñ a phương ch chăn nuôi th c hi n bi n pháp ch ng d ch kh n c p nh m khoanh vùng, h n ch lây lan nhanh chóng d p t t d ch Cùng v i phát hi n s xu t hi n c a nhánh virus cúm 2.3.2-B t i Nam ð nh, chương trình giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m t i t nh có nguy cao c nư c cho th y virus nhánh 2.3.2 ñang lưu hành h u kh p t nh mi n B c ðây c khoa h c quan tr ng giúp B Nông nghi p Phát tri n nông thôn, C c Thú y ban hành văn b n ch đ o phịng ch ng cúm gia c m ð c bi t qua ñánh giá hi u l c c a vacxin cúm H5N1 ch ng Re-5 Trung Qu c s n xu t mà Vi t Nam d ki n s d ng đ tiêm phịng năm 2011 2012 cho th y vacxin có b o h r t th p v i virus H5N1 nhánh m i 2.3.2 (hi n Trung Qu c ñã không ti p t c s n xu t vacxin cúm H5N1 ch ng Re-1) T k t qu Chính ph Vi t Nam d ng khơng th c hi n tiêm phịng đ t năm 2011 chưa có vacxin tiêm phịng phù h p Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 74 K T LU N VÀ ð NGH 5.1 K t lu n T k t qu nghiên c u c a ñ tài chúng tơi có m t s k t lu n sau: Tình hình chăn ni gia c m c a t nh Nam ð nh t năm 2008 - 2011 có m c tăng trư ng t 2,3 - 8,0% tăng cao nh t năm 2009 D ch cúm gia c m b t ñ u xu t hi n t i t nh Nam ð nh năm 2004 sau d ch có x y năm ti p theo 2005, 2007, 2008, 2010 2011 ðã xây d ng ñư c b n ñ d ch cúm gia c m c a t nh Nam ð nh t năm 2004 ñ n B n ñ d ch cho th y rõ tình hình d ch cúm gia c m x y t i ñ a phương t nh T l tiêm phòng vacxin cúm H5N1 cho ñàn v t t i Nam ð nh t năm 2008 ñ n 2010 ñ u ñ t t l cao t 85,79 - 105,12% k ho ch tiêm K t qu giám sát sau tiêm phòng vacxin cúm gia c m H5N1 cho ñàn v t năm 2010 t i th i m tháng sau tiêm phịng mũi cho th y t l b o h c a đàn v t ni t i 27 xã c a huy n Nam Tr c, Tr c Ninh, Xuân Trư ng, Ý Yên thành ph Nam ð nh đ t t l khơng cao - ð t 1: t l b o h dao ñ ng t 31,9 - 83,3%, trung bình đ t 62,7% - ð t 2: t l b o h dao ñ ng t 35,4 - 88,9%, trung bình đ t 61,1% D ch cúm gia c m có xu hư ng x y t i nh ng ñ a phương có t l b o h sau tiêm phịng vacxin th p C n tiêm phòng nh c l i mũi cho nh ng v t m i tiêm mũi vacxin ñ ñ m b o mi n d ch phòng ch ng cúm gia c m T i t nh Nam ð nh, nh ng ñàn v t ñã ñư c tiêm phòng vacxin H5N1 cho th y có s lưu hành virus cúm A/H5N1 t l lưu hành 6,4% ñ t ki m tra l n (tháng 12/2009) 0,2% ñ t (tháng 01/2010) V t nhi m virus cúm v n kh e m nh, khơng có bi u hi n tri u ch ng lâm sàng - Trên nh ng v t ch báo nuôi t i 81 xã c a t nh Nam ð nh không phát hi n s lưu hành c a virus cúm gia c m th i gian t 6/2010 - 3/2011 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 75 - K t qu giám sát virus m u d ch h u h ng, d ch nh p c a v t ñư c l y t i ch , ñi m gi t m v t vào tháng 01/2011 05/2011 khơng phát hi n có s lưu hành c a virus cúm gia c m - Giám sát b ñ ng d ch nghi ng cúm gia c m t i t nh Nam ð nh ñã phát hi n ñư c nhánh virus m i xu t hi n t i Nam ð nh clade 2.3.2-B xã Nghĩa An huy n Nam Tr c 5.2 ð ngh - ð tài m i nghiên c u m t ñ i tư ng gây b nh c a virus cúm v t v y c n ti n hành nghiên c u ti p theo ñ i tư ng khác gà, ngan, chim c nh, chim hoang,… - C n ng d ng ph n m m b n ñ ArcGIS lĩnh v c qu n lý khác c a ngành thú y xây d ng b n đ phân b vùng chăn ni lo i v t ni; b n đ phân b nơi thu gom, t p trung ñ ng v t; b n ñ chu i cung ng gia c m (gia súc) bao g m ch bán gia c m (gia súc), lò p n (tr i gi ng), s gi t m , c a hàng bán thu c thú y,… - S m nghiên c u kh o nghi m, th nghi m s n xu t lo i vacxin tương ñ ng v i ch ng virus cúm ñang lưu hành ñ th c hi n tiêm phịng đ m b o an tồn d ch b nh cho ñàn gia c m - ð l a ch n gia c m ch báo ngồi thơng tin thu đư c t vi c ñi u tra, ph ng v n ch h cán b thú y s nh t thi t ph i ti n hành l y m u huy t ñ ki m tra kháng th cúm ð ng th i ph i có bi n pháp ñánh d u phù h p, d nh n bi t v i nh ng gia c m khác ñàn c t m , phun sơn,… Nh ng gia c m khác đàn ch báo khơng tiêm phịng vacxin Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 76 TÀI LI U THAM KH O Tài li u Ti ng Vi t Vũ Tri u An (1998), Mi n d ch h c, Nhà xu t b n Y h c, Hà N i Bùi Ng c Anh, Nguy n Ti n Dũng, Nguy n Thúy Diên, ð Quý Phương, ðào Thanh Văn, Bùi Nghĩa Vư ng, Nguyên Th Vinh (2005), Giám sát b nh cúm gia c m t i Thái Bình T p chí khoa h c k thu t Thú y, t p XII s - 2005 Bùi Quang Anh Văn ðăng Kỳ (2004), B nh cúm gia c m: lưu hành b nh, ch n đốn ki m sốt d ch b nh, T p chí Khoa h c k thu t thú y, t p XI s - 2004 Tr 69 - 75 Ban Ch ñ o Qu c gia phòng ch ng d ch cúm gia c m (2005), Báo cáo t ng k t cơng tác năm (2004 - 2005) phịng ch ng d ch cúm gia c m, H i ngh T ng k t năm phòng ch ng d ch cúm gà, ngày 18/4/2005, Hà N i B Nông nghi p Phát tri n nông thôn (2005), D án s d ng vacxin nh m kh ng ch toán b nh cúm gia c m th đ c l c cao H5N1 B Nơng nghi p PTNT, B Y t (2006), Vi t Nam - Chương trình ph i h p hành đ ng qu c gia phòng ch ng d ch cúm gia c m cúm ngư i 2006 - 2010 (Sách xanh) B Nông nghi p Phát tri n nơng thơn (2011), Quy t đ nh s 305/Qð-BNNTY ngày 25/02/2011 v vi c phê t D án s d ng vacxin nh m kh ng ch tốn b nh cúm gia c m th đ c l c cao giai ño n IV (2011 - 2012) Nguy n Văn C m, T ng H u Hi n, Nguy n Tùng, Nguy n Hoàng ðăng (2011), K t qu cơng cư ng đ c gà, v t, ngan sau dùng vacxin cúm gia c m tái t h p H5N1 ch ng Re-5 c a Trung Qu c, T p chí Khoa h c Thú y, t p XVIII s - 2011 Tr 12 - 16 Tr n H u C n Bùi Quang Anh (2004), B nh cúm gia c m bi n pháp phòng ch ng, Nhà xu t b n Nông nghi p, Hà N i 10 Chi c c Thú y t nh Nam ð nh, Báo cáo t ng k t công tác thú y c a t nh Nam ð nh năm 2008, 2009, 2010 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 77 11 Chi c c Thú y t nh Nam ð nh (2011), Báo cáo t ng k t D án GETS 12 C c Thú y (2005), Các văn b n ch ñ o hư ng d n phòng ch ng d ch cúm gia c m 13 C c thú y (2005), S tay hư ng d n phòng ch ng b nh cúm gia c m b nh cúm ngư i, Hà N i 14 C c Thú y, Báo cáo cơng tác phịng ch ng d ch cúm gia c m năm 2009 2010 15 C c Thú y (2011), Báo cáo công tác qu n lý thú y năm 2010 16 C c Thú y (2011), Công văn s 864/TY-DT ngày 19/5/2011 v vi c lưu hành virus k ho ch tiêm phịng vacxin cúm gia c m đ t năm 2011 17 C c Thú y (2009), Công văn s 1313/TY-DT ngày 06/8/2009 v vi c tri n khai ho t ñ ng d án GETS t i t nh 18 Trương Văn Dung Nguy n Vi t Khơng (2004), M t s ho t đ ng nghiên c u khoa h c c a Vi n Thú y qu c gia v b nh cúm gia c m gi i pháp khoa h c công ngh th i gian t i, T p chí Khoa h c K thu t Thú y, t p XI s - 2004 Tr 62 - 68 19 Nguy n Ti n Dũng (2004), H i th o m t s bi n pháp khơi ph c đàn gia c m sau d p d ch, Hà N i 20 Nguy n Ti n Dũng, ðào Thanh Vân, Bùi Ng c Anh, Kenjiro Inui, Bùi Nghĩa Vư ng, Nguy n Th Vinh, Nguy n Bá Thành, Ph m Th Kim Dung (2005), Giám sát tình tr ng nhi m virus cúm gia c m t i ñ ng b ng sông C u Long cu i năm 2004, T p chí Khoa h c K thu t Thú y, t p XII s 2005 Tr 13-17 21 Ph m Văn ð c (2010), Th nghi m vacxin cúm A/H5N1 (ch ng NIBRG-14 ) Vi t Nam s n xu t đàn gà ni t i t nh Nam ð nh, Lu n văn th c sĩ nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i, Gia Lâm, Hà N i 22 FAO (2007), S tay chim hoang dã b nh cúm gia c m 23 Tr n Xuân H nh (2004), M t vài v n đ phịng b nh cúm gia c m b ng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 78 vacxin, Khoa h c K thu t Thú y, t p XI s - 2004 Tr 84 - 85 24 Ninh Văn Hi u (2005), Tình hình d ch cúm gia c m k t qu tiêm vacxin H5N2, H5N1 c a Trung Qu c đ phịng b nh cho gà, v t ñ a bàn t nh Nam ð nh, Lu n văn th c sĩ nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i, Gia Lâm, Hà N i 25 Ph m S Lăng (2004), Di n bi n b nh cúm gia c m Châu Á ho t đ ng phịng ch ng b nh, Khoa h c K thu t Thú y, t p XI s - 2004 Tr 91 - 94 26 Ph m Sĩ Lăng (2004), H i th o m t s bi n pháp khôi ph c ñàn gia c m sau d p d ch, Hà N i 27 Lê Văn Năm (2004), B nh cúm gà T p chí Khoa h c k thu t Thú y, t p XI s - 2004 28 Lê Văn Năm (2004), K t qu kh o sát bi u hi n lâm sàng b nh tích đ i th b nh cúm gia c m m t s sơ s chăn nuôi t nh phía B c, T p chí Khoa h c k thu t Thú y, t p XI s - 2004 29 Lê ðình Nghi, Tr n Th Dân, Nguy n T t Toàn (2010), Hi u giá kháng th sau tiêm phòng t l nhi m b nh cúm A (H5N1) ñàn v t ngan t i t nh ð ng Tháp, T p chí Khoa h c Thú y, t p XVII s - 2010 Tr - 10 30 Nguy n Hoài Tao, Nguy n Tu n Anh (2004), M t s thông tin v d ch cúm gia c m, Chăn nuôi s - 2004 31 Nguy n Như Thanh (1997), Mi n d ch h c Thú y, Nhà xu t b n Nông nghi p 32 Tô Long Thành (2004), Thông tin c p nh t v tái xu t hi n b nh cúm gia c m t i nư c Châu Á, Khoa h c K thu t Thú y, t p XI s - 2004 Tr 87 - 93 33 Tô Long Thành (2006), Thông tin c p nh t v b nh cúm gia c m vacxin phòng ch ng, Khoa h c K thu t Thú y, t p XIII s - 2006 Tr 66 - 76 34 Nguy n Tùng, ð Th Hoa, Ngô Th Thu Hương, Nguy n Văn C m, Nguy n Bá Hiên (2011), Xác ñ nh m t s ñ c tính virus cúm gia c m ñ c l c cao H5N1 nhánh phân l p Vi t Nam, T p chí Khoa h c Thú y, t p XVIII s - 2011 Tr - 11 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 79 35 Nguy n Tùng, Nguy n Hoàng ðăng, Ngô Th Thu Hương, ð Th Hoa, Kenjiro Inui, Nguy n Văn C m, Nguy n Bá Hiên (2011), ð c l c c a virus cúm gia c m ñ c l c cao H5N1 nhánh gia c m, T p chí Khoa h c Thú y, t p XVIII s - 2011 Tr - 10 36 Tr n Quang Vui, Nguy n Th Bích Nga, Nguy n Bá Hiên, Lê Thanh Hịa, ð c ñi m gen NS c a virus cúm A/H5N1 ch ng A/Ck/Vietnam/HG4/2005 so sánh v i m t s ch ng c a Vi t Nam Và th gi i, T p chí Khoa h c k thu t Thú y, t p XVII s - 2010 Tr - 13 Tài li u Ti ng Anh 37 Alexander, D.J (2000), A review of avian infuenza in different bird species Vet Microbiol 74: 3-13 38 Alexander D.J (2003), Report on Avian Influenza in the Eastern Hemisphere during 1997-2002, Veterinary Laboratories Agency Weybridge, United Kingdom: 792-797 39 Castrucci MR and Kawaoka Y (1993) Biologic importance of neuraminiase stalk length in influenza A virus J Virol 67: 759-764 40 Food and Agriculture Organization of the United Nations - FAO (2004), FAO, OIE & WHO Technical consultation on the Control of Avian Influenza, Animal health specical report 41 Holsinger LJ, Nichani D, pinto LH and Lamb RA (1994) Influenza A virus M2 ion channel protein: a structure-fuction analysis J virol 68: 1551-1563 42 Horimoto T and Kawaoka Y (1994) Reverse genetics provides direct evidence for a correlation of hemagglutinin cleavability and virulence of an avian influenza A virus J Virol 68: 3120-3128 43 Ito T and Kawaoka Y (1998), Avian influenza P 126-136 In Nicholson KG, Webster RG, Hay AJ (eds.), Textbook of influenza, Blackwell Sciences Ltd., Oxford, United Kingdom Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 80 44 Webster RG, Peiris M, Chen H and Guan Y (2006) H5N1 Outbreaks and Enzootic Influenza Emerg Infect Dis 12 (1) Danh m c trang web 45 Các văn b n ch ñ o c a Trung ương v phòng ch ng d ch cúm gia c m trang web c a C c Thú y, http://www.cucthuy.gov.vn 46 ESRI, ArcInfo Ngu n http://www.esri.com/software/arcgis/arcinfo/index.html Ngày truy c p 20/6/2011 47 Eropean Union (EU) Scientific Committee on Animal Health and Animal Welfare (SCAHAW) (2003) Food Safety: Diagnostic Techniques and Vaccines for Foot and Mouth Disease, Classical Swine Fever, Avian Influenza and some other important OIE List A Diseases Report of the Scientific Committee on Animal Health and Animal Welfare http://europes.eu.int/comm/food/fs/sc/scah/out93 48 Vidagis (2008), Ph m m m GIS ESRI Ngu n http://www.vidagis.com/vn/index.php?option=com_content&view=article& id=76&Itemid=98&lang=vi Ngày truy c p 05/3/2011 49 WHO (2011), Cumulative Number of Confirmed Human Cases of Avian Influenza A/H5N1, Reported to WHO Ngu n http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/country/cases_table_2011_ 06_22/en/index.html Ngày truy c p 23/6/2011 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 81 PH L C Môi trư ng b o qu n b nh ph m B nh ph m d ch ngoáy nh p, h ng, khí qu n đư c đ ng ng ch a dung d ch b o qu n Có th s d ng mơi trư ng 199 ho c mơi trư ng glycerol có b sung kháng sinh, b o qu n 40C t - ngày, n u lâu nên gi nhi t ñ -200C - Môi trư ng 199 ch a 0,5% BSA (Albumin huy t bò) B sung kháng sinh Penicillin G 2.000.000U/lít Streptomycin 200 mg/lít Polymyxin B 2.000.000 U/lít Gentamicin Nystatin Ofloxacin HCl Sulfmethoxasole 250 mg/lít 500.000 U/lít 60 mg/lít 200 mg/lít - Mơi trư ng Glycerol + Pha ch PBS NaCl KCl 8g 0,2 g Na2HPO4 1,15 g KH2PO4 0,2 g Nư c c t vñ 1000 ml + H p vô trùng (1210C/15) phút, b sung kháng sinh (như trên) tr n v i glycerol theo t l 1:1 Ngồi có th s d ng môi trư ng b o qu n khác như: Mu i đ m Hank, mơi trư ng M.E.M, PBS, Tryptose Phosphate broth, Veal Infusion Broth, Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… Sucrose-phosphate buffer Các dung d ch có th ñư c b sung bovine serum albumin (BSA), gelatin 0,5 - 1%, ch t kháng sinh, kháng n m K thu t chi t tách ARN (b kit Qiagen RNeasy) làm ph n ng RRT-PCR Các m u b nh ph m mô, ph t ng c a gia c m nghi m c cúm ñư c nghi n, pha 1/10 v i dung d ch PBS pH 7,0 - 7,4 r i ly tâm 1.000 vòng 10 phút l y d ch n i ñ chi t tách ARN M u d ch ngoáy ho c d ch ni u mô thu ho ch sau tiêm tr ng ch c n ly tâm r i l y d ch n i chi t tách K thu t chi t tách b ng b kit Qiagen RNeasy th c hi n theo hư ng d n c a nhà s n xu t sau: - Nh 200 µl d ch nghi n mơ (ho c 500 µl d ch swab) vào ng ly tâm 1,5 ml v i 500µl Buffer RLT có b sung 1% β-ME, l c đ u máy Votex r i ly tâm nh - Thêm 500µl c n Ethanol 70% vào ng, l c m nh b ng máy Votex r i ly tâm nh - Chuy n t t c d ch n i sang c t l c RNeasy Qiagen, ly tâm 15 giây v i t c ñ ≥ 8.000 vịng nhi t đ phịng - Nh 700 µl dung d ch r a (RW1 buffer) vào c t l c RNeasy Qiagen, ly tâm 15 giây t c đ ≥ 8.000 vịng, thay ng thu m i vào c t l c - Nh 500 µl dung d ch r a RPE buffer vào c t l c ly tâm 15 giây t c ñ ≥ 8.000 vòng, thay ng thu m i, l p l i l n v i dung d ch r a RPE buffer - Thay ng thu m i, ly tâm c t l c ng thu phút b t c ñ t i ña, ng thu - ð t c t l c vào ng thu ARN, nh 50 µl RNase free H2O vào c t l c, nhi t đ phịng nh t phút Tách ARN b ng cách ly tâm phút t c đ ≥ 8.000 vịng, b c t l c, gi l i d ch ng thu ARN - B o qu n m u ARN thu ñư c 4oC th i gian ng n trư c làm RRT-PCR, n u sau 24 gi , nên b o qu n m u - 20oC ho c nhi t ñ th p Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… Công th c pha h n h p ph n ng dùng k thu t RRT-PCR: Cơng th c có th thay ñ i cho phù h p v i t ng lo i primer t ng lo i kit rRT-PCR khác Công th c áp d ng cho kit RT-PCR bư c c a hãng Qiagen: H2O 10,5 µl 5X reaction mix µl MgCl2 1,2 µl Dntp 0.8µl Enzyme mix 1µl Primer forward 0,5 µl Primer reverse 0,5 µl Probe 0.5 µl M u ARN µl T ng c ng 25 µl Trình t c p m i s d ng cho ph n ng RRT-PCR Gen Trình t m i (primer) m u dò (probe) M M u dò: TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG M i xuôi: CAT GGA RTG GCT AA GAC AAG ACC M i ngư c: AGG GCA TTT TGG ACA AAK CGT CTA H5 M u dò: TCA ACA GTG GCG AGT TCC CTA GCA M i xuôi: ACG TAT GAC TAC CCG CAG TAT TCA M i ngư c: AGA CCA GCT ACC ATG ATT GC N1 M u dò: TGG TCT TGG CCA GAC GGT GC M i xuôi: TGG ACT AGT GGG AGC AGC AT M i ngư c: TGT CAA GGT TAA GGG CAA CTC Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… Th i gian, nhi t ñ chu kỳ nhi t c a bư c phiên mã ngư c, t ng h p gen ph n ng RRT-PCR - Chu kỳ nhi t c a bư c phiên mã ngư c (RT) dùng cho Quiagen one step RT-PCR kit chu kỳ 30 phút 500C 15 phút Bư c phiên mã ngư c 950C - Chu kỳ nhi t cho t ng h p gen c p m i C pm i Bư c Th i gian Nhi t đ 20 giây 600C Bi n tính giây 940C 20 giây 580C Bi n tính giây 940C 20 giây 570C Kéo dài chu i t ng h p 40 chu kỳ 940C Bám c a c p m i H5 40 chu kỳ giây Bám c a c p m i H7 45 chu kỳ Bi n tính Bám c a c p m i AIV matrix giây 720C Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… M TS HÌNH MINH H A Vacxin cúm H5N1 ch ng Re-1 Tiêm phòng vacxin cúm gia c m cho v t ðeo vòng chân cho v t ch báo L y m u huy t v t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… Chi t tách ARN t m u Màn hình hi n th k t qu c a ph n b nh ph m gia c m ng RRT-PCR Ph n ng ngăn tr ngưng k t h ng c u HI d ch cúm tháng 3/2011 t i xã Nghĩa An, huy n Nam Tr c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… ... đoan rằng: - Các kết nghiên cứu luận văn trung thực, khách quan cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn đà đợc cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn đà đợc rõ nguồn... vă Tác giả luận văn Trầ Đức Trần Bá Đức Tr ng i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… i L I C M ƠN Trong su t năm h c t p hoàn thành lu n văn, v i n l c c... y; Chi c c Thú y t nh Nam ð nh giúp đ tơi hồn thành chương trình h c t p hoàn thành lu n văn t t nghi p Nhân d p hoàn thành lu n văn, cho phép tơi đư c g i l i c m ơn sâu s c t i gia đình, ngư