Nghiên cứu ảnh hưởng của kích thước hạt gel và phương pháp hoạt hóa tới hiệu suất lên men rượu từ rỉ đường bằng phương pháp cố định tế bào

i LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình học tập tại trường Đại học Nha Trang em đã được các Thầy Cô cung cấp, truyền đạt và chỉ bảo nhiệt tình tất cả kiến thức nền tảng và chuyên môn quý giá. Ngoài ra em còn được rèn luyện một tinh thần học tập và làm việc rất cao. Đây là những yếu tố cơ bản giúp em nhanh chóng hoà nhập với môi trường làm việc sau khi ra trường. Đó cũng là nền tảng vững chắc giúp em thành công trong sự nghiệp sau này. Đồ án tốt nghiệp là cơ hội để em có thể áp dụng, tổng kết những kiến thức mà mình đã học, đồng thời rút ra những kinh nghiệm thực tế quý giá trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Trước hết cho em gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu trường ĐH Nha Trang, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ thực phẩm, phòng thí nghiệm Công nghệ thực phẩm, phòng thí nghiệm Hóa sinh, phòng thí nghiệm Vi sinh, phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học đã tạo điều kiện giúp đỡ em trong thời gian thực hiện đề tài Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Đặng Thị Thu Hương - GVHD trực tiếp của em đã giúp em hoàn thành đồ án một cách thuận lợi. Cô đã luôn bên cạnh để đóng góp sửa chữa những thiếu sót, khuyết điểm em mắc phải và đề ra hướng giải quyết tốt nhất từ khi em nhận đề tài đến khi hoàn thành. Một lần nữa em xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của các Thầy Cô. Em cũng xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, đã ủng hộ, động viên tinh thần giúp em hoàn thành đồ án tốt nghiệp. Nha Trang, tháng 06 năm 2012 Sinh viên Tăng Thị Thủy ii MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BẢNG v LỜI MỞ ĐẦU 1 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 2 1.1. Tổng quan về rỉ đường mía 2 1.1.1. Thành phần hoá học của rỉ đường mía 2 1.1.2. Ứng dụng của rỉ đường mía 3 1.2. Tổng quan về quá trình lên men rượu etylic 5 1.2.1. Bản chất của quá trình lên men rượu etylic 5 1.2.2. Diễn biến và các thời kỳ lên men rượu etylic 7 1.2.3. Nguyên liệu và các phương pháp lên men rượu etylic 9 1.2.4. Tác nhân lên men rượu etylic 10 1.3. Tổng quan về kỹ thuật cố định tế bào 11 1.3.1. Giới thiệu về cố định tế bào 11 1.3.2. Ưu điểm của việc cố định tế bào 12 1.3.3. Các phương pháp cố định tế bào 14 1.3.4. Kỹ thuật cố định tế bào bằng phương pháp bẫy 15 1.3.5. Giới thiệu chung về chất mang Alginate 16 1.3.6. Các nghiên cứu về ứng dụng của alginate trong lĩnh vực cố định tế bào 20 CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1. Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.1. Nguyên liệu chính - rỉ đường 24 2.1.2. Nguyên liệu phụ 24 2.1.3. Các dụng cụ và thiết bị dùng trong nghiên cứu 24 2.2. Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1. Sơ đồ quy trình 25 2.3.2. Nội dung nghiên cứu 27 iii 2.3.3. Bố trí thí nghiệm 27 2.3.4. Phương pháp xử lý nguyên liệu và nuôi cấy tế bào nấm men 30 2.3.5. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu 31 2.3.5.1. Phương pháp phân tích 31 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 32 3.1. Kết quả xác định ảnh hưởng của kích thước hạt đến hiệu suất lên men rượu32 3.1.1.Ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến thời gian lên men 32 3.1.2. Ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến hiệu suất lên men 34 3.2. Kết quả xác định ảnh hưởng của phương pháp hoạt hóa đến hiệu suất lên men rượu 35 3.2.1. Kết quả thí nghiệm xác định số lần tái sử dụng hạt gel 36 3.2.2. Kết quả xác định nồng độ oxy hòa tan bổ sung 37 3.3. Đề xuất quy trình lên men từ rỉ đường bằng tế bào cố định 39 3.4. Đánh giá hiệu suất lên men 39 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 41 Kết luận 41 Đề xuất ý kiến 41 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Sơ đồ lên men rượu etylic . 8 Hình 1.2. Nấm men vừa mới chớm nở được quan sát bằng kính hiển vi điện tử 11 Hình 1.3. Hình ảnh tế bào cố định trong alginate. 12 Hình 1.4. Cấu tạo của hai monomer α-L-guluronic acid và β-D-manuronic acid 16 Hình 1.5. Các dạng alginate 17 Hình 1.6. Mô hình tạo gel dạng vỉ trứng của alginate canxi. 18 Hình 1.7. Quá trình tạo gel alginate canxi theo phương pháp khuếch tán 22 Hình 2.1. Rỉ đường sau khi thu mua. 24 Hình 2.2. Sơ đồ quy trình nghiên cứu 25 Hình 2.3. Sơ đồ thí nghiệm xác định ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến hiệu suất lên men 28 Hình 2.4. Sơ đồ thí nghiệm xác định ảnh hưởng của phương pháp hoạt hóa đến hiệu suất lên men 30 Hình 3.1: Lượng đường sót trong dịch lên men theo thời gian ở các kích thước hạt gel 1, 2, 5, 10, 25ml 32 Hình 3.2: Hiệu suất lên men theo thời gian ở các kích thước hạt gel 1, 2, 5, 10, 25ml 34 Hình 3.3. Hiệu suất lên men ở các kích thước hạt gel sau 48h lên men 35 Hình 3.4: Hiệu suất lên men sau 48h ở các lần tái sử dụng với kích thước hạt gel 25ml 36 Hình 3.5. Quy trình lên men rỉ đường 39 v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Thành phần hóa học của rỉ đường mía 2 Bảng 1.2: Thành phần chất hữu cơ của rỉ đường 3 Bảng 1.3. Tóm tắt các đặc điểm chính của các phương pháp cố định 14 Bảng 1.4. Một số ứng dụng của alginate trong kỹ thuật cố định tế bào 20 Bảng 3.1. Thời gian lên men để đường sót 5mg/ml 33 Bảng 3.2: Kết quả xác định hiệu suất lên men sau khi bổ sung oxy 38 1 LỜI MỞ ĐẦU Rượu etylic hay ethanol là một hợp chất hữu cơ trong dãy đồng đẳng của rượu metylic có công thức hóa học là C 2 H 5 OH hay CH 3 -CH 2 -OH. Rượu etylic là một chất lỏng, không màu, mùi thơm dễ chịu, vị cay, nhẹ hơn nước, sôi ở nhiệt độ 78,39 0 C, hóa rắn ở -114,15 0 C, tan trong nước vô hạn. Nguyên liệu để sản xuất rượu etylic là các nguyên liệu giàu tinh bột (gạo, sắn, ngô…) hay đường (rỉ đường…). Tác nhân để thực hiện quá trình lên men rượu etylic thường là nấm men. Người ta có thể cho trực tiếp hoặc nhốt chúng trong các „bẫy‟ và khi đó nó trở thành tế bào cố định. Tế bào cố định được hiểu là ngăn không cho chúng chuyển động tự do với các tế bào lân cận nó trong pha lỏng. Có nhiều phương pháp cố định đã được các nhà khoa học nghiên cứu, ở đây chỉ xét phương pháp “bẫy” gel. Cố định tế bào là một hướng phát triển mới trong công nghệ sinh học. Những tế bào cố định được nghiên cứu và ứng dụng vào trong hóa học, thực phẩm, nhiên liệu, y học và xử lý nước thải… Hiện nay, nguồn rỉ đường chủ yếu dùng làm thức ăn gia súc. Vấn đề xử lý rỉ đường đang là vấn đề được các nhà máy đường quan tâm, trong đó có một hướng là cho lên men rượu. Kỹ thuật lên men rượu bằng phương pháp cố định tế bào đã được áp dụng, nhưng việc nghiên cứu về kích thước hạt gel, phương pháp hoạt hóa tế bào chưa được quan tâm. Do đó, em được sự phân công của Nhà trường và Khoa Công nghệ thực phẩm cho thực hiện đề tài: “Nghiên cứu ảnh hƣởng của kích thƣớc hạt gel và phƣơng pháp hoạt hóa tới hiệu suất lên men rƣợu từ rỉ đƣờng bằng phƣơng pháp cố định tế bào” Qua hơn 3 tháng thực tập tại phòng thí nghiệm thuộc trung tâm thí nghiệm thực hành của trường em đã hoàn thành được những yêu cầu của đề tài. Mặc dù em đã hết sức cố gắng nhưng do thời gian có hạn nên báo cáo không tránh khỏi những thiếu sót. Vì vậy, em rất mong nhận được ý kiến đóng góp của quý Thầy Cô và các bạn để báo cáo được hoàn thiện hơn. Em xin chân thành cảm ơn! 2 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1. Tổng quan về rỉ đƣờng mía Rỉ đường mía là một sản phẩm phụ tạo ra trong quá trình sản xuất đường từ cây mía, nó chính là đường không kết tinh được, do đó tồn tại ở trạng thái mật và lẫn một số hợp chất khác. Màu sắc của rỉ đường mía thường là màu nâu đen, do quá trình caramen hóa, được tạo thành do phản ứng giữa đường với NH 2 CH 2 COOH [8]. Rỉ đường mía là hỗn hợp gồm nhiều loại đường: Saccharoza, glucoza, fructoza, maltoza… 1.1.1. Thành phần hoá học của rỉ đƣờng mía [12] Thành phần hóa học chính xác của rỉ đường mía rất khó dự đoán vì nó phụ thuộc vào điều kiện thổ nhưỡng, thời tiết, khí hậu, giống mía và giai đoạn thu hoạch cũng như quy trình sản xuất đường trong từng nhà máy. Do vậy thành phần dinh dưỡng, mùi vị, màu sắc và độ nhớt của rỉ đường không ổn định. Bảng 1.1 cho thấy biến động của các thành phần của rỉ đường Bảng 1.1: Thành phần hóa học của rỉ đường mía Thành phần Trung bình Biến động Nước 20 17-25 Sucroza 35 30-40 Glucoza 7 4-9 Fructoza 9 5-12 Các chất khử khác 3 1-5 Các glucid khác 4 2-5 Khoáng 12 7-15 Các chất chứa N 4,5 2-6 Các acid không chứa N 5 2-8 3 Sáp, sterol và phôtpholipid 0,4 0,1-1 Sắc tố - - Vitamin - - Nguồn: Wolfrom và Binkley (1953) Các loại glucid hoà tan (đường đôi và đường đơn) là thành phần dinh dưỡng chính của rỉ đường, trong đó sucroza là chủ yếu (bảng 1.1). Rỉ đường mía có đặc điểm là có tỷ lệ đường khử tương đối cao. Trong chu trình kết tinh các loại đường khử tăng lên tới mức mà sucroza không thể kết tinh được nữa bởi vì đường khử làm giảm khả năng hoà tan của sucroza. Các chất khoáng có xu hướng giữ sucroza trong dung dịch, cho nên cân bằng giữa đường khử và chất khoáng sẽ quyết định sản lượng sucroza lý thuyết có từ cây mía. Phần sirô còn lại thường được coi là rỉ đường. Tổng lượng đường trong rỉ đường củ cải đường thường thấp hơn trong rỉ đường mía, nhưng lại chứa hầu như toàn bộ là sucroza. Bảng 1.2: Thành phần chất hữu cơ của rỉ đường Nguồn: Sreg và Van de Meer (1985) 1.1.2. Ứng dụng của rỉ đƣờng mía Rỉ đường được ứng dụng trong sản xuất nhiều sản phẩm như: bột ngọt, rượu rum, sản xuất nấm men, acid lactic, cồn, tăng sinh khối protein. Ngoài còn rất nhiều các quy trình công nghệ tiên tiến khác cũng dùng rỉ đường làm nguyên liệu như: Micromix-3 kết hợp bổ sung rỉ đường NPK để xử lý rác, xử lý vỏ đầu tôm với rỉ đường và enzym dùng làm thứ ăn cho gia súc, gia cầm,… Thành phần Rỉ đƣờng cải đƣờng Rỉ đƣờng mía Sucroza 66 44 Fructoza 1 13 Glucoza 1 10 Acid amin 8 3 Các chất khác 24 30 4 Dùng rỉ đường làm nguyên liệu để lên men vì trong rỉ đường có những đặc tính phù hợp với quá trình lên men như sau: Rỉ đường chứa hàm lượng đường cao. Ngoài đường saccharose còn chứa nhiều chất hữu cơ, vô cơ, các chất thuộc vitamin và các chất điều hoà sinh trưởng. Trong đó có vitamin H (biotin) là chất kích thích sinh trưởng đối với phần lớn nấm men. Trong 2 loại rỉ đường thì rỉ đường từ mía có hàm lượng biotin cao hơn rỉ đường từ củ cải đường. Chính vì thế, ở nhiều nước không có mía, người ta phải nhập rỉ đường từ mía về trộn chung với rỉ đường từ củ cải đường để đảm bảo hàm lượng biotin cho nấm men phát triển. Tuy nhiên rỉ đường cũng có những đặc điểm không phù hợp với quá trình lên men. Muốn sử dụng chúng cho quá trình lên men, ta phải tiến hành một số quá trình xử lý. Các đặc điểm ảnh hưởng quá trình lên men là: Rỉ đường thường có màu nâu sẫm, được tạo ra trong quá trình chế biến đường. Màu này rất khó bị phá hủy trong quá trình lên men. Sau khi lên men, chúng sẽ bám vào sinh khối nấm men và tạo cho nấm men có màu vàng sẫm. Màu này không phải màu tự nhiên của nấm men và việc tách màu ra khỏi sinh khối rất tốn kém và khó khăn. Các chất màu này bao gồm các hợp chất caramen, phức chất của phenol – Fe +2, Melanoidin, Melanin. Hàm lượng đường khá cao, nên khi tiến hành lên men phải pha loãng tới nồng độ thích hợp cho sự phát triển của nấm men. Hệ keo trong rỉ đường có ảnh hưởng xấu đến quá trình lên men. Hệ keo trong rỉ đường hình thành bởi protein và pectin. Hệ keo này tạo ra độ nhớt cao làm giảm khả năng hoà tan của oxy, làm cản trở quá trình trao đổi chất của tế bào nấm men. Nếu hệ keo không được phá sẽ gây thoái hoá tế bào, dẫn đến hiệu suất thu nhận sinh khối nấm men thấp [1]. Bên cạnh đó sản phẩm phụ là CO 2 thu được trong quá trình lên men rỉ đường để cung cấp cho các cơ sở sản xuất nước giải khát có gas cũng thu được khối lượng đáng kể. C 6 H 12 O 6 2C 2 H 5 OH + 2CO 2 Theo công thức trên lượng CO 2 thu được chiếm (44:46)% = 95,65% khối lượng cồn tinh khiết, qua khảo sát tại cơ sở sản xuất cồn với giá hiện tại 1.800 5 đồng/kg CO 2 sản phẩm phụ thu được đủ trả chi phí nhân công lao động trong toàn cơ sở.  Bảo quản rỉ đường Hiện nay các công ty sản xuất đường thải ra một lượng rỉ đường từ 32%÷35% so với đường thành phẩm. Với lượng lớn rỉ đường như vậy không thể tiêu thụ, sử dụng hết ngay trong vụ ép vì vậy phải có kho chứa. Kho chứa rỉ đường thường là hệ bồn hình tròn có thể đổ bê tông cốt thép hoặc bằng thép có sức chứa từ 100 - 200 tấn rỉ, mỗi bồn nhất thiết phải có mái che mưa nắng. Trước van xả bố trí hệ thống gia nhiệt để làm loãng trước khi lấy rỉ đường vì rỉ đường để lâu bùn cát và một số đường saccharose kết tinh chặt dưới đáy, mùa lạnh sẽ không thể lấy ra được 1.2. Tổng quan về quá trình lên men rƣợu etylic 1.2.1. Bản chất của quá trình lên men rƣợu etylic [15] Lý thuyết về lên men rượu đã được nhiều nhà khoa học nghiên cứu từ lâu. Năm 1769, Lavoisier phân tích sản phẩm lên men rượu và nhận thấy, khi lên men đường không chỉ biến thành rượu mà còn tạo ra acid axetic. Năm 1810, Gaylussac nghiên cứu và thấy rằng, cứ 45 phần khối lượng đường glucoza khi lên men sẽ tạo ra 23 phần alcol etylic và 22 phần khí cacbonic. Trên cơ sở đó ông đưa ra phương trình tổng quát về lên rượu như sau: C 6 H 12 O 6 2C 2 H 5 OH + 2CO 2 + Q Năm 1857, Louis Pasteur tiếp tục nghiên cứu và thấy rằng, cứ 100 phần đường saccaroza khi lên men sẽ tạo ra 51,1 phần alcol etylic; 48,4 phần CO 2 ; 32 phần glyxerin; 0,7 phần acid succinic và 2 phần các sản phẩm khác. Từ đó ông suy ra, cứ 45 phần khối lượng glucoza khi lên men sẽ cho 21,8 phần rượu chứ không phải 23 phần như Gaylussac đã tính. Tuy nhiên, phương trình lên men do Gaylussac đưa ra vẫn đúng và được dùng làm cơ sở để tính hiệu suất lên men và hiệu suất thu hồi rượu theo lý thuyết. Passteur cho rằng, sự lên men chỉ xảy ra khi có mặt của vi sinh vật. Nếu ngăn ngừa không cho vi sinh vật tiếp xúc với dịch đường thì hiện tượng lên men sẽ không [...]... cứu ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến hiệu suất lên men - Nghiên cứu ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến thời gian lên men - Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp hoạt hóa đến hiệu suất lên men - Đánh giá hiệu suất lên men 2.3.3 Bố trí thí nghiệm 2.3.3.1 Thí nghiệm xác định ảnh hƣởng của kích thƣớc hạt gel đến hiệu suất lên men 28 Dung dịch alginate và sinh khối nấm men theo tỉ lệ 1:1 Tạo hạt gel ở... các kích thước pipet 1ml 2ml 5ml 10ml 25ml Ổn định hạt gel Rửa hạt gel Thiết bị lên men chứa dịch rỉ đường đã chuẩn bị Lên men Chưng cất Xác định độ rượu Dịch lên men Xác định hiệu suất lên men Xác định lượng đường sót Chọn kích thước thích hợp Hình 2.3 Sơ đồ thí nghiệm xác định ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến hiệu suất lên men Sau khi rửa hạt gel ở các kích thước khác nhau, ta cho hạt gel vào... định ảnh hƣởng của phƣơng pháp hoạt hóa tế bào cố định đến hiệu suất lên men Quy trình nghiên cứu được thực hiện sau chu kỳ lên men thứ 4 của quá trình lên men gián đoạn Sau chu kỳ lên men thứ 4 thì tế bào cố định có khả năng bị giảm hoạt lực do đó hiệu suất lên men rượu sẽ giảm, vì vậy sau mỗi chu kỳ lên men muốn tận dụng khả năng lên men của tế bào cố định thì ta phải hoạt hóa nó Có hai phương pháp. .. lên men Mỗi bình lên men là một kích thước hạt gel Tiến hành lấy dịch lên men ở các thời điểm sau 12, 24, 36, 48, 96h lên men trong các bình lên men để xác định hàm lượng đường 29 sót và chưng cất xác định độ rượu Dựa vào hàm lượng đường sót và độ rượu thu được ta xác định được hiệu suất lên men ở các kích thước và từ đó có thể chọn được kích thước hạt gel lên men thích hợp 2.3.3.2 Thí nghiệm xác định. .. hai phương pháp để hoạt hóa tế bào cố định: Phương pháp thứ nhất là hạt gel sau khi lên men chu kỳ 4, được rửa sạch bằng dung dịch muối sinh lý và cho vào dịch rỉ đường lên men Không khí được sục vào KMnO4 0,1% để vô trùng và sục vào lòng dung dịch lên men chứa các hạt gel Phương pháp thứ hai là sau khi hạt gel lên men chu kỳ 4, được rửa bằng dung dịch muối sinh lý và cho hạt gel vào môi trường có thành... thực hiện sau chu kỳ lên men thứ 4 của quá trình lên men gián đoạn Quy trình nghiên cứu theo sơ đồ sau : Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp hoạt hóa 30 Hạt gel sau lên men lần 4 Bình lên men có chứa dịch rỉ đường đã chuẩn bị Sục khí ở các thời gian khác nhau 5, 10, 15, 20 phút Nhiệt độ phòng Lên men pH = 5 Dịch lên men Chưng cất Xác định lượng đường sót Xác định hiệu suất lên men Chọn thời gian... phƣơng pháp cố định tế bào Để lựa chọn được phương pháp cố định tế bào thích hợp cần căn cứ vào rất nhiều yếu tố Có nhiều phương pháp cố định tế bào đã được nghiên cứu: phương pháp hấp thụ, kết bông, liên kết cộng hóa trị, ngăn chặn, bẫy gel Các phương pháp này có các ưu điểm và nhược điểm được trình bày như bảng 1.3 dưới đây: Bảng 1.3 Tóm tắt các đặc điểm chính của các phương pháp cố định Phương pháp. .. thác hiệu quả các tế bào cố định Thứ nhất là sản phẩm sau khi cố định phải có hoạt tính xúc tác sinh học mạnh và kéo dài Độ bền của sản phẩm cố định là điều quan trọng thứ hai Đối với việc cố định các tế bào để lên men rượu thì các tác giả cũng tập trung vào hai vấn đề này Có nhiều phương pháp cố định tế bào và các chất mang khác 21 nhau dùng vào mục đích cố định Nhưng có lẽ phương pháp được nghiên cứu. .. lên men và lấy dịch lên men sau 12h để xác định hàm lượng đường sót, chung cất xác định độ rượu Dựa vào hàm lượng đường sót và độ rượu thu được ta xác định được hiệu suất lên men và từ đó có thể xác định được thời gian sục khí thích hợp 2.3.4 Phƣơng pháp xử lý nguyên liệu và nuôi cấy tế bào nấm men Phƣơng pháp xử lý nguyên liệu Nguyên liệu ban đầu là dịch rỉ đường 65oBx, pH= 5,6 không thể lên men rượu. .. bằng khúc xạ kế ATC Xác định hàm lượng đường ban đầu trong rỉ đường và hàm lượng đường sót trong dịch giấm chín bằng phương pháp Graxianop [6] Xác định số tế bào nấm men bằng phương pháp đếm [14] Xác định độ cồn bằng cồn kế Xác định hiệu suất lên men: hiệu suất lên men là tỉ lệ % giữa độ rượu thu được so với độ rượu theo lý thuyết [2] Xác định DO bằng máy đo Oxi200 2.3.5.2 Phƣơng pháp xử lý số liệu Các . ảnh hưởng của kích thước hạt đến hiệu suất lên men rượu3 2 3.1.1 .Ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến thời gian lên men 32 3.1.2. Ảnh hưởng của kích thước hạt gel đến hiệu suất lên men 34 3.2 trường và Khoa Công nghệ thực phẩm cho thực hiện đề tài: Nghiên cứu ảnh hƣởng của kích thƣớc hạt gel và phƣơng pháp hoạt hóa tới hiệu suất lên men rƣợu từ rỉ đƣờng bằng phƣơng pháp cố định tế bào . Giới thiệu về cố định tế bào 11 1.3.2. Ưu điểm của việc cố định tế bào 12 1.3.3. Các phương pháp cố định tế bào 14 1.3.4. Kỹ thuật cố định tế bào bằng phương pháp bẫy 15 1.3.5. Giới thiệu