Nghiên cứu tình hình nhiễm virus viêm gan b ở cán bộ, công chức đến khám sức khỏe tại một số cơ sở y tế thành phố huế năm 2011

Virus viêm gan B được lây truyền chủ yếu qua đường máu và các sảnphẩm từ máu, qua quan hệ tình dục không an toàn, từ mẹ sang con… Theo Tổchức y tế thế giới, vùng dịch lưu hành cao có đườ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC

PHẠM THỊ HỒNG MINH

NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH NHIỄM VIRUS VIÊM GAN B

Ở CÁN BỘ, CÔNG CHỨC ĐẾN KHÁM SỨC KHỎE TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ Y TẾ THÀNH PHỐ HUẾ NĂM 2011

LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC

HUẾ - 2012

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC

PHẠM THỊ HỒNG MINH

NGHIÊN CỨU TÌNH HÌNH NHIỄM VIRUS VIÊM GAN B

Ở CÁN BỘ, CÔNG CHỨC ĐẾN KHÁM SỨC KHỎE TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ Y TẾ THÀNH PHỐ HUẾ NĂM 2011

KÝ HIỆU VIẾT TẮT

Anti HBc (anti HBc antibody) :

Kháng thể kháng kháng nguyên lõi của virus viêm gan BAnti HBe (anti HBe antibody) :

Kháng thể kháng kháng nguyên nhân của virus viêm ganB

Anti HBs (anti HBs antibody):

Kháng thể kháng kháng nguyên bề mặt của virus viêm gan BAST : Aspartate aminotransferase

ALT : Alanine aminotransferase

ELISA : Kỹ thuật miễn dịch gắn enzym

(Enzym Linking Immunosorbent Assay)HBcAg : Kháng nguyên lõi của virus viêm gan B

(Hepatitis B virus Core Antigen)HBeAg : Kháng nguyên nhân của virus viêm gan B

(Hepatitis B virus Egtima Antigen)HBsAg : Kháng nguyên bề mặt của virus viêm gan B

(Hepatitis B virus Surface Antigen)HRP : Horse Radish Peroxidase

MỤC LỤC

Trang

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Sơ lược lịch sử phát hiện virus viêm gan B 3

1.2 Dịch tễ học bệnh viêm gan virus B 4

1.3 Phương thức lây truyền 7

1.4 Chẩn đoán huyết thanh virus viêm gan B 12

1.5 Diễn tiến tự nhiên của nhiễm virus viêm gan B 18

1.6 Các yếu tố liên quan đến nhiễm virus viêm gan B 20

1.7 Dự phòng nhiễm virus viêm gan B 24

1.8 Một số nghiên cứu liên quan trên thế giới và ở Việt Nam 26

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29

2.1 Đối tượng nghiên cứu 29

2.2 Phương pháp nghiên cứu 29

2.3 Đạo đức nghiên cứu 39

2.4 Hạn chế của đề tài 39

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 40

3.1 Tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B 40

3.2 Các yếu tố liên quan nhiễm virus viêm gan B 51

Chương 4 BÀN LUẬN 55

4.1 Tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B 55

4.2 Các yếu tố liên quan đến nhiễm virus viêm gan B 60

KẾT LUẬN 67

KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ

Nhiễm virus viêm gan B (VRVGB) hiện nay là một vấn đề sức khỏelớn của toàn cầu, đặc biệt là các nước đang phát triển Theo ước tính của Tổchức y tế thế giới (WHO), hiện nay trên thế giới có khoảng 2 tỉ người đãnhiễm virus viêm gan B, trong đó khoảng 300 triệu người trở thành ngườimang virus mạn tính và hậu quả là trên 1 triệu người chết mỗi năm liên quanđến viêm gan B như viêm gan cấp, tối cấp; lâu dài như xơ gan và ung thư gan[22], [71]

Việt Nam nằm trong khu vực có tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B rất cao,các thống kê cho thấy tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B là 15-20% dân số [23] Tỷ

lệ HBsAg (+) ở người đi tiêm chủng tại Thành phố Hồ Chí Minh (2003) là14,8% Ở Hà Nội tỷ lệ này là 14% [7] Nghiên cứu của Viên Chinh Chiến(1997) trên quần thể dân cư ở Nha Trang là 16,7% Tại Thừa Thiên-Huế,Nguyễn Ngọc Minh và cộng sự đã nghiên cứu ở người hiến máu nhân đạo có13,57% HBsAg (+) [30]; Phạm Văn Lình, Trần Thị Minh Diễm và cộng sựnghiên cứu người từ 3 tuổi trở lên có tỷ lệ HBsAg (+) là 16,8% [26]

Virus viêm gan B được lây truyền chủ yếu qua đường máu và các sảnphẩm từ máu, qua quan hệ tình dục không an toàn, từ mẹ sang con… Theo Tổchức y tế thế giới, vùng dịch lưu hành cao có đường truyền chủ yếu xảy ra theochiều dọc từ mẹ sang con, tuổi bị nhiễm thường rất sớm như trẻ sơ sinh Ngoài

ra còn sự lây truyền lẫn nhau trong gia đình, qua quan hệ tình dục… vì vậy hầuhết dân số bị nhiễm virus viêm gan B rất sớm [49], [52] Người nhiễm viruskhông có triệu chứng là nguồn lây rất nguy hiểm cho cộng đồng Kiểm soát cácyếu tố nguy cơ là một trong các biện pháp tốt nhất để phòng bệnh

Cán bộ, công chức là một nhóm lao động quan trọng trong xã hội, cóảnh hưởng nhiều đến các hoạt động kinh tế, văn hóa, xã hội của cộng đồng

Việc tìm hiểu các yếu tố nguy cơ lây truyền virus viêm gan B ở đối tượng cán

bộ, công chức và đề xuất biện pháp phòng chống hữu hiệu là rất cần thiết

Vì vậy chúng tôi thực hiện đề tài: “Nghiên cứu tình hình nhiễm virus viêm gan B ở cán bộ, công chức đến khám sức khỏe tại một số cơ sở y tế thành phố Huế năm 2011” với mục tiêu:

1 Xác định tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B của cán bộ, công chức đến khám sức khỏe tại một số cơ sở y tế thành phố Huế năm 2011.

2 Tìm hiểu một số yếu tố liên quan nhiễm virus viêm gan B của cán bộ, công chức đến khám sức khỏe tại một số cơ sở y tế thành phố Huế năm 2011.

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 SƠ LƯỢC LỊCH SỬ PHÁT HIỆN VIRUS VIÊM GAN B

Năm 1965, Blumberg và các cộng sự ở Philadelphia đã nhận thấy huyếtthanh ở hai bệnh nhân có thể phản ứng với huyết thanh của một thổ dân Châu

Úc Người ta phát hiện ra rằng huyết thanh ở bệnh nhân này chứa kháng thể(KT) chống lại kháng nguyên (KN) có trong huyết thanh của thổ dân Úc nêncòn gọi là KN Úc Ngày nay, KN Úc được xác định chính là KN bề mặt củavirus viêm gan B (VRVGB), viết tắt là HBsAg

Khám phá của Blumberg về KN bề mặt HBsAg là công cụ giúp các nhànghiên cứu khẳng định nguyên nhân của viêm gan do virus B (VGVB) Các

KN khác như HBcAg, HBeAg tiếp tục được phát hiện với sự phát triển củacác kỹ thuật miễn dịch phóng xạ, kỹ thuật miễn dịch gắn enzym Các kỹ thuậtnày cho phép phát hiện các loại KN khác nhau cùng với các KT tương ứng(Anti-HBs, Anti-HBc, Anti-HBe) giúp chẩn đoán, nghiên cứu dịch tễ và theodõi bệnh VGVB mạn tính [23]

Virus viêm gan B thuộc họ Hepadnaviridae, là virus hướng gan Virus

hoàn chỉnh (virion) có hình cầu đường kính 42 nm Là loại virus có enzymsao chép ngược DNA polymerase (sao chép DNA từ RNA truyền tin) nên nócũng thuộc nhóm Retrovirus là những virus có khả năng gây ung thư rất cao.VRVGB có sức đề kháng khá cao: kháng với tia cực tím, ether 10%,mecthiolat 0,05% và có thể bền vững ở nhiệt độ 560C trong 30 phút VRVGB

có các loại kháng nguyên chính là s (HBsAg: Còn gọi kháng nguyên bề mặtviêm gan B), c (HBcAg: Kháng nguyên lõi, không tìm thấy trong máu, chỉ có

ở gan qua kết quả sinh thiết gan), e (HBeAg: Kháng nguyên nội sinh của virus

viêm gan B, được coi là một phần của kháng nguyên lõi); trong đó quan trọngnhất là kháng nguyên vỏ HBsAg

HBcAg HBsAg

DNA polymerase

HBeAg HBV DNA

Hình 1.1 Sơ đồ minh họa cấu trúc virus viêm gan B

Virus viêm gan B đột biến là tình trạng VRVGB trong quá trình kếthợp với tế bào vật chủ có thể bị đột biến tại một vị trí nào đó trên DNA, hậuquả thay đổi, có thể không ảnh hưởng gì đối với virus đó, có thể suy yếu quátrình nhân lên của virus, có thể thay đổi sự nhạy cảm của cơ thể vật chủ hay

có thể dẫn đến virus có khả năng né tránh được hệ thống miễn dịch của cơ thểvật chủ Những đột biến này xảy ra có thể do đáp ứng miễn dịch của cơ thểvật chủ, hay do việc tiêm chủng hoặc do điều trị [23]

1.2 DỊCH TỄ HỌC BỆNH VIÊM GAN VIRUS B

1.2.1 Tình hình nhiễm virus viêm gan B trên thế giới

VRVGB được phát hiện ở tất cả các khu vực trên thế giới Ngay cả cáckhu vực được xem là cách biệt nhất, người ta vẫn tìm thấy sự hiện diện củaVRVGB trong các quần thể dân cư với tỷ lệ khác nhau Nhiều tác giả đã gâythực nghiệm cho một số loài linh trưởng và vượn Chimpanzees nhưng nóichung người vẫn là đối tượng cảm nhiễm duy nhất của VRVGB

Trên thế giới có khoảng 2 tỷ người bị nhiễm VRVGB và có hơn 1 triệungười chết vì bệnh liên quan đến nhiễm VRVGB Hiện nay ước tính cókhoảng hơn 300 triệu người bị nhiễm VRVGB mạn tính, chiếm 5% dân số thếgiới [23], [58].

Tình hình nhiễm VRVGB thay đổi theo từng khu vực địa dư Dựa vào

tỷ lệ người mang HBsAg mà người ta chia ra làm 3 khu vực chính [23]:

- Vùng dịch lưu hành cao: Đông Nam Á, Trung Quốc, Châu Phi

+ Tỷ lệ người có HBsAg (+) 8-20%

+ Tỷ lệ người có Anti-HBs (+) 70-95%

+ Sự nhiễm VRVGB chủ yếu xảy ra theo chiều dọc từ mẹ sang connên tuổi bị nhiễm là từ rất sớm, lúc còn là trẻ sơ sinh Do bị nhiễm ở tuổi cònnhỏ nên nguy cơ mang virus mạn tính là rất cao

- Vùng dịch lưu hành trung bình: Địa Trung Hải, Đông Âu, Nga, Nam

1.2.2 Tình hình nhiễm virus viêm gan B ở Việt Nam

Việt Nam được xếp vào vùng dịch tễ lưu hành cao của VRVGB Theocác nghiên cứu của nhiều tác giả, kết quả tỷ lệ nhiễm VRVGB như sau:

- Hà Nội: theo Đào Đình Đức tỷ lệ HBsAg (+) là 14% và Anti-HBs là50% [15] Theo Châu Hữu Hầu và cộng sự tỷ lệ HBsAg (+) là 17,8% và Anti-HBc là 60% trên bệnh nhân đến khám tại bệnh viện Nhật Tân [16].

- Thanh Hóa: nghiên cứu của Vũ Hồng Cương thì tỷ lệ HBsAg (+) ởnam giới là 14,15%, còn ở nữ giới là 13,98% và Anti-HBc (+) ở nam là26,42%, nữ là 24,67% [10]

- Hà Tĩnh: Đường Công Lự phát hiện ở nhân viên y tế có HBsAg (+)

là 12,35% và Anti-HBs là 53,36%; trong khi ở người bình thường tỷ lệ nàylần lượt là 7,73% và 31,36% [27]

- Nha Trang: tỷ lệ HBsAg (+) là 17,6% và Anti-HBs là 70,5% trên đốitượng là nhân viên y tế, nghiên cứu của Viên Chinh Chiến và cộng sự [3]

- Tại Thừa Thiên Huế: theo Phạm Văn Lình, Trần Thị Minh Diễm thì

tỷ lệ người trên 15 tuổi có HBsAg (+) là 19,3% [25] Theo Ngô Viết Lộc, tỷ

lệ người từ 6 tuổi trở lên có HBsAg (+) là 16,36% [28]

- Thành phố Hồ Chí Minh: theo Cao Ngọc Nga, tỷ lệ HBsAg (+) ởngười đi chủng ngừa là 16,1% [32] Theo Nguyễn Hữu Chí tỷ lệ này trên sinhviên Y khoa là 8% [1]

- Tại Đồng bằng sông Cửu Long: theo Châu Hữu Hầu, tỷ lệ HBsAg(+) là 11 ± 2%; nếu có sự hiện diện đồng thời của cả 3 dấu ấn (HBsAg, Anti-HBs, Anti-HBc) thì tỷ lệ này là 64,4 ± 9,8% [13]

1.2.3 Tỷ lệ nhiễm VRVGB còn phụ thuộc vào các yếu tố khác

- Giới tính: Trong những vùng lưu hành dịch cao, trẻ em gái và trẻ emtrai có tần suất nhiễm VRVGB ban đầu giống nhau, tuy nhiên sau đó có sựtrội hơn ở nam giới về nhiễm virus mạn tính; cần nghiên cứu sâu thêm về sựkhác biệt này Ở người lớn, theo nhiều nghiên cứu thì tần suất nhiễm VRVGB

ở nam thường cao hơn nữ, chủ yếu do quá trình lây nhiễm sau sinh và một sốyếu tố khác chưa được nghiên cứu sâu [13]

- Nghề nghiệp và tình hình kinh tế xã hội: Một vài nhóm nghề nghiệpnhư: nhân viên y tế xử lý máu có nguy cơ nhiễm VRVGB cao hơn Gái mạidâm có tần suất nhiễm VRVGB cao, tuy nhiên tỷ lệ nhiễm VRVGB mạntương tự trong cộng đồng chung, có thể do tình trạng nhiễm VRVGB mạnphụ thuộc chủ yếu theo tuổi Trẻ sinh ra mà cha mẹ có tình trạng kinh tế - xãhội thấp thì có tần suất nhiễm VRVGB cao hơn các trẻ có cha mẹ có mứckinh tế - xã hội cao [13], [34].

- Dân tộc: có sự khác biệt chủng tộc trong tỷ lệ nhiễm VRVGB Các

cư dân của con đường tơ lụa khác biệt chủng tộc có sự khác biệt về tỷ lệHBsAg (+): người Uygur là 6%, người Kazak là 9% và người Hán là 12%.Các phân tích khác cho thấy ảnh hưởng quan trọng về chủng tộc của người

mẹ hơn của người cha và cho thấy truyền nhiễm chu sinh có thể góp phầnquan trọng vào sự khác biệt chủng tộc [13]

- Vùng sinh thái và các yếu tố nguy cơ khác: tỷ lệ nhiễm VRVGB ởvùng nông thôn cao hơn ở thành thị và nguồn nhiễm đã được xác định nhưtruyền máu và các chế phẩm từ máu, có các phẫu thuật trước đây, các lâynhiễm qua đường tình dục… [13], [37]

1.3 PHƯƠNG THỨC LÂY TRUYỀN

Virus viêm gan B lây truyền qua các con đường sau: qua đường máu,qua quan hệ tình dục không an toàn và lây truyền từ mẹ sang con, ngoài rathống kê cho thấy 31% trường hợp VRVGB cấp không có yếu tố nguy cơ

Các đề tài nghiên cứu cho thấy các yếu tố nguy cơ lây truyền như sau: cáccan thiệp y tế có xâm nhập như phẫu thuật, tiêm truyền, chữa răng, châm cứu;các yếu tố nguy cơ như dùng chung dao cạo râu, làm móng tay chân; các lâytruyền qua quan hệ tình dục; mẹ truyền sang con cũng là một yếu tố nguy cơquan trọng; yếu tố lây truyền trong gia đình cũng là một vấn đề đáng lưu ý [8]

1.3.1 Lây truyền virus viêm gan B từ mẹ sang con

Sự lây truyền từ mẹ sang con có thể xảy ra trong quá trình mang thai vàsinh đẻ Những bà mẹ mang virus viêm gan B nhất là mang đồng thời cả hailoại kháng nguyên HBsAg và HBeAg hoặc người mẹ bị nhiễm virus viêm gan

B cấp tính trong giai đoạn cuối của thời kỳ mang thai có nguy cơ lây truyềndọc rất cao

1.3.1.1 Lây nhiễm trong bào thai

Nhiễm virus trong bào thai đã được nghiên cứu khá sâu Máu người mẹ

bị nhiễm virus thấm qua nhau thai do những cơn co tử cung trong lúc mangthai và lúc bóc màng nhau thai, giữ vai trò quan trọng trong lây nhiễm trướckhi sinh Theo Lee và cộng sự thì 8% (4/48) thai nhi tuổi thai 20 - 31 tuần bịsẩy từ những người mẹ có HBsAg (+) có bằng chứng của nhiễm virus quanhau thai Theo Liz Highleyman thì trong số trẻ sinh ra bị lây nhiễm VRVGB

từ những bà mẹ bị nhiễm có tới 41% trẻ bị nhiễm trong tử cung và số còn lạilây nhiễm theo đường chu sinh [13], [66]

1.3.1.2 Lây nhiễm chu sinh

Lây nhiễm chu sinh thường gặp ở các vùng dịch lưu hành cao

Theo một nghiên cứu ở Đài Loan thì 40% trẻ sinh ra bị nhiễm VRVGB

từ người mẹ nhiễm VRVGB mạn tính và 80% trẻ này bị trở thành nhiễm virusmạn tính Nồng độ HBsAg ở mẹ càng cao thì nguy cơ nhiễm virus càng lớn.Đặc biệt những người mẹ có HBeAg (+) gây nhiễm cho trẻ sơ sinh càng cao.Trong khi 85% các trẻ sinh ra từ người mẹ mang HBeAg (+) trở thành nhiễmvirus mạn tính thì các trẻ sinh ra từ mẹ có HBeAg (-) chỉ có 31% nhiễm mạntính [59]

Tỷ lệ lưu hành HBsAg ở nước ta từ 10 - 20%, đây là một trong những

tỷ lệ cao nhất thế giới Tỷ lệ phụ nữ có thai mang HBsAg là 10 - 15%, trong

đó có khoảng 30 - 40% mang đồng thời cả HBsAg và HBeAg [14], [19]

1.3.2 Lây truyền qua tiếp xúc với máu và các chế phẩm từ máu

Nguy cơ lây truyền viêm gan quan trọng nhất có liên quan đến sự lâytruyền của máu Người ta thấy có sự liên quan giữa viêm gan với việc sửdụng máu và các chế phẩm của máu trong điều trị dự phòng bệnh tật Đườnglây nhiễm này thường gặp ở nhân viên y tế, người được lọc máu, truyền máunhiều lần Ngoài ra, các loại dụng cụ y tế, phẫu thuật, nha khoa, bơm kimtiêm cũng là những yếu tố nguy cơ gây lây truyền virus viêm gan B Virusviêm gan B còn lây lan do các dụng cụ xăm mình, xâu lỗ tai, châm cứu, daocạo râu, bàn chải đánh răng, có dính máu bị nhiễm virus VRVGB đã đượcchứng minh là có thể sống trên các bề mặt với nhiệt độ phòng trong trạng tháikhô ít nhất là 1 tuần

1.3.2.1 Truyền máu

Máu và các chế phẩm của máu được xác nhận là nguồn chứa virus gâynhiễm Người ta đã tìm thấy sự hiện diện của các phân tử hạt virus gây bệnhtrong huyết thanh và các loại dịch tiết của người bệnh hoặc người mang mầmbệnh mạn tính Vì vậy những ai có nguy cơ tiếp xúc với máu và các chế phẩmcủa máu và các dịch tiết có chứa virus đều có thể nhiễm bệnh Những người

có nồng độ VRVGB trong máu càng cao thì khả năng lây nhiễm cho ngườikhác càng cao

Ở thập niên 60, nguy cơ bị nhiễm VRVGB từ việc nhận máu của nhữngngười đi bán máu là rất cao, khoảng 50%, và trên 60% bệnh nhân bị viêm gansau khi truyền máu phát hiện có HBsAg (+) Hiện nay ở các nước phát triển,nhờ xử lý tốt các chế phẩm từ máu nên nguy cơ này hầu như không còn nữa.Những năm gần đây, nước ta đã tăng cường vận động hiến máu nhân đạonhằm phòng ngừa lây nhiễm trong truyền máu Theo Bạch Khánh Hòa,Nguyễn Quốc Cường tỷ lệ đơn vị máu bị nhiễm VRVGB ở Viện Huyết học

truyền máu Trung ương đã giảm đáng kể, từ 7,13% năm 2003 xuống còn2,89% năm 2004 và 1,2% năm 2005 [20].

Tại Thừa Thiên Huế, theo Nguyễn Ngọc Minh và cộng sự thì tỷ lệnhiễm VRVGB ở người hiến máu tự nguyện trong 5 năm (1997 - 2001) là13,73% [30]

Tại Thành phố Hồ Chí Minh, tỷ lệ nhiễm VRVGB ở người hiến máu tựnguyện là 9,3% Theo Cao Ngọc Nga và cộng sự, tỷ lệ HBsAg (+) ở người đitiêm chủng năm 2001 - 2002 là 16,1% Theo Phạm Hoàng Phiệt, tỷ lệ này là13,78% năm 2003 [13]

1.3.2.2 Nhân viên y tế

Nhiều công trình nghiên cứu trong nước đã công bố cho thấy không có

sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa nhân viên y tế và cộng đồng chung về

tỷ lệ mang HBsAg Tuy nhiên nhóm nhân viên y tế tại khoa Nhiễm và khoaHồi sức trung tâm Bệnh viện Nhiệt đới có tỷ lệ nhiễm VRVGB là khá cao26,3% [13], [25]

Theo Viên Chinh Chiến và cộng sự, tỷ lệ mang HBsAg cũng như tỷ lệ

có Anti-HBc trong nhân viên y tế miền Trung là rất cao Nếu dựa trên tỷ lệ cóHBsAg (+) hoặc Anti-HBc (+) thì chắc chắn có tới 64,4% nhân viên y tế đã

và đang bị phơi nhiễm với VRVGB [5]

Theo Nguyễn Quang Tập và cộng sự tỷ lệ nhiễm VRVGB trong nhânviên y tế tại một số bệnh viện của Hải Phòng là 14,8%, trong đó tỷ lệ mangHBsAg (+) là 8,1% và tỷ lệ có Anti-HBs (+) trong số đối tượng chưa tiêmchủng là 6,7% Nguy cơ nhiễm ở nhóm chưa tiêm phòng cao gấp 15 lần sovới nhóm tiêm phòng [38]

1.3.2.3 Tiêm chích ma túy

Những người tiêm chích ma túy là đối tượng được nhiều quốc gia trênthế giới quan tâm Ở Việt Nam thì tỷ lệ HBsAg (+) trong nhóm tiêm chích ma

túy cao hơn hẳn so với nhóm dân cư Ở những người nghiện ma túy thì việc

sử dụng chung bơm kim tiêm làm tăng khả năng lây nhiễm VRVGB

Theo Lê Bửu Châu và cộng sự, tỷ lệ nhiễm VRVGB trên nhữngngười cai nghiện ma túy tại Trung tâm Điều dưỡng và cai nghiện Thanh Đa(Thành phố Hồ Chí Minh) là 11,1% Theo Trịnh Thị Ngọc và cộng sự,nhóm bệnh nhân viêm gan có tiền sử tiêm chích ma túy có tỷ lệ đơn nhiễmVRVGB là 22,4%, trong khi tỷ lệ đa nhiễm có liên quan đến VRVGB lênđến 69% [1], [33]

1.3.3 Lây truyền qua đường tình dục

Một yếu tố nguy cơ cũng được nghiên cứu rất nhiều là khả năng lâynhiễm qua đường tình dục Cơ sở của nó là sự có mặt của HBsAg trong nướcbọt, tinh dịch, dịch tiết âm đạo, máu hành kinh của những người mangVRVGB Người bị viêm gan cấp hay mang HBsAg mạn đều có thể truyềnVRVGB qua đường này Trung tâm Kiểm soát và Phòng bệnh của Mỹ đãkhuyến cáo rằng lây truyền qua đường quan hệ tình dục chịu trách nhiệm chokhoảng 50% trường hợp bị viêm gan B cấp tính ở những đối tượng có yếu tốnguy cơ trong tiền sử Tỷ lệ viêm gan B mạn tính cao ở nam giới có quan hệđồng giới cũng như quan hệ khác giới với nhiều bạn tình

1.3.4 Những đường lây truyền khác

Nhiều nghiên cứu cho thấy rằng nguy cơ lây truyền VRVGB sẽ tăng cao

ở đối tượng mà trong gia đình có người bị nhiễm VRVGB Lây truyền nganggiữa những đứa trẻ xảy ra có thể là do sự tiếp xúc gần gũi làm cho virus có thểtruyền sang thông qua những vết xước nhỏ trên da hoặc niêm mạc

Côn trùng hút máu như muỗi đã được chứng minh là vectơ truyềnVRVGB ở động vật nhưng bằng chứng chắc chắn cho vấn đề này còn thiếu

Nhiều dịch tiết của cơ thể có kết quả dương tính với HBsAg, nhưng chỉ

có tinh dịch và nước bọt mới thực sự là nơi trú ngụ của virus Mặc dù DNAcủa VRVGB được phát hiện thấy trong nước bọt của một số người mangHBsAg, nhưng không có bằng chứng thuyết phục cho việc VRVGB lâytruyền qua đường miệng

Theo Komatsu, trong gia đình ngoài lây truyền mẹ - con là đường lâytruyền chính thì lây truyền giữa cha - con cũng là kiểu lây truyền phổ biến thứhai; ngoài ra, lây truyền giữa anh chị em ruột cũng được tìm thấy

1.4 CHẨN ĐOÁN HUYẾT THANH VIRUS VIÊM GAN B

Có nhiều kỹ thuật để chẩn đoán huyết thanh của nhiễm VRVGB Một

số phát hiện các KT chống lại các loại KN khác nhau của VRVGB HBs, Anti-HBe, Anti-HBc); một số khác dùng để phát hiện các thành phầncấu trúc của VRVGB là những KN (HBsAg, HBeAg) hoặc DNA của virus.Những kỹ thuật thứ nhất chứng tỏ sự lây nhiễm với VRVGB, trong khi loạithứ hai biểu hiện quá trình tiến triển của tình trạng nhiễm trùng Kết hợp cácchỉ điểm khác nhau giúp đánh giá thời gian của lây nhiễm và mức độ nhân lêncủa virus Dĩ nhiên một biện luận tốt nhất khi phối hợp các triệu chứng lâmsàng và xét nghiệm [23]

(Anti-1.4.1 Kháng nguyên bề mặt HBsAg

HBsAg là kháng nguyên bề mặt của virus, xuất hiện trong máu khoảng

6 tuần sau khi nhiễm virus và thường biến mất sau 3 tháng kể từ khi có biểuhiện lâm sàng Nếu HBsAg tồn tại hơn 6 tháng thì phát triển tình trạng mangmạn tính Sự hiện diện của HBsAg chứng tỏ đang nhiễm VRVGB [21], [55]

Trong viêm gan B cấp, HBsAg đạt đến nồng độ cao nhất tương ứng vớithời kỳ vàng da rõ rệt trên lâm sàng rồi giảm dần sau đó 5 - 10% trường hợpHBsAg biến mất sớm trước khi có triệu chứng lâm sàng, 28% trường hợp đã

âm tính khi triệu chứng lâm sàng vừa được cải thiện Do đó, HBsAg (-) khôngloại trừ được tình trạng nhiễm VRVGB mà chúng dựa vào Anti-HBc và DNAcủa VRVGB [21], [56].

HBsAg được phát hiện bằng phương pháp đơn giản như khuếch tántrên thạch hoặc phương pháp điện di miễn dịch đối lưu [21], [57]

Một số trường hợp khác, xét nghiệm HBsAg (-) là do sự đột biến làmgiảm đáng kể tần suất sao chép của virus nên nồng độ HBsAg cũng giảm ởdưới mức phát hiện trong huyết thanh Ngoài ra, ở những bệnh nhân bị nhiễmVRVGB mạn tính có thể có hiện tượng sao chépDNA của virus vào nhiễmsắc thể của tế bào gan, tái sắp xếp các trình tự của HBV DNA và làm biến đổi

sự biểu hiện gen của HBsAg Chính vì những lý do đó có thể làm cho kết quảHBsAg (-) Gần đây nhiều tác giả đã đề cập đến khái niệm nhiễm VRVGB

“thể tiềm ẩn” Đó là những trường hợp HBsAg đã biến mất trong máu nhưngHBV DNA vẫn còn được phát hiện ở nồng độ thấp [21], [56], [62]

1.4.2 Kháng thể kháng HBsAg (Anti-HBs)

Anti-HBs là kháng thể trung hòa do cơ thể tạo ra để loại trừ HBsAg,dấu ấn này là một chỉ dẫn cho tình trạng khỏi bệnh và/hoặc đã được miễnnhiễm với VRVGB; cho nên đây là kháng thể dịch thể bảo vệ duy nhất cóđược sau khi nhiễm VRVGB hoặc sau chủng ngừa [21]

Anti-HBs xuất hiện khoảng 3 tháng sau triệu chứng lâm sàng đầu tiên,nồng độ Anti-HBs ít khi quá cao, có khoảng 10 - 15% bệnh nhân bị viêm gan

B cấp tính nhưng không có Anti-HBs

Thông thường HBsAg và Anti-HBs là hai dấu ấn huyết thanh loại trừlẫn nhau, có nghĩa là khi cái này dương tính thì cái kia âm tính và ngược lại.Tuy nhiên cũng có những trường hợp cả hai dấu ấn này cùng âm tính đó là:

- Giai đoạn “cửa sổ” là lúc mà HBsAg đã biến mất nhưng Anti-HBsvẫn chưa xuất hiện trong huyết thanh, giai đoạn này có thể kéo dài vài ngàynhưng cũng có khi vài tháng.

- Sự hiện diện của phức hợp KN - KT đang lưu hành

- Do đột biến tại gen S

- Có sự hòa nhập HBV DNA và nhiễm sắc thể của tế bào gan làm thayđổi sự biểu hiện của HBsAg

Trong các trường hợp này, việc chẩn đoán nhiễm VRVGB được dựatrên kết quả Anti-HBc (+) [21], [62]

Anti-HBs ít có vai trò trong chẩn đoán huyết thanh của viêm gan B.Tuy nhiên, trong trường hợp HBsAg (-) / Anti-HBc (+) yếu, sự phát hiệnAnti-HBs khẳng định kết quả của Anti-HBc và chứng tỏ khả năng đã lâynhiễm VRVGB Thực tế, Anti-HBs được sử dụng để kiểm soát việc chủngngừa Nếu huyết thanh âm tính sau khi chủng ngừa, đừng nên vội kết luận lý

do không đáp ứng với chủng ngừa mà phải loại bỏ trường hợp nhiễmVRVGB mạn tính bằng các chỉ điểm huyết thanh khác

Anti-HBs được phát hiện bằng các phương pháp RIA, ELISA hoặcMEIAs theo nguyên tắc “Bánh mì kẹp thịt” (Sandwich) Khi tiêm vắc xin, chỉcần một lượng Anti-HBs ≥ 10mIU/ml là đủ để tạo miễn dịch bảo vệ

Khi lượng KT này giảm dần sau lần tiêm chủng, miễn dịch bảo vệ vẫnđược duy trì là nhờ “trí nhớ miễn dịch” của tế bào lympho có thể kéo dài đến

hiện bằng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang hoặc hóa miễn dịch mô trên mẫusinh thiết gan [21].

đã hồi phục Như vậy, đây là dấu ấn huyết thanh quan trọng chứng minh bệnhnhân đã từng bị nhiễm VRVGB và nó không tạo ra khi tiêm vắc xin Anti-HBc không phải là KT trung hòa nên không có khả năng tự bảo vệ về miễndịch [21]

KT này tương đối hằng định hơn Anti-HBs vì khoảng 15% bệnh nhântrong giai đoạn hồi phục không có Anti-HBs và sau 6 năm thì 20% bệnh nhân

sẽ mất Anti-HBs nhưng Anti-HBc vẫn tồn tại gần như suốt đời Hơn nữa, một

số nghiên cứu cho thấy có các trường hợp nhiễm VRVGB tiềm ẩn, lúc đó tất

cả các dấu ấn huyết thanh khác của VRVGB đều âm tính ngoại trừ Anti-HBc[21], [41]

Anti-HBc được phát hiện bằng kỹ thuật miễn dịch ELISA trực tiếphoặc cạnh tranh

1.4.5 Kháng nguyên HBeAg

HBeAg là protein không cấu trúc của VRVGB nhưng nó có cùngnguồn gốc gen với HBcAg và được tổng hợp vượt trội trong giai đoạn saochép của virus HBeAg xuất hiện trong huyết thanh sau HBsAg và trở về âmtính trước khi HBsAg được loại trừ HBeAg không có ý nghĩa về chẩn đoánnhưng khi có HBsAg (+) nó lại có ý nghĩa về mặt tiên lượng

- Nếu HBeAg tồn tại trên 8 tuần sau khi bắt đầu có triệu chứng lâmsang sẽ là dấu hiệu chỉ điểm sớm cho khả năng diễn tiến sang mạn tính.

- HBeAg thường dương tính trong giai đoạn đầu của nhiễm VRVGBmạn tính và thường âm tính ở những giai đoạn mà bệnh đã diễn tiến khá lâunhư xơ gan, ung thư biểu mô tế bào gan Hầu như HBeAg (-) ở những ngườimang HBsAg mạn tính không hoạt động hoặc khi bệnh đã tiến triển sang xơgan [21], [67]

HBeAg trong huyết thanh được phát hiện bằng các thử nghiệm miễndịch kiểu “bánh mì kẹp thịt” (Sandwich) giống như HBsAg

1.4.6 Kháng thể Anti-HBe

Anti-HBe là KT kháng HBeAg Anti-HBe xuất hiện khi có sự giảmhoặc biến mất của HBeAg Đây cũng là đáp ứng của hệ miễn dịch nhằm hạnchế mức độ sao chép của virus Sự chuyển huyết thanh HBeAg có thể xảy ramột cách tự nhiên hoặc thúc đẩy nhờ các phương pháp trị liệu kháng virus.Khi bệnh phục hồi, Anti-HBe có thể giảm dần và biến mất trong vòng 12tháng, khác với các KT như Anti-HBc và Anti-HBs có thể tồn tại rất lâu.Trong nhiễm VRVGB mạn tính, sự hiện diện của Anti-HBe chứng tỏ bệnhdiễn tiến tương đối lâu, có thể đã chuyển sang giai đoạn xơ gan hoặc ung thưgan nguyên phát Tuy nhiên, cũng có một số trường hợp bệnh nhân có Anti-HBe (+)VRVGB vẫn tiếp tục nhân lên và gan vẫn tiếp tục bị tổn thương.Những bệnh nhân như vậy thường chứa virus đột biến trước nhân (precoremutation) nên HBeAg không còn được tổng hợp Số lượng các trường hợpnhư trên đang có xu hướng tăng lên ở các nước Châu Á và Nam Âu trong khilại rất hiếm xảy ra ở Mỹ Sự lựa chọn loại đột biến này xảy ra do các yếu tốcủa cả virus lẫn vật chủ, và điều này dường như giúp cho virus có thể tiếp tụcnhân lên ngay cả khi có mặt Anti-HBe và có khả năng đề kháng vớiLamivudine trong quá trình điều trị [64], [21]

1.4.7 DNA của virus viêm gan B

HBeAg và HBV DNA trong huyết thanh phản ánh tình trạng đang nhânlên của virus và là thời kỳ lây lan mạnh Trong khi HBeAg là KN phản ánhchất lượng thì HBV DNA phản ánh số lượng của quá trình nhân lên của virus.HBV DNA được phát hiện bằng kỹ thuật PCR Kỹ thuật này có thể phát hiệnDNA của VRVGB trong máu hoặc trong tế bào gan khi HBsAg đã biến mất.Tuy nhiên PCR chỉ là một phương pháp chẩn đoán định tính nhằm phát hiệnmầm bệnh trong bệnh phẩm Gần đây với phương pháp real-time PCR có thểphát hiện chính xác số lượng bản sao của HBV DNA có trong huyết thanhbệnh nhân với ngưỡng 50 copies / 1ml huyết thanh Đây là những thông sốkhách quan và đáng tin cậy nhất để các thầy thuốc lâm sàng đánh giá hiệu quảcủa các phát đồ điều trị kháng virus thông qua sự biến đổi nồng độ của virustrong huyết thanh HBV DNA còn liên quan với các triệu chứng lâm sàng vàcận lâm sàng ở bệnh nhân viêm gan B mạn tính Ở nhóm bệnh nhân viêm gan

B mạn tính HBeAg (+) thì nồng độ HBV DNA cao hơn ở nhóm có HBeAg(-)

Đa số bệnh nhân có HBeAg (+) có HBV DNA >105 copies/ml Nồng độ HBVDNA trong huyết thanh tăng cũng tỷ lệ thuận với hoạt độ men ALT HBVDNA cũng có giá trị tiên lượng vì sự tồn tại của nó trên 8 tuần sau khi có triệuchứng lâm sang báo hiệu sự tiến triển sang giai đoạn mạn tính HBV DNA (+)trong huyết thanh là chỉ điểm tốt cho sự hiện diện của virus, có thể kèm theotransaminase tăng, HBsAg (+) Ngoài ra, HBV DNA (+) có thể là bằng chứngduy nhất về sự nhân đôi của virus khi trong huyết thanh không tìm thấy cácdấu ấn khác như trong trường hợp mức độ nhân lên của virus quá thấp, độtbiến precore… Vì vậy, việc xác định nồng độ HBV DNA có tính quyết địnhđến sự đánh giá tiến triển của bệnh và là chỉ tiêu để theo dõi kết quả điều trịthuốc kháng virus [24], [41]

Sơ đồ 1.1 Đường biểu diễn các dấu ấn huyết thanh của virus viêm gan B

1.5 DIỄN TIẾN TỰ NHIÊN CỦA NHIỄM VIRUS VIÊM GAN B

Virus viêm gan B có thể gây ra viêm gan cấp hoặc mạn với những biểuhiện lâm sàng khác nhau Hầu hết nhiễm VRVGB ban đầu là không triệuchứng, nhiễm virus cấp tính có thể không gây tổn thương gì ở gan nhưngcũng có thể gây ra những tổn thương từ nhẹ đến viêm gan bùng phát NhiễmVRVGB mạn tính có thể xảy ra 2 - 10%

Viêm gan mạn liên quan đến tuổi nhiễm virus, nhiễm VRVGB càngsớm thì khả năng chuyển sang viêm gan mạn càng cao, đặc biệt ở đối tượngtrẻ sơ sinh Một khi đã trở thành người mang virus mạn thì rất khó điều trị vàthường thì nó sẽ tồn tại suốt đời Triệu chứng lâm sàng của nhiễm virus mạnthường nghèo nàn và cơ thể vật chủ có thể chia làm 4 giai đoạn: giai đoạndung nạp miễn dịch, giai đoạn đào thải, giai đoạn hòa nhập, và giai đoạn táihoạt động Hai giai đoạn đầu xảy ra khi VRVGB đang hoạt động nhân lên,giai đoạn 3 tương ứng với lúc virus ngừng hoạt động và giai đoạn 4 diễn ra ởmột số người mà lúc đó virus tái hoạt động một lần nữa

Diến biến tự nhiên của bệnh có thể tóm tắt ở sơ đồ sau

80% không triệu chứng 90-99% hồi phụcTrẻ em và người lớn 20% bệnh cảnh cấp

(vùng không dịch tễ) # 1% viêm gan tối cấp 1-10% mang

VRVGB mạn

1-12%/năm 1,5%/năm

2,5%/năm0,5%/năm 1-12%/năm

Thời kỳ sơ sinh Bệnh không có 95% người mang(vùng dịch tễ) triệu chứng rõ ràng VRVGB mạn

Sơ đồ 1.2 Diễn biến và biến chứng của nhiễm VRVGB mạn tính [23]

Giai đoạn đầu virus nhân lên rất mạnh, giai đoạn này thường chỉ gặp ởbệnh nhân bị nhiễm virus từ thời kỳ sơ sinh, bệnh nhân thường không có triệuchứng lâm sàng và tổn thương mô học của gan cũng thường rất ít Xét nghiệmthấy men gan bình thường, HBsAg (+), HBV DNA (+) và HBeAg (+) Sựchuyển huyết thanh tự nhiên hiếm khi xảy ra trong giai đoạn này Tuy nhiênvào cuối giai đoạn này, sự nhân lên của virus suy yếu, và sự dung nạp miễndịch không còn nữa Một số tế bào lympho được hoạt hóa tiết ra các cytokinviêm đóng vai trò quan trọng trong việc thải loại virus Đáp ứng miễn dịchtrung gian tế bào đặc hiệu với HBcAg/HBeAg dẫn đến sự ly giải các tế bào bịnhiễm virus, lúc này gan bắt đầu tổn thương Người mang mầm bệnh không

có triệu chứng đến lúc này có thể xuất hiện các biểu hiện của viêm gan cấp.Sau một thời gian, thường là nhiều năm, cơ thể vật chủ có thể loại bỏ đượcquá trình nhân lên của virus nhưng lúc này bộ gen của virus đã có thể hòa

nhập vào nhiễm sắc thể của vật chủ, lúc này HbeAg (-), Anti-HBe (+), nồng

độ HBV DNA trong huyết thanh giảm xuống thấp, bệnh có dấu hiệu ổn định

và thoái lui Tuy nhiên, ở một số người virus lại có thể hoạt động trở lại và họtrở thành người bị viêm gan mạn tính có HBeAg (-) [45]

Thương tổn ở gan là do quá trình tương tác giữa virus và vật chủ, xơgan và ung thư tế bào gan nguyên phát là 2 biến chứng chính của nhiễmVRVGB mạn Thật vậy, nhiều nghiên cứu đã chứng minh mối liên quan chặtchẽ giữa nhiễm VRVGB với ung thư gan nguyên phát Tác giả Đỗ Đại Hải đãđưa ra kết luận khi nghiên cứu diễn tiến của nhiễm VRVGB mạn tính ở ngườiViệt Nam như sau:

- Giai đoạn dung nạp: ở lớp tuổi 1 - 20, đây là lớp tuổi có khả năng lâynhiễm cao

- Giai đoạn thải virus: ở lớp tuổi 20 - 40, lớp này thường có tổnthương gan

- Giai đoạn hòa nhập: ở lớp tuổi trên 40, lớp tuổi này có nguy cơ biếnchứng gan

- Tỷ lệ mất HBsAg tự nhiên hằng năm thấp: 1,2% Tỷ lệ chuyển huyếtthanh tự nhiên hằng năm là 9,6% Lớp tuổi 20 - 40 và transaminase tăng có tỷ

lệ chuyển huyết thanh cao

- Tỷ lệ viêm gan mạn do VRVGB biểu hiện trên xét nghiệm sinh hóa

là 16,8% ở nhóm bệnh nhân HBeAg (+), như vậy nhóm này có tỷ lệ viêm ganmạn cao gấp 4 lần so với nhóm HBeAg (-)

- Xơ gan và ung thư gan xảy ra ở lớp tuổi trên 40 [17]

1.6 CÁC YẾU TỐ LIÊN QUAN ĐẾN NHIỄM VIRUS VIÊM GAN B 1.6.1 Các yếu tố liên quan đến nghề ngiệp, thói quen sinh hoạt

Các yếu tố liên quan đến nghề nghiệp và thói quen sinh hoạt: nhânviên y tế, dùng chung dao cạo, dùng chung bàn chải đánh răng, xăm da,xâu lỗ tai…

Theo kết quả nghiên cứu của Trần Xuân Chương thì các yếu tố nguy cơnhư: nhân viên y tế (OR = 3,18; p < 0,01), xăm da (OR = 5,74), dùng chungdao cạo (OR = 1,90) có liên quan đến nhiễm VRVGB Trong khi các yếu tốkhác như xâu lỗ tai và dùng chung bàn chải lại không có liên quan đến nhiễmVRVGB (OR < 1) Theo Hà Thị Minh Thi và cộng sự thì dùng chung dao cạo

và xăm da có liên quan rõ rệt với nhiễm VRVGB (OR = 4,72 và 5,16), cònxâu lỗ tai thì ít có liên quan (OR = 1,21) [9], [39]

Theo Viên Chinh Chiến và cộng sự thì tỷ lệ nhiễm VRVGB ở nhânviên y tế tuyến huyện là 13,3%, tuyến tỉnh là 18,9%; theo Trần Xuân Chương

tỷ lệ này là 15,2% Nghiên cứu của Petrosildo và cộng sự ở Ý cho thấy tỷ lệnhiễm VRVGB trong nhân viên y tế là 23,3% [6], [9]

Chen C.J nhận thấy rằng xăm da có liên quan đến sự tăng nguy cơnhiễm VRVGB ở Đài Loan D Lavanchy cũng khuyến cáo không nên dùngchung các đồ dùng cá nhân như dao cạo, bàn chải đánh răng và bất cứ vật

gì có khả năng làm xây xát da, niêm mạc để đề phòng lây truyền VRVGB[51], [65]

1.6.2 Các yếu tố liên quan đến gia đình, tập thể

Các yếu tố liên quan đến gia đình, tập thể: có mẹ, vợ, chồng hoặc cóngười thân trong gia đình bị nhiễm VRVGB; trong cơ quan hay lớp học cóngười bị nhiễm VRVGB…

Kết quả nghiên cứu của Hà Thị Minh Thi và cộng sự năm 2002 thì yếu

tố mẹ có HBsAg (+) có liên quan đến nhiễm VRVGB (OR = 2,74) Mộtnghiên cứu ở Đài Loan cho thấy một số người bị nhiễm VRVGb là nam giới,tuổi dưới 50 và tiền sử gia đình có người bị ung thư gan Theo kết quả nghiêncứu của Trung tâm Phòng ngừa và kiểm soát bệnh tật của Mỹ (CDC) thì có4% người nhiễm VRVGB do tiếp xúc với bệnh nhân viêm gan trong nhà hoặcnhân viên y tế [9], [39], [48]

Sự lây truyền từ mẹ sang con là một đặc điểm dịch tễ quan trọng ở cácnước đang phát triển trong đó có Việt Nam Điều đặc biệt nguy hiểm là tỷ lệchuyển thành nhiễm VRVGB mạn tính của những trẻ bị nhiễm trong thời kỳchu sinh rất cao (> 90%) Sự lây truyền này có thể xảy ra trong thời kỳ bàothai, trong khi sinh và cả sau sinh Vì vậy, bên cạnh chương trình tiêm chủng

mở rộng cho trẻ em còn cần phải chú trọng đến việc tiêm chủng cho đốitượng phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ

Khả năng lây truyền VRVGB giữa những người trong gia đình vẫn cóthể xảy ra Chẳng hạn sự lây truyền giữa các trẻ em Châu Phi do số lượng ítmáu và nước xâm nhập qua các xây xát nhỏ ở da và niêm mạc hay do việcdùng chung các vật dụng gia đình như kéo, lược, dao cạo, bàn chải đánhrăng… [45], [55]

1.6.3 Các yếu tố liên quan đến các dịch vụ chăm sóc y tế

Các yếu tố liên quan đến các dịch vụ chăm sóc y tế: phẫu thuật, truyềnmáu và các chế phẩm của máu, chữa răng, châm cứu, chích lễ, các thủ thuậtnhư nội soi, chọc tủy sống, cắt trĩ, tiêm truyền…

Các dịch vụ chăm sóc y tế trước đây vẫn được xem như những yếu tốliên quan quan trọng nhất có liên quan đến nhiễm VRVGB trong cộng đồng.tuy nhiên theo Trần Xuân Chương thì các yếu tố liên quan truyền thống nhưtruyền máu và phẫu thuật đã không còn đóng vai trò quan trọng trong việc lâytruyền VRVGB nữa; tỷ lệ có truyền máu và phẫu thuật ở cả 2 nhóm bệnh vàchứng tương đương nhau (OR = 0,98; p > 0,05) [9]

Các yếu tố tiêm chích, truyền dịch, cắt amidan, nội soi… cũng khôngcho thấy có sự liên quan đến nhiễm VRVGB Các yếu tố nguy cơ quan trọng làkhám chữa răng, chích lễ, khâu da, xẻ nhọt và châm cứu có liên quan rõ rệt vớinhiễn VRVGB Theo Trần Xuân Chương có đến 24,8% trong nhóm bệnh có

khám chữa răng ít nhất 1 lần so với nhóm chứng là 11,33%; có 11,2% ngườinhiễm VRVGB có châm cứu so với 7,33% trong nhóm chứng (OR = 1,59);18,4% có chích lễ so với 5,33% trong nhóm chứng (OR = 4, p< 0,001) [9].

Nghiên cứu của Hà Thị Minh Thi và cộng sự cho thấy các yếu tố liênquan đến nhiễm VRVGB là phẫu thuật, tiêm truyền, chữa răng và châm cứu(OR = 1,81 - 3,1) Kết quả một nghiên cứu ở Ý thì các yếu tố liên quan quantrọng là nhân viên y tế, khám chữa răng và bị kim đâm khi làm việc trongbệnh viện (các tai nạn nghề nghiệp) [9], [39]

Các phương pháp điều trị theo y học cổ truyền như châm cứu, chích lễ,rạch da… là một nhóm yếu tố nguy cơ thường gặp nhất ở các nước đang pháttriển trong đó có Việt Nam Phần lớn những cách chữa bệnh này chưa đượctheo dõi cẩn thận nên chưa thể đánh giá hết sự nguy hiểm của nó đối với việclây nhiễm VRVGB

1.6.4 Các yếu tố liên quan đến các tệ nạn xã hội

Các tệ nạn xã hội như tiêm chích ma túy, quan hệ tình dục với nhiềungười đặc biệt với gái mại dâm…

Theo các kết quả nghiên cứu của CDC tại Hoa Kỳ thì có đến 50%người bị viêm gan B cấp có liên quan đến quan hệ tình dục với hơn 1 đốitượng, với người bị viêm gan hoặc quan hệ tình dục đồng giới [48]

Lây truyền VRVGB qua việc dùng chung bơm kim tiêm khi tiêmchích ma túy là khá phổ biến ở Việt Nam và các nước đang phát triển khác.Theo Trịnh Thị Ngọc thì trong số 58 người dùng ma túy đường tĩnh mạch có22,4% nhiễm VRVGB, 17,2% nhiễm virus viêm gan C, 39,5% nhiễm đồngthời cả VRVGB và C, 3,5% nhiễm đồng thời cả 3 loại VRVGB, C và D.Theo nghiên cứu của CDC thì 15% người bị viêm gan B cấp có tiêm chích

ma túy [33], [48]

1.7 DỰ PHÒNG NHIỄM VIRUS VIÊM GAN B

1.7.1 Vắc xin ngừa VRVGB

Từ những năm 80, vắc xin viêm gan B lần đầu tiên có mặt trên thịtrường thế giới Các vắc xin viêm gan B đã sử dụng KN bề mặt của VRVGB(HBsAg) có độ tinh khiết cao Cho đến nay đã có 3 thế hệ vắc xin viêm gan Btùy theo tính chất KN của HBsAg

- Vắc xin thế hệ thứ nhất: điều chế HBsAg từ huyết tương ngườinhiễm VRVGB gồm có: HBsAg, pre-S1, pre-S2, DNA của virus và được xử

lý làm bất hoạt VRVGB bằng enzyme papain, bằng kỹ thuật hóa lý (ure, xử lý

pH, nhiệt)

- Vắc xin thế hệ 2: được gọi là vắc xin tái tổ hợp sử dụng đoạn gen mãhóa HBsAg và sản xuất bằng phương pháp nuôi cấy từ nấm men hoặc E.coligồm HBsAg, pre-S Một số vắc xin loại này như: Engeris-B, H.BVax II,Recombivax-HB

- Vắc xin thế hệ 3: được tái tổ hợp và nuôi cấy từ tế bào trứng chuột cốngvàng Trung Quốc, chứa đủ 3 nhóm quyết định KN: HBsAg, pre-S1, pre-S2

Sự phát triển của các vắc xin nhằm mục đích tăng cường đáp ứng tạo KTvới nồng độ cao, đảm bảo an toàn, ngăn chặn những trường hợp không đáp ứngsau tiêm chủng và bảo vệ tránh những đột biến về HBsAg [43], [51]

1.7.2 Các loại vắc xin viêm gan B

Có 2 loại vắc xin viêm gan B: vắc xin chế từ huyết tương và vắc xin tái

tổ hợp

- Vắc xin huyết tương được chế từ HBsAg tinh chế từ huyết tương củangười nhiễm VRVGB mạn tính Những vắc xin này đã có trên thị trường từnăm 1982 Tiếp theo quá trình tinh lọc cao, những phân tử nhiễm trùng tiềmtàng sẽ bị loại trừ Aluminium phosphate hay aluminium hydroxide được chothêm vào như là 1 tá dược; thiomesal được sử dụng như là một chất bảo quản

- Vắc xin tái tổ hợp sử dụng HBsAg được tổng hợp từ nuôi cấy menhoặc tế bào của động vật có vú, trong đó gen HBsAg (hay gen tiền HBsAg)

đã được lồng vào plasmid Những tế bào này được nuôi cấy trong các bìnhlớn Các phân tử tái tổ hợp khác với các phân tử tự nhiên về thành phầnglucose của HBsAg Sau khi tinh chế qua từ các tế bào chủ, nhôm vàthiomesal được cho thêm vào

Trong quá trình sản xuất khác nhau, số lượng protein HBsAg cho mỗiliều vắc xin sẽ tạo ra đáp ứng miễn dịch khác nhau giữa các sản phẩm vắc xinkhác nhau (2,5 - 40g cho mỗi liều người lớn) Vì lý do này, không có tiêuchuẩn quốc tế về nồng độ protein HBsAg trong một liều

Vắc xin viêm gan B hiện nay ở dạng đơn giá (sử dụng tiêm cho trẻ

sơ sinh) hoặc kết hợp với các vắc xin khác (không được sử dụng cho trẻ sơsinh) [18]

1.7.3 Tính sinh miễn dịch và hiệu quả bảo vệ của vắc xin viêm gan B

Hiệu quả bảo vệ của vắc xin viêm gan B có liên quan trực tiếp với KTAnti-HBs Hiệu giá KT ≥ 10mIU/ml 1 - 3 tháng sau tiêm mũi vắc xin cuốicùng, được coi là chỉ số đáng tin cậy trong việc bảo vệ trung hạn hay lâu dàichống lại nhiễm VRVGB Hiệu quả lâm sàng của vắc xin viêm gan B trongviệc dự phòng ung thư gan ở trẻ lớn hơn đã được chứng minh Tiêm đầy đủ 3mũi vắc xin sẽ tạo được miễn dịch bảo vệ > 95% trẻ em và người trưởngthành Ở người 40 tuổi, mức độ KT bảo vệ < 90% Ở người 60 tuổi, mức độ

KT bảo vệ chỉ còn 65 - 75% ở những người đã được tiêm vắc xin Thời gianbảo vệ ít nhất là 15 năm và có thể là suốt đời

Ở một số trẻ đẻ non, cân nặng lúc sinh < 2.000gam có thể không có đápứng tốt với việc tiêm vắc xin lúc sơ sinh Tuy nhiên khi trẻ được hơn 1 tuổi,tất cả các trẻ đẻ non, không liên quan đến cân nặng lúc sinh hay tuổi thai, đápứng miễn dịch sẽ tốt hơn Những bệnh ức chế miễn dịch như nhiễm HIV,

bệnh gan mạn tính, suy thận mạn và đái đường có liên quan tới việc giảm tínhsinh miễn dịch của vắc xin [35].

1.7.4 Phòng ngừa nhiễm VRVGB bằng tiêm phòng vắc xin viêm gan B trong Chương trình Tiêm chủng mở rộng ở Việt Nam

Ngày 18/8/1997 Thủ tướng Chính phủ chính thức phê duyệt cho phéptriển khai vắc xin viêm gan B trong Chương trình Tiêm chủng mở rộng quốcgia và triển khai thí điểm tại 2 thành phố lớn là Hà Nội và Thành phố HồChí Minh

Năm 1998, bắt đầu triển khai vắc xin viêm gan B tại 28 tỉnh/thành phốlúc bấy giờ

Năm 2001, số đối tượng trẻ em dưới 1 tuổi được tiêm là 375.121 trẻ.Dùng vắc xin viêm gan B sản xuất trong nước cho 17 tỉnh, vắc xin viêm gan

B viện trợ của Liên minh toàn cầu vắc xin (GAVI) cho 44 tỉnh còn lại

Năm 2002, được sự hỗ trợ của Liên minh toàn cầu vắc xin (GAVI) tăngdiện triển khai và số đối tượng triển khai lên đến 987.651

Năm 2003, 100% xã/phường trong toàn quốc triển khai tiêm vắc xinviêm gan B với tổng số 1.500.113 trẻ dưới 1 tuổi [18], [35]

Lịch tiêm vắc xin viêm gan B được khuyến cáo áp dụng từ năm 2005đến nay là:

- Mũi 1: Trong vòng 24 giờ sau sinh

Ở Bắc Mỹ, Bắc và Tây Châu Âu và Úc, VGVB lây nhiễm 5-7% dân số,hầu hết các bệnh nhiễm trùng VGVB xảy ra ở thanh thiếu niên và thanh niêntrong tương đối được xác định các nhóm nguy cơ cao, bao gồm cả người sửdụng thuốc tiêm, đồng tính nam, nhân viên y tế, bệnh nhân cần truyền máuthường xuyên [63].

Tại các nước Trung Âu tỷ lệ mang HBsAg chỉ từ 0,9-1,9% song cácnước vùng Đông Âu vẫn có tỷ lệ khá cao

Tại Liên Xô cũ, tỷ lệ HBsAg ở vùng Tây Bắc và Ural là 2%, còn vùngTây Bắc Siberi, Trung Á thì tỷ lệ này là 10-13% Ở các nước thuộc quần đảoNam Thái Bình Dương tỷ lệ HBsAg(+) trung bình khoảng 8-20% (thấp nhất2%,cao nhất 35%) còn tỷ lệ nhiễm VRVGB khoảng 60-80% (thấp nhất 36%,cao nhất 98%) Các kết quả điều tra trong cộng đồng ở vùng dịch lưu hành chothấy tỷ lệ mang HBsAg có xu hướng tăng từ tuổi nhỏ (khoảng 2-7%) đến cựcđỉnh ở độ tuổi 20-29 (khoảng 20%) hoặc 30-40 (7-12,8%) rồi sau đó giảm dần

Theo Ranger Rogez tại Pháp, nếu mẹ có HBsAg (+) thì 10-30% sẽtruyền VRVGB cho con [69] Theo khuyến cáo của tổ chức Y tế thế giới tạikhu vực Tây Thái Bình Dương, mẹ có HBsAg (+) thì tỷ lệ truyền virus cho condao động trong khoảng 10-90% [71] Người mẹ có khả năng lây nhiễm cho controng thời kỳ chu sinh và sau sinh ở trẻ em Trung Quốc là 40-59% [32]

Theo Irsan Hasan nguy cơ nhiễm VRVGB chu sinh từ trẻ sơ sinh docác bà mẹ có HBeAg (+) vào khoảng từ 70-90%, khoảng 90% các trẻ em vẫn

Theo Vũ Hồng Cương, yếu tố nguy cơ lây truyền từ mẹ sang con là38,38% [10]

Lê Văn Trịnh nghiên cứu trên học sinh trường Trung học Y tế Huế, tỷ

lệ HBsAg (+) là 9% Trong đó yếu tố nguy cơ do tiêm chích, chích lễ, châmcứu là 9,45%; do xâu lỗ tai là 5,35%; do gia đình có người bị nhiễm là15,38% [42]

Nguyễn Hữu Chí, Cao Ngọc Nga nghiên cứu trên sinh viên Y khoanăm 2 tại trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh có tỷ lệ HBsAg(+) là 8% [1]

Tại Thừa Thiên Huế, Trần Xuân Chương đã nghiên cứu ở người hiếnmáu nhân đạo có 11,47% HBsAg (+) Trong đó số người được khảo sát cóyếu tố nguy cơ do xăm da là 7,2%; do xâu tai là 14,4%; do dùng chung daocạo là 21,6%; dùng chung bàn chải đánh răng là 10,4%; mẹ truyền cho con là4,8%; vợ chồng là 4%; người thân trong gia đình là 5,6% [8]

Phạm Văn Lình, Trần Thị Minh Diễm và cộng sự nghiên cứu người từ

3 tuổi trở lên ở Thừa Thiên Huế có tỷ lệ HBsAg (+) là 16,8% [26]

Trần Thị Minh Diễm, Trần Xuân Chương và cộng sự nghiên cứu cácyếu tố nguy cơ lây nhiễm VRVGB tại tỉnh Thừa Thiên Huế cho thấy chưa có

sự liên quan rõ ràng giữa giữa tỷ lệ HBsAg (+) và tiền sử có sử dụng các dịch

vụ y tế Có nguy cơ lây nhiễm VRVGB cao đối với vợ hoặc chồng nếu cómột trong hai người có HBsAg (+); đặc biệt nguy cơ này rất cao khi nam giới

có vợ bị viêm gan/ HBsAg (+) trong khi nữ giới HBsAg (+) thì sự liên quanvới chồng có tiền sử viêm gan/ HBsAg (+) ít chặt chẽ hơn [12]

Ngô Viết Lộc, Đinh Thanh Huề, Nguyễn Đình Sơn nghiên cứu tìnhhình nhiễm VRVGB ở người từ 6 tuổi trở lên ở Thừa Thiên Huế với tổng sốmẫu 2.525 có 16,36% có HBsAg (+) [29]

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ

- Các đối tượng từ chối tham gia nghiên cứu

- Các đối tượng đến khám ngoài thời gian trên

2.1.3 Cỡ mẫu

Trong thời gian nghiên cứu có 618 người tham gia vào nghiên cứu.Chúng tôi đã tiến hành phỏng vấn đối tượng, làm các xét nghiệm HBsAg,Anti-HBs, transaminase (AST, ALT)

2.1.4 Tiêu chuẩn xác định nhiễm virus viêm gan B

- Trường hợp đang nhiễm: Có xét nghiệm kháng nguyên: HBsAg (+)

- Trường hợp đã nhiễm: có xét nghiệm kháng thể: Anti-HBs (+)

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Phương pháp nghiên cứu chung

Nghiên cứu mô tả cắt ngang

2.2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.2.1 Lập phiếu nghiên cứu

Phiếu nghiên cứu gồm 3 phần:

- Phần thông tin chung:

+ Tuổi

 Có người thân trong gia đình đã và đang bị các bệnh về gan

 Không có người thân trong gia đình đã và đang bị các bệnh

về gan

+ Tiền sử cá nhân: Có bệnh về gan hoặc các triệu chứng liên quanđến các bệnh về gan: nước tiểu vàng và mệt rũ người không do lao độngnặng; rối loạn tiêu hóa, đau tức hạ sườn phải,

+ Các thói quen sinh hoạt hằng ngày: dùng chung dao cạo, xăm

da, dùng chung bàn chải đánh răng, sữa giũa móng tay, chân, cắt tóc

+ Các thủ thuật y tế: châm cứu, nhổ răng, phẫu thuật

+ Thông tin về phòng bệnh: tiêm ngừa vắcxin viêm gan B (có làmxét nghiệm trước khi tiêm; đã tiêm đủ liều)

- Kết quả xét nghiệm: HBsAg, Anti-HBs, transaminase (AST,ALT)

2.2.2.2 Các bước tiến hành

- Liên hệ Phòng Kế hoạch tổng hợp Bệnh viện Trường Đại học YDược Huế và Khoa Sức khỏe nghề nghiệp, Trung tâm Y tế Dự phòng tỉnhThừa Thiên Huế để biết thời gian khám sức khỏe của cán bộ - công chức

- Phỏng vấn trực tiếp cán bộ, công chức đến khám sức khỏe tại 2

cơ sở trên và thu thập số liệu theo bảng câu hỏi soạn sẵn (kèm theo ở phầnphụ lục)

- Tiến hành lấy mẫu máu xét nghiệm HBsAg, Anti-HBs vàtransaminase.

- Ghi nhận kết quả xét nghiệm

- Tổng hợp kết quả; xử lý thống kê

2.2.3 Các kỹ thuật xét nghiệm trong nghiên cứu:

2.2.3.1 Kỹ thuật xét nghiệm HBsAg [46]

- Nguyên liệu: Bộ kít MonolisaTM HBsAg ULTRA của hãng Bio-Rad

- Nguyên tắc kỹ thuật: Monolisa HBsAg ULTRA dựa trên kỹthuật ELISA “bánh mì kẹp thịt” (Sandwichs) KT đơn dòng đặc hiệu (1) gắnvới đáy giếng nhựa, thêm huyết thanh thử vào giếng, phản ứng kết hợp xảy ranếu có HBsAg Kháng thể Anti-HBs (2) gắn với HRP (Hoseradishperoxidase) nhằm phát hiện phức hợp KN - KT và sử dụng như chất phản ứngvới chất sinh màu TMB (Tetramethylbenzidin) nhờ có peroxidase Sự xuấthiện màu tương ứng với sự hiện diện của HBsAg

+ Micropipettes (100µl), pipette đa kênh 5ml, 10ml

+ Dung dịch đệm PPS pha loãng 1: 25 (10ml + 240ml nước cất)(nếu bị kết tủa ở dung dịch mẹ thì nên để vào 370C cho tan) H2SO4 1mol/lít

+ Chất sinh màu gồm 1 thể tích TMB và 1 thể tích ure peroxide.+ Máy phổ kế đọc kết quả ELISA

- Tiến hành kỹ thuật miễn dịch gắn enzym: thực hiện trên máy đomật độ quang 680 của hãng Bio - Rad

+ Gắn đủ các giếng vào khay (stripholder) theo yêu cầu của sốmẫu thử và các chứng dương, chứng âm.

+ Nhỏ 25µl dung dịch pha loãng huyết thanh vào các giếng

+ Nhỏ 75µl huyết thanh thử và các chứng vào các giếng (nhỏ mẫuthử trước, mẫu chứng sau), thay các đầu côn sau mỗi mẫu huyết thanh thử vàchứng Lắc nhẹ khay, ủ các giếng ở 370C trong 60 phút

+ Nhỏ 50µl cộng hợp có Anti-HBs gắn HPR vào mỗi giếng Lắcđều và ủ ở nhiệt độ phòng 30 phút

+ Rửa sạch các giếng 5 lần với dung dịch PBS Vẩy và đập mạnhcác giếng vào giấy thấm để ráo nước (chú ý: không còn bọt khí ở các giếng)

+ Nhỏ 100µl dung dịch cơ chất TMB và ủ ở nhiệt độ phòng 30 phút.+ Làm ngừng phản ứng bằng 100µl H2SO4 1mol/lít vào mỗi giếng

và lắc nhẹ

+ Đọc kết quả với máy đọc ELISA ở bước sóng 450nm

- Kết quả:

+ Bằng mắt thường có thể sơ bộ nhận xét:

 Nếu mẫu thử có màu vàng: HBsAg (+)

 Nếu mẫu thử không có màu hoặc màu vàng rất nhạt: HBsAg (-).+ Phân tích kết quả

 Tính OD trung bình của chứng âm (ODR3):

Như vậy OD R3 trung bình = Tổng OD R3 /4 = 0,030

 Tính giá trị ngưỡng (cut-off)):

Giá trị ngưỡng cut-off = ODR3 + 0,050

ODR3 x 0,6 ≤ ODR31 ≤ ODR3 x 1,4

ODR3 x 0,6 ≤ ODR32 ≤ ODR3 x 1,4

ODR3 x 0,6 ≤ ODR33 ≤ ODR3 x 1,4

ODR3 x 0,6 ≤ ODR34 ≤ ODR3 x 1,4

 Nếu một chứng âm không đạt tiêu chuẩn này hoặccao hơn 40% so với giá trị trung bình của chứng âm(ODR3) thì loại bỏ chứng âm này và tính lại giá trị

OD trung bình với 3 chứng âm còn lại Chỉ chophép loại bỏ 01chứng âm đối với thử nghiệm này

 Trong trường hợp giá trị chứng âm thấp (OD trungbình chứng âm thấp hơn 0.010) thì không sử dụngtiêu chuẩn loại bỏ này đối với chứng âm R3

 Thử nghiệm phải làm lại nếu tất cả giá trị của chứngkhông đạt điều kiện của phản ứng

 Tính giá trị của mẫu

Cho mỗi mẫu, tính tỷ số của mẫu như sau:

R = OD mẫu / giá trị ngưỡng (cut-off)

 Đánh giá kết quả

 R < 0.9: Mẫu âm tính đối với thử nghiệm Monolisa

- Các quy định kiểm tra chất lượng kỹ thuật và bộ sinh phẩm:

 Chứng âm (NC) phải có OD < 0,200 Loại bỏ chứng âm có

OD ≥ 0,200

 Tính trị trung bình chứng âm Nx

 NC ≤ 1,4Nx; loại bỏ NC > 1,4Nx và tính lại Nx

 NC ≥ 0,06Nx; loại bỏ NC < 0,06Nx và tính lại Nx

 Xét nghiệm có giá trị khi chứng dương (PC) - Nx ≥ 0,400

- Độ nhạy và độ đặc hiệu của bộ kít MonolisaTM HBsAg ULTRA:

 Độ nhạy: 100%

 Độ đặc hiệu: 99,94%

2.2.3.1 Kỹ thuật xét nghiệm Anti-HBs [47]

- Nguyên liệu: Bộ kít Monolisa® Anti-HBs PLUS của hãng Bio-Rad

- Nguyên tắc: Dựa trên nguyên tắc kỹ thuật ELISA “Sandwichs”,thay vì gắn Anti-HBs vào pha rắn thì là HBsAg

HBsAg Anti-HBs HBsAg - HRP + chất sinh màu

Pha rắn mẫu dương enzym - Ag

- Chuẩn bị: tương tự như phần kỹ thuật HBsAg, tuy nhiên chất sinhmàu được pha bằng cách:

+ Hòa tan 1 viên ure peroxide trong 10ml nước cất, lắc đều trướckhi sử dụng Sau đó lấy 1ml dung dịch ure peroxide này thêm vào chai chứađệm dành cho cơ chất và dung dịch được gọi là đệm peroxide/substrat

+ Chất sinh màu TMB - đệm peroxide/substrat: gồm 0,5ml đệmperoxide/substrat đã chuẩn bị ở trên cho vào 5ml nước cất trộn đều Sau đóthêm 100µl TMB và lắc đều (dùng cho 50 giếng thử).

- Tiến hành: thực hiện trên máy đo mật độ quang 680 của hãng Bio - Rad

+ Gắn đủ các giếng vào khay theo yêu cầu của số mẫu thử và 3chứng gồm: 1 chứng dương thấp (tương ứng 10mIU/l), 1 chứng dương cao(tương ứng 100mIU/l) và 1 chứng âm

+ Nhỏ 100µl mẫu huyết thanh thử và chứng vào các giếng (nhỏmẫu thử trước, mẫu chứng sau) và lắc nhẹ (thay mới các đầu côn sau sau mỗimẫu huyết thanh mẫu)

+ Ủ các giếng ở 370C trong 60 phút

+ Rửa sạch các giếng 4 lần với dung dịch PBS bằng pipette đa kênh.+ Vẩy và đập mạnh vào giấy thấm để được ráo (chú ý không cònbọt ở các giếng)

+ Nhỏ 100µl cộng hợp (Anti-HBs đơn dòng gắn HRP) vào các giếng.+ Ủ các giếng ở 370C trong 60 phút

+ Rửa sạch các giếng 4 lần với dung dịch PBS bằng pipette đa kênh.+ Nhỏ 100µl chất sinh màu TMB - đệm peroxide/substrat vào các giếng+ Ủ các giếng ở nhiệt độ phòng (180C - 250C) trong 30 phút

+ Làm ngưng phản ứng với 100µl H2SO4 1mol/lít và lắc nhẹ.+ Đọc kết quả với máy đọc ELISA ở bước sóng 450nm

- Kết quả:

+ Đọc tương tự HBsAg nếu chỉ định tính

+ Trong trường hợp định lượng (hiệu giá kháng thể) thì dùng giấy

kẻ li vẽ được đường biểu diễn chuẩn căn cứ vào các chứng dương thấp vàdương cao đã biết trước nồng độ Anti-HBs với các OD đọc được trên máy

Từ kết quả OD của mẫu thử sử dụng đường biểu diễn chuẩn (Hình 2.1),

ta có thể tính được nồng độ của Anti-HBs của mẫu thử

Hình 2.1 Đường biểu diễn chuẩn căn cứ vào

các chứng dương thấp và dương cao của Anti-HBs.

- Độ nhạy và độ đặc hiệu của bộ kít Monolisa® Anti-HBs PLUS+ Độ nhạy: 99,20%

+ Độ đặc hiệu: 99,40%

Các xét nghiệm này được tiến hành trên dàn máy ELISA của hãng Rad (bao gồm máy ủ, máy rửa và máy đọc)

Bio-2.2.3.3 Xét nghiệm Transaminase: AST, ALT

- Xác định hoạt tính của AST trong huyết thanh:

+ Nguyên lý:

AST

L Aspartate + Cetoglutarate  Oxaloacetate + L Glutamate

MDHOxaloacetate + NADHH+