Khóa luận tốt nghiệp Sư phạm sinh học: Khảo sát hoạt tính kháng oxi hóa của một số cao chiết từ nấm cộng sinh địa y Graphis sp

Do đó, hoạt tính sinh học của các chiết xuất từ nắm cộng sinh địa y ít được nghiên cứu chỉ với một vài báo cáo xuất hiện gần đây.. Vi vậy, dé tai này được thực hiện nhằm “Khao sát hoạt t

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

BÙI ÁNH TUYẾT

KHAO SÁT HOẠT TÍNH KHANG OXI HOÁ

CUA MOT SO CAO CHIẾT

TU NAM CONG SINH DIA Y Graphis sp.

KHOA LUAN TOT NGHIEP NGANH SƯ PHAM SINH HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DAN KHOA HỌC

TS Trần Thị Minh Định

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH - 2023

LỜI CÁM ƠN

Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất đến Thạc sĩ Tran Thị Minh Định đã tận tình hưởng dân, dwa ra những định hướng thực hién đề tài, chia sẻ những kiến thức và kinh nghiệm nghiên cứu khoa học, liên tục đốc thức và động viên

em trong quá trình thực hiện đề tài khoá luận orn ghiép

Bên cạnh đó, em cũng xin được gửi lời cam ơn đến PGS.TS Duong Thúc Huy

~ Giảng viên khoa Hoá học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hà Chí Minh; các anh chị, bạn bè nghiên cứu thuộc Phòng thí nghiệm Hop chất tự nhiên đã hết lòng hỗ trợ em thực hiện một số thí nghiệm.

Ngoài ra, em xin gửi lời cảm ơn đến các bạn sinh viên thực hiện đề tài ở phòng

thínghiệm Sinh hoá — Vi sinh cũng như các bạn cùng khoá 45 Khoa Sinh học, Trường

Đại học Sư phạm Thanh phố Hỗ Chí Minh đã luôn đồng hành và chia sẻ trong suốt

thời gian em thực hiện đề tài

Em xin chân thành cảm ơn Thay, Cô khoa Sinh học — Trường Đại học Su phạm

Thành phố Hồ Chi Minh đã tạo cho em một nên tang kiến thức chuyên môn và những kinh nghiệm thực tiên trong quá trình học tập.

Cuối cùng, không thể dùng từ ngữ nào để thể hiện lòng biết ơn vô bờ của con

đối với gia đình, cha mẹ, người đã sinh thành, nuôi nang, tao mọi điều kiện tốt nhất

dé con được học hành đến nơi đến chon, tiếp cận tri thức khoa hoc, trở thành người

có ích cho xã hội Cảm ơn gia đình, người thân đã luôn bên con, là chỗ dựa tỉnh thần

vững chắc để con bước tiếp đến tương lai tốt đẹp.

Thành phó Hỗ Chí Minh, ngày tháng năm 2023

SINH VIÊN

Bùi Ánh Tuyết

MUC LUC

Lời CÂHÏ'0R¡i¿cccisniatiiiitiiiiiisii201451531114611631802315353535858ã15053883316555833835189565g35583588565538338ã856 i

TIM Ñ:Gitctitiiiitioebooiiiiiiti140116111461164115411138385553511558836485635:558565156515665563ã663i5648ã63115558885L li

Danh mục các chữ VICE AC cece ceccceccsecccescssecessecsscssesessecssveeteessncesesesseseeceessevsnceneeeeeeees V

Danh: M6 các Dang caoosnoaooiiiiioiiiiiiiiiiiii4111411165113314381385100453365136533843868536188335168ã3340 vì TDanhimU6 cáE|HÌNH::::;::::::::::::::::::2:::2202222023122231222262306512633363015351333826353685883583555555g43 5832 vil

MÔ ĐẦU a ee ee 1

EifdselondbilI cata scatacescsssecssateesesezcescsasssestdctetstnacectedessesctdesctctetcseetteses 1

II.M€ tiêu nghin GỮU:icccoccoioiiiooiioiioitiiiiiti111401114G55314138388343333358353853883535365855 2

1.1 Tông quan về stress oxi hoá -c cccccccccccecec2cSvvvzd2ZEereedrzrsrsrdrzreserrrrred =

1.2 Tông quan về chat chồng oxi hoá 222222222222222222112222111112222111 re 51.3 Tổng quan về địa y va nam phân lập từ địa y ccccccccccvccccerrrrrrrree 7

1.3.1 Tổng quan về địa y - -2 2-222+222222EEE2EEE2EA22231E 2212 2122222.crxcrrrree 71.3.1.1 Đặc điểm sinh học ch E1 2H 11011 0 1 g2 xe 7

2.1.1 Thiết Dice eeeccsssseecsesesneeseessntneeecusnneeecennnseescesnueesenssneesessaneseeeonnneeee 18

D:D: Hóa CHAD ccsscisoassoaaasessssssoasssessoussossissssssasuossissssssssoaaassrsznossoatisessecousasissiie 18

2.1.2.1 Hoá chat sử dung dé chế tao môi trường nuôi cây nắm 18

2.1.2.2 Hoá chất dùng dé tạo các cao chiết -. - s2 v22 21222 19

2.1.2.3 Hoa chat dùng trong thir nghiệm hoạt tinh khang oxi hoa 19

2:2 Phương pháp nghiên COW sssssssssssssssssssisssosssiassoasssaesonssssssnssssssesssssissaasessassoonseassenaaiasaees 19

2.2.1 Phương pháp phân lập nắm từ địa y c cccccecccecccesccescesseescessseesseeneeeneee 19

2.2.2 Phương pháp nuôi cấy nằm cộng sinh địa y trên môi trường rắn và môi

CONE LÔ :iccioiioiipiititgiii11012013011133118615585116818856866135818885ã38588185861388788685861568188685368 20

2.2.3 Phương pháp tạo các cao chiết 2-©22©czzczxecrxecEkzcxkecreecrrec 20

2.2.4 Khảo sát hoạt tinh kháng oxi hoá bằng phương pháp bẫy gốc tự do DPPH.21BDA, NG HH na acc can 21

2.2.4.2 Pha mẫu thử 1-2 2s 221 0221 2111 SE TH T112 1121012110211 1011111 xec 21

2.2.4.3 Tiền trình thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng oxi hoá bằng phương

pháp bay gốc tự do DIPPH - 2-2222 SSE£SE2EEEEESE1 211722723 222212- xe 22

2.2.5 Phương pháp xử lí số liệu ó5 2c 2 1290 0 21011 111111102 xe 23

2:3.i0uyitrinhitho HIỆN::i:ccccooinieoiiiiiilit01142100111113601301333013334333535335365331333456333183563785888E 23

Chương 3 KET QUA VÀ THẢO LUẬN si 52 21 2222212250222121222122111 s25 24

3.1 Kết quả phân lập nắm cộng sinh từ mẫu địa y khảm thuộc chỉ Graphis 24

3.2 Các yếu tô ảnh hưởng đến hoạt tính kháng oxi hoá 2cssscrrrrcez 27

3.2.1 Ảnh hướng của điều kiện nuôi tinh hoặc nuôi lắc đến hoạt tính kháng

OKIIBGÃ:::c::::ccciiscicocciozgio2002212261122162211655115630851856118556152388855665588838585385518858582365518558858 27

3.2.2 Anh hướng của thời gian nuôi cay đến hoạt tính kháng oxi hoá 29

3.3 Kết qua ảnh hưởng của dung môi đến hoạt tính kháng oxi hoá 32

3.4, Kết quả hoạt tính kháng oxi hoá của đối chứng dương ascorbic acid 34

KET LUẬN VÀ KIEN NGHỊ, 2 Ss-cczEEzzEEZAEEA.rkkerrkkerrkecrreee 36

TÀI LIEU THAM KHẢO - - 2222 222232 1221223211711721 2117117217121 172.111 cee 37

EU 0n an coanAanoaaearonarmain |

PHU LUC 1: Hoạt tính kháng oxi hoá của cao ethyl acetate chiết xuất từ chủng nam phân lập được nuôi tĩnh và nuôi lắc s - 2222122222 12222211111 121711111130210211210111 se l

PHU LUC 2: Hoạt tính kháng oxi hoá của cao ethyl acetate chiết xuất từ chủng nam

phân lập được nuôi ở các khoảng thời gian khác nhau 555cc l

PHỤ LUC 3: Hoạt tính kháng oxi hoá của các loại cao được chiết xuất từ chủng nam cộng

sinh của địa y Graphis sp trong 5 tháng -.s HH tu re 2

PHU LUC 4: Hoạt tính kháng oxi hoá của acid ascorbic ở các nồng độ khác nhau và

phương trình đường chuân của acid ascorbic +1 s222141222222112122-c 3

DANH MỤC CÁC CHỮ VIET TAT

Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ

BHA Butylated HydroxiAnisole

(Các loại oxi phan ứng)

SOD SuperOxide Dismutase

TBHQ Tert - ButylHydroQuinone

Trolox

(+)-6-Hydroxi-2,5,7,8-tetramethylchromane-2-carboxilic acid

DPPH 2,2-DiPhenyl-1-PicrylHydrazy]

DANH MỤC CÁC BANG

Trang

Bang 2.1 Các thiết bị sử dụng trong đề tài - 5-2 222 x22 Sx0221222112 12s re 18

Bang 2.2 Cách pha loãng các mau cao ethyl acetate thành nông độ 1000 pg/ml 21

Bang 2.3 Cách pha loãng mẫu cao methanol và cao acetone từ môi trường nuôi va

sinh khối nam cộng sinh địa y Graphis sp thu & 20 tuần thành nồng độ 1.000 pg/ml

Bảng 3.1 Sinh khối nắm thu được khi nuôi trên môi trường rắn MYA và trên môi trường MY lỏng ở điều kiện lắc -2- 22222 +2Ex2Ext2YE2EEe z2 ec2trxetrxerred 27 Bang 3.2 Khôi lượng cao ethyl acetate thu được từ nắm cộng sinh của địa y Graphis Gopi HTS Hưới cây: si) LH os isesssnssscssscsssnsscnssssessnossnasssassnssssssvesivessiesivonssssssnesnees 28

Bang 3.3 Ti lệ % bay gốc tự do DPPH của cao ethyl acetate được chiết xuất từ nam

cộng sinh của địa y Graphis sp phân lập được nuôi trên môi trường tĩnh và lắc 28

Bảng 3.4 Sinh khối nắm thu được khi nuôi trên môi trường MYA ở các khoảng thời

SiI1(KRAGIRHÑUisisstosssissins5g00511055100111051156115511330133518ã538561693388538363888389635399558866861398385588855 29

Bang 3.5 Khối lượng cao ethyl acetate thu được tử nam cộng sinh của địa y Graphis

sp được nuôi trong các khoảng thời gian khác nhau c <-«<<-. .- 30

Bang 3.6 Tỉ lệ % bay gốc tự do DPPH của cao cthyl acetate được chiết xuất từ chủngnam phân lập được nuôi trên môi trường tĩnh ở các thời gian khác nhau 30Bang 3.7 Ti lệ % bẫy gốc tự do DPPH của cao ethyl acetate được chiết xuất từ chủng

nam phân lập được nuôi trên môi trường tĩnh trong 20 tuần -.22-2s- 31 Bảng 3.8 Ti lệ % bay gốc tự do DPPH của cao ethyl acetate được chiết xuất từ chủng

nắm phân lập được nuôi trên môi trường tĩnh trong 20 tuần ở các nông độ khác nhau

DANH MUC CAC HINH

Trang

Hình 1) Céci dang ia Y::ccoccoccociocpointioiiitiatiiai2502121311631383555535534816315635525565ã588580 8

Hình 2.1 So đồ quy trình thực hiện thí nghiệm trong đề tài . - 23Hình 3.1 Dia y khảm trên vỏ cây được thu từ Đức Trọng, Lâm Đồng 24

Hình 3.2 Bào tử địa y Graphis SD c chu nà nu 24

Hình 3.3 Khuan lạc nắm sau 2 tuần nuôi cấy -2 -2-©szeczzeczxecxzecvzzce 25

Hình 3.4 Khuẩn lạc nam sau I thắng 622262 221221223122112211711221221023 220 25

Hình 3.5 Khuan lạc nam sau 2 thang - 2-22 +£©Y+£ z+22xetzetrzsrrserred 26 Hình 3.6 Khuan lạc nắm sau 3 tháng - ¿- 2222222222 22221222122212721222222ecze 26 Hình 3:7 Khuẩn lạc nằm sau Siting cssscsasesssssssecssscsssasssosisnsisosssoasssossecsssesasessonsises 27

Hình 3.8 D6 thị thé hiện tỉ lệ phan tram bẫy gốc tự do DPPH của cao ethyl acetatechiết xuất từ chủng nam phân lập được nuôi trên môi trưởng tĩnh trong 20 tuần ở các

ndng dO Khac maw MA .ẽ 32

Hình 3.9 Đồ thị thé hiện ti lệ phần trăm bẫy gốc tự do DPPH của ascorbic acid

(VRAIN S:hšaaadiiidẢẢIIIAẶAẶAẶÚ 35

MO DAU

I LÍ DO CHON DE TÀI

Stress oxi hoá đang là mối quan tâm hàng đầu với các nhà khoa học hiện nay.Stress oxi hoá là hiện tượng xuất hiện trong cơ thê sinh vật khi có sự mất cân bằng

giữa việc sản xuất các gốc tự do (ROS) và hoạt động của các chất kháng oxi hoá [1].

Ở nông độ sinh lý bình thường, ROS cần thiết cho các hoạt động của tế bào Chúng

đóng một vai trò tích cực trong việc san xuất năng lượng, thực bào, điều hòa tín hiệugiữa các tế bảo phát triển và tông hợp các hợp chất sinh học quan trọng [2] Tuy nhiên

ở nòng độ cao hon, ROS dẫn đến sự phát trién của hơn một tram bệnh, từ viêm khớp

và rôi loạn mô liên kết sinh ung thư, chan thương thực thể đến nhiễm trùng và hội

chứng suy giảm miễn địch [2] [3] Ngoài ra, việc sản xuất quá mức các gốc tự do

trong cơ thé người gây phá hủy các tế bào j3 của tuyến tụy, từ đó làm thay đổi mức insulin trong cơ thé, dan đến bệnh tiêu đường [4].

Cách hiệu quả nhất dé loại ROS gây stress oxi hoá là sử dung chất chống oxi hoá Chất chống oxi hoá tong hợp hoặc tự nhiên, có thé có hiệu quả trong việc giúp

cơ thê con người giảm ton thương do stress oxi hoá gây ra Tuy nhiên, hiện nay đã có nhiều ý kiến cho rằng các chat chống oxi hoá tong hợp như butylated hydroxianisole

(BHA), butylated hydroxitoluene (BHT), tert - butylhydroquinone (TBHQ) và propyl

gallate (PG) có tác dụng độc hai và gây ung thu Do đó, nhiều nghiên cứu ve dia y

được thực hiện nhằm khám phá các chất chống oxi hoá tự nhiên vì có thé ngăn chặn

các gốc tự do va bảo vệ sinh vật khỏi bị hư hại do stress oxi hoá gây ra [2].

Địa y là dang cộng sinh giữa tảo và nam, có thé sông ở nhiều nơi trên đất, đá,thân cây và trong nhiều điều kiện môi trường khắc nghiệt, khô hạn hay giá lạnh, từ

vùng thấp đến núi cao, cho thấy chúng có tính chống chịu tốt Các công trình khảo

sát thành phan hoá học của địa y trên thé giới cho thay nó chứa một lượng lớn chất

biến dưỡng sơ cap (protein, amino acid, polyol, carotenoid, polysaccharide, vitamin)

va thứ cap (depside, depsidone, dibenzofuran, steroid, terpene, ), trong đó một số

chat đặc thù chi có ở địa y Nghiên cứu về hoạt tính sinh học của các chất từ địa y

cũng cho thay khá năng kháng khuẩn, kháng virus, kháng nam, khang oxi hoá, kháng

ung thư, khang virus HIV [5].

Môi trường sống của địa y rat đa dạng, chúng được tìm thay trong tat cả các hệ sinh thai và đã được sử dụng với mục đích y học từ thời cô đại [6] Trong đó, chi

Graphis được báo cáo là một trong những nguồn địa y có khả năng chống oxi hoá

mạnh Chi Graphis là một trong những chi chính của địa y khảm với hơn 400 loài

trên khắp thé giới Về mặt dược lý, các chiết xuất thô của chỉ Graphis có hoạt tính chống oxi hoá, kháng khuẩn và ức chế các enzyme tiêu hod a - amylase, a -

glucosidase [4].

Mặc dù địa y có nhiều hoạt tính sinh học từ các chất chuyển hoá của chúng đã

được thế giới công nhận, nhưng tiềm năng điều trị của chúng vẫn chưa được khai thác

hết Hơn thế nữa, do đặc tính phát triển chậm trong tự nhiên, nên việc thu thập một

lượng lớn địa y đề phục vụ cho ngành công nghiệp dược phẩm hiện đại còn gặp nhiều

khó khăn [7] [8] Các chất chuyên hoá được tạo ra bởi vi sinh vật, đặc biệt là nắm

cộng sinh của địa y là một nguồn tải nguyên có tiềm năng chữa bệnh, nhưng phan lớnvan chưa được khám phá và khai thác [9] Do đó, hoạt tính sinh học của các chiết

xuất từ nắm cộng sinh địa y ít được nghiên cứu chỉ với một vài báo cáo xuất hiện gần

đây Vi vậy, dé tai này được thực hiện nhằm “Khao sát hoạt tính kháng oxi hoá

của một số cao chiết từ nam cộng sinh địa y Graphis sp.” dé tìm ra nguôn chất chống oxi hoá tự nhiên phục vụ cho đời sống con người.

Il MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

Phân lập nam cộng sinh của địa y Graphis sp và khao sát hoạt tính kháng oxihoá của một số cao chiết từ nam cộng sinh phân lập được từ địa y Graphis sp

Ill DOI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Cao chiết của nam cộng sinh địa y Graphis sp

IV NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU

- Phân lập nắm từ địa y Graphis sp.

- Nuôi nắm địa y phân lập được với số lượng lớn trên môi trường MYA và môi

V PHAM VI NGHIÊN CỨU

Đề tài chỉ tiến hành khảo sát hoạt tính kháng oxi hoá của các cao chiết của một loài nắm phân lập từ mẫu địa y kham thuộc chi Graphis thu từ Đức Trọng Lam Đồng

vào tháng 12/2021.

VI THỜI GIAN VA DJA DIEM NGHIÊN CỨU

- Thời gian: 4 tháng (12/2022 - 03/2023).

- Địa điểm: Các thí nghiệm được thực hiện tai phòng thí nghiệm Sinh hoá — Vi

sinh, Khoa Sinh học, Trường Dai học Sư phạm Thành phô Hồ Chí Minh

Chương 1 TONG QUAN

1.1 TONG QUAN VE STRESS OXI HOA

Stress oxi hoá là sự mat cân băng giữa các quá trình sinh hoá dan đến việc sảnxuất quá mức các loại oxi phản ứng (ROS) và các chất chéng oxi hoá sẽ chịu trách

nhiệm loại bỏ bớt ROS [6].

Các gốc tự do là các loại oxi phản ứng, chăng hạn như gốc hydroxil, anion

superoxide, hydrogen peroxide vả các loại nitơ phan ứng ví dụ như nitric oxide thực

hiện một hoạt động trong các quá trình sinh hoá trong tế bảo Mặc dù các loại oxi phảnứng có vai trò đặc biệt quan trọng trong quá trình chuyên hoá các hoạt động sống trong

tế bao Tuy nhiên, khi các loại oxi phản ứng có nông độ quá cao trong tế bào cũng gây

ra nhiều tác dụng phụ không mong muốn, dẫn đến tôn thương tế bào [ I0]

Trong tình huéng đó, nêu không giảm các loại oxi phản ứng có trong tế bào thì

chúng có thẻ tắn công các protein, acid nucleic, cũng như các acid béo không bão hòa

có trong mang tế bao gây ra một số bệnh mãn tính ở người (như bệnh thoái hoá thầnkinh) [6] Các tác động gây hại của các gốc tự do có thé được giảm bớt bởi các chatchống gốc tự do va các chất kết thúc phản ứng dây chuyên - các enzyme như

superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase và glutathione reductase [ I0].

Bên cạnh đó, dé thoát khỏi hậu quả của stress oxi hoá, việc khôi phục lại sự cân bằng giữa chat oxi hoá và chất chong oxi hoá là rat quan trọng Dé duy trì hoạt động sinh lý của cơ thé diễn ra một các bình thường người ta thường sử dụng các hợp chat

tông hợp chéng oxi hoá Tuy nhiên, những rủi ro va tác hại của các chất chống oxihoá tông hợp đã được chỉ ra trong những năm gan đây và ngày nay việc sử dụng hạnchế các chất oxi hoá tông hợp đòi hỏi phải thay thé chúng bằng các chất chống oxi

hoá tự nhiên đang được quan tâm nhiều Trong số các chất chống oxi hoá tự nhiên,

các hợp chat phenol đã được nghiên cứu là chất chống oxi hoá không độc hai day hứa

hẹn trong các hệ thông sinh học Các hợp chất phenol, chăng hạn như flavonoid,

thường được tìm thay trong thực vật và ngày càng có giá trị nhờ tác đụng chong oxi

hoá vả vai trò tiềm năng của chúng trong việc ngăn ngừa và điều trị các bệnh liên

quan đến stress oxi hoá [11]

1.2 TONG QUAN VE CHAT CHONG OXI HOÁ

Trong sinh học va y hoc, chat chống oxi hoá có thé được định nghĩa là một hợp

chất có thẻ ngăn ngừa, giảm hoặc sửa chữa các thiệt hại do oxi hoá gây ra của một phan tử sinh học (như protein té bảo, một lipid mang hoặc một phân tir acid nucleic) Chúng hoạt động bằng cách phản ứng với các gốc tự do, chelate hoá các kim loại xúc

tác tự do và cũng có tác dung như một chat thu hồi oxi [10]

Theo định nghĩa về chất chong oxi hoá có ba phương thức hoạt động tiềm nang,

mà qua đó các phân tử chat chong oxi hoá bảo vệ chống lại tôn thương oxi hoá, do

ROS gây ra đối với các thành phần quan trọng của tế bao Dé chính là: ức chế sự hình

thành ROS; trực tiếp loại bỏ ROS; và sửa chữa các hư hỏng do ROS gây ra [12].

Đối với hoạt động ức chế sự hình thành ROS của chất chống oxi hoá: ROS đượctạo ra bởi các nguồn tế bảo khác nhau, bao gồm chuỗi vận chuyên điện tử ti thé,NADPH oxidase (còn được gọi là enzyme NOX), hệ thống enzyme cytochrome P450

va xanthine oxidase (XO) Chất chong oxi hoá có thê hoạt động trên các nguôn tế bào

nay, ức chế hoặc ngăn chặn việc sản xuất ROS Ví dụ, apocynin (một hợp chat phenol

có trong tự nhiên) ức chế hoạt động của enzyme NOX, do đó làm giảm ROS có nguồn

gốc NOX và tôn thương mô oxi hoá tiếp theo Một ví dụ khác là sự ức chế XO bởi

chất ức chế allopurinol làm giảm sản xuất ROS và tôn thương mô oxi hoá trong các

mô hình bệnh đa dạng Do đó cả apocynin va allopurinol có thê được coi là các hợp

chất chống oxi hoá hoạt động thông qua việc ức chế sản xuất ROS từ các nguồn tế bảo cụ thể [ 12].

Còn về hoạt động trực tiếp loại bỏ ROS của các chất chống oxi hoá: nhiều chất

chống oxi hoá nội sinh và ngoại sinh có thê trực tiếp loại bỏ hoặc giải độc ROS Việc

loại bỏ ROS có thé xảy ra thông qua các phản ứng có sự xúc tác của enzyme Vi dụ,

superoxide dismutase (SOD) xúc tác quá trình khử superoxide dé tạo thành hydrogen

peroxide, oxi phân tử và catalase xúc tác quá trình phân hủy hydrogen peroxide để

tạo thành nước và oxi phân tử [12].

Cuối cùng là hoạt động sửa chữa các hư hỏng do ROS gây ra của các chat chống

oxi hoá: ROS có thê gây hư hỏng hoặc thay đôi các phân tử sinh học của tế bảo Tếbảo động vật có vú được trang bị nhiều cơ chế khác nhau dé loại bỏ hoặc sửa chữa

các phân tử sinh học bị biển đôi hoặc bị tôn thương do ROS Vi dụ, ROS oxi hoá du

lượng methionine trong protein, tạo ra methionine sulfoxide Enzyme methionine

sulfoxide reductase (Msr) lam giảm methionine sulfoxide trong protein trở lại thành

methionine bình thường Day là một cơ chế sửa chữa quan trọng đối với ton thương

protein oxi hoá ở động vật có vú Tế bào động vật có vú cũng chứa các enzyme dé

sửa chữa các tôn thương do oxi hoá của lipid và acid nucleic [12]

Trong sinh học và y học, chất chống oxi hoá được phân loại dựa trên nhiều tiêu

chí khác nhau, bao gồm nguồn gốc, vị trí, hoạt tính của enzyme, bản chất protein, cơ

chế tác động lên ROS và điều hòa phân tử, cũng như sự ton tại trong tự nhiên [12].

Các chất chuyên hoá thứ cấp có hoạt tính chống oxi hoá mạnh được tìm thay

tông hợp nhiều trong các loài địa y Chất chống oxi hoá phenol có chức năng như

chất điệt gốc tự do và chat chelate hoá kim loại Cao methanol của địa y

Xanthoparmelia camtschadalis, X conspersa và các hợp chất của chúng như acid salazinic, acid stiren và acid usnic đã bảo vệ tế bào hình sao của con người khỏi thiệt

hại do hydrogen peroxide gây ra Tế bảo hình sao tạo thành tuyến bảo vệ đầu tiên

trong não chong lại độc tính than kinh của các loại oxi phản ứng, do đó, acid salazinic, acid stiren và acid usnic được sử dụng làm chất chống oxi hoá trong các rồi loạn thoái

hoá thần kinh liên quan đến tôn thương oxi hoá (ví du, bệnh Alzheimer và bệnh

Parkinson) Nhiều hợp chất được phát hiện ở một số địa y có hoạt tính kháng oxi hoá,

chăng hạn như atranorin (chiết xuất từ Placopsis sp.); acid divaricatic (chiết xuất từ

Protousnea malaeea); depsidone, pannarin (chiết xuất từ Psoroma pallidum) và 1

-chloropannarin (chiết xuất từ Erioderma chilense) [10]

Ngoài ra nhiều nghiên cứu đã chứng minh acid usnic là một hợp chat bảo vệ da

đảy vì nó làm giảm tôn thương oxi hoá và ức chế sự xâm nhập của bạch cầu trung

tính trong bệnh loét da day do indomethacin ở chuột [ 10].

1.3 TONG QUAN VE DIA Y VA NAM PHAN LẬP TỪ DIA Y

1.3.1 Tổng quan về dia y

1.3.1.1 Đặc điểm sinh học

Địa y là nhóm thực vật bậc thấp hình thành do sự cộng sinh giữa hai thành phan

là nam (mycobiont) và một hay nhiều loài sinh vật có khả năng quang hợp (photobiont hoặc phycobiont) thường là tảo lục (green alga) hoặc vi khuẩn lam (cyanobacterium).

Thông qua quá trình quang hợp, thành phần quang hợp là tảo của địa y sản xuất ra

các hợp chất hữu cơ cho chính nó và cho nắm, ngược lại nắm có nhiệm vụ bảo vệ tảo

khỏi các tác nhân vat lý có hại và cung cấp mudi khoáng, nước từ môi trường cho tảo.

Nhờ sự cộng sinh này, địa y có thể sống được ở nhiều điều kiện môi trường khắcnghiệt như núi cao, vùng băng giá hay nhiệt đới và sống trên nhiều thé nền khác nhaunhư dat, đá, lá cây, vỏ cây, kim loại, bẻ tông, vita, gạch cao su hoặc nhựa và có théthích nghi với han hán, ngập lụt, nhiễm man, nồng độ 6 nhiễm không khí cao va môi

trường nghẻo dinh đưỡng [5], [13].

Dia y được phân thanh ba dạng hình thái phat triển: dang khảm (crustose) đính

chặt vào giá thé, dang phiến (foliose) với nhiều thay như lá cây và dạng sợi (fruticose) nhiều sợi như bụi cây [5].

Địa y dang khảm còn gọi là địa y lớp vo, bám rất chặt vào chất nền ma chúng mọc

trên đó Chúng thường phát triển theo hình tròn vả không quá dày, Hau hết các địa y lớp

vỏ được phân tang theo kiêu tử trên xuống dưới Bởi vì địa y lớp vỏ không có bề mặtbên dưới nên gan như không thẻ tách một cái còn nguyên ven ra khỏi chất nén [14]

{a]: địa y khám (crustose), [b]: địa y phién (foliose), [c]: địa y sợi (fruticose) [15], [16]

Địa y dạng phiến co hình thái giỗng như chiếc lá Sự tăng trưởng xảy ra ở ria

ngoài và thường theo hình tròn Các khu vực tăng trưởng nhanh hơn tạo ra các thùy

có thê lớn hoặc nhỏ tùy thuộc vào loài Một số loài địa y dang phiến có thẻ phát triển cùng nhau, hợp lại thành những mảng lớn không rõ ràng Một số địa y dạng lá năm rat phẳng trên bé mặt trong khi những địa y khác có thé có các cạnh cuộn tròn phía trên bề mat [14].

Địa y dạng sợi mọc thăng đứng giống như những cái cây nhỏ, bụi rậm, hoặc

chúng có thé rủ xuống như một cây nho thu nhỏ Địa y fruticose dai va manh với tiết

điện tròn hoặc det [14].

Địa y sinh trưởng chậm và sống lâu năm Phần lớn các loài địa y vùng ôn đới,

cận nhiệt và nhiệt đới tăng trưởng vai mm tới vai cm trong một năm và phát triển

mạnh nhất ở vùng khí hậu ấm ven biển và rừng mưa Bắc Mỹ Ở vùng rất lạnh hoặc

rất nóng, địa y phải mat hang thé ky dé đạt được kích thước lớn Dia y rat nhạy cảm

với sự ô nhiễm không khí như chất oxi hoá, SO›, HF, đã xảy ra hiện tượng địa y

biến mat ở các đô thị lớn; vì vậy mà nó phan ánh một phan mức độ ô nhiễm không

khí Nguyên nhân là do nguồn dinh dưỡng của địa y chủ yếu từ môi trường xung quanh, chăng hạn như nguồn nước của địa y là từ sương có thé mang theo nhiều chat

ô nhiễm Bênh cạnh đó do một số loài địa y không có lớp biểu bì nên các chất ô nhiễm có thé dé đảng xâm nhập vào bên trong [17].

Mỗi loài địa y có màu sắc đặc trưng nhưng cũng khó phân biệt giữa một số loài

địa y với nhau: cam, vàng chanh tới lục nhạt, xanh vàng nhạt, xám trắng, xám xanh,

xám đen, nâu, đen Màu sắc cũng là một yếu tố để nhận dang loài địa y [18].

Chi Graphis là một chi thuộc họ Graphidaceae được phân bồ tập trung tại các

vùng nhiệt đới Hiện nay, họ Graphidaceae được xem là họ địa y lớn thứ hai của

ngành Ascomycota với hon 2.500 loài đã được báo cáo va dy đoán có gan 5.000 loài trên thé giới [19] [20].

Chi Graphis là một trong những chi địa y lớn nhất với hơn 370 loài đã được báocáo trên thế giới trong đó mỗi năm có khoảng hơn 10 loài được phát hiện và báo cáo

mỗi năm Một số loài có thể kẻ đến như Graphis japonica, Graphis scripta, Graphis

proserpens, Graphis epiphloea, Graphis renschiana, [2L], [22].

1.3.1.2 Công dung của dia y

Trong quá trình phát triển của sự sông, con người đã nghiên cứu va tìm ra được

nhiều công dụng khác nhau của địa y Từ thời xa xưa, địa y đã được sử dụng như một

nguôn thực phẩm cung cấp chất dinh dưỡng cho nhiều loài động vật và con ngườitrong nạn đói Khoảng một thời gian sau đó, người Ai Cập đã biết sử dụng địa y để

làm thuốc nhuộm, nước hoa và các bài thuốc trong y học dân gian Ung dụng địa y

trong công nghiệp đệt nhuộm đã đạt kinh tế đáng kể trong thé ky 18 ở một số nơi trên

thé giới như ở Quan dao Canary Ngay sau đó, người ta đã phát hiện ra một chất mau

xanh lam được gọi là litmus từ địa y lên men, được sử dụng lam thuốc nhuộm cho ngành đệt may [23] Về công nghiệp sản xuất nước hoa, đây là một ứng dụng quan

trọng của địa y: Evernia prunastri va Pseudevernia furfuracea được sử dụng ở Pháp

với lượng 8.000 - 10.000 tan mỗi năm [17].

Tuy nhiên, quan trọng nhất và được nghiên cứu nhiều nhất là ứng dụng của địa

y trong y học dé chữa bệnh cho người Một số ứng dụng có từ lâu đời như các loài

Usnea đã được sử dụng ở Châu A, Châu Phi và Châu Âu dé giảm dau và kiểm soát

sốt Chang hạn như Ramalina thrausta là một loài địa y được sử dụng phô biến ở

Phan Lan vì nó có thé điều trị vét thương, nam da chân hoặc các bệnh ngoài da khác

và còn dùng dé giảm dau hong, dau rang [23]

Đầu tiên là đặc tính kháng khuẩn của chiết xuất địa y được biết đến trong nhiều

thập kỷ Một số hợp chất kháng khuân được sử dụng phô biến là depside, depsidone

va usnic acid chống lại vi khuân Gram đương [Š]

Sau đó, các chất chuyên hoá thứ cap cúa địa y cũng được phát hiện có hoạt tínhkháng virus Năm 1999, Perry công bố hoạt tinh kháng virus của acid usnic chong lại

virus Herpes simplex type 1 va Polio type 1 Đặc biệt, hợp chat parietin chiết xuất từ

loài địa y Teloschistes chrysophthalmus được chứng minh là có tác dung diệt virus

Junin và Tacaribe Bệnh cạnh đó, lichenan, một hợp chất xuất hiện rộng rãi trong địa y

cũng được chứng minh có kha năng ức chế virus khảm thuốc lá [23]

Hơn thé nữa, một số hợp chat của địa y cũng được công bố có hoạt tính kháng nam.

Năm 2005, Manojlovic đã báo cáo hoạt tính kháng nam của hoạt chất parietin anthraquinone

được chiết xuất từ từ địa y Caloplaca cerina Hai năm sau, cao chiết của địa y Andean

Protousnea poeppigi Và Usnea harda, chữa acid divaricatinic, acid isodivaricatinic, acid

usnic và 5 — resorcinol cũng được công bố có hoạt tính kháng nắm [23]

Các cao chiết của địa y có hoạt tính chong khối u thu hút sự quan tâm trong y

học và được xem là nguôn cung cấp thuốc tiềm năng cho các bệnh ung thư ác tính

gây chết người Acid usnic là chất chuyên hoá của địa y được nghiên cứu nhiều nhất

kẻ từ lần đầu tiên vào năm 1844, có tác dụng chồng tăng sinh ảnh hưởng đến tế bao bệnh bạch cầu ở người (K562) và tế bào ung thư biêu mô nội mạc tử cung (HEC-50) Acid protolichesterinic la hợp chất được chiết xuất từ địa y Cetraria islandica cho

thay sự ức chế khả năng phát triển của các dòng tế bào ung thư và tế bao lympho [23]

Ngoài ra, một số hợp chat từ địa y còn có tác dụng trợ tim (acid pulvinic

dilactone), giảm dau và hạ sốt (acid usnic và acid diffractaic), gây di ứng (atranorin,

barbatic, diffractaic ), ức chế enzyme (lecanoric acid, usnic acid ) va ức chế sự

phát triển của thực vật (acid psoromic, acid virensic, acid usnic ) [5].

1.3.2 Tổng quan về nắm phân lập từ địa yNắm phân lập từ địa y có thê được nuôi ở trạng thái bất cộng sinh (sống tự do)

nhưng hau hết trong tự nhiên chỉ có kiểu cộng sinh được tim thấy [17] Trong những

năm gần đây, các nghiên cứu về nắm phân lập từ địa y trong môi trường đã tăng trong

các phòng thí nghiệm của các trường đại học ở Hoa Kỳ, Thụy Điền, Đức và Nhật

Bản, mục đích chủ yếu là nghiên cứu phân loại và sinh lý học [9].

Việc tách mycobiont khỏi photobiont sẽ nâng cao triên vọng khám phá các chấtchuyên hoá mới có thé được tạo ra Nhiều nghiên cứu cho ring những loài photobiont

có thé ảnh hưởng đến quá trình trao đôi chat thứ cấp của địa y Ví dụ, một số báo cáo

đã chỉ ra các loài tảo cộng sinh địa y có thể tạo ra chất ức chế carboxilase ngăn chặn

quá trình sinh tông hợp acid phenolic [9].

Các chất do địa y tạo ra được chia thành 2 nhóm: chất chuyên hoá sơ cấp và chất chuyên hoá thứ cấp Amino acid, protein, vitamin, carotene và polysaccharide là một

số chất chuyên hoá chính Phan lớn các chất chuyên hoá nay cũng được tim thay ở nam

không bị địa y hoá hoặc các sinh vật khác Trong số các chất chuyển hoá chính, một số

được tạo ra bởi mycobiont và một số được tạo ra bởi photobiont, nhưng không phải lúc

nào cũng dé đàng xác định mycobiont hay photobiont tạo ra một hợp chat cụ thể [24].

Hau như các chất chuyên hoá thứ cấp alkaloid, quione, benzopyranoid, steroid,

peptide, pyrone, xanhthone và hợp chất allycylic đều do nam cộng sinh địa y tạo ra

[25] Ban đầu, các chất chuyên hoá thứ cap được tao ra trong sợi nam và sau cùng lắng đọng trên bẻ mặt sợi nắm dưới dang tinh thê hoặc đạng vô định hình Không giống như các chất chuyển hoá sơ cắp, các chất chuyền hoá thứ cắp thường không hỏa tan trong

nước và phải được chiết xuất bằng dung môi hữu cơ Hơn 1.000 chất chuyển hoá thứcap đã được biết đến và hau hết chúng chỉ được tìm thấy trong địa y, chi có 50 đến 60

chất được tim thay trong nắm không bị địa y hoá hoặc thực vật bậc cao Các chất chuyền hoá thứ cấp có thê được chiết xuất từ địa y tươi cũng như từ các mẫu khô đã được lưu

trữ hàng chục năm [24].

Một số hợp chất, chăng hạn như anthraquinone, dibenzofuran và acid vulpinic

xuất hiện rất nhiều trong nắm cộng sinh của địa y được nuôi cấy trong môi trường

không cộng sinh Ở môi trường cộng sinh địa y, các hợp chất này bị ức chế do nó có

độc tinh đối với các photobiont [26] Điều đỏ, chứng minh rằng photobiont có thé anh

hưởng đến sự trao đôi chất thứ cấp của địa y Chăng hạn như, tảo tạo ra chất ức chế carboxilase ngăn chặn quá trình sinh tông hợp acid phenolic trong địa y [9].

Nhiều nghiên cứu đã báo cáo rang các chất chuyên hoá thức cấp nảy cho thấy các hoạt tính sinh học quan trọng như giảm đau, chéng viêm, hạ sốt, ức chế tăng

trưởng thực vật, kháng sinh, kháng khuẩn, kháng virus [27] Chăng hạn như ở một số

hợp chất chuyển hoá thứ cấp như acid usnic là một hợp chất chiết xuất từ địa y tự

nhiên được sử dụng trong bao chế được phâm No hoạt động chống lai vi sinh vật va

virus và còn có tác dụng như thuốc giảm dau, ha sốt Ngoài ra, nó được sử dụng trong

điều trị các bệnh da tăng sinh, bệnh vay nên cũng như nhiễm ký sinh trùng Bên cạnh

đó, còn có một hợp chất được chiết xuất từ một số loài nắm cộng sinh địa y cũng

được sử dụng phé biến trong y được là acid pulvinic Hợp chất này có sắc tố màuvàng tươi hoặc màu đa cam với đặc tính chống oxi hoá mạnh Cũng giống như acid

pulvinic, boldine cũng là một hợp chất chuyên hoá chiết xuất từ địa y tự nhiên có hoạt

tính chống oxi hoá, tác dụng chống viêm, cũng như khả năng bảo vệ chống lại các

bức xạ cường độ cao [28].

1.4 TINH HÌNH NGHIÊN CỨU VE HOẠT TÍNH KHANG OXI HOÁ CUA

ĐỊA Y

Một số báo cáo liên quan đến khả năng kháng oxi hoá của các chất chuyên hoá

thứ cấp chiết xuất từ địa y

Cao chiết của địa y C islandica đã được nghiên cứu nhằm mục đích đánh giá

hoạt tính chống oxi hoá của năm 2002 Trong nghiên cứu nảy, các hoạt tính kháng oxi hoá, năng lực khử, hoạt tính loại gốc superoxide và hoạt tính loại gốc tự do đã

được nghiên cứu Kết quả nghiên cứu cho thấy, hoạt tính kháng oxi hoá tăng lên khi

lượng chất chiết xuất tăng (từ 50 đến 500 yg) được thêm vào acid linoleic Đặc biệt,

khi khảo sát ở các nồng độ khác nhau, gồm 50, 100, 250 và 500 pg/ml, cao chiết của

địa y € islandica có hoạt tính kháng oxi hoá cao nhất ở nồng độ 500 ug/ml Từ các

kết quả thu được trong nghiên cứu nay có thé thấy C islandica là một nguồn chất

chóng oxi hoá tự nhiên tiềm năng cần được khai thác, bảo quản và sử dụng [29]

Ngoài ra, hoạt tính chống oxi hoá của cao methanol từ ba loai địa y, gồm Usnea

longissima Ach., Usnea florida (L.) Weber ex Wigg và Lobaria pulmonaria (L.)

Hott được thử nghiệm vào năm 2004 Trong số các cao chiết được thử nghiệm, cao methanol của Lobaria pulmonaria và Usnea longissuna thé hién hoat động chong Oxi

hoá mạnh [30].

Hoạt tính chống oxi hoá tông hàm lượng phenolic và năng lực khử của cao

methanol từ bốn loài địa y, gồm Bryoria fuscescens, Dermatocarpon intestiniformis,

Peltigera rufescens và Pseudevernia furfuracea được thừ nghiệm vào năm 2005 Cao

methanol của P rufescens thé hiện hoạt tính chong oxi hoá cao nhất Tuy nhiên, không

có mối tương quan giữa hoạt tính chống oxi hoá và tong ham lượng phenol của cao chiết Mặc dù cao methanol của P furfuracea có tông hàm lượng phenolic cao nhất nhưng nó thé hiện hoạt tính chống oxi hoá thấp Ngược lại, năng lực khử lại có mối

tương quan chặt chẽ với hoạt tính chong oxi hoá của các chất chiết xuất Nang lực khử

cao nhất được xác định đối với chiết xuất methanol của P rufescens [31].

Bên cạnh đó, vào năm 2005, các chiết xuất dung môi khác nhau cua địa y Usnea

ghattensis cho thay hoạt động chống oxi hoá tốt Cao methanol của địa y U ghattensis

cho thấy hoạt tính loại gốc tự do tới 73% và đã ức chế quá trình peroxide hoá lipid

đến 87% [32].

Năm 2010, một nghiên cứu được tiễn hành nhằm khám phá hoạt tính kháng oxi hoa, tông hàm lượng phenol, nang lực khử và hoạt tinh kháng khuân của các cao chiết methanol của các loài địa y gồm Cetraria pinastri, Cladonia digitata, Cladonia

fimbriata, Fulgensia fulgens, Ochrolechia parella và Parmelia crinia Trong đó, cao

methanol của địa y Cerraria pinastri cho thay có hoạt tính kháng oxi hoá mạnh, trong

khi cao methanol của các loài Fulgenesi fulgens, Cladonia fimbriata và Parmelia

crinita có hoạt tính trung bình và cao methanol của loài Ochrolechia parella va

Cladonia digitata có hoạt tính yéu [33]

Kể tiếp vào năm 2011, hoạt tính chống oxi hoá của các cao chiết acetone,

methanol của các loài địa y gồm Cladonia furcata, Hypogymnia physodes, Lasallia

pustulata, Parmelia caperata và Parmelia sulcata đã được xác định bằng cách sử

dụng các phương pháp khác nhau (loại bỏ gốc DPPH, loại bỏ gốc superoxide, nang

lực khử, xác định tong các hợp chat phenolic và xác định tông hàm lượng flavonoid).

Trong số các loài địa y được thử nghiệm, L pustulata có các hoạt tính kháng oxi hoá mạnh nhất Cao acetone và cao methanol của địa y L pustulata lần lượt có tỉ lệ loại

bỏ gốc tự đo DPPH là 90,93% và 69,87% Trong nghiên cứu này, các chất chống oxi

hoá tông hợp như acid ascorbic, butylated hydroxianisole (BHA) và a — tocopherol

được sử dụng làm chứng dương Qua nghiên cứu này cho thấy loài địa y 1 pustulata

có hoạt tính kháng oxi hoá mạnh và có thé xem đây là một nguồn cung cấp chất chống

oxi hoá tự nhiên tốt cần được khai thác và bảo vệ [2].

Một nghiên cứu cũng được thực hiện vào năm 2011, mục tiêu nhằm kiểm tra hoạt tính kháng oxi hoá và hoạt tính kháng khuân của các cao chiết từ các loài địa y

Cladonia furcata, Hypogymnia Physodes, và Uhricaria polyphylla trong acetone và

methanol Ở đây, hoạt tính kháng oxi hoá được đánh giá bằng năm phương pháp khác

nhau: loại bỏ gốc tự do, loại bỏ gốc superoxide, năng lực khử, xác định tong các hợp

chất phenol vả xác định tông hảm lượng flavonoid Trong đó, cao methanol của loài

địa y U polyphyla thê hiện hoạt tính kháng oxi hoá mạnh hơn các loài địa y khác, ti

lệ loại bỏ gốc tự đo tới 90,08% (ti lệ này lớn hơn so với tỉ lệ loại bỏ gốc tự đo của các

chat chong oxi hoá tông hợp được sử dụng lam chứng dương gồm ascorbic acid, BHA

và a — tocopherol) Kết quả cho thay rằng địa y U polyphyla có thể được sử dụng

như một nguồn chất chống oxi hoá tự nhiên tốt và cho các mục đích được phâm trong điều trị các bệnh khác nhau [34].

Hoạt tính kháng oxi hoá của 4 loài địa y gồm Ramalina peruviana, Bulbothrix

isidiza, Parmotrema tinctorum và Cladia aggregata thu thập ở Malaysia được khảo

sắt vào năm 2011 Kết qua nghiên cứu cho thay, cao acetone của Ramalina peruviana

cho thay hoạt tính loại bỏ gốc tự do cao nhất (86%) ở nông độ 750 ug/mL và caomethanol của Cladia aggregata (42,45%) thé hiện hoạt tính thấp nhất Nong độ hiệu

quả để loại bỏ 50% gốc tự do (ECs») khác nhau ở các loài khác nhau Cao acetone

của Ramalina peruviana có giá trị ECso hiệu quả nhất cụ thé là 60.66 pg/ml Các loàiđịa y nghiên cứu thê hiện hiệu quả loại bỏ 50% gốc tự đo theo thứ tự sau: cao acetone

của R peruviana > cao methanol của Ñ peruviana > cao acetone của P tinctorum > cao methanol của B isidiza > cao methanol cua P finctorum > cao acetone cua C aggregata > cao acetone cua Ö isidiza > cao methanol của C aggregata [35].

Năm 2012, một nghiên cứu được tiễn hành nhằm khảo sát các hợp chất hoá học

có trong cao acetone của các loài địa y gồm Parmelia caperata, P saxatilis và P sulcata và các hoạt tính kháng oxi hoá, kháng khuân và kháng ung thư của một số chất chuyên hoá chính của chúng Kết quả cho thay, các hợp chất phenol chiếm uu thé trong các chất chiết xuất này là acid protocetraric, acid usnic (P caperata) và acid desidone salazinic (ở hai loài khác) Bên cạnh các hợp chất đó, atranorin và

chloroatranorin cũng được phát hiện trong các chất chiết xuất được nghiên cứu Ngoài

ra, kết quả còn cho thay acid salazinic có hoạt tính chống oxi hoá mạnh hơn acid

protocetraric Hơn nữa, hai chất chuyển hoá thứ cấp acid salazinic và acid protocetraric cũng được phát hiện có hoạt tính kháng khuan và kháng ung thư [36].

Năm 2013, cao chiết từ dung môi của Ramolina roesleri Nyl đã được thử

nghiệm hoạt tính chống oxi hoá Kết qua cho thấy hoạt tính bay gốc tự do

I,I-diphenyl-2-picryl-hydrazil (DPPH) của các cao chiết dao động từ 29,426% đến

87.9% [37].

Nghiên cứu được thực hiện nhằm phát hiện các chất chuyên hoá có trong các loài địa y gồm Usnea rubrotincta, Ramalina dumeticola và Cladonia verticillata và

đánh giá hoạt tinh kháng oxi hoá và kháng khuẩn của cao acetone được chiết xuất từ

các loài địa y đó Kết quả cho thấy, có sáu chất chuyển hoá thứ cấp được phân lập

bằng phương pháp sắc ký long (PHPLC) từ hai loài địa y có hoạt tinh sinh học cao là

U rubrotincta và R dumeticola Trong số tat ca sáu hợp chất, hợp chất (1) thể hiện

hoạt tính kháng khuẩn mạnh nhất đối với vi khuẩn Gram đương được thử nghiệm ở

nông độ 7,81 pg/mL Bên cạnh đó, hợp chất (6) có tỉ lệ phan tram loại bỏ gốc tự do

DPPH cao nhất (69,57%), trong khi 5 hợp chất còn lại chỉ thể hiện hoạt tính kháng

oxi hoá dưới 50% [38].

Một nghiên cứu được tiền hành vào năm 2016 nhằm so sánh hoạt tính kháng oxi hoá của hai loài địa y Roccella phycopsis Ach (Roccellaceae) và Flaveparmelia

caperata L Hale (Parmeliaceae) Kết qua cho thay, cao ethanol của R phycopsis có

hoạt tinh kháng oxi hoá thấp nhất với giá trị SCs» là 1655,63 + 49,38 pg/mL va cao ethanol của Flavoparmelia caperata có hoạt tính kháng oxi hoá cáo nhất với giá trị

SCso là 526,87 + 10,55 ug/mL [39].

Năm 2018, một nghiên cứu được thực hiện dé đánh giá các hoạt tính kháng oxi hoá và kháng khuẩn của các cao chiết từ các loài địa y gồm Flavoparmelia caperata

(L.) Hale, F baltimorensis (Gyelnik & Foriss) Hale, F soredica (Nyl.) Hale và F.

flaventior (Stirton) Hale Cao acetone của F caperata có hoạt tính kháng oxi hoá cao

nhất với giá trị IC‹¿ là 0.791 mg/mL [40].

Năm 2019, một nghiên cứu nhằm khảo sát các hoạt tính kháng oxi hoá và hoạt

tính gây độc tế bảo của cao methanol từ mười bốn loài địa y gồm Parmotrema

tinctorum (Delise ex Ny|.) Hale, Sticta nylanderiana Zahlbr., Everniastrum cirrhatum

(Fr.) Sipman, Lobaria pulmonaria (L.) Hottm, Usnea rubicunda Stirt., U glabrescens

(Ny ex Vain.) Vain, U baileyi (Stirton) Zahlbr., U ceratina Ach., U fulvereagens

(Rasanen) Rasanen, U nipparensis Asahina, U flammea Stirt., U rubrotincta Stirt.,

U pectinata Stirt và U schadenbergiana Göpp & Stein ở Vườn Quốc gia Bidoup Núi

Bà, Việt Nam được thực hiện Hoạt tính kháng oxi hoá của các cao methanol được

chiết xuất từ các mười bốn loài địa y đó được thử nghiệm bằng phương pháp loại bỏ

gốc tự do DPPH Kết quả cho thay, cao methanol của loài địa y Parmotrema tinctorum

(Delise ex Nyl.) Hale có hoạt tính loại bỏ gốc tự do cao nhất với giá tri ICs¿ là 59,9 +

4,65 ug/ml Cao methanol của Parmotrema tinctorum (Delise ex Nyl.) Hale cũng cho

thay tông hàm lượng favonoid va phenol cao nhất [41].

Hoạt tính kháng oxi hoá của các mẫu địa y của Parmotrema tinctorum,

Pseudocyphellaria aurata, Ramalina taitensis, Usnea bismolliuscula được khảo sát

vào năm 2020 Kết quả cho thấy, hàm lượng hợp chat phytochemical có trong cao

acetone của các loài địa y cao Bên cạnh đó, cao acetone của Pseudocyphellaria aurata còn cho thay có hoạt tinh kháng oxi hoá mạnh với giá tri ICs» là 93,339 ug/mL [42].

Xác định thành phan phenol và khả năng kháng oxi hoá của bốn loài địa y gồm

Cladonia rangiformis, Flavoparmela caperata, Squamarina cartlaginea vàXanthoria parietina đã được thực hiện vào năm 2021 Kết quả cho thấy, cao methanol

của S cartilaginea có có hoạt tính kháng oxi hoá mạnh nhất với giá trị ICso là 0,9

tugtmL và cao acetone của loài nay cũng có khả năng khử sat cao nhất [43].

Năm 2021, một nghiên cứu được thực hiện nhằm phân lập hợp chất có trong địa

y Teloschistes flavicans; khảo sát hoạt tính kháng oxi hoá của địa y T flavicans va

hợp chất phân lập được từ loài địa y đó Kết quả phân lập thu được một hợp chất tỉnh thê hình kim có tên là 3-[1-(2"3"-dihydroxi-phenyl)-propyl]-7-hydroxi- chroman-4-

one và có công thức phân tử CisHisOs Thử nghiệm độc tính cho các hợp chất phần

lập được có giá trị LCs là 162,18 g/ml, cho thay hợp chat phân lập được là độc hại

Ngoài ra dịch chiết từ địa y và các hợp chất phân lập được có hoạt tính chống oxi hoá tương đối cao với giá trị ICso lần lượt là 54,05 và 127,38 pg/ml [44].

Một nghiên cứu được thực hiện vào năm 2022, nhằm khảo sát các yếu tố ảnh

hưởng gôm nhiệt độ, tỉ lệ lỏng/rắn và loại/nông độ dung môi khác nhau đến hoạt tính

kháng oxi hoá, ức chế các enzyme a - glucosidase vả enzyme a - amylase của cao

chiết từ loài địa y Cladonia foliacea Kết qua nghiên cứu cho thay cao methanol ở

48,8°C, ti lệ lỏng/rắn là 12,3 mL/g và nồng độ methanol là 86,4% được xác định là điều kiện tối ưu Những kết qua này cho thay rằng điều kiện chiết xuất có thê là một yêu tô hạn chế về đặc tính hoạt tinh sinh học và các thông số chiết xuất được ti ưu

hoá có thé cải thiện hoạt tinh chống oxi hoá va ức chế tiêm nang của các enzyme quan

trọng liên quan đến bệnh tiêu đường loại H của địa y € foliacea (45].

Chương 2 VAT LIEU VA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1 THIẾT BỊ VÀ HOÁ CHÁT

2.1.1 Thiết bị

Đề tải sử dụng các thiết bị như trình bay trong Bang 2.1

Cân phan tích điện từ Sartorius (Đức)

Máy đo pH Hanna (Mỹ)

Pipetman 5000 ql VITLAB (Đức)

Pipetman 1000 ul Bio — Rad (Mỹ)

Pipetman 200 yl Scilogex (Mỹ)

Máy đo quang phô Thermo Genesys 20 (Mỹ)

Máy cô quay chân không Heidolph (Đức)

2.1.2 Hóa chất

2.1.2.1 Hoá chất sử dụng để chế tạo môi trường nuôi cay nam

Môi trường Malt - Yeast Agar (MYA)

- Cao malt: 3g

- Cao nắm men: 3g

- Peptone: 538

- D - Glucose: 10g