Phân lập một số hợp chất từ phân Đoạn ec4 cao n hexane ethyl acetate của cây Đơn lá Đỏ excoecaria cochinchinensis

LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan để tải * "hân lập một số hợp chất từ phân đoạn EC4 cao øchexane ethyl acetate eli edy Don lã đ Excoecaria cochinchinensis” là công trình do tối tự thực hiện dướ

PHAN LAP MOT SO HOP CHAT TU PHAN DOAN

EC4 CAO N-HEXANE:ETHYL ACETATE CUA CAY

DON LA DO EXCOECARIA COCHINCHINENSIS

‘Thanh phố Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 04 năm 2024

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH

KHOA HOA HOC

Ea

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

PHAN LAP MOT SO HOP CHAT TU PHAN DOAN

EC4 CAO N-HEXANE:ETHYL ACETATE CUA CAY DON LA DO EXCOECARIA COCHINCHINENSIS

Họ và lên: Vũ Thi Quỳnh My

Mã số sinh viên: 46 01.201.065

Giảng viên hướng dẫn: TS Lê Thị Thu Hương

‘Thanh phố Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 04 năm 2024

(Kí và ghí rõ họ tên) (Kí và ghí rõ họ tên)

'

LỜI CẢM ƠN

Em xin chan thành gửi ời cảm ơn sâu sắc quý thủy cô, đặc biệtlà cổ Lê Thị Thu Hương sung cắp những kiễn thức, kỉnh nghiệm quý báu Nhờ đó, mà kiến thức và kinh nghiệm hết mình khi em gặp khó khăn, giúp em hoàn thành tốt khóa luận của mình Cam ơn quý thầy cô bộ môn Hóa học trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh, hành trang vũng chải cho bước đầu trong sự nghiệp tương la

Cam ơn khoa Hóa học trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh đã luôn tạo

điều kiện cho em để có thể hoàn thành khóa luận

'Cảm ơn anh chị và các bạn sinh viê 1g phòng thí nghiệm đã hỗ trợ, úp đỡ trong suốt quá trình thực hiện đề tài

‘Tran Trọng

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan để tải * "hân lập một số hợp chất từ phân đoạn EC4 cao øchexane ethyl acetate eli edy Don lã đ Excoecaria cochinchinensis” là công trình do tối tự thực hiện

dưới sự hướng dẫn của TS Lê Thị Thu Hương,

Kết quả nghiên cứu là trung thực Các số liệu, bảng biểu được trích tử các nghiên cứu

cửa các tác giả tước tù iệu tham khảo cổ nguồn gốc rõ rằng

“Thành phổ Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 04 năm 2023

Sinh viên thực

'Vũ Thị Quỳnh My

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIỆT TÁT VÀ KÍ HIỆU

DANH MỤC BẰNG, BIẾU VÀ SƠ ĐÒ

3.2.2 Biện luận cấu trúc hóa học 15

“Chương 4: KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHY Ly

ror! Bookmark not defined

Phố tương tác di hạt nhân liên kí

Phố tương tác trực tip HC Hằng số ghép spin Mũi đơn Mũi đi Mũi đa

Độ chuyên dịch hóa học Phan triệu

Phẳn triệu gam

Nang độ ức chế ối thiểu

w

DANH MUC BANG, BIEU VA SO DO

Bang 3.1 So sinh dit ligu phd "H-NMR vi "C-NMR cia hop chất với — lá

baccatin [20]

Bang 3.2 So sénh di ligu phd "H-NMR va “C-NMR cia hop chit 2 vei kaempferol [21] 17

So db 1 Phin lập các hợp chất từ phân đoạn ECS 12

w

DANH MỤC HÌNH

“Tên hình

Bình 11 Cây Đơn lá đỏ (Exeoecaria cochinchinensis)

Hình 31 “CÍu trúc hóa học của hợp chất 1 Hình 32 “CÍu trúc hóa học của hợp chất 2

Trang

DANH MYC PHY LUC

Phu Tue tg Pho HMBC cia hop chit 1 Phụ lục Th Pho HSQC của hợp chất Phụ lục 2a Phố 'H-NMR của hợp chất 2

Phy Iye 2b Phố ''C-NMR của hợp chất 2

1

MỞ ĐẦU

Trên th giới, họ Thầu Dẫu (Euphorbiaceae) fa mot trong những họ thực vật lớn với nhiễu lợi ích rong ý học như làm thuốc hoặc trong đời sống như lấy gỗ, thực phẩm, làm cảnh, cho đầu bo [I5] Do đồ, cc loi cây thuộc họ Thì lầu được các nhà khoa

học chọn làm đối tượng nghiên cứu về thành phẫn hóa học cũng như hoạt tính sinh học

để phục vụ cho y rà đời ng

om li dd có tên khoa học là Evcoccaria cochinchinensis cũng là một loài thuộc họ

“hầu Dầu, phân bổ rộng

không có khó khăn về mặt vị tí địa í trong việc thu thập Đơn lá đỏ để nghiên cứu Hơn ở các nước Đông Dương trong đó có Việt Nam Vi vậy,

nữa, chứng lại có ắt nhiều công dụng thục tiễn như chống viêm, chữa mụn nhọt, ngứa, shống khối u [1], [5]I101 Đặc biệt, Đơn lá đỏ côn có khả năng ức chế mạnh sự tăng dối mặt, Nhận thấy, cây Đơn lá đỏ có nhiễu công dụng chữa t hoặc hỗ trợ làm giảm

các triệu chứng bắt thường về sức khỏe thường gặp ngày nay Cây có thể xanh tốt quanh năm, thuận lợi cho việc thu bái lá Qua quá trình tìm hiểu vẻ thành phần hóa học và

những hoạt tính sinh học được c tác giả thử nghiệm từ các chất đã cô lập được thì

nhận thấy đây là một ly có tid nắng phân lập được những chắt mới với những hoạt tính inh học có giá tỉ

`Vì những lý o tên, tôi chọn đề tải "Phân lập một số hợp chất từ phân đoạn ECA cao n- hexane.ethyl acetae của cây Đơn lá đỏ Excoecaria cochichinensis” đề góp một phần

trong việc làm sáng tỏ thành phẫn hóa học của cây Đơn lá đỏ

màu tía [17] Thân cây nhỏ, mảnh Lá của Đơn lá đỏ mọc gần như đối xứng nhau, có

"hình bầu dục, đài Š em đến 11,5 em, rộng 2,5 em đến 4 cm, mặt trên màu xanh đậm, mặt

dưới màu đỏ túm và mép có răng cưa Cuỗng lá đi 0.5 em đến l em, lá kèm hình mác

THỊ 41.0

ở phía đông Đông Dương [4] Mủa hoa quả từ tháng 4 đến thing 6

'eoài ra còn được xem như một cây thuốc Việt Nam, được phân bố rộng rãi

Cây Đơn lá đó ưa sáng, ưa âm, thường được trồng tại vườn gia đình hoặc vườn

thuốc để thuận lợi cho việc làm thuốc và làm cảnh [16] Cây Đơn lá đỏ được mô tì ở

3

nghiên cứu cho thấy một số chất trong cây Đơn lá đỏ có tác dụng chống viêm, kháng khuẩn, chống ovi hóa, chẳng khổi u [1 [5H10]

Một nghiên cứu củn Lành Thị Ngọc và cộng sự đánh giá tác dụng chống oxi hóa

va kháng khuẩn cho thấy cao methanol tổng ức chế sự phát miển của # chủng vĩ khuẩn Saccharomyces cerevisiae; cao n-hexane ie ché s phat tién của 3 ching B subtilis,

S aureus va S cerevisiae; cao ethyl acetate thi

hoạt tính kháng các chúng B subiilis

S aureus, F oxysporum và, cereviiae; và cao methanol cây Đơnlá đỏ kháng sắc chủng E: coli và E ubnili đều với giá trị MIC 200 jghmL (18)

Nghiên cứu điều chế chế phẩm xà phòng lỏng từ Đơn lá đỏ nhờ hoạt tính kháng

khuẩn do Eatkhurachman và cộng sự thực hiện cho kết quả Đơn lá đỏ có

vi khuẩn trên bàn tay [19]

Ngoài ra, nghiên cứu của Nguyễn Phú Hùng và Lê Thị Thanh Hương đã phát

\y MKN45 vì

hiện ra dịch chiết ethanol của Đơn lá đỏ ức chế được tế bảo ung thư dạ

trong Đơn lá đỏ có chứa cureuminoid và 3'-demethoxycyclocurcumin là những chất có

hoại tính gây độc đối với tế bảo ung thư [S]

1.8 Một số nghiên cứu về thành phần hóa học cũa cây Đơn lá đố

13.1 Ở nước ngoài

Năm 2005, Jing-Hua Yang và cộng sự đã nghiên cứu và phát

ây Đơn lá đó là excolabdone A (1), B (2), C (3) B3]: n ra sự có mặt của ba hợp chất mới từ

Năm 2008, Bao-Wei Yin và cộng sự đã tổng hợp và lập ra một danh sách các hợp

chất đã được nghiên cứu thuộc chỉ Excoecaria Trong đỏ, có một số hợp chất thuộc cây

‘Don lá đỏ bao gồm 7 flavonol glycoside (4-10) [6]

"Năm 2009, nhôm nghiên cứu của Wang Yun Song đã tách và tỉnh chế 12.0 kg

Sau đó, nhóm nghiên cổu bắt đầu phân

Năm 2014, nhôm nghiên cứu của Wang Ye Ling nghiên cứu thành phần của Đơn

lá đồ bằng phương pháp sắc ký cật siliea gel, sắc ký cột Sepbadex LH-20, sắc ký cột

"Năm 1999, Nguyễn Thái An và Phạm Xuân Sinh nghiên cứu thành phần hóa học trong dịch chiết cây Dơn lá đồ phat hiện có chứa các hợp chất coumarin (27) một số đường khử [I4]

Năm 2002, Nguyễn Thái An và cộng sự đã phân lập và nhận dang được các hợp

chất acid gallie (16) và acid ellagie (32) [10] Đến năm 2003, tác giả trên phát hiện ra

thêm bai hợp chất là kaempferol 7-Ø-gluc‹

ì on

HH a)

Năm 2005, Phan Minh Giang và cộng sự nghiên cứu và phân lập các hợp chit tir

lá của Đơn lá đỏ được thu thập vào tháng 9 năm 2003 tại Hà Nội, Việt Nam Các hợp (36), shikimie acid (37) và p-hydroxybenzoic acid (38) trong lá cây [4] cle

một diterpenoid (39) và m6t phenolic (40) Sau khi phân tích chỉ tiết từ các phương pháp,

thức của các hợp chất như sau [1], 2]

thamnocitrin 3-glucoside (43), pinoresinol-4' B-D- glucoside (46), liriodendrin (47), O-f-D-glucopyranoside ——(49),——benzyl-O-a-L

-hamnopyranosyl(1~s6)-ƒ-D- glucopyranoside (50), 8-phenylethyl 6-0-

ay

“ (st)n=2

Chương 2: THỰC NGHIỆM

¡ tượng nghiên cứu

Lá của cây Đơn lá đỏ được hái ở tỉnh Hòa Bình, Việt Nam, được kiểm định bởi thạc sĩ Cao Ngọc Giang Mẫu cây được làm sạch, phơi khô trong bóng râm, bảo quản

nơi khô río, thoáng mát, sẩy khô ở 50-55° Sau đó được xay nhuyễn thành bột, iến

- Silica gel: bot silica gel 60, 0.040 ~ 0.063 mm

~ SẮc kí bản mỏng loại 25 Aluminium sheets 20 x 20 cm, Kiesel gel 60F›s4,

ie dung cụ đùng để giải ly, dụng cụ chứa mẫu

- Phổ NMR được đo trên miy Bruker Avance AV 600 MHH: tại Viện Hóa học Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam vi may do phd NMR v6i tin số 500

MH¿ phòng phân tích cấu trúc trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia

Han

2.3 Phương pháp nghiên cứu

Sử dạng các phương pháp chiết xuất ích ly để điều ch các loi cao

Sir dung cic Ki that ắc ký, tinh để phân lập và nh chế một sổ hợp chắt trong các cao phân đoạn

Sử dụng phương pháp phổ nghiệm (ID-NMR và 2D-NMR) để xác định cầu trú của các hợp chất phân lập được

2.4 Quy trình thực hiện

“Thu hái 20 kg thân và lá của cây Đơn lá đỏ, phơi khô và nghi nhỏ thành bột Ngâm bột cây trong dung môi methanol ở ni ột độ phòng Sau đó, tiến hành lọc và cô cq0ay dịch chiết bằng máy cô quay chân không để thu hồi dung môi và thu được 675.0 ø sau: n-hexane, hexane:ethyl acetate (1:1), ethyl acetate thu duge 70.0 g cao H, 250.0 ø

hệ dung môi H:EA (15-100% BA v/v) thu duge 10 phân đoạn được đánh số từ ECI- ECI0

“Chọn phân đoạn EC4 tiến hành sắc ký cột siliea gel pha thường giải ly bằng hệ dung môi H:BA (5:1, v/v) thú được 6 phân đoạn đánh số từ EC4.I-BC4.6 Thực hiện cô sắc ký siliea gel pha thưởng lần lượt với hệ dung môi H;CH:ClzAe (2:1:0.25) và (CH:Clz:MeOH (10:1), Sau d6 tién hành tỉnh chế nhi

Va hop chat 2 (5.0 mg), lần thu được hợp chit 1 (2.8 mg)

C6 quay, thu hồi dung môi

‘Cao methanol (675.0 ) Chiétlong-long

(109.5 mg)

Sơ đồ 1 Phân lập các hợp cht ừ phân đoạn ECA

~ Trạng thái: dạng bột, không màu

~ Phổ 'H-NMR (500 MH¿, chloroform-d,), phụ lục la, 1b, Ie

~ Phổ '"C-NMR (125 MHz, chloroform-4/) phụ lục 1d, Te, 1f

~ Phổ HMBC, phụ lục lự

- Phổ HSQC, phục lục 1h

3.1.2 Biện luận cấu trúc hóa học

Phổ 'H-NMR cho thấy sự hiện diện của hai tin higu proton olefin tai dy [6.70 (1H, d, J=9.0 Hi) va 6.44 (1H, d, =

(375 (1H, m) và 3/01 (1H, d, J=9.5 Hey), Neodi ra ten phd cdn xudt hign tn higu cia don (gi 5y {1.04 GH, 5), LOL GH, »), 0.97 GH, 5), 0.95 GH, 5), 0.92 (3H, ), 0.92 GH, s), và 082 (3H, )| Từ những dữ liệu trên, cho

5 H)], hai proton ita nhém oxymethine tai

7 nhém methyl

y hop chit 1

có đặc điểm của một triterpenoid khung oleanane

Phd C-NMR kết hợp với phổ HSQC cho tín hiệu cộng hưởng của 29 carbon bao gồm hai carbon olefin 6 3: (135.4 va 1320),

4 & (84.2 va 69.5), hai carbon tứ cắp liên kết với oxygen ở đ: (87.6 và 7.4), bay carbon

nhóm methyl ở ä: (33.1, 28.3, 25.0, 23.9, 19.5, 18.6 va 16.2), tém carbon methylene 6

-arbon methine liên kết với oxygen

& (46.9, 43.2, 41.1, 40.8, 35.3, 29.8, 19.2 và 18.1), ba carbon methine & & (56.1, 51-4

và 49.9), và nim carbon tứ cắp ở đ: (39.9, 39.4, 39.3, 39.1 và 31.0),

Tuong quan HMBC tir proton Ho-I (6 2.09) và H-3 oxymethine C-2 (i: 69.5) va tir hai nhém methyl Hs-23 (6 1.01) va Hy-24 (đi 0.82) tới (Bi 3.01) tới carbon

carbon oxymethine C-3 (0: 84.2) gp xe din vit ha nhóm hydroxy ở cmbon số 2

và 3 Bên cạnh đó, tương quan HMBC tir hai proton olefine H-15 (dy 6.44) va H-16 (i

1

6.70) tới hai cabon tứ cấp liên kết với oxygen C-14 (2: 87.6) va C-17 (877.4) sip

ác định liên kết peroxide nd véi C-14 va C-17,

Tương quan HMBC tir Hs-23 và Hs-24 161 C-3 (de 84.2), C-4 (ee 39.3), va C5 (656.1) gidp quy kết tín hiệu của các carbon này Tương tự nhờ phỏ HSQC và HMBC các tín hiệu của các proton và các carbon còn lại đã được quy kết

(Qua vige phan ch phd NMR nhận thấy giá tr phổ của hợp chất có nhí tương đồng với baceatin [0|, vì vây hợp chất 1 được đề nghị là baccati Số liệu phổ [NMR ciia 1 via hop chit so sinh được tình bày trong bảng 3L

"Hình 3.1 Cấu trúc hóa học và tương quan HMBC của hợp chất 1

:

phổ 'HLNMR và ”C-NMR của hợp chất 1 với bccdin

4⁄2 Khảo sát và biện luận cắu trúc hóa học của hợp chất 2 3.2.1 Die diém của hợp chất 2

Hop chất 2 (5.0 mg) thụ được từ phân đoạn EC4 của cao H:EA có các tính chất

xà đặc điểm sau

~ Trang thai: dang bột, màu vàng

~ Phổ 'H-NMR (600 MHz, DMSO-ds), phu lye 2a

= Phd C-NMR (150 MHz, DMSO-d), phy Ive 2b

"hổ 'C-NMR cho tín hiệu cộng hưởng của 15 carbon gồm một nhóm carbonyl

6 & (175.9), vam catbon tứ cắp sp” ở đ: (163.9, 160.7, 159.2, 156.2, 146.8, 135.7, 121.7

‘va 103.1), va séu carbon methine vòng thơm, trong đồ có hai cặp carbon có cùng độ chuyển dịch hóa học ở đ: (129.5, 115.4, 98.2 và 93.5

“Từ dữ liệu của phổ "H-NMR và "C- iá trị phổ của hợp chất 2 tương đồng với kaempferol [21] Do đó hợp chất 2 được đề nghị là kaempfcrol Số liệu phổ của hợp chất 2 và kaempferol được nêu ra trong bảng 3.2

Mình 32 Cấu trúc hóa học của hợp chất 2

:

Bảng 32 So sánh dữ liệu phố 'H-NMR và 'ˆC-NMRR của hợp chất 2 vi kaempferol

1

“Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT 4.1 Kết luận

"Từ phần thân và lá của cây Đơn lá đỏ, tiền hành phương pháp ngâm dằm trong

methanol thụ được cao chiết methanol Thực hiện chiết lỏng-lòng cao tổng methanol thu

urge cao phn doan n-hexane, n-hexanesethyl acetate (1:1) va cao ethyl acetate Thire

t2

hiện sắc ký cột và sắc ký lớp mỏng phân đoạn EC4 thu được hợp chất 1 và hp ct

“Thông qua các phương pháp phổ nghiệm và so sánh dữ liệu phổ của các chất đã cô lập

bb

4.2 Đề xuất

"ĐỀ tài mới chỉ phân lập được hai hợp chắttừ phân đoạn EC4 cao rchexane:ethyÌ

acetate, cdn nhiều phân đoạn khác chưa được nghiên cứu Trong tương lai, nếu có đủ

& kinh phí và thị

của các hợp chất khác trên phân đoạn EC4 cao n-hexane:ethyl acetate va trén ede phin

điều ian, chúng tôi tục khảo sit fim ra cau trúc hóa học

đoạn khác của cây Đơn lã đô cũng như in hành Khảo st hoạttính nh học ca chúng

dé làm rõ hơn về hóa thực vật của cây