Nghiên cứu thành phần hóa học của cây chìa vôi cissus modeccoides

Mục tiêt "Nghiên cứu, phân lập và xác định cắt đồng gộp thêm vào danh mục các hợp chất được nghiên cứu từ loài này, cung cấp một số thông tin {ho va gop phn ting thêm gii tị sử dụng của

BO GIAO DỤC va ĐẠO TAO TRUONG DAI HQC SU PH PHO HO CHi MINH

BAO CAO TONG KET

DE TAL KHOA HQC VA CÔNG NGHỆ CAP TRUONG

NGHIEN CỨU THANH PHAN HOA HOC CUA CAY CHIA VOI Cissus modeccoides

MA SO: CS.2020.19.22

Co quan chủ trì: Khoa Hoá học, Trường Đại học Sư Phạm TP.HCM

Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết

THÀNH PHÔ HÒ CHÍ MINH - 4/2022

- BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO —_—_

‘TRUONG DAI HQC SU PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

CAO TONG KET

ĐÈ TÀI KHOA HỌC 'VÀ CÔNG NGHỆ CÁP TRƯỜNG

NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN HOÁ HỌC CUA CAY CHIA VOI Cissus modeccoides

MA SO: CS.2020.19.22

Xác nhận của cơ quan chủ trì (hy, ho tên) Chủ nhiệm để tài (by, ho tên)

‘THANH PHO HO CHi MINH ~ 4/2022

VÀ CÁC DƠN VỊ PHÓI HỢP CHÍNH

« _ Các thành viên tham gia thực hiện đề

1 TS Nguyễn Thị Ảnh Tuyết - Chủ nhiệm để tà:

2 Nguyễn Ngọc T 3 Trần Hữu Duy, sinh viên học viên cao học

4 Nguyén Thanh Bình, sinh viên

+ _ Các đơn vị phối hợp chính:

| Trưởng ĐIIKHTN Tp HCM;

2 Viện Công nghệ hóa học Việt Nam

Chuong 1 TONG QUAN

LA Bae dim hye vat

1.2 Che nghiên cứu về dược tính

L3 Cúc nghiền cứu về hành phẳn hoá học

Chương 3 THỰC NGHIỆM

31 Hoá chất tuếtbị

Phuong pháp tiến hành

3.3, Nguyên liệu

24, Điề chế các loại cao

2.5 Cé lip các hợp chất hữu cơ trong cao phân doan ethyl acetate Chương 3 KÉT QUÁ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Hợp chất CVI (Chrysophanol)

3⁄2 Hợp chất CV2 (Emodin)

3.3 Hợp chit CV3 (Physcion)

3.4 Hop chat CV4 (Li

3.5 Hop chit CVS (rans 4-hydroxymellein)

Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy bon-13 Ni

CTPT a Công Thức Phân Tir doubt

DEPT Giá Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Growth Inhibition 50

HR-ESI-MS High Resolution BlectroSpray Ionization Mass Spectroscopy HsọC Hetcronuclear Singlet Quantum Correlation ICa Inhibitory Concentration 50%

2.1 Quy trình điều chế các loại cao từ cây Chia vôi

Sơ đồ 2.2 Qui trình phân lập hợp chit CVI-CV8

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Cay Chia voi

Hình L.2 Các công thức cầu tạo của một số hợp chit tr ec cay cing chi Cissus Hình 3,1 Cấu trúc và một số tương quan HMBC của hợp chit CVI Hình 3.3 Cấu trúc và một số tương quan HMBC cia hop chit CV3 Hình 3 5 Cầu trúc và một số tương quan HMBC của hợp chất CVS Hình 37 Cân trúc và một số tương quan HMBC eta hop chit CV7

DANH MUC BANG BIÊU

Bảng 1.1 Một số hợp chất được cô lập từ các cy cảng ch Cho Bảng 21 Sc kí cột dica gai tên cáo ely! ac

Bảng 22 Sắc kí cột silica gel tren phan dogn eao ethyl acetate EAL

Trang

Trang

Dữ liệu phô NMR của hợp chất CV3 và phcion

Dữ liệu phố NMR của hợp chất CV4 và leiodplodin

Dữ liệu phô NMR của hợp chất CVS và các hợp chất so xinh

Dữ liệu phô NMR của hợp chất CV6 và lupenone

Dữ liệu phố NMR của hợp chất CV7 và hợp chít so sánh

Dữ liệu phô NMR của hợp chất CV8 và sorghumol

TRUONG DALHQC SU PHAM THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH Độc lập ~ Tự do ~ Hạnh phú:

Tp.HCM, ngày - tháng - năm 2022

'THÔNG TIN KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU

ln để ti Nghiên cứu thành phần hóa học của cây Chi vôi Cissus modeccoides

~_ Chủ nhiện: Nguyễn Thị Ảnh Tuyết

~_Cơ quan chủ tì: Khoa Hóa, Đại học Sư Phạm TP.HCM

~ Thời gian thục hiện: thing 12-2020 đến tháng 12-2021

2 Mục tiêt "Nghiên cứu, phân lập và xác định cắt

đồng gộp thêm vào danh mục các hợp chất được nghiên cứu từ loài này, cung cấp một số thông tin {ho va gop phn ting thêm gii tị sử dụng của cây

3 Tính mới và sắng tạo: “Trong số tâm hợp chất đã phân lập à xác định cẳu tric, thi bai hop chit chrysophanol, hyscion

đã được phân lập st Cissus populnea, sảu hợp chất côn lại (emodin, hsiodiplodin, tramr-+- tte tng i Ch re

L Kết quả nghiên c Bằng các phương pháp chiết suất và cô lập ch hữu cơ, từ cao chi eeute, chứng ti đã đã phân lập được ám hợp chất Bằng các phương pháp phố nghiệm (ID và 2D-NMR) và so sính với các tài (chrysophancl, emodin, physcion), hai hep chit phenolic (lsiodiplodin, srans-4-hydroxymellein) va

3 witerpenoid lupenone, 3-bydcoxy-D:B-fredo-olean-5-ene va sorghummol) 5 Sản phẩm:

51 Bãi bio 4 quả nghiên cứu đã được chấp nhận

ph Hồ Chí Minh 3-2022) yen Thanh Binh, & Nguyen Thi Ảnh Tuyết (2022) Authraguinones and phenolic compounds from Cissus modeccoides Ho Chi Minh City University of Bescon sural of lee, 198), 514 3052

btn ga lo to hal sin vita ve vid a by

~ Nghiên cửu thành phần hoá học phân đoạn cao chiết A2 của cây Chia vôi (Nguyễn Thanh Bình, ảnh viên),

tre wie hap chấ ự nhiên có trong nhằm

6 Higu quả, phương thức chuyển giao kết quả nghiên cứu và khả năng ấp dụn

i ght ach dye cg bb wn Toy i Kho hg a Ting Ba be Se pat Tp THồ Chỉ Minh shim cung cắp những thông in vẻ thành phẫn hóa học của cây Chia vOin6i sig va

cứu VỀ hóa học trên những cây cùng chỉ

“Xác nhận của cơ quan chủ trì (ký, đồng dấu) Ngày thing - năm 2022 “Chủ nhiệm để tài

(ký, họ và tên)

TRUONG DAL HOC SU PilaM HỖ CHÍ MINH lập — Tự đo — Hạnh phúc

Tp.HCM, ngày — tháng - năm 2022 INFORMATION ON RESEARCH RESULTS

1 General informatior ~ Project title: Study on chemical constituents of Cissus modeccoides:

— Code number: CS.2020.19.20

Coordinator: Nguyen Thí Anh Tuyết

Implementing institution: chemistry department, Ho Chỉ Minh City University of Education uration: From December 2020 to December 2021

2 Objective(s):

Extraction, isolation, and structural elucidation of chemical constituents from Cissus

‘modeccoides growing in VietNam

3 Creativeness and innovativeness:

Among isolated compounds, two compounds chrysophanol, physcion were presented in Cissus opulnea but this was the first time they were found in Cissus modeccoidles Six compounds ene and sorghumol were known forthe first time in the genus Cissus

4 Research results:

From the ethyl acetate extract of the aerial part of Cissus modeccoides, isolated, The chemical structures of these compounds were established as sntragunones hydeoxymeten and witerpenoks(upenne, hy roxy-D:B.fedo-oleanSene and sorghumob by 1D, 2D NMR spectroscopy as well as comparison with those reported in the literature,

The project has contributed to training two students and one master student

6 Effects, transfer alternatives of reserach results and applicability

1 Tổng quan tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước thuộc lĩnh vực để tài

Chỉ Cissus gồm 350 loài thuộc họ Nho (Vitacea) Các loài này phân bổ rộng, nhưng

được tìm thấy nhiều nhất ở vùng nhiệt đới Nhiều loài thuộc chi Cissus duge nghiên cứu

dược tính trên các chiết xuất va cho thấy rằng các chiết xuất có nhiều hoạt tỉnh sinh học

"hữu ích như chiết xuấttừ ài Cissus quadrangularis Linn 6 téc dung khang viém [1], khôi tit Cissus repens Lam có tic dụng kháng viêm [6]: hoặc chiết xuất từ Cisske iBucnsir cô tác dụng kháng khuẩn [7]

Nghiên cứu về thành phần hóa học trên một số loài cùng chi Cissus nhu Cissus

‘quadrangularis, Cissus sieyoides, Cissus repens, Cissus ibuensis, cho thấy chúng chứa hợp eoumarin [12], terpenoid [13]

Riêng loài Ciasus modeccoidex chưa được nghiên cứu về thành phần hóa học

2 Tính cấp thiết của để

Việt Nam là một trong những quốc gia có điều kiện phát triển mạnh về nền Y học cổ

truyền do có vị trí địa lý thuộc vùng nhiệt đới nóng âm nên hệ thực vật phong phú và đa

dang Trong đó, lĩnh vực nghiền cứu hồa học các hợp chất thiên nhiên và hoạt tính sinh

học đã góp phần rất lớn vào sự phát triển của ngành Y học cổ truyền vả hóa dược

Hiện nay, nhiễu người dân sử dụng các ài thuốc dân gian từ các loi được liệu nhưng chưa nắm rõ thành phần hóa học của chúng

Cây Chìa vôi (Cissus medeccoides Planch) thuộc họ Nho (Vitaceae) Trong dân gian,

sây này được nhân dân sử dụng để chữa một số bệnh như đau nhức xương, đau nhức đầu

ít Nghiên cứu về thành phần hóa học trên loài này chưa được thực hiện Một số loi cũng

hi đã được nghiên cứu vẻ hoạt tính sinh học và thành phần hóa học Với mục tiêu nghiên

cứu hành phần bóa học, góp phần lý iải rõ hơn về cơ chế tị liệu, tác đụng của loi được liệu trên, chúng tôi chọn cây Chỉa vôi để nghiên cứu thành phẫn hóa học

1-1 Đặc điểm thực vật

Cây Chia vơi cơn cĩ tên gọi khác là bạch lim, dau xương, bach phin đằng,

“Tên khoa học: Cissus modeccoides Planch

“Thuộc họ: Nho Vitaeeae

Cây Chia vơi là một loại cây mọc leo, dài chừng 2 đến 4 m, tồn thân nhẫn, cĩ tua cuốn

đơn, nhỏ hình sợi Lá đơn, xẻ thủy chân vit, phia cuống hình tìm, đi và rộng từ 6 đến

em, những lá phía gốc hằu như nguyên, hình mác, lá phía trên chia 5 đến 7 thùy, dài gin

bằng nhan, mép hơi sĩ răng cưa Hoa mẫu vắng nhạt, mọc đối diện với lá, nhưng ngắn hơn

số cuống

Cây Cha vơi mọc hoang ở khắp các tỉnh miền Bắc và miễn Nam Cây thường được

thụ lấy rễ cũ, thái mỏng, phọ hay sắy khơ làm thuốc, cĩ thể thu hoạch quanh năm nhưng,

vào mùa thu đơng là tốt nhất [14]

Hình 1.1 Cay Chìa vơi

1.2 Các nghiên cứu về được tính

“rong Y học cỗ truyễn ở Việt Nam, cây Chia vơi được đăng để làm thuốc chữa đau nhức xương, đau nhức đầu, tẻ thấp (10g đến 30g thuốc sắc/ ngày hoặc ngâm rượu uống)

1144

Cho đến nay, cây Chia vơi chưa được nghiên cứu nhiều nên phần được tính của một

số lồi cùng chỉ sẽ được trình bày thêm dưới đây

‘methanol cua cây C quadrangularis th

n hoạt nh kháng nghiệm trên chuột [1] Thử nghiệm dùng ethyl phenylpropiolate gây viêm, cao chiết

êm (đối với arachidonic acid)

Hoại tính kháng viêm cũng được thể hiện với cao chiết methanol từ loài C repens Ở nông độ nồng độ 500 mg/kg thể trọng, ức chế 29.60% phủ nề Chất đối chứng dương là indomeethacin với nồng độ 10 mg/kg thể trọng, ức chế 31.67% phù nẺ [L5] Hoạt tính khẳng khuẩn

‘Cao chiết ethanol của cây C sbuensis véi nông độ 10 mg/mlL có khả năng kháng vì khuẩn Slaphyococcus œmơews, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa manh hom so véi acetone [7]

Hoạt tính khẳng virus

Cao chiết methanol cia cây C guadrangularis có kha nang kháng virus HSV1 va 1SV2 khi thữ nghiệm trong ống nghiệm với iều lượng 100 jygimlL [S] Hoạt tính khẳng oxi hóa

Cao chiết methanol cây C quadrangularis ¢6 khả năng ức chế sự sản sinh các gốc tự ddo DPPH, superoxide, hydroxyl và cải thiện tổn thương ở gan do CC: gây ra ở chuột, nồng

độ thừ nghiệm là 1000

cđương là catechin, có nồng độ 1000 mg/mL, ức chế lẫn lượt 79,3%,

Hoạt nh hạ đường huyết

mÌ ức chế lần lượt 75.6%, 75,3% và 80,1% (chất đối chứng

79,9% và 78,4%) [4]

Cao chiết nước từ lá tươi của cây C sieyoides (C verticillata) ờ nồng độ 200 mụ/ kg

thể trọng có khả năng làm giảm đường huyết (259%), tiglyeeride (48) [16] Hoạt tính chẳng loãng xương

trọng giúp phục hồi gần như hoàn toàn

Cao chit methanol eta ety C.sieyoides (C verticillata) 66 kha ning te chế viêm loệt

dạ đây do HCVethano, piroxicam, ethanol vi pylorus giy ra 6 chugt v6i ning &9 1000 lin lug à ansoprazole ức chế 59%, cimetidine te ché 53% vi lansoprazole Ue ché 47% với nồng độ 1000 mgfkg thể trọng [I7

1.3 Các nghiên cứu về thành phần hóa học

Các nghiên cứu về hỏa học trước đầy trên một số loài cũng chỉ cho thấy các loài này

chứa chủ yếu các chất thuộc nhóm flavonoid, anthraquinone, phenolie, dẫn xuất cia stilben,

một vài terpenoid, lignan, iridoid, Thinh phin hỏa học của một số loài đã được nghiên cứu được tình bày tôm tắtrong bảng 1.1 vi Hinh 1.2

"Băng 1 Một số hợp chất được cô ập từ các cây cũng chỉ Cbuus

1 gp ent Bi] tại

€ papuhuea

5,6.,8-Tetrahydroxyeoumarin C sicyoides Coumatin [S228 TemashyiroxyooumannS/ZB- (€ verticllaa)

C prota |

và lá

C sicyoides (C vertcittaa)

7-0-act-rhamnopyranoside

Kaempferol-3-O-a arabinopyranosyl- | 55

€ quadrangularis

uadrangularis

€ quadrangularis

C sicyoides (C vertcitiaa)

C.repens

€ quadrangularis

on

Ol SS W och,

© on

rhamnopyranosyl(1— Ho!

a-L-Rhamnopyranosyl (1-6)

-f-D-galactopyranosyl galactopyranosi

công thức cấu to ciia mot sé hgp chit tir cée edy ciing chi Cissus

Hình 1 2

2.1 Hóa chất, thiết bị

2.1.1 Hóa chất

Dung mdi: n-hexane, chloroform, ethyl acetate, acetone, acetic acid, methanol, ethanol hình vết trên bảng sắc ký lớp mỏng: dung dich H;§O, 20, nung

- Thuốc thử hiệ

~ Sắc ký lớp móng pha thường: TLC silica gel 60 Fs (250 pm, Merck, Germany) + Sie ky Lop ming pha dio: TLC RP-18 Fs (250 pm, Merck, Germany) Sắc ký cột pha thuimg: silica gel 60 (4063 jm, Merck, Germany) 2.12 Thiết bị

- Các cột ắc ký

~ Bình triển khai sắc ký lớp mỏng

Máy cô quay chân không (Heidolph)

Bép cach thuy (Memmert)

~ Đèn soi UV: bước sóng 254/ 365 nm (spectrotine ENF-240 C/FE, USA) Cin phan tich (Sartorious BL 2105)

~ May eng hung tir hat nhin (Bruker Avance) tin s6 500 MHZ cho phố 'H-NMR và 125 nghệ Việt Nam, Hà Nội

2.2 Phương pháp tiến hành

Cð lập các hợp chất hữu cơ bằng phương pháp sắc kí bao gồm kỹ thuật sắc kícột sileca

gel pha thường, pha đáo RP-1§ và sắc kí lớp mỏng

Các vất chất hữu cơ trên SKLM duge hiện hình bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254

em và 365 nm hoặc đùng thuốc thứ là dụng dịch H:SO, 20

“Sử dụng phương pháp phổ nghiệm, chủ yếu là phổ NMR để xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được

2.3 Nguyên liệu

Cây Chia voi duoc thu hai tai huyện Bến Cát, tỉnh Bình Dương vào tháng 8 năm

2017 Mẫu cây Chỉa vôi được định danh bởi TS Đặng Văn Sơn, Viện Sinh học nhiệt đới miễn Nam

Cây Chìa vôi tươi được rửa sạch và đem phơi khô trong mát Sau đó, cây được siy

"

2.4, Điều chế các loại cao

Cây Chìa vôi (Cissưs modeccoides Planch.) được phơi khô và nghién thành bột mịn,

sấy khô để

96? bing phuong phip ngăm dầm, lọc và cô quay loại dung môi đưới áp suẾt thấp thu được

«ao ethanol thô (417.08)

Cao ethanol thô được chiết lòng lông lần lugt vi n-hexane, ethyl acetate dé thu

khối lượng không đổi (10.5 kg) Nguyé bột mịn được trích với ethanol

được cao n-hexane, cao ethyl acetate va phẫn cao còn lại Quá tình thực hiện được tổm tắt

theo sơ đỗ 2.1

Chế lồng lòng với hexane ethyl acetate (CO quay thu hos dụng môi

Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế các loại cao từ cây Chìa vôi

228 cô ập các hợp chit hou co trong cao ethyl acetate

2.5.1 Sắc kí cOt silica gel trén cao ethyl acetate

Cao ethyl acetate (167.6 g) duge sic ki etslica gel, giả ly với hệ dung mỗi n-hexane- EIOA€ có độ phân cục tăng dẫn (0-1006 EIOA:), sau đó giải ly với hệ dung môi EXOAc-

MeOH (5-100% MeOH) Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ, theo dõi quá trình giải

lớp móng giống nhau được gộp chủng

ly bing sic ki lop mong Những lọ cho kết quả sắc

R