Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học cây thỏ the centipeda minima l

MO DAU Cây có từ lâu đã được dùng nhiều trong các bài thuốc y học cổ truyền dân sian ở Việt Nam cũng như trên thể giới.. Từ thực vật, các nhà khoa học trên thể giới đã chiết xuất và xác

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

'TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HÔ CHÍ MINH

DE TAL KHOA HQC VA CONG NGHE CAP TRI

GOP PHAN NGHIEN CUU THANH PHAN HOA HQC

AY CO THE ~ CENTIPEDA MINIMA (L.)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HÒ CHÍ

ĐÈ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CÁP TRƯỜNG

GÓP PHẢN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẢN HÓA HỌC CAY CO THE - CENTIPEDA MINIMA (L.) MASO

THÀNH PHÓ HO CHi MINH ~ Tháng 01 Năm 2016

Trưởng DarHoe Su-Pham |

TP, HỒ-CHI-MINH,

LOI CAM ON

~ _ Thay mặt toàn bộ nhỏm thực hiện để tải, trân trọng cảm ơn Trường Đại học

Sư phạm Thành phổ Hỗ Chí Minh đã cắp kinh phí để thực hiện đề tải nay

= Trin trọng cảm ơn Phòng Khoa học Công nghệ Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chỉ Minh đã hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi giáp chúng tôi hoàn

thành đề tải

= Chin thinh cảm ơn các Thầy Cô trong hội đồng đã đóng góp các nhận xét cquý báu giúp hoàn thiện để tải

TÀI VẢ CÁC ĐƠN VỊ PHÓI HỢP CHÍNH

“Các thành viên tham gia thực hiện đề tài

1 TS Bai Xuân Hào,

Trần Thị Kim Loan

3 Võ Thị Kim Hằng

(Che don vj phi

1, Khoa Héa học, Trường ĐHSP Tp, HCM

"Phòng thí nghiệm phân tích trung tâm Trường ĐHKHTN Tp HCM lợp chính:

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU

1.1, Vải nét về ho ete ~ Asteraceae

1.2 Cie chi trong hg ede ~ Asteraceae

1.3 Đặc điểm thực vật cây có the “

1.3.1 Phân bổ, thu hái và chế biển

1.3.2, Công đụng

13 3, Thành phần hóa học có trong cây có the

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

3.1 Phương pháp nghiên cứu

21.1 Đổi tượng nghiên cửu, me

3.12 Phương phập cô lập cde hợp chất

CHƯƠNG 4, KET LUẬN VA KIỂN: NGHỊ,

TÀI LIỆU THAM KHẢO

: Acetyl (CHsCO)

mũi đối bầu (broad doublet)

mũi don ceo singlet)

(doublet

đối i tie doublet)

Distortiontess Enhancement by Polarisation Transfer + Dimetyl sulfoxid'

E

tương quan giữa LI-H

tương quan giữa LỊ-C qua

(Heteronuclear Multiple Bond Coherence) (H-H Correlation SỊ

: tương quan giữa H-C qua một nỗi

(Heteronuclear Single Quantum Coherence) : High Resolution-Fleeto Spray lonization-Mass Spectrometry : Bằng số ghế coupling constant)

&DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Cay cỏ the

Mình I2, Hoa cỏ the

Mình 3.1 Tương quan tse ‘a COSY quan rọng của hợp Minh 3⁄2 Tương quan ROESY quan trong của hợp chất CT1 Hình 3.3 Tương quan i H COSY vi HMBC quan trong của hợp chit CT:

eh 3.4 Tương quan ROESY quan trọng của hợp chất CT2 Hình 3.5 Tương quan HMBC cia hop chất CT3

Hình 3.6 Tương quan HMBC và 'H-'H COSY cia hgp chil

Hinh 3.7 Cau tric hoá học của hợp chit CT4 và minimosid Hình 3.8 Tương quan HMBC cia hợp chất CTS

Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế các loại cao neil)

Sơ đồ 22 Quy trình sắc ký cột sÏiea gel cao n-butanol s18

#DANH MỤC CÁC BẰNG

Bang 2.1 Két qua sic ky cột trên cao ø-butanol) của cây cỏ the 10

Bing 34, Sb liệu phổ ‘H-NMR vi "C-NMR của hợp chất CTÀ 25 Bing 3.5 Bing so sinh số liệu phổ 'H-NMR vi "C-NMR cia hợp chất CT4 và hợp chất minimosid

Băng 3.6 Số liệu phổ hop chit CTS

Bảng 3 So sánh số liệu phổ giữa các hợp chit CTA „ CT6

BỘ GIÁO DỤC VẢ ĐẢO TẠO CONG HOA XA HOH CHU Ngôn A VIET NAM TRƯỜNG ĐH SƯ PHẠM TP.HCM Độc lập ~ Tự do ~

Tp HỖ Chỉ Minh, ngày 25 thẳng 12 năm 2016

THONG TIN KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU

ĐÈ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CÁP TRƯỜNG

1 Thông tin chung:

iui Xuan Hao, Tran Thi Hang, Duong Thue Huy 2016),

pm ‘asc of ened am aie al oi duo bg Tesch, 5400),

ó, Hiệu quả, phương thức chuyên CÁN Tắt mã NM cập phốt bổ sug thấm VEU Ua ph clare Compe giao kết g cru vi khả năng dp đụng:

eh

TS Bùi Xuân Hảo.

~Study on chemical constituents of Centipede minima (1),

3 Creativeness and innovatieness

This isthe fist me that amnarae drvties anel 3620 ydmgjdammardk- 1220.4ihydroxyldammnar-24- D- gherrmonl4l 2:24 Thine Neale feet Cepal wr

4 ‘Se compounds issn from the ety! ete exact of Comic mining (L) results:

xxyldammar-24-cne-12-O-f-D-glucopyranoside, 12,20

nethoxy quercetin nd de serquiterpen lactone compound '3-Op-D glucopyranesyl(t-22)-0/ D-lucopyraneside, 3-

5 Products: Te research esl was pubs on Juma of Selene and Technology Bui Xuan Hao, Tran Thi Kim Loan, im Hang Duong Thue Huy (2016), chemical constituents of centipeda minima cJoumal of Scene and Teachnology, 54(2B)

6, Effects, transfer alternatives of reserach results and applicability:

Bui Xuan Hao

MO DAU

Cây có từ lâu đã được dùng nhiều trong các bài thuốc y học cổ truyền dân sian ở Việt Nam cũng như trên thể giới Đây là nguồn tài nguyên thực vật có giá trị

thiết thực trong việc phòng chữa bệnh cho nhân dân Từ thực vật, các nhà khoa học

trên thể giới đã chiết xuất và xác định cấu trúc nhiều hợp chất hóa học dùng để chữa

trị nhiều căn bệnh hiểm nghèo, như hợp chất taxol được cô lập từ cây thông đỏ, hợp

chất vinblastin từ cây dừa cạn, ding diéu trị ung thư ngực ở phụ nữ Ngày nay ngành hóa học các hợp chất tự nhiên có sự phát triển vượt bậc Cùng với sự kết hợp các ngành y được học, sinh học, đã không ngừng nghiên cửu

thành phẩn hóa học vả hoạt tính sinh học của các loại được thảo có trong các bài

thuốc cổ truyền, để ứng đụng vào việc chữa bệnh cho con người

Vigt Nam thuộc ving khí hậu cận nhiệt đới với hệ thực vật phong phú, đa

đạng Nhiều cây thuốc có giá trị sử dụng cao như cây sâm Ngọc Linh ở tỉnh Quảng

thông đó ở Lâm Đồng Đây là một thuận lợi lớn cho việc nghiên cửu của

Nam,

các nhả hóa học các hợp chất thiền nhiên ở nước ta

Cây cỏ the từ lâu đã được dùng trong y học dân tộc để điều trị các chứng

ho ga, tr chin

thương, đau mắt đỏ, viêm mắt có mủ Tuy nhiên, ở Việt Nam chưa có công trình

ên cứu thành phẩn hóa học của cây có thế Vì lý do

bệnh như viêm họng cấp, viêm mũi dị ứng, viêm phế quản mãn

khoa học nảo công bổ về nại

đó chủng tôi chọn cây cỏ the là đối tượng nghiên cứu trong đề tài nảy với mong các hợp chất tự nhiên, tìm ra những hợp chất có hoạt tính sinh học nhằm nâng cao

giá trị sử dụng của dược thảo Việt Nam

CHUONG 1 TONG QUAN

- Phân họ hoa ống (Tubuliforae, Asteroideae): trên cụm hoa chỉ có hoa hình

ống, hoặc hoa hình ống ở giữa, hoa hình lười nhỏ ở xung quanh đầu

~ Phản họ hoa lưỡi nhỏ (Liguiiflorae Ciehorioiđeae): tắt cả các hoa trong cụm hoa dẫu là hoa lười nh, không bao giờ có hoa ông Cây có nhựa mũ

Họ Cúc phản bề rộng khắp thẻ giới nhưng phố biển nhất tại các khu vực ỏn đới và miễn núi nhiệt đới

OVE

Nam, họ Cúc có khoảng 125 chí trên 350 loải, chủ yêu là cỏ dại, một

số được trồng làm cảnh (các loại hoa cúc) rau ăn (ngải cứu cải cúc, rau diếp), gia

vi (eúe tắn)

cÈ Một số đặc điềm thực vặt của họ Cúc

Thân có hay bụi sống một năm hay nhiều năm, ít khi là đây leo hay cả

Rễ có thể phủ lên thành củ nhưng chất dự trờ ở đây không phải là

ma 1a inulin

Lá có hình dạng biển thì

không có lá kèm, thường mọc đối hoặc tụ thành

hình hos ở gốc có những loại ã cỏ sai Thông thường phiễn lá nguyễn xẻ sâu hình

dạng lá kép hình lông chim hay hình chân xịt

Cụm hoa: Đầu có thể mang nhiều hay ít hoa Đẫu có thể đứng riêng lẻ hay tự

thành chủm giế xim nhưng thông thường nhất là tụ thành ngủ Có thể xem hoa tự

đầu như một giề thu ngắn, trong đó các hoa đỉnh theo một đường xoắn ốc hay liên

(Seneciio, Tagetes) hoặc đính trên nhiều hàng kết hợp Hình dạng và kích thước của

lả bắc ngoài rất biển thiên Ở actis,

lá bắc ngoài nạc và phản nảy ăn được, Lá

bắc ngoài có thể nguyên hay có răng có gai cỗ những loại cỏ màu như cảnh Lá

mỏng hẹp, đôi có lông Lá bắc thật có thể phẳng hay cong xung quanh hoa chúng có thể không có

bắc thật có mang hoa ở nách, là những phi

Hoa: lưỡng tính, mẫu năm bằu dưới không có lá bắc con Các hoa trên một

đầu có thể gi

te nhau có củng cách cầu tạo cùng chức năng Kiểu đầu này gọi là

đồng giao với toàn những hoa hình ống hoặc toản hoa hình lưỡi nhỏ có nắm rằng nhiệm vụ sinh sản và hoa không đều hình lưỡi nhỏ có ba răng ở bia,

ing 6

đông vai trò của trằng để thu hút côn trùng Kiểu đầu nảy gọi là di giao

Bao hoa: lá đãi thường giảm vì nhiệm vụ bảo vệ đã được đảm nhiệm bởi các

lũ bắc của tổng bao Đài có thể biển mắt, đối khi chỉ còn một g nhỏ, nguyễn hay có

phát triển thành một mào lông cỏ thể lắng hay có gai, có nhiệm vụ trong sự phát tán đầu dị giao) hoặc không đều có dạng lưỡi nhỏ có ba răng hay răng hoặc hình môi 2/3 hoặc hình ng dai hoi cong

Bộ nhị: năm nhị bằng nhau đình trên ông trang vả xen kế với cánh hoa, Chỉ nhị rời nhau từ tông Cynareae, Bao phắn mở dọc, hướng trong, dính nhau thành một

ng bao quanh vòi Chung đới thường kéo dài trên bao phấn thành bộ Ngoài ra bao

phẩn còn mang ở gốc những phy bộ choãi ra tạo thành những tai nhỏ, che chớ cho

mật hoa ở gốc vôi khỏi bị nước mưa

Bộ nhụy: hai lá noãn ở xị trí trước về sau tao thành bầu đưới một ö đựng

một noãn, đỉnh đáy, Đĩa mật ở trên bằu Ở hoa lưỡng tính và hoa cái, vòi xuyên qua nhánh đầu nhụy mang ở mặt đưới những lông đẻ quét hat phan khi vòi mọc xuyên qua ống cấu tạo bởi các bao phắn Sự thụ phắn nhờ côn trùng

Quả bế, thường mang một mào lông do đài biến đổi, có khi mảo lông được mang bởi một cuống dài hay ngắn Đôi khi quả trần hoặc có móc hay có gai Hạt không có nội nhũ, lá mâm to, nhiều khi chứa đây dầu

‘Ho Cite là họ có số loài được đùng làm thuốc lớn nhất trong giới thực vật Có

khoảng 51 loài của họ Cúc được dùng làm thuốc trong đó có 18 loài được dùng

3

trong công nghiệp được như các loài: aisô bạch trust, ¢6 nho nồi, cỏ ngọt, cúc hoa n tưới mộc hương,

cúc tần, hỗng hoa hy thiêm ké đầu ngựa khoản đồng hoa mã

uật, thanh hao hoa vắng, tử uyển,

ngài cửu ngưu bàng sài đất thươt

Cây có the thuộc he Cie, chi Centipeda,

Tên khoa hoe: Centipeda minima (L)

Tên thông thưởng: nga bắt thực thảo địa hỗ tiêu, cầu tử thảo cóc mắn cúc mẫn thạch hỗ tuy P

nh

an trén mgt dat ẩm thân rất nhiễu c

Có the là một loại cổ mềm mọc bò

ở ngọn có lông mịn trắng nhưng toản thản trông nhẫn bỏng Lá đơn mọc so le hình

mép có một, hai hoặc ba răng cưa; đãi 10-18

ba lá cạnh, đầu tủ, phía cuồng hep I

mm, rng 6-10 mm, gan chính hơi nổi ở mặt dưới lá, gân phụ không rõ, không có

m hoa hình đầu mọc ở nách lá, hoa cái gồm nhiều lớp, cánh hoa hình ống

tính ít hơn Trằng hoa hình chuồng, có bốn

có răng cưa, hoa lưỡng

mau trắng trẻ

răng hình trứng rộng, mâu hơi tím Quả bể bổn cạnh trên cạnh có lồng mịn nhỏ

7 Để dùng lâm thuốc, thường hái toàn cây,

Mia hoa thing 2 - 5, mùa quả tháng 4

hấp nơi ở vũng di

gồm cả rễ, đũng tươi hay phơi hoặc sảy khô Cây mọc hoại

phổ chỗ những chân tường âm, khe gạch vỡ hở đất cũng thường hay gập cây này,

1 3.1 Phan bo, thu hái và chế biến

Có the mọc hoang ở nơi m thấp hoặc ruộng bỏ hoang ở Việt Nam Trung

Quốc (Quảng Tây Giang Tô, Quảng Châu) Malaysia Indonesia, An Dd, Nhat Ban,

‘Chau Ue, Mangat, mọc phổ biển sau vụ gặt mọc nhiễu vào tháng giêng Thủ hãi toàn cây vào mùa khô, rửa sạch dùng tươi hoặc phi sẩy khỏ

2 Cong dung

có the có vị cay, mùi hắc, tính ẩm có tác dụng thông khiéu, tan thắp,

khu phong tiêu thũng tiêu viêm, tiêu sung Co the còn thường dùng lâm thuốc chữa

dị ứng, hay ding ngoài để chữa bệnh mẫn ngửa (eczema) tị rắn cin, dip bó gầy xương

Phin thân, lá và hoa của cây có the còn được sử dụng phổ biển trong các bài thuốc dân gian Vị dụ như trong các bải thuốc dẫn gian của Trung Quốc, cây cỏ the Loan: cô the được ndu Hy nước để tẫm cho trẻ ơm bị bệnh ghẻ lớ, lay uống để các bệnh về hệ tiêu hóa

.#ˆ Một số bài thuốc đân gian sử dụng cây có the:

+ ˆ Chữa mắn ngửa (eczema): cô the hai phần, độu xanh một phần, mudi vai hat CCả ba thứ giã nhỏ đấp lên nơi bị mẫn ngửa đã được rửa sạch + Chữa ho: cỏ the khô 20 g hoặc tươi 30 g, nước $00 ml sic edn 100 ml chia

ba Lin uống trong ngây

© Chia viém mũi, nghẹt mỗi: ding c6 the, hoa mộc lan (mỗi vị 6 g) kẻ đầu

ngya (10 g) sic lly nước uỗng Nễu dùng ngoài nghiền cỏ the, ế tần và bạch chỉ tồi đặt mỗi lẫn một t vào trong mũi

1.3.3 Thành phần hóa học có trong cây có the

'Năm 1989, Dipú Gupla vã J Singh công bổ bổn triterpenoid saponin mới từ

vô che lả ad Jă3:194.23eahydroxyus-l2-ea-2-oic28-0/:D-

28-0/.D-

xylopyranosid (1), acid If.2a.38.19a.23-pentahydroxyurs-12-en-28

“tetramethoxy stilben (7) 2-isopropyl-5-

‘methythydroquinon-4-0 D-xy lopyranosid (8), tetratriacontany! nonadecanoat (9), 34.2 1f.2a.28-tetrahydroxyolean-|

sesquiterpen laclon cổ hoạt tỉnh khẳng khuẩn là 6-@-methylacrylylplenolin (12) 6-

(-angeloylplenolin (13), 6-Œ-isobutyroylplenolin (14)

Năm 2007, Heng-Xing Liang và cộng sự đà cô lập được được các xesqtiterpen laeton là 4.5-/-dihydroxy-2/-(sobutyryloxy)-10/I-guai-1I(13)-en- 12.8/-olid' (15) palehel

*a-O-iglat (16) 2//-(isobutyryloxy)florilenalin (7), 4- hydroxy=1/H-puaia-9.11(13)-dien-12.8a-olid (18), Noritenalin-2a-O-tiglat (19)

-olid (22), +-hydroxy-2a-angeloyloxy-pesudoguaia- 11(13}-en-8a12-olid (23), 4.5-cpory-2a-angeloyloxy-guaia-1 1(13)-en-8f,12-olid (24), 4.S-cpoxy-2aisobutyryloxy-guaia-11(13)-en-8f.12-olid (25), plenolin (26) amicolid D (27), pulchellin-2a-O-isovalerat (28), foritenalin-2a-O-isovalerat (29), (32)

2.1 Phương pháp nghiền cứu

3.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Là cây cỏ the, được thu hái tạ tính Vĩnh Long vào tháng 07 năm 2013 Cây được nhân danh tên khoa học bởi ThS Hoảng Việt, khoa Sinh Trường Dai Học Khoa Học Tự Nhiên

3.1.2 Phương pháp cô lập các hợp chất

Trong dễ tải đã đùng các phương phấp sắc ký, bao sôm sắc ký lớp mng

silica gel, sic ky lớp móng pha đảo RP-1#, sắc kỷ lớp mỏng silica gel điều chẻ, sắc

ký cột siliea gel, sắc ký cột phá đáo RP-]§

3.1.3 Phương pháp xác định cấu tric cde hop chat

Dũng các phương pháp phổ hiện đại chủ y u là phổ cộng hưởng từ hạt nhân (ID-NMR va 2D-NMR), phố khôi lượng phân giải cao

3.3 Thực nghiệm

3.3.1, Hóa chất và thiết bị

Dung môi dùng trong sắc ký cột và sắc ký lớp mỏng là dichlorometane

cloroform methanol, ø-butanol, ethyl acetate

Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng trắng sẵn DC-Alufolien 60

Foss (Merck), ban méng RP-18 Foss (Merck), Cac cau tử được phát hiện bằng đèn

UUV hoặc phun xịt dung dich HI:§O; 25

hiện màu sau khi khai triển bằng hệ dung mỗi giải ly thích hợp

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân được ghỉ trên máy Bruker AMSOO FT-NMR

NMR và 125 MIIz đổi với phổ '!C- „ sấy khỏ và sẩy nóng tử từ cho đến khi

Cây tươi sau khi thu hái được rửa sạch va siy ở 60°C đến khối lượng không

đổi và được xay nghiễn thành bột thổ thụ được 3.3 kg Đun hoàn lưu 3.2 kg bột thô

9

ờ) lọc nóng, cô quay ở áp suất thấp hú hồi

với dung mỗi methanol (3 lẫn x 3

dụng môi được cao methanol, Chiết phân bổ lỏng - lỏng cao methanol này lẫn lượt

với các dung mỗi có độ phân cực ting din: eter du hoa ethyl acetate va n-butanol

¢ loa eao: cao eter du hoa (320.2 gam), ca0

Cö quay các dich chiết, thu được c

ethyl acetate (36.5 gam), cao butanol (13,6 gam),

Quy trinh điều chế các loại cao được tỉnh bày trong sơ đỗ 2.1

Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế các loại cao

Bột cây khô (3.20 ke)

= Bun hod lưu với MeOH (40 i0,

- Trích long long voi

Cao ethyl acetate (36,5 2) butanol bio hỏa nước

= CB quay thu hai dung mỗi

Cao n-butanol (13.6 2)

Hiến hành sắc ký cột siliea gel trên cao m-butanol với hệ dung mỗi đichloromelane-methanol-nướ với độ phản cực tăng dẫn, thu được mười phản đoạn lằn các phân doạn CT-III và CT-V trên cột silica gel pha thường, cột RP-

18 với hệ dung môi giải ly thích hợp, thụ được các hợp

Ghi chic: C: elorotorm, M: metanol, W:H:0

Bang 2.2 Kết quả sắc ký cột phân đoạn CT-IH (1.058)

Phin đoạn | Dung mdi gaily | Khôilượng | NHAN (Ghi hủ

Em e Nhang | NiôYhhHS5 Í tam kisdk CTAHB | CMdSD | 333Img | NhềmNNphân | Khosạ Grae | eatery | Hay | RR TIT gumnt G315 | H2mg | — Nhànấ CM@&2 | 553mg | Vàdù mờ

án đoạn | DUBE M61 gia ti Kitqua

CTIfEi | GM aoa 3ì mg Vidi, ma CTHIIC2 | Moy S3 mg Mot vét tron

Bang 2.4 Két quả sắc ký cột phản đoạn CT-V (4.26g)

Í Phân đoạn | Dung mỗi giảily | Khốilượng Tu Ghỉ chú

CMd9U) | 602mg | NASER | King khio sit

Ghi ent; NCN: aclonifil, W+ nước,

+ Cd lap các hợp chất trong cao ethyl acetate

Tiến hành sắc kỷ cột siliea gel trên cao ethyl acetate twong tir eao butanol, với hệ dung mỗi diehlorometane-methanol-nước với độ phân cực tăng dẫn thu được năm phản đoạn tương ứng được ký,

Phan đoạn Dung môi giáily ( Khối lượng (g) Ghi cha

Thực hiện sắc kỷ cột nhiều lẫn phân đoạn CT-EAII (11.0 g) với hệ dung mỗi giải ly

thích hợp đã thu được hợp chat CTS (4.5 mg)

Thực hiển sắc kỷ cột nhiễu lần phản đoạn CT-EAIHI (15.0 ạ) với hệ dung môi giải

1y thích hợp đã thụ được các hợp chất CT4 (Š.0 mg)xà CT6 (4.3 mẹ)

Thực hiện sắc kỷ cột nhiều lẫn phản đoạn CT-EAIV (&04 g) v

ly thich hgp da thu được các hợp chất CT3 (25,3 mg) ý dụng mỗi giải

~ Phố HRMS (phụ lục la) cho mũi ion của phân tử gi

= Pho H-NMR (CsDsN) (phy Ie 1b va bing 3.1),

~ Phố PC va pho DEPT-NMR (CsDsN) (phu lue Le, 1d va bang 3.1)

= Pho COSY HSQC, HMBC, ROESY (CsDeN) (phy Iye Te, If Ig 1h va bang 3.1)

Biện luận cấu trúc

Khôi phổ phân giái cao của hop chất CTI (phụ lục la) cho mai ion của phân

tứ giả, với sz 785,50510 [M+H]* phủ hợp với công thức phân tử Cụ:tl›:OIo, Phổ 'H-NMR (phụ lục Ib) của hợp chất CT1 cho thấy sự hiện diện của tấm

nhóm proton methyl cộng hưởng trong khoảng ð¡ 0.90 đến 1.70 ppm, gdm các tín

hiệu có giá trí độ chuyển dịch hóa học như sau: öu 0.95 (3H s H-18); 0.79 (3H s H-19): 41 (3H, H-21; 1,61 (SH, , H-36); 1.63 GH, 3, H27); 1.28 GHI, s, H 28): 1.09 G11 s H-29): 0.94 (3H s H-30) Phố 'H-NMR còn cho thấy sự hiện điện của một proton methine olefin -CH=C<, với 6y 5.30 (IH, 1, J 7.0 Hz, H-24), vi các proton methylen hign điện trong khoảng 6y 1,70 đến 2.50 ppm Phỏ 'HI-NMR cũng

cho thấy sự hiện diện của proton carbinol tại C-3 cộng hưởng đạng mũi đối đôi, với 63.27 (IH, dd J 11.5: 7.0 Hz, H3)

Ngoài ra, trên phổ 'H-NMR côn cho thấy sự hiện diện các proton của hai đơn

vị đường glucopyranose, bao gồm các tín hiệu như sau: các proton methine gin

oxygen cia hai don vị đường cộng hưởng trong khoảng ổu 3,70 đến 4.60; proton

methylene gin oxygen của dom vi đường thứ nhất cộng hưởng ở ðu 4,53 (1H dõy, /

1440 Hz., H,-6') vi 4.47 (1H, m, Hi-6"); proton anomer của đơn vị đường nảy cộng hưởng ở 61 4.92 (1H d J 8.0 Hz: HL") Gia tr) J 8.0 Hz cho thay dom vj durimg thứ nhất cô cẩu hình là /- D-glueopyranose Đơn vị đường thứ hai có proton methylene

gắn oxygen cộng hưởng ở ổy 4.50 (1H mm H„-6”) va 4.33 (IH m, Hy-6"); proton

H

trị.11.5 Hz cho thấy đơn vị đường thử bai có cấu hình là /- D-glueopyranose

Phd "C-NMR DEPT 90 va DEPT 135 (phụ lục le và 1d) của hợp chất CT1 chơ thấy sự hiện điện của 42 carbon, gôm tám nhóm metyl, mười nhóm methylene,

đắp, Ngoài ra, phd “C-NMR cia CTL côn cho thấy tin hiệu carbon anomer của hai đơn vị đường /- D-glucopyranose công hưởng ở õc 105.1 (C-I') và 106.0 (C-I”)

Phi HMBC cho thấy proton anomer của đơn vị đường thứ nhất ở ổn 4.92

(1H, á, 7 80 Hz: H-I') tương quan đến carbon ở ốc 88,9 (C-3) nén C-1" gin voi

mười tám nhóm methine và sáu carbon tử

-3) cho thay carbon anomer (C-1") của đơn vị đường thử hai

gắn với oxygen tại C-2' Các tương quan HMBC được trình bảy trong hình 3, và bảng 3

Phố HSQC cho thấy tương quan một nổi của proton va carbon, nén cho phép xác định được độ chuyển địch hóa học của các proton và carhon tương ứng trong hợp chit CTI, có so sánh với ải liệu tham khảo 9

Phỏ COSY cho phép xác định chính xác tín hiệu cộng hướng các pruton của đơm vị đường thứ nhất, nhờ tương quan COSY của chuỗi H-I!/ H-2/ H-3⁄/ H—/ H-

xố ghép / 7.0 Hz, xắc nhận lI-4” ở vị tí trục nên oxygen t

ở tí xích đạo (được trình bảy trong hình 3.2) Tương tự don vi đường thứ nhất tín hiệu công

hướng ở õu 4,31 (H-4) xuất hiện đạng mỗi đôi đôi với hằng số ghép 8.0 Hz, xác

nhận H-4” ở vị trí trục nên oxygen tại C-4” ở vị trí xích đạo Tín hiệu cộng hưởng ở

$1 4,92 (H-1') xuất hiện dạng mũi đôi với J 8,0 Hz, cho thấy H-I" và H-2' đều ở vị

triụe

Tương tự như đơn vị đường thữ nhất, giá trị ổu của các proton trong hai đơn vị đường này được xác định là glucopyranose, dựa vào các phản tích về dữ liệu phd

(được thể hiện trong bảng 3.I) có sơ sánh với tải liệu tham khảo!!! Các si é

"HENMR và ''C-NMR của hợp chất CT1 được trinh bay trong bang 3.1

1s

Loại C

CHOW

trúc lập thể của hợp chit CTA, Phổ ROESY của CT1 (phụ lục 1h) cho thấy H-Š

xác nhận cấu trạng zrans của vòng A và vòng B, Tương tự như vậy, H-]8 tương tác

với I-13, tương quan nảy xác nhận câu trạng rans của vòng B và C đồng thời

phía với nhóm metyl C-30 (hình 3.2): H-30 tương tác với H-12 tương quan này xác niin hydrogen tai C-12 6 vj tri trục nến nhóm ~OH gắn tại dạo

3 phải ở vj trí xích Phổ ROESY của CTI côn cho thấy tương quan của các proton trong hai dom

xi đường Proton HI” tương tác đến H-3 xác nhận oxygen gin tai C-3 ở vị trí Ø(3- (0-7) H-2" tương tắc I-4' xắc nhận hydrogen H-‡' ở vị trí trục; proton LI-]” tương

tác đến II-3* xác nhận H-3” ở vị trí trục; H-3" tương tác đến H-4” nên H-4” ở vị trí

cđược cõ lập trong cây có the

Hình 3.1, Tuong quan HMBC vi COSY quan trong của hợp chất CTL

”

3.3 Hợp chất CT2

Hop chất CT2 được ô lập từ phân đoạn CT-I (bảng 2.2 2.3), la chat bột vô

định hình không máu, tan hoàn toản trong methanol

Hợp chất CT2 có các phổ nghĩ

~ Phố LIRMS (phụ lục 2a) cho mũi ion của phân tử giá với s⁄ 639.44720 [M+HI]"

= Pho H-NMR (CD,OD) (phy lục 3b và bảng 32)

= Pho C và phổ DEPT-NMR (CD:OD) (phụ lục

Biện luận cấu trúc

Khối phổ phản giải cao của hợp chất CT2 (phụ lục 2a) cho mũi ion của phân

tử gi, với nưz 639.472 [M+H]", phủ hợp với công thức phần tử C/uHs

“Tương tự hợp chất CT3, phổ 'I-NMR (phụ lục 2b) của hợp chất CT2 cũng

cho thấy sự hiện diện của tám nhóm proton metyl cộng hưởng trong khoảng ö¡ 0.90

GH, s, H-I): 1.00 3H, s, H-19): 1.17 3H s, H-21): E70 GH s, H-26): 1.64 GH,

3, 1-27); 1,35 GH, 5, 1-28); 1,02 GH, 5, H-29); 1,11 GH, s, H-30), Ngoài ra, phổ

“H-NMR còn cho thấy sự hiện diện của mét proton methine olefin -CH=C<, voi ii

5.16 (IH, f.J 7.0 Hz) Khi so sinh các tín hiệu cộng hưởng cia proton trén phd của hợp chất CT2 tương tự hợp chất CT

Khác với hợp chất CTH, phổ HI-NMR của hợp chất CT? cho thấy sự hiện diện của các polon của một đơn vị đường glueopyranose, bao gằm các tin hiệu sau;

các proton methine gân oxygen, cộng hưởng trong khoảng ổu 4.00 đến 5.15 ppm: proton methylene giin oxygen cộng hưởng ở proton anomer;

của đơn vị đường này công hưởng 6 6 4.8 (1H, đ, / &Ø l2; H-I9, Giá trị J 8.0 Hz cho thấy đơn vị đường có cấu hình là đ- D-glucopyranose

Phố ''C-NMR (phụ lục 2e) và DEPT-NMR (phụ lục 24) của hợp chất CT1

đồ llly các tỳ liêu chng hướng trang ông với 3 cụ bon; rong dé ef thy carbon

32

lục

Bảng 3.2 Số liệu phổ 'II-NMR và ! CT2 (CD/OD)

- iy Tong quan LoạiC (opm kel (ppm) Be) AGH) | mec (0)

¡_ | Trường Danoc SỈ Pham TP HÓ.CHỊ-MINH, THU VIEN

#9: Tin hiệu công lường đ của Có

Hình 3.4 Tương quan ROISY quan trọng của hợp chất CT2

AA Hop chất CTS

Hop chat CT3 thủ được được tir phn doan CT-EAIV voi các đặc điểm như sau

> Chất bột võ định hình mẫu vàng nhạt, tan hoàn toàn trong dung mỗi methanol, acetone

> Hign hinh vết mâu vâng khí soi UV, vất màu vắng với dung dịch H:SO 20%, sẩy nông

Pho 'H-NMR ctia hop chất CT3 cho thiy có sự hiện di

thơm trong khoảng 6-8 ppm, trong đó proton nhiin thom 61 6,18 (IH: đ; tia nam proton nhân J 24

‘meta vi proton nhân thơm ở 81 7.54 (1H; d: J 2.0: H-2') ehiimg 16 ba proton nay &

các vj tri 1.2.4 trên nhân thom B, Ngoai ra, phố 'H-NMR côn cho thấy sự hiện diện

của một proton nhóm hydroxyÌ kiểm nỗi

ấn 13:7 và proton của nhém methoxy! tại ổn 3.77

Phd NMR cia bop chit CT3 cho thấy có sự hiện diện của mười sâu

‘carbon trong khoảng ðc 100-170 ppm trong đồ carbon carbonyl cộng hưởng tại 8c

.oxygen cộng hưởng tại ốc 59.6,

Các dữ liệu phổ trên xác nhận hợp chất CT3 có khung sườn lavonol, Phé HMBC cho thiy proton cua nhém methoxy! (OCHs) twong quan vii

‘carbon ốc L37,6 xác nhân nhom OCHS gin vai carbon tai ốc 137.6 (C-3)

Khi so sinh di ligu phổ hợp chất CT3 với 3-methoxyquercetin đã được công

củ cấu trúc của hợp chất 3-methoxyquercetin Hợp chất CT3 cùng là hợp chất lần

đầu tiên được tâm thấy trong cây cỏ the

Hop chất CT4 được cô lập từ phân đoạn CT-FAIII là chất bột võ định hình, không mã

tan hoàn toàn trong chloroform, hign hinh UV mâu tím, trên bản mỏng

có R; 0.50 với hệ dung mỗi giải ly CHCH: : CH›COCH:= 6:4,

Hop chất CT4 có các phố nghiệm như sau:

= Phd 'H-NMR (CDCh) (Phu lục 4a và bảng 3.4)

= Phd "C (CDCI) (Phy lye 4b và bảng 3.4)

= Phd HSQC, HMBC, COSY (CDCI) (Phi lục đc 4d, Se va bing 3.4), Biện luận cấu trúc

Phố 'HI-NMR (phụ lục 4a) của hợp chất CT4 cho thấy những mũi công hưởng với sự hiện điện của hai nhóm -CH ở öu 1.16 (BH, s, H-|5) và 1.20 (3H d, J=740

¡ 5,13 (IHL, brs) và (CHeEC<,C-14)

MR (phụ lục 4b) kết hợp với phê HSQC (phụ lục 4e) của hợp chất CT4 cho thấy những tín hiệ

MZ.- H-13), Ở vũng từ tường thấp xuất hiện hai tin hiệu có

13 (LH, brs) cho thấy đây là hai proton olefin của

hướng tương ứng với 15 carbon trong đó có bốn

nhóm ~CH- sáu nhóm >CH-, hai nhêm -CHs và ba carbon tứ cấp Ở vùng trường

ở ốc 140.1 (C-10) va 117.9 (C-14), Ngoai ra còn có ba tín hiệu carbon liên kết với

it CT Proton olefin & i 8.13 (1H, brs) vit $.23 (IH, brs)

có tương quan với carbon ở ốc 1174

2

và ðu 1.87 (1H, đ.J=5.5 Hz) có tương quan với carbon ở ốc 50.6 Các tương quan HSQC duge trình bảy trong bảng 3.4

Phé HMBC (phy luc 44.) cho thay hai proton Hy-14 [6115.13 (1H brs) va 5.23 (1H, | cổ tương quan với carbon & Be $5.7 (C-1) vi carbon & đc 38.2 (C9),

nhận nhóm vinyl gắn ở carbon C-10 Proton ở ổ 4.21 (1H; ør) có tương quan với

a phổ COSY (phụ lục 4e) cho tương tác spin-spin giữa H-1 H-2 và H-3 từ đỏ giúp khẳng dinh vj tri ~OH tai C-

Nhóm methylene [õu 1.83 (IH, d J=5.5 Hz) va 4 2.20 (IHL d, J=6.0 Hz)] 66 tương quan với carbon 6 8c 78.6 (C-4); 48,6 (C-S) va 23.6 (C-15); ding thi proton

AC Proton nhém methylene H-6 [61 (0.90 1H m) va (1.87, 1H, đá, /=5,0, 16.0)]

1 và C-12, đồng thời proton H-7 ¢6 tong quan với C-12 va proton

TT cổ tương quan với C-13 và C-6,

So sánh dữ liệu phô của hợp chất CT4 vai hop chit minimoside " cho thiy e6

sự tương đồng chứng tỏ cầu trúc của hai hợp chất này có phần tương tự nhau ngoại trữ đơn vị đơn vị đường glucopyranose trong hop chit minimoside, Tuy nhiên có

một số giả trị độ dịch chuyển hóa học ốc của C-7, C-8, C-10, C-13, C-14 thay dai

giữa hợp chất CT4 va minimoside (sai khic Adc = -2.9: 2.8; 5.8: 4.8;

+30) được trình bay trong bang 3.4 Từ đỏ, chủng tôi để nghị hợp chất CT4 có th có cấu trúc

"

hợp chất CT4 (CDCI) vi hop chất minimoside (CD:OD)

1 Hợp chất CTS

Hợp chất CT5 cỗ lập được có các đặc điểm sau:

Là chất bột vô định hình, tan trong ede dung mdi ethy! acetate, methanol Phỏ 'H-NMR (phụ lục 5a)

Phi "C-NMR (phụ lục Sb)

Phổ HMBC (phụ tue Se)

Biện luận cấu trúc

Trên phổ 'H-NMR của hợp chất CTS cho thấy có sự hiện điện của ba tín hiệu proton thơm cộng hướng ở ðn 7.02 (1H d, J = 8.0 Hz) va 6.71 2H, đó, Jị=? HZ, Jy nhỏ) chứng tỏ hợp chất CTS phải chứa nhân benzen với ba nhỏm th ở vị trí 12.4

không tương đương của nhỏm methylen, dạng mũi đổi ở ổu 3.95 (IH đi, J= 9.5, 3.5 112) va 3.74 (1H, did, = 9.5 Hz, Jo = 7.5 He),

Trên phổ ''C cho thấy trong ving 110-160 ppm có sy hign dign eda ba nhom methine >CI- nhân thơm ở ốc 118.0, 121.6, 127.7 ppm, ba tín hiệu của carbon tứ cấp CC<) tại ốc 154.8,138.1 132.3 Tin higu carbon của CH: ở ốc 15.8 Một tín

hiệu ở ốc 69.8 là tin hiệu carbon sp` gắn với nhỏm OR (carbon sp” gắn với nhỏm

O11 cỏ ốc khoảng 63.0 đến 63.0 pm)

Trên phd HMBC cho thấy proton của nhỏm CHỊ tại öu 2.28 (3H s) có tương

quan dén de 118.0 (C-2), 121.6 (C-6) 138.1 (C-1), nên nhóm CH; gin véi carbon

C1, Ngoai ra, proton 6 1 6.71 2H, dd, Jị=7Hữ, › nhỏ) cỏ tương quan với carbon đốc LIR0 (C-2), 127.7 (C-5) 158 (C-7) Các tương quan HMBC như trên xác hận vị trí nhóm ~CH trên vòng benzen

Proton ở ðn 7.02 có tương quan đến các catbon với ốc 138.1 (C-1), 154.8 (C- 3), 36.7 (C-8) Tương quan trên xác nhận vị trí nhóm >CH- trong hợp chất đồng thời H-8 [3.23 (1H, Jị= 3.5 HZ, Jà = 7.5 Hz)| cũng cho tương quan với C-5, Proton

ôi 6.71 (2H, đả (=7 Hz Jy nhỏ) có tương quan với carbon & 8c 36.7 (C-8) 15.8 (C-9), Proton & 61 1.3 (3H d) có tương quan với carbon Be 36.7 (C-8), 69.8 (C- 10) 127.7 (C -4) Teén phd côn cho thay tin higu proton ở ổu 6.72 có tương quan với carbon & Be 121.6 (C-6), 138.1 (C-1), 154.8 (C-3), Carbon C-3 có độ địch

Từ các phân tích như trên, cho phép đự đoán cấu trúc hỏa học của hợp chất

'CT§a hoặc CTSb Các số liệu phỏ cộng hưởng tử của hợp chất CTS được trình bảy trong bing 3.6

Hình 3⁄8, Tương quan IMBC cia hop chất CTS

n

Logic

3.6 Hợp chất CT6

Hop chất CT6 cô lập được có các đặc điểm sau:

La chat bột vô định hình, tan trong các dung mỗi DMSO

Phố 'H-NMR (phụ lục 68)

Phố C-NMR (phụ lục 6b)

Biện luận cấu trúc

Phố 'H-NMR (phụ lục 6a) của hợp chất CT6 cho thấy sự hiện diện của hai nhóm «CHs 6 ôu 0.97 (3H s, H-15) và 1,15 (3H, 4,7 7.0, H-13), Phd 'H còn chó thấy hai tín hiệu proton olein của nối đôi (CH›=C<) có ðu S.13 (1H âr4) và 5.23 (IH, brs)

Phé "C-NMR (phy Ive 6b) cia hợp chất CT6 cho thấy những tin hiệu cộng hưởng tương ứng với 15 carbon trong đỏ cỏ bổn nhỏm ~CH¡-., sảu nhỏm >CH-, hai

nhóm -CHò ba carbon tứ cấp, một nhóm carbonyl & 8¢ 178.6 (C-12), mot ndi doi

>C=CH: ở ốc 142.4 (C-10) và 114.6 (C14) Ngoài ra, côn cỏ tin hiệu cộng hưởng của ba nguyễn tử carbon liên kết với oxygen 6 ốc 77,5 (C-4), 80,5 (C-Ñ) và 69.5 (C- lactone,

tiữnimsiöe di được cổ lập thước đấy, nhận JIỖy đô liệu phố của hợp thất CT6

tương đồng với dữ liệu pl moside đặc biệt tại proton

metyl H13 Tứ đó chúng tôi đề nghị hợp chất CT6 cỏ hỏa học lập thể tương ding

xới khung sesquiterpene lactone cua hợp chất minimoside

hỗ của phẫn aglycone của mí

CHUONG 4 KET LUAN

Từ mẫu cây có the thủ hải được ở huyện Lon

Hỗ tinh Vĩnh Long và dun

hoàn lưu toàn bộ bột mẫu cây khô với methanol được dịch chiết methanol Dũng

va ethyl ecetate Bằng kỹ thuậi sắc kỷ cột trên sliea geÏ pha thường, pha đào, sắc kỳ

)-trihydroxydammar-24-en-12-0-f-D-glucopyranosid (CTI) tir cao n=

thuật sắc ký ca gel pha ing «td 66 Lap được một hợp chit flavonoid

yl acetate bằng,

thường, pha đáo sắc ký bản mông

(CT3), bai hợp chất sesquiterpene lactone và một dẫn xuất hydrocarbon thơm, trong

đỏ hợp chit CTS có cau trúc CTSa hoặc CTSb

“Cấu trúc của các hợp chất trên được xác định dựa vào các phương pháp phổi nghiệm hiện đại như 'H-NMR '°C-NMR, DEPT, HSQC HMBC, COSY HRMS,

Hướng nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi là tiếp tục khảo sát các phản đoạn

“ao côn lại và tiến hành thăm đò hoạt tính sinh học các hợp chất đã cô lập được góp phan lim sang tỏ thành phin héa hoc và nâng cao giá trị sử dụng của cây cỏ the