Góp phần tìm hiểu thành phần hóa học của cây Đinh lăng răng polyscias serrata balf họ nhân sâm araliaceae

KHOA HOA xk* GÓP PHẦN TÌM HIỂU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐINH LĂNG RĂNG- POLYSCIAS SERRATA BALF., HO NHAN SAM ARALIACEAE _——_ TP... KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SU PHAM TP HCM KHOA HOA

xk*

GÓP PHẦN TÌM HIỂU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐINH LĂNG RĂNG- POLYSCIAS SERRATA BALF., HO NHAN SAM (ARALIACEAE)

_——_ TP HỒ HIMINE

Tám tắt

Summary

L TINH CAP THIET CUA ĐỂ TÀI

II MỤC TIÊU CUA DE TAL

IIL CÁCH TIẾP CẬN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

IV PHẠM VI NGHIÊN CỨU

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐẠT ĐƯỢC

A PHAN TONG QUAN

1 MO TA THUC VAT

2 CAC NGHIEN CỨU VỆ DƯỢC TÍNH

3.CÁC NGHIÊN CỨU VỀ HÓA HỌC

12 Khảo sát cấu trúc của hợp chất S

1.3 Khảo sát cấu trúc của hợp chất SE 3

2.1 Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn

3.2 Thử nghiệm hoạt tính kháng ung thư

C PHAN THUC NGHIÊM

1 CO LAP HOP CHAT SE 1

3 THỦ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC

3 KIẾN NGHI KET QUA

Trang

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG

n để óp phẩn tìm hiểu thành phẩn hóa học của ¢ ây Đỉnh lăng răng ~ Polyscias serrata Balf., ho Nhân sâm (Araliaceae)

~ Nhận danh cấu trúc của một số hợp chất hữa cơ cô lập được

“Thưt nghiệm hoạt tính sinh học

serrata Balf Riêng hợp cÍ

xuất hiện trong chi Polyscias

le: Contribution to the study on chemical constituents of

Cooperating Institution(s): Organic Chemistry Laboratory, Department

‘of Chemistry, UNS, National University of HoChiMinh City, Duration: from 1" June 2005 to 1" June 2

- calleton and wn the plant

= Isolation of some chemical constituents in Polyscias serrata Balf, by chromatoghraphy methods

Structural elucidation of compounds isolated

~ Assay some biological activities on compounds isolated and extracts such as methanol, chloroform, petroleum ether

3 Results obtained

We isolated 3 compounds from Polyscias serrata Balf These compounds 2), (8E) Yydroxyalkanoylamino)-8-alken- l.3 fnicures were determined by specroenpic mehods (R, Mã NMR, HSQC, HMBC)

wg these compounds the compound (1) was the first time seen in the

Từ lầu, trong dã

bệnh Ngành hóa thực vật đã góp phi

những uất mãi hầm phục vụ ho nhục ch bệnh nộ ách hi

du thành phẩn hóa học của các cây thuốc là một trong những

n ở nhiều công ty được nhằm tìm ra những hợp, chải ự nhiên có huạt nh inh học

Nam là nước nhiệt đổi có nguồn thực vật phong pl

“Tí lâu nhiễu loài cây cô được nhân dân ta sử dụng rất cổ hiệu quả tron đi

tràng, sốt rét, viêm nhiễm, v.v Để sử yên này, viếc nghiên cứu thành phẩn hóa học các

gian và y học cổ truyền đã dùng cây cỏ để c không nhỏ vào việc Khám phá ra

MỤC TIỂU CỦA ĐỀ TÀI

một số hợp chất hữu cơ cô lập được,

CÁCH TIẾP CẬN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Qua các tài liệu tham khảo, tìm hiểu về thành phẩn hóa học, dược tính của các cây Đình lãng thuộc chỉ Polyscias cũng như các phương pháp thực nghiệm, nhận danh và xác định cấu trúc chất hữu cơ

hóa học và dược tính của một số loài thuộc chỉ

~ Thu hai mẫu và nhận danh

VI CÁC KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐẠT ĐƯỢC

A PHAN TONG QUAN

ch med Việ Nam như Polyscias ta[Pantonn Balt (Dinh lang itn), Polyscias filicifolia Bail (Binh ling ring), Polyscias fruticosa (L.) Harms (inh Ling), Polyscias grandifotia, Polyscias guilfoylei Bail (Đỉnh lãng

MS, Polyscas scutellaria (Burm, f.) Mert trổ), Polyscias sambucifolia’

(Dinh ling dia), Polyseias serrata Balt, (Dinh King ring)" Ngoaii ee loai thude ehi Polyscias ở trên, trên thể giới còn có một loài khác thuộc chỉ Polyscias như: Polwseiat amplifolia ' crispatum !°Ì,_Polyscias camingiana (C Presl) Fern.-ViILPP, Polysciax

Polysclas

Hình I

Theo bác sĩ Huỳnh Ngọc Tựng '”, các loài cây Đỉnh lãng được trồng

ở Việt Nam đều dùng làm thuốc được Tuy nhiên có một số loài cây Đỉnh lãng vẫn chưa tim thấy tài liệu nghiên cứu về được tính một cách cụ thể

Trong số các cây thude chi Polyscias ở trên thì sự Đình lãng Polyseias fruticosa (L ) Harms, duge nghién cứu nhiễu al thành phẩn hóa học cũng như được tính Bên cạnh đó cũng có một số nghiên cứu vẻ dược

Sn Polacies iejolia Bai, Povscias uilfesti, Polscies suellode (Burm, £) Mert, Polyscias amplifolia, Polyscias dichroostachya, Polyseias

tính u

fulva va Polyscias murrai (E, MuelL) Harms

2 1, Polyscias filicifolia Bail

Dịch trích từ sinh khối của tế bào Polyscias filicifolia có khả năng kháng rất manh ching vi khuiin Staphylococcus aureus và kháng yếu với 3 chủng Micrococcus flavus, Streptococcus pyogenes ¥a Streptococcus agatatiae " Dịch tích 40% ctanol từ sinh khối của những tế bao cay Polyscias filicifolia Rhodiola rosea, Ungernia victoris, Panax ginseng được nuôi cấy áp dụng lên mạnh ề kháng độ a

2 2 Polvscias fruticosa (L.) Harms

ây Đình lãng có tác dụ

với một số yếu tố như: kiệt sức, nồng,

Các thí nghiệ lo thấy cây Đỉnh lăng có khả năng làm

nạ tiết niệu gấp trê h thường, làm tăng sức để kháng của chu đố với các bức xa siêu cao ting, kéo dai thời gian sống của chuột trên người cho thấy cây Đình lăng làm tăng khả năng chịu đựng của bộ đội vận động viên thể thao

Ngoài ra, cây Đinh lãng còn có tác dụng chữa ho, kiết ly, phong thấp, mun nhọt sưng tấy, sốt

lạ tác dụng của thuốc chống sốt rét cloroquine Khác vai Nhân cm, Định lăng không làm tăng huyết áp, mức độ độc chỉ bằng nhân nữa Nhân sâm

ác hợp chất polyacelen như heptadeca-1.8 (E)-dien-4/6-diin- 3I0-didluich Aưpc el ây Panax vietnamensix và Polyscias [ndicosa cho thấy clbicans nhưng không kháng được chủng khuẩn Gram âm Đình lăng giúp cơ thể người bị suy mòn nhanh chóng hồi phục, ăn ngon, ngủ tốt tăng cân Dùng Đỉnh King nấu nước uống hàng như thuốc bổ

hân rẻ tới thì I kg được sao nóng với nước gừng (30-40 g cũ gừng giã nát với có thể dùng 50 g lá tưới (hoặc 30 g

100 ml nước, vắ lấy nước ôi uớ lên Định lãng dã thứ)

3 3 Polysciax gailfoytei 9L

Lá tưới, dịch trích nước và dịch trích diclorometan của cây Đỉnh lãng

tưới đã sao nóng rồi) Đối với

2 4, Polyscias scutellaria (Burm f.) Merr

“Cao trích có chứa saponin eiia ey Polyscias scutellaria 4p dung trén albino cho thay có khả năng làm vết thương nhanh lên đa non

3 5 Polyscias amplifplia

CHATURVEDULA V S PRAKASH và cộng sự "” đã cô lập được

từ quả 4 hợp chất là acid 3-O-B-D-galactopyranosyloleanolic: acid 3-O-| D-galactopyranosyl-(1>4)- B-D- xylopyranosyloleanolic và acid 3-Ó-B-D- khi thử nghiệm heat tính chống lại dòng t thư buồng trứng A2780 ở người thì chúng, hoạt tính tướng đối với gái trị ICóp là 6.7-10/8u/ml

tế bào ung thư như P-388, L—

1210, U-997, HL nén of thể làm hành huốc chữa bệnh ung thư 2.7 Polyscias da."

được dùng trong y học dân gian để chữa lành vết thương

2 8, Polyscias murrayi (F Muell.) Harms "”!

Mot s6' din xusit cia acid 3-(4-hydroxyphenyl) propanoie được cô lập

từ cây Polyscias murrayi nhu 3-(4-hydroxyphenyl) propionyl choline, acid 3.4 i-O-3-(4-hydroxyphenyl)-1,5-dihydroxypropionyleyclohexancarbox lic,

dihydroxypropionyleyclohexancarboxyli -(4-hydroxyphenyl) propanoie

có mã năng ức chế hoạt tính xúc tác của men tự ineledkie inde T

i nay, các nhà khoa học đã khảo sắt thành phẫn hóa học của

3.1, Polyscias filicifolia Bail

Nim 1980, DALAKI SHVILI Ts, M va cộng sự '”! đã cô lập được bai acid béo đã cô lập được từ rễ cây Panax gửnseng 6 năm tuổi

Năm1993, LƯTOMSKI và cộng sự!" đã cô lập được từ rễ 5 hợp chất falearinol (5), heptadeca-l.8-(E)-đien-4.6-diya-3,10-diol (6), heptadeca~ 1.8-(E)-dien-4,6-diyn-3-ol-10-on (7), heptadeca~l.8-(Z)-dien-4,6-diyn-3- 6l-10-on (8), panaxydol (9)

* Acid 3-O- [[B-D-glueopyranosyl(I~»4), B-D-glucopyranosyl(1>2)]-B-D- glucuronopyranosyl] oleanolic (14)

+ 3-0-{B-D-glucopyranosyl(1>4)- B-D-glucuronopyranosyl} oleanolie acid- 28-0-B-D- glucopyranosyl] ester (22),

+ Acid 3-0-{[B-D-glucopyranosyl(1+2)-B-D-glucuronopyranosyl} oleanolie (23)

3.3 Polyscias scutellaria (Burm f.) Mert

Năm 1988, S PAPHASSARANG cing cOng sự !! đã cô lập được hợp chất 3-0-f-D-glucopyranosyloleanan (24)

Năm 1989, S, PAPHASSARANG cùng công sự '*' đã cô lập từ lá các hợp

2003, CHATURVEDULA V S PRAKASH va cng sự '”! đã cô lập được ta 4 hợp chất là:

* Acid 3-O-B-D-galactopyranosyloleanolic (27),

* Acid 3 B-D-galaelopyranosyl-(l»4)- -D-galactopyranosyloleanolic (28)

‘+ Acid 3-0-(}-D-galactopyranosyl-(14)- B-D- aylopyranosyloleanolic (29) + Acid 3-0-B-D-galactopyranoyyl-(1>4)- o-1.~ arabinopyranosyloleanolic (30)

Năm 1990, N GOPALSMY cùng cộng sự 'Ìđã cô lập được 4 hợp chất

# 3-0-a-L-arabinopyranosyl}hederagenin (31)

#3-0-{-L-ramnopyranosyl-(1+2)-u-L ~arabinopyranosyl|hederagenin (32),

# 3-0-[f-D-glucopyranosyl-(1->2)-c-L-arabinopyranosyl|hederagenin (33) + 3-0-{a-L-ramnopyranosyl-(1->2}-o-L-arabinopyranosylhederagenin— 28-0-f-D+ -gucopyrani (4 Tác gid LEE KYUNG ©" cho biết các hợp chất hederagenin và dẫn xuất 3-Ó glieoide của hedersgenin có kh năng ức chế nhiều dòng tế bào bệnh ung thư

3.7 Polyscias murray (F Muell) Harms

MALCOLM S BUCHANAN va cong sự ""!da ed lp ti cây Polyscias

c chớp chất acid 3,4-di-O-3-(4-hydroxyphenyl)-1.5- dihydroxypropionylcyelohexanearboxylic (44) acid 3.5-di-O-3-44- murrayi

1) propanoie (46)

3.8, Polyseias nodosa

Nam 1913, van der HAAR va cng su! da,

chất sapogenin có công thức phân tử C„HuO

1

inure °

đ)

a9

3)

“aN ' e

WO rà

¡

oe Sa A0) en

B PHAN NGHIÊN CỨU

Việc khảo sắt th nh phẩn hóa học của cây Đỉnh lãng răng được thực hiện với các phương tiện kĩ thuật và hóa chất như sau:

~ Điều chế các loại cao: cao eter dẫu hỏa, cao cloroform, cao metanol bằng cách trích pha rắn

~ Phân lập cấu tử hữu cơ bằng:

+ Sắc kí cột nhanh với siica gel 0.4-0,6 mm, Merck

+ Sắc kí điều chế loai silica gel 60 Fass, Merck

+ Sắc kí lớp mồng loại 25 DC- Alufolein 20x20 em, Merck

+ Đo điểm nóng chảy trên khối Maquene

* Phổ hồng ngoại (II) ghỉ trên máy quant phổ hồng ngoại Bruker IFS + Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ghi trên máy Bruker 500 MHz ('H-NMR)

ya 200 MHz (""C-NMR)

~ Dung môi:

Bter dau hỏa sử d

~ Thuốc thử hiện hình bảng mỏng là acid sulfuric

(Qua trình cô lập các cấu tử hữu cơ được thực hiện bang sie kí cột và sắc

kí bảng dày, sắc kí lớp mông Phân đoạn nào cho vết rõ khi phun acid sulfuric đặc thì mới được khảo sát tiếp

~ Thu hái và điều chế cao

Đình lãng răng được thu hái ở Bình Dương và được nhận danh bởi ThS Liêu Hỗ Mỹ Trang bộ môn Hóa Thực Vật rường Bai Học Y Dược Tp

ái, lá khô đến khối lượng không đổi (1.6 kg) Mẫu ki cay được trích kiệt bằng etanol ở nhiệt độ phòng Budi dung moi thu được cao etanol thô (80 g)

Tit cao etanol thd, trích pha rắn chúng tôi thu được cao eter dầu hỏa (6g), cao cloroform tổng (11.3 gg) và cao cao metanol (40g) Sắc kí cột trên các cao này, chúng tôi thu được các hợp chất được đặt tên là SE 1, SE 2, SE 3

1 KHẢO SAT VÀ BIỆN LUẬN CẤU TRÚC CÁC CHẤT HỮU CƠ CÔ LẬP ĐƯỢC

1.1, Khảo sắt cấu trúc của hợp chất SE 1

Hap chất SE I thu được từ phân đoạn E4 của ca

Tĩnh thể ình kim không màu

Điểm nóng ch:

- Phd IR (KBr (phy lve 1), vem": 3390 (0-H), 2967 (C-H), 1637 (C=C), Khối phổ MS (phụ lục 2): cho một mũi m/s = 424, ứng với phân tử mẹ mất một phân tử H,O nên KLLPT của SE ] là 442,

Phổ "H-NMR (CDCl + CD,OD, 500 MHZ) (phy luc 3, 3a), ö ppm: 5.62 (=CH), 330 (CH-OH)

Phổ '`C-NMR kết hợp với DEPT (CDCIø+ CD.OD) (phụ lục 4, 4a) ö ppm: 139.26 (=CH), 125.70 (=CH), 78.78 (@CH-OH), 7067 (-C-OH), 520-140 (ese

10 eter dau hỏa,

« Biện tain căn tú

Phổ I cho các mũi hấp thu đặc trưng ứng với đao động (3390 em |),

nhóm O-H

đó có 6 carbon tứ cấp (một carbon tứ cấp ở dạng C-OH, ä= 70,67 pm), 5

He (8 = 139, 26 va 125,70ppm).1 carbon loại >CH-OH (= 78.78 ppm) va 7 carbon eai CH,

Hợp chất SE 1 e6 KLPT 442 phù hợp với CTPT CHO Phổ 'H-NMR xuất hiện mũi công hưởng ứng với proton olefin (=CH) tai ä=5,62 ppm Phổ 'C-NMR kết hợp với DEPT cho thấy có 3 carbon

cH

Như vậy hợp chất SE 1 có một nối đôi CH=CH và có 2 nhóm -OH Trong đó một nhóm -OH gấn trên carbon tứ 70,67 ppm) va một nhóm -OH, gắn trên carbon tam cấp (ốc = 78.78 ppm)

Bên cạnh, phổ 'H-NMR xuất hiện 6 mũi đơn (ö:

và 0.845 ppm) và một mũi đôi (ä = 0,900 ppm)

các proton của nhóm metyl -CH›

Phi HSQC (phy luc 5) cho thấy có 2 proton H, và Hạ lẫn lượt cộng hường

tại 0.3665ppm (d, J= 4Hz) và 0 5960 ppm (d, J=4Hz) tương quan với một

carbon thuộc loại CH; cộng hưởng tại 29.9 ppm, Đây là những mũi công tưởng đậc tưng của 2 rte sem Cú gắn ân ông cclogrsnn Một số trilerpen có khi ccloartan thường có một vòng 3 cạnh

Cy Hai proton gem gắn tên cylopopyl uất hiện he nd ap đổi ở vũng từ trường cao trong 'H~NMR với hằng số ghép J

SE 1 mộ vietfen số khung cơ Ma — một nối đối -C

so sánh được trình bày trong bang 1

‘qui so sánh cho thấy có sự trùng khớp Do đó chúng tôi để nghị hợp

là (23E)-eycloart-23-en-3.25-diol

Bảng 1 Phổ NMR của cycloar©-23\

Vii

carbon | EP SAFON oy 38 25-diol

at có thể hoán đổi lẫn nhau

[ Vite proton | THAME

1.35 (my

C14, C-[ C1

7 18 1010) 1,62 C13, C16,)~ 20 -

+ Biện luận cấu trúc của hợp chất SE 2:

Phổ IR cho mũi hấp thu đặc trưng của dao động cuả nhóm O-H (3390

Phổ ''C- NMR cũng thể hiện sự hiện diện của nhận thơm qua các mũi cộng

hưởng trong ppm CH), 137.3ppm (mst earn >¢ công hưởng của carbon anome tại 1032 ppm một mũi cộng hưởng tại 71.5

pm ứng với carhon Ö-Cl ông hưởng còn lại trong vùng

66 - 63.0 ppm ứng vi các nguyên tử catbon của phân tử đường

e mũi cộng hưởng của nguyễn tử carbon của đường được so sánh với các

tử đường glucoz và galactoz

Phổ ”C- NMR kết bu với DEPT (CDCl+ CD.OD) (phụ lục 14, 14a), 5 ), 1309; 129/9 (=CH-), 75,8-72,15 (>CH-O-), 61.24 (~CHạ~

78 (4 cs ), 14,14 (CH

(m, >CH- NHS)

giống với một trong các hợp chất gynuramid Sự so sánh được trình bày trong hằng 5

+ 32 ppm thì cấu hình của nối đôi là £ ?*.*⁄

trúc của hợp chất SE 3 còn được tái xác định bồi các phổ HSQC và HMBC Các tương tác “Jc và `, được thể hiện trong bằng 6, và phụ lục 15,16

Do khối phổ không thể hiện mũi ion phân tử và chúng tôi chưa ghỉ được phổ MS phân giải cao nên chúng tôi chưa xác định chính carbon, Do đồ chúng tôi tạm để nghị cất a

tình

bằng đường kính vòng vô khu:

Ching vi khuẩn eloroform | metanol

po o 7 07 00 0 0 0 j0 Pseudomonas | 1000 aeruginosa 15008 | 0 ue | 0 ° 0 0 | 0 0 | 0

3.2 Thử nghiệm hoạt tính kháng ung thư

Chúng tôi cũng thử nghiệm hoạt tính kháng ung thư trên dòng tế bào MCT-7 (tế bào ung thư vú) đối với 3 loại cao: cao eter dẫu ha, cao clorofrm

Y cao metanol

Các cao được thử nghiệm ở nông độ 100 ppm

I% nó thị cho khả năng kháng phân bào của hợp chất toạt tính khi Í lớn hơn 50V

thử nghiệm được thể hiện trong bing 9

Kết a

(Phân Dungmôi ˆ Trọng lượng

doan | giảily cao (2)

ắc kí cột siliea gel tiền cao eter dầu hỏa Kết quả Ghichú sắc kí lớp

acetate 0-25) thu được SE 1 (E44, 30 mg)