nghiên cứu thành phần hóa học cao n butanol và cao nước của rễ củ bạch chỉ nam millettiae pulchrae kurz fabaceae đề cương nghiên cứu khoa học

Kiểm tra tính khiết các hợp chất phân lập được bằng phương pháp thích 225.... Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được.... Nguyên liệu nghiên cứu Nguyên liệu thực hiện ng

BO GIAO DUC VA DAO TAO BỘ Y TẾ

ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

NGUYEN THI HONG HUE

NGHIEN CUU THANH PHAN HÓA HỌC CAO A-BUTANOL,

VA CAO NUOC CUA RE CU BACH CHI NAM (Millettiae pulchrae Kurz Fabaceae)

DE CUONG NGHIEN CUU KHOA HOC

Thanh pho Hé Chi Minh — Nam 2023

BO GIAO DUC VA DAO TAO BOY TE

ĐẠI HỌC Y DƯỢC THANH PHO HO CHi MINH

NGUYEN THI HONG HUE

NGHIEN CUU THANH PHAN HOA HOC CAO N-BUTANOL

VA CAO NUOC CUA RE CU BACH CHI NAM (Millettiae pulchrae Kurz Fabaceae)

KHOA LUAN TOT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Giảng viên hướng dẫn: TS MÃ CHÍ THÀNH

Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2023

ĐẠI HỌC Y DƯỢC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH Độc lập — Tự do - Hạnh phúc KHOA DƯỢC

TP Hô Chỉ Minh ngày tháng năm

MỤC LỤC

\/10I9310iSlNMAddảẢÝŸẳiẳi 3

DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮTT 5222¿2222222221222122211222112212222 e2 5 b.Ise0piei: viec 6 DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐÔ, ĐÔ THỊ 2252 2222222221121 7 2.00065520708887 8

CHƯƠNG I TÔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 5c S222 c6 9

CHƯƠNG 2 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 222222 222222 2222x22xesee 10

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu - - - 2: 22 1220121231123 1 151111511 15511 151111 x2 10 2.1.2 Trang thiết bị nghiên cứu - 2s 211121111111111111 11 1 1 1 te rre 10 2.1.3 Dung môi, hóa chất 55-5: s22 2111111111111 1111211 1111011121211 1x6 II 2.2 Phương pháp nghiên cỨu - c2: 0222122011113 11131 1131113111111 1111 111111 k2 11 2.2.1 Phan lap cac thanh phan cia cac phan doan cao -butanol, cao nuéc bang CAC KY thudt SAC KY =D II 2.2.2 Tinh chế các chất tỉnh khiết thu được từ các phan doan cao n-butanol, 5:00 0 12 2.2.3 Kiểm tra tính khiết các hợp chất phân lập được bằng phương pháp thích 225 12 2.2.4 Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được 12 CHƯƠNG 3 KÉ HOẠCH THỰC HIỆN ©2221 22122212712 1271211211 22 1e 13 KP) (908)-)0/98:)ì5ẳảắáắ 13 3.2 KẾ HOẠCH THỰC HIỆN 2-©222 1225152122711 1112121211211211122 re 13 3.3 KINH PHÍ 22 2sS221221221122112211211121121111 2211121121212 re 13

TAI LIEU THAM KHAO

DANH MUC KY HIEU, CHU VIET TAT

Ký hiệu, chữ viết tắt Chữ nguyên Y nghĩa

UV-Vis m1 Ultraviolet-Visiblc _ — — _ - Tử ngoại - khả kiên _ _—_

HSQC Heteronuclear Single Quantum

HMBC Heteronuclear Multiple Bond ti (tsti‘“‘<‘<‘<z;SOstw™”

“ ,.,Ô,ÔÖÔ Correlation,

NMR_ _] Nuclear Magnetic Resonance Cong hưởng t từhạtnhn _ DMSO Dimethyl sulfoxyde == a si ststi(i‘; OW

DANH MUC BANG

DANH MUC HINH VE, SO DO, DO THI

DAT VAN DE

CHUONG 1 TONG QUAN TAI LIEU NGHIEN CUU

- Néur6 muc tiêu và nội dung nghiên cứu

- Các vẫn đề, khái mệm liên quan

- Tổng quan tỉnh hình nghiên cứu nước ngoài

- Tổng quan tỉnh hình nghiên cứu trong nước

- Các vẫn đề tồn tại cần giải quyết

CHUONG 2 NGUYEN VAT LIEU VA PHUONG PHAP NGHIÊN CỨU

2.1.NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu

Nguyên liệu thực hiện nghiên cứu là cao z-butanol và cao nước của rễ củ Bạch chỉ nam (Radix Milletia pulchrae Kurz) được chiết xuất từ đề tài “Nghiên cứu thành phân hóa học hướng tác dụng chống oxy hóa của rễ củ Bạch chỉ nam” của tác giả Dinh Thi Bach (Luan van thạc sĩ dược học) năm 2020

Ré ctl Bach chi nam (Radix Millettia pulchrae Kurz) 15,0 kg (tuoi) thu mua tai An Giang vào tháng L1 năm 2018 Rễ củ Bạch chỉ nam được thái phiến mỏng và phơi khô (6,0 kg), xay nhỏ đến độ mịn cần thiết Sau đó, được liệu được chiết ngắm kiệt với cồn 96 %, Cao cồn được chiết phân bồ lỏng-lỏng với các dung môi có độ phân cực tăng dân, thu được 4 cao phân đoạn: cao n-hexan (50 g), cao ethyl acetat (17,6 g), cao n-butanol (10 g), cao nudc (900 g) Dé tai str dung cao n-butanol va cao nước để tiếp tục phân tích

2.1.2 Trang thiết bị nghiên cứu

Các trang thiết bị nghiên cứu được trình bày dưới bảng 2.l

Bảng 2.1 Trang thiết bị nghiên cứu

Máy xay dược liệu (Philip) Trung Quốc

Tu say UML-500 (Memmert, model ULM-500, 2005

Cân phân tích 5 s6 I CP-2250 Sartorius d6 nhay 0,01mg

Đèn UV 254 va 365 nm (Vilber Lourmat CN-15-LC)

Cét sac ki long: Cot Phenomenex Gemini C18 (150 x 4,6

mm; 5 um), tiền cdt Phenomenex Gemini C18

Bêp cách thủy Memmert WB-14

Bồn siêu âm Sonorex- Super RK 1028 H

Cân điện tử Sartorious độ nhạy 0,01 2

Đức

Tủ sây chân không Gallentkamp

Máy cô quay Buchii | lit-210S

Máy cô quay Buchi Rotavapor R-220 kèm bộ sinh han tự

động Haake K-20

Nhật

Các dụng cụ thường quy khác trong phong thí nghiệm

10

2.1.3 Dung môi, hóa chất

Cac dung môi hóa chất được sử dụng trong quá trình thực hiện đề tài được thế hiện dưới bảng 2.2

Bảng 2.2 Các hóa chất, đung môi, thuốc thử

Hóa chật, dung môi, thuốc thử Độ tỉnh khiết Xuất xứ Methanol TK HPLC J.T.Baker (Mỹ)

Acetonitril TK HPLC Merck (Đức)

Acid formic TK HPLC J.T.Baker (Mỹ)

n-hexan TK HPLC Schaular (Tây Ban Nha) Dicloromethan TKPT Schaular (Tây Ban Nha) Cloroform TKPT Chemsol (Việt Nam) Ethyl acetat TKPT Schaular (Tây Ban Nha) Methanol TKPT Schaular (Tây Ban Nha) n-Butanol TKPT Schaular (Tây Ban Nha) Acid acetic TKPT Schaular (Tay Ban Nha) Silica gel hat trung binh (40 — 63 um) Merck (Đức)

Silica gel hat min (15 — 40 um) Merck (Duc)

Vanillin sulfuric

Sat (III) clorid

SKLM dung ban Silica gel F254 cỡ hat Merck (Duc)

40-63 wm tráng sẵn trên nền nhôm

TKPT: Tĩnh khiết phân tích

TK HPLC: Tinh khiết dùng cho HPLC

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phân lập các thành phần của các phân đoạn cao #-butanol, cao nước bằng các kỹ thuật sắc ký

Các phân đoạn ø-butanol, cao nước của rễ củ Bạch chỉ nam được phân tách thành các phân đoạn đơn giản hơn Sau đó tiếp tục sử dụng sắc ký cột cô điển và sắc ký cột rây phân tử để phân tách các phân đoạn thu được các hợp chất tỉnh khiết -Sắc ký cột cô điền: sử dụng pha tĩnh là hạt silicagel cỡ hạt trung bình (40 — 63 ym)

và silicapel cỡ hạt min (15 — 40 um)

-Sắc ký rây phân tử (Sephadex LH-20) tách các hỗn hợp chất có kích thước phân tử khác nhau rõ

II

2.2.2 Tỉnh chế các chất tinh khiết thu duoc tir cac phan doan cao n-butanol, cao nước

Tỉnh chế các chất tỉnh khiết thu được từ các phân đoạn cao z-butanol, cao nước bằng các kỹ thuật sắc ký thích hợp như sắc ký cột pha đảo, sắc ký lớp mỏng điều chế và phương pháp HPLC điều chế Ngoài ra còn có thê sử dụng phương pháp kết tinh lại trong dung môi thích hợp dựa vào sự thay đối tính tan trong các dung môi khác nhau đề tính chế chất tinh khiết

2.2.3 Kiểm tra tỉnh khiết các hợp chất phân lập được bằng phương pháp thích hợp

Các chất phân lập được kiểm tra độ tinh khiết bằng phương pháp SKLM với 3 hệ dung môi có độ phân cực khác nhau Phát hiện các vét bằng cách quan sát dưới đèn

UV 254 nm, UV 365 nm, nhúng thuốc thử VS va UV 365 nm sau khi nhúng thuốc

thử

Chất được xem là tinh khiết trên sắc ký lớp mỏng khi trên cả 3 hệ dung môi đều cho một vết gọn và duy nhất trên sắc ký đỏ

2.2.4 Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được

Các chất tỉnh khiết phan lập được trong phân đoạn cao n-butanol, cao nude duoc xác định cấu trúc dựa trên dữ liệu phô MS và phổ NMR kết hợp so sánh với các đữ liệu trong tài liệu tham khảo

- So sánh với chất tỉnh khiết được phân lập từ đề tài trước dựa vào SKLM -Phé MS được đo ở chế độ ion âm (ESI- ) hay ion đương (ESI+) được đo bằng máy LC-MS tại Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam tại Thành phó Hồ Chí Minh và máy Waters G2-XS Qtof tại Bộ môn Dược liệu - Khoa Dược, Đại Học Y Dược Thành Phó Hồ Chí Minh

-Phô NMR được đo với các kỹ thuật I-D, 2-D (LH-NMR, 13C-NMR, HSỌC, HMBC, COSY) bang may do phé céng huong từ hạt nhân Briker 600 MHz tại phong NMR

— Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam tại Hà Nội

CHƯƠNG 3 KẺ HOẠCH THỰC HIỆN

3.1.NƠI THỰC HIỆN

Bộ môn Dược Liệu, Khoa Dược, Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh (địa chỉ 41-43

Đinh Tiên Hoàng, P Bến Nghé, Quận I, TP Hồ Chí Minh

12

3.2 KE HOACH THUC HIEN

STT | Công

vi 1/11/2022

1

2

3

4

5

6

7

8

3.3 KINH PHI

13

TAI LIEU THAM KHAO

14