Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh hoc của hai loài húng chanh (plectranthus amboinicus (lour )) và húng quế ( ocimum basilicum l ) ở huyện quảng xương, tỉnh thanh hóa

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO UBND TỈNH THANH HÓA TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC NGUYỄN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HOC CỦA HAI LOÀI HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.)) VÀ HÚNG QUẾ ( OCIMUM BASILICUM L.) Ở HUYỆN QUẢNG XƯƠNG, TỈNH THANH HÓA LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC THANH HÓA, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO UBND TỈNH THANH HÓA TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC NGUYỄN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HOC CỦA HAI LOÀI HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.)) VÀ HÚNG QUẾ ( OCIMUM BASILICUM L) Ở HUYỆN QUẢNG XƯƠNG, TỈNH THANH HÓA LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA HỌC Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 844.01.14 Người hướng dẫn khoa học: Người hướng dẫn khoa học 1: PGS TS Ngô Xuân Lương Người hướng dẫn khoa học 2: TS Ngũ Trường Nhân THANH HÓA, NĂM 2022 Danh sách Hội đồng chấm luận văn Thạc sỹ khoa học (Theo Quyết định số : / QĐ- ĐHHĐ ngày tháng năm 2022 Hiệu trưởng Trường Đại học Hồng Đức) Học hàm, học vị Họ tên Chức danh Cơ quan Công tác Hội đồng Chủ tịch HĐ UV Phản biện UV Phản biện Uỷ viên Thư ký Xác nhận Người hướng dẫn Học viên chỉnh sửa theo ý kiến Hội đồng Ngày tháng năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết luận văn chưa công bố không trùng lặp với cơng trình khác nghiên cứu Thanh Hóa, tháng năm 2022 Người cam đoan Nguyễn Thị Thúy i LỜI CẢM ƠN Trong q trình hồn thành luận văn này, tơi nhận hướng dẫn tận tình PGS TS Ngô Xuân Lương , TS Ngũ Trường Nhân, tạo điều kiện thầy cô môn; tạo điều kiện ban chủ nhiệm khoa Khoa học tự nhiên, Trường Đại Học Hồng Đức động viên khuyến khích gia đình, anh em, bạn bè, đồng nghiệp Tôi cảm động, biết ơn xin gửi lời tri ân sâu sắc Chắc chắn luận văn không tránh khỏi khiếm khuyết, mong nhận đóng góp ý kiến nhà khoa học, thầy giáo, cô giáo người quan tâm Thanh Hóa, tháng năm 2022 Tác giả Nguyễn Thị Thúy ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN………………………………………………… i LỜI CẢM ƠN…………………………………………………… ii MỤC LỤC………………………………………………………… iii DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT, CÁC KÍ HIỆU…… v DANH MỤC SƠ ĐỒ……………………………………………… vi DANH MỤC BẢNG……………………………………………… vii DANH MỤC HÌNH………………………………………………… viii MỞ ĐẦU………………………………………………………… 1 Lý chọn đề tài………………………………………………… 2 Mục đích đề tài ……………………………………………… Nhiệm vụ nghiên cứu………………………………………… Đối tượng nghiên cứu …………………………………………… Chương TỔNG QUAN………………………………………… 1.1.Khái quát thực vật họ Bạc Hà………………………… 1.1.1 Cây Kinh Giới ( E ciliata (Thunb.) Hyland)………………… 1.1.2 Cây Ích Mẫu………………………………………………… 1.1.3 Cây Hương Nhu Trắng……………………………………… 1.1.4 Cây Hương Nhu Tía……………………………………… 1.1.5 Cây Râu Mèo……………………………………………… 11 1.1.6 Cây Tía Tơ………………………………………………… 13 1.2 Thành phần hóa học tinh dầu………………………… 17 1.2.1 Các hợp chất aliphatic……………………………………… 17 1.2.2 Các terpen dẫn xuất chúng…………………………… 18 1.2.3 Các dẫn xuất benzen………………………………………… 19 1.2.4 Các thành phần pha tạp……………………………………… 19 iii 1.3 Phân bố loài chứa tinh dầu hệ thực vật Việt 19 Nam………………………………………………………………… 1.4.Chi Ocimum………………………………………………… 20 1.4.1.Cây Húng Quế……………………………………………… 20 1.4.2 Cây Húng Chanh…………………………………………… 22 Chương PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM…………… 25 2.1 Thiết bị phương pháp……………………………………… 25 2.1.1 Hoá chất……………………………………………………… 25 2.1.2 Phương pháp nghiên cứu…………………………………… 25 2.2 Nghiên cứu hợp chất từ loài Húng Chanh (Plectranthus amboinicus (Lour.)) Húng Quế (Ocimum basilicum L.) Quảng Xương Thanh Hóa ……………………………………… 29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………… 35 3.1 Biện giải kết tinh dầu hai loài Húng quế Húng chanh ……………………………………………………………… 35 3.2 Biện giải xác định cấu trúc hợp chất……………………… 40 3.2.1 Biện giải xác định cấu trúc hợp chất LT-CH1……………… 40 3.2.2 Biện giải xác định cấu trúc hợp chất LT-CH2……………… 45 3.3 Biện giải kết hoạt tính sinh học……………………… 50 KẾT LUẬN………………………………………………………… 56 CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN ……………… 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………… 59 iv DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT, CÁC KÍ HIỆU CC: Column Chromatography (Sắc kí cột) FC: Flash Chromatography (Sắc ký cột nhanh) TLC: Thin Layer Chromatography (Sắc kí lớp mỏng) IR: Infrared Spectroscopy (Phổ hồng ngoại) MS: Mass Spectroscopy (Phổ khối lượng) EI-MS: Electron Impact Mass Spectroscopy (Phổ khối lượng va chạm electron) ESI-MS: Electron Spray Impact Mass Spectroscopy (Phổ khối lượng phun sương electron) H-NMR: Proton Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 13 C-NMR: Carbon Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Carbon 13) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer HSQC: Heteronuclear Single Quantum Correlation HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation COSY: Correlation Spectroscopy (Phổ COSY) s: singlet br s: singlet tù t: triplet d: doublet dd: doublet douplet dt: doublet triplet m: multiplet TMS: Tetramethylsilan DMSO: DiMethylSulfoxide Đ.n.c.: Điểm nóng chảy v DANH MỤC BẢNG BẢNG 3.1: THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA TINH DẦU HÚNG QUẾ (OCIMUM BASILICUM L.) Ở QUẢNG XƯƠNG THANH HÓA 35 BẢNG 3.2: THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA TINH DẦU HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) Ở HUYỆN QUẢNG XƯƠNG, TỈNH THANH HÓA 36 BẢNG 3.3 SỐ LIỆU PHỔ 3C-NMRCỦA HỢP CHẤT LT - CH1……… 44 BẢNG 3.4.: SỐ LIỆU PHỔ 13C-NMR CỦA HỢP CHẤT LT-CH2 48 BẢNG 3.5 CHỨNG DƯƠNG (AMPICILLIN) 50 BẢNG 3.6 HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU HÚNG QUẾ (OCIMUM BASILICUM L.) 51 BẢNG 3.7 HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA TINH DẦU HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) 51 BẢNG 3.8 CHỨNG +: ACID ASCORBIC 53 BẢNG 3.9 HOẠT TÍNH CHỐNG OXI HĨA CỦA TINH DẦU HÚNG QUẾ (OCIMUM BASILICUM L.) 53 BẢNG 3.10 HOẠT TÍNH CHỐNG OXI HÓA TINH DẦU HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) 54 vi DANH MỤC SƠ ĐỒ SƠ ĐỒ 2.1: CHIẾT CÁC PHÂN ĐOẠN TRONG METANOL CỦA CÂY HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) 33 SƠ ĐỒ 2.2: TÁCH CÁC HỢP CHẤT TỪ CAO ETYLAXETAT CỦA HÚNG CHANH (PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) 33 vii Hình 3.10: Phổ 1H-NMR hợp chất LT-CH2 (phổ dãn) Hình 3.11: Phổ 1H-NMR hợp chất LT-CH2 (phổ dãn) 47 Hình 3.12 Phổ DEPT hợp chất LT-CH2 Bảng 3.4: Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất LT-CH2 CH2 Độ chuyển dịch hóa học  (ppm) 37,38 37,3 CH2 31,76 31,7 CH 71,77 71,8 CH2 42,34 42,3 C 140,76 140,8 CH 121,64 121,7 CH2 31,7 31,9 CH 31,75 31,9 CH 50,1 51,3 10 C 36,54 36,5 11 CH2 20,9 21,1 12 CH2 39,5 39,7 13 C 42,1 42,3 14 CH 56,65 56,9 15 CH2 24,05 24,4 Cacbon DEPT 48 [12] 16 CH2 28,3 28,9 17 CH 55,8 56,0 18 CH3 12,59 11,9 19 CH3 19,4 19,4 20 CH 40,43 40,5 21 CH3 20,89 20,2 22 CH 135,82 138,3 23 CH 131,69 129,3 24 CH 42,78 50,2 25 CH 33,08 31,7 26 CH3 19,0 19,0 27 CH3 19,95 21,2 28 CH2 25,2 25,4 29 CH3 19,63 19,60 29 28 21 18 20 22 23 12 11 17 13 19 HO 14 10 25 26 16 15 Chất Stigmasterol 49 24 27 3.3 Biện giải kết hoạt tính sinh học Tính chất kháng khuẩn tinh dầu húng quế (Ocimum basilicum L.) Húng chanh (Plectranthus amboinicus (Lour.) xác định dựa khả ức chế phát triển vi khuẩn, thể qua đường kính vịng kháng khuẩn tạo đĩa petri Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn trình bày bảng 3.5; bảng 3.6 ;bảng 3.7 hình 3.13 đây: Bảng 3.5 Chứng dương (Ampicillin) Mật độ vi khuẩn Nồng độ kháng sinh (mg/ml) Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) Khả kháng 100% (vi khuẩn không mọc tồn đĩa thạch) 100% (vi khuẩn khơng mọc tồn đĩa thạch) 100% (vi khuẩn khơng mọc tồn đĩa thạch) 100% (vi khuẩn khơng mọc tồn đĩa thạch) 10 CFU 2,00 54mm, 54mm, 54mm 107 CFU 1,75 54mm, 54mm, 54mm 107 CFU 1,50 54mm, 54mm, 54mm 107 CFU 1,00 54mm, 54mm, 54mm 107 CFU 0,75 52mm; 52,5mm; 52,5mm 96,91% 107 CFU 0,50 50,5mm; 50mm; 50mm 92,90% 50 Bảng 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Mật độ vi khuẩn Nồng độ tinh dầu (mg/ml) Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) Khả kháng 107 CFU 14 54mm, 54mm, 54mm 100% (vi khuẩn khơng mọc tồn đĩa thạch) 107 CFU 12 48 mm; 48mm; 48,5mm 89,20% 107 CFU 10 41,5mm; 41,5mm; 41mm 76,54% 107 CFU 32,5 mm; 32,5mm; 32,5mm 60,19% 107 CFU 24,5mm; 24mm; 24mm 44,75% 107 CFU 14mm; 14mm; 14,5mm 26,23% 107 CFU 6,5mm; 6mm; 6mm 11,42% Bảng 3.7 Hoạt tính kháng khuẩn Tinh dầu Húng chanh (Plectranthus amboinicus (Lour.) Mật độ vi khuẩn Nồng độ tinh dầu (mg/ml) Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 107 CFU 10 54mm, 54mm, 54mm 107 CFU 8,5 47,5 mm; 47mm; 47mm 100% (vi khuẩn khơng mọc tồn đĩa thạch) 87,35% 107 CFU 7,0 38mm; 38mm; 38mm 70,37% 107 CFU 5,5 32,5 mm; 32mm; 32mm 59,57% 107 CFU 4,0 22mm; 22mm; 22,5mm 40,74% 107 CFU 2,5 17mm; 17m; 16,5mm 31,17% 107 CFU 1,0 7mm; 7mm; 7mm 12,96% 51 Khả kháng Đối chứng (-) (DMSO 2%) Hình 3.13 Khả kháng khuẩn nồng độ khác tinh dầu Húng quế Húng chanh Với nồng độ pha lỗng 2,0 mg/ml vịng trịn kháng khuẩn với đường kính đo với vịng kháng E coli 6,2 mm, khả ức chế 11,42% Khả ức chế vi khuẩn E coli tăng dần từ nồng độ 2,0 mg/ml-12,0 mg/ml đến nồng độ 14 mg/ml vi khuẩn khơng mọc tồn đĩa thạch Tại nồng độ 12,0 mg/ml vòng tròn kháng khuẩn 48,2 mm khả ức chế E coli 89,20% So với nghiên cứu tác giả Trần Thanh Quỳnh Anh cộng khả kháng vi khuẩn E coli tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Thành phố Huế (vòng tròn kháng khuẩn E.coli 5,08 mm) tác giả Võ Thị Thanh Tuyền Bình Định (vịng trịn kháng khuẩn E.coli 16,0 mm) kết cho thấy khả ức chế vi khuẩn E coli tinh dầu Húng 52 quế (Ocimum basilicum L.) Thanh Hóa mạnh [2, 3] Kết tương đồng với nghiên cứu Lu cộng (2011) cho tinh dầu húng quế tác nhân kháng khuẩn tự nhiên tiềm Do kết hợp tinh dầu húng quế với tinh dầu khác tăng khả kháng khuẩn Kết đánh giá hoạt tính chống oxi hóa trình bày bảng 4, bảng hình đây: Bảng 3.8 Chứng +: Acid ascorbic % ỨC CHẾ Acid ascorbic IC50 (µg /ml) µg/ml 50 70,87 70,85 70,89 40 56,11 56,02 56,14 30 41,95 41,98 42,09 20 30,17 30,14 30,07 10 18,17 18,09 18,16 trung bình 34,99 Bảng 3.9 Hoạt tính chống oxi hóa tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Tinh dầu % ỨC CHẾ IC50 mg/ml 2,5 96,93 96,11 96,16 2,0 80,28 1,5 62,24 62,15 62,17 1,0 47,15 47,18 47,23 0,5 32,17 31,98 32,06 0,25 22,76 22,78 22,86 80,76 53 (mg/ml) trung bình 80,45 1,08 Bảng 3.10 Hoạt tính chống oxi hóa Tinh dầu húng chanh (Plectranthus amboinicus (Lour.) Tinh dầu % ỨC CHẾ IC50 (mg/ml) mg/ml 2,5 96,83 96,01 96,11 2,0 80,23 1,5 62,21 62,12 62,13 1,0 47,12 47,17 47,22 0,5 32,16 31,88 32,01 0,25 22,56 22,68 22,76 80,66 trung bình 80,35 1,08 Hình 3.14 Khả kháng oxi hóa nồng độ khác tinh dầu húng quế, húng chanh Thử nghiệm cho thấy nồng độ tinh dầu từ 0,25 mg/mL đến 2,5 mg/mL phần trăm hoạt tính ức chế gốc tự DPPH tinh dầu húng quế (Ocimum basilicum L.) tăng dần từ 22,76 %, 22,78% 22,86 % đến 96,93%, 96,11 % 96,16% (Bảng 3.9) với Húng chanh từ 22,56%; 22,68% 22,76 % đến 96,83%; 96,01%, 96,11 % Khả kháng oxy hóa 54 biểu tốt mẫu thử với phần trăm hoạt tính bắt gốc tự DPPH 96,83% 96,11% Ngoài ra, so với chất đối chứng dương acid ascorbic với IC50 =34,99 μg/mL tinh dầu húng quế Húng chanh với IC50 = 1,08 μg/mL, từ kết luận khả kháng oxy hóa tinh dầu húng quế Húng chanh có mạnh acid ascorbic 32,5 lần So với nghiên cứu tác giả Trần Thanh Quỳnh Anh cộng khả kháng oxi hóa tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Thành phố Huế với IC50 = 35,89 μg/mL khả kháng oxi hóa tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Húng chanh Thanh Hóa mạnh nhiều [2] Kết cho thấy hoạt tính kháng oxi hóa tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Húng chanh Thanh Hóa cao nhiều so với nghiên cứu tác giả Hadj-Khelifa cộng (2012), tinh dầu Húng quế O basilicum từ Algeria biểu tác dụng chống oxy hóa thấp (IC50 = 83,4 mg/mL) [7] Nhận xét: Qua bảng thử nghiệm nhận thấy tinh dầu Húng quế Húng chanh có khả chống oxi hóa mạnh Với IC50 =1,08 mg/ml nồng độ 0,25-2,5 mg/ml so với chất đối chứng Acid ascorbic (IC50 (mg/ml) =34,99) gấp 32,5 lần Kết mở tiềm khả chống oxi hóa Húng quế (Ocimum basilicum L.) Húng chanh tương lai 55 KẾT LUẬN Sau nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.), Húng chanh(Plectranthus amboinicus (Lour.) huyện Quảng Xương, tỉnh Thanh Hố, chúng tơi thu số kết sau: Thành phần hóa học tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Húng chanh (Plectranthus amboinicus (Lour.) có 23 cấu tử xác định chiếm 99,42% 97,09 % Các cấu tử tinh dầu hai loài húng quế húng chanh là: Estragole (92,16%, 92,26%), 1,8-Cineole (1,69%, 1,71%), 3-Carene (0,99%, 0,97%) trans-α-Bergamotene (0,52%, 0,54%) Trong hàm lượng Estragole cao hơn, hàm lượng 1,8-Cineole tương đồng Điều cho thấy chất lượng tinh dầu Húng quế Húng chanh thu có chất lượng tốt, nhiên có khác thành phần % hai loài phần đặc tính sinh học, thực vật loài khác thổ nhưỡng khác Để xác định thành phần không bay tiến hành ngâm thân loài húng chanh với metanol nhiệt độ phòng thời gian 15 ngày, sau cất thu hồi metanol thu cao Sau phân đoạn dung mơi khác thu cao tương ứng là: n-hexan (7,1g), etyl axetat (6,4g), butanol (12,0g) Bằng phương pháp sắc ký cột nhồi cao etylaxetat với silicagel dung môi giải hấp thích hợp kết tinh phân đoạn thu hợp chất LT-CH1 LT-CH2 Phối kết hợp phương pháp phổ đạị tài liệu tham khảo cho phép khẳng định cấu trúc hợp chất tách là: Chất LT-CH1 sitosterol chất LT-CH2 Stigmasterol Hai hợp chất chiếm phổ biến loài thực vật chúng tách lần từ loài húng chanh Quảng Xương, Thanh Hóa 56 Tinh dầu lồi Húng quế Húng chanh có khả kháng oxy hóa mạnh, tỉ lệ ức chế gốc tự DPPH 94,40% với giá trị IC50 =1,08 mg/ml khả ức chế E coli 89,20% với đường kính kháng khuẩn 48,2 mm Các nghiên cứu cứu sâu góp phần mở tiềm khai thác cho Húng quế (Ocimum basilicum L.) vào thực phẩm chức dược phẩm góp phần khai thác sử dụng hiệu lồi 57 CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Ngo Xuan Luong, 2Ngu Truong Nhan, 1*Nguyen Thi Thuy, Trinh Xuan Vinh (2022) “ Chemical composition, antimicrobial and antioxidant activitites of essential oll from (ocimum basilicum L) collected in Thanh Hoa province’’ Hong Duc University Journal of Science , E7 – Volume 12.2022 66-75 *Corresponding authors E mail: Thuyhoaqx1@gmail.com 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Trần Thanh Quỳnh Anh, Đỗ Thị Bích Thuỷ, Võ Thị Thu Hằng, Nguyễn Thị Vân Anh (2020) “Các yếu tố ảnh hưởng trình tách chiết, khả kháng oxy hóa kháng khuẩn tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.) Thừa Thiên Huế”, Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc, 238-243 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Xuân Dũng, Đào Hữu Vinh cộng (1985), Các phương pháp sắc ký, NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Hữu Đĩnh, Trần Thị Đà (1999), Ứng dụng số phương pháp nghiên cứu cấu trúc phân tử, Nhà xuất giáo dục Phạm Hoàng Hộ (2001), Cây cỏ Việt Nam (An Illustrated Flora of Vietnam), 3, Nhà xuất Trẻ, Thành phố Hồ Chí Minh Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, 62, Nhà xuất Y học, Hà Nội Lã Đình Mỡi, Lưu Đàm Cư, Trần Minh Hợi, Trần Huy Thái, Ninh Khắc Bản (2002), Tài nguyên thực vật có tinh dầu Việt Nam, 2, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Ts Lê Thanh Phước, Bài giảng phương pháp phổ nghiệm, Đại học Cần Thơ Võ Thị Thanh Tuyền, Lê Thị Như Quyền (2020) “Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh tinh dầu húng quế (Ocimum basilicum L.) trồng Bình Định”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 56(3), 114-119 59 Tiếng Anh 10 Al Abbasy, D W., Pathare, N., Al-Sabahi, J N., Khan, S A (2015) “Chemical composition and antibacterial activity of essential oil isolated from Omani basil (Ocimum basilicum Linn.)”, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 5(8), 645–649 11 Chapman and Hall-CRC (2009), Dictionary of Natural product on CDRom 12 Chalchat, J.-C., Özcan, M M (2008) “Comparative essential oil composition of flowers, leavesand stems of basil (Ocimum basilicum L.) used as herb”, Food Chemistry, 110(2), 501–503 13 Ismail M (2006) Central Properties and Chemical Composition of Ocimum basilicum Essential Oil, Pharm Biol, 44(8), 619-626 14 Khelifa H, Achour D, Brada M, Brahmi, L, Fauconnier F, Marie-Laure, Lognay, Georges (2012) “Chemical Composition and Antioxidant Activity of Essential Oil of Ocimum basilicum Leaves from the Northern Region of Algeria”, J Herb Med, 2(1), 53-58 15 Kuo H Y., Yeh M H (1997), Chemical constituents of heartwood of Bauhinia purpurea, J Chin Chem Soc., 44, pp 379-383 16 Thien Hien Tran, Huynh Huu Hao Nguyen, Duy Chinh Nguyen, Thanh Quang Nguyen, Huynh Tan, Le Thi Hong Nhan, Dai Hai Nguyen, Lam Dai Tran, Sy Trung Do, Trinh Duy Nguyen (2018) “Optimization of Microwave-Assisted Extraction of Essential Oil from Vietnamese Basil (Ocimum Basilicum L.) Using Response Surface Methodology”, Processes, 6(11), 206 60 61