khảo sát hoạt tính kháng nấm da của cao riềng nếp ở dạng phối hợp

3: Kết quả xác định phối hợp giữa TTO – cao riềng – terbinafine bằng phương pháp khuếch tán chủng nấm da T.. 5: Kết quả xác định phối hợp giữa TTO – cao riềng – terbinafine bằng phương p

KHÁI QUÁT VỀ RIỀNG NẾP

Danh pháp khoa học: Alpinia galanga (L.) Willd

Tên đồng nghĩa: Languas galanga (L.) Stuntz, Alpinia pyramidata Blume

Tên nước ngoài: Greater galangal (Anh), grand galanga (Pháp)

⮚ Hình thái và phân bố

Cây thuộc loại thảo, cao 1 - 2 m Thân cỡ 5 - 7 mm, thân rễ to 2-3 cm có mùi thơm Lá hình mũi giáo nhọn, thót lại nơi gốc, dài 30 - 40 cm, rộng 7 - 8 cm, không có lông Chùy hoa dài 15 - 30 cm, rộng 8 - 10 cm, nhiều hoa Chùy có lông nhung và nhánh nhiều, sát nhau Cuống hoa mọc đứng, có lông Hoa màu trắng, có vạch hồng, dài 20 - 25 mm; tràng hoa có ống ngắn, cánh hoa hình giáo tù, dài 10 - 15 mm; cánh môi hình giải xoan ngược, phiến môi chia 2 thùy ở chóp Quả mọng, hình cầu hay hình trứng dài 12 mm x 6 mm, màu đỏ nâu chứa 3 - 5 hạt…

Các loài trong chi riềng có mặt tại các vùng có khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới của châu Á và trên các đảo ở Thái Bình Dương

SVTH: Trịnh Thị Thanh Trâm 4

Cây Riềng nếp (Alpinia galanga) mọc hoang và được trồng nhiều ở các nước Đông Nam Á

Công dụng quan trọng và nổi trội là làm gia vị trong thực phẩm Ngoài ra, tinh dầu riềng nếp còn được dùng làm chất phụ gia trong kỹ nghệ nước giải khát, rượu như Chartreuse Nụ hoa và hoa dùng làm thực phẩm dịch chiết được thêm vào các loại rượu có nồng độ cồn thấp để tạo cảm giác rượu mạnh hơn

Riềng nếp được dùng như riềng ấm chữa đau bụng, tiêu chảy, nôn mửa, lỵ và phối hợp với than tóc rối uống chữa ngộ độc thịt cóc Riềng nếp muối dùng một nhúm ngậm, cắn nhẹ và nuốt dần dần giúp giải khát, đỡ mệt khi làm việc mệt nhọc hoặc đi nắng nhiều khát nước Thân rễ riềng nếp được ghi trong dược điển nhiều nước châu Âu, và được dùng rộng rãi trong y học cổ truyền trị bệnh da, bệnh hô hấp, làm thuốc lợi tiêu hoá sau khi đẻ, khó tiêu, đầy hơi, cơn đau bụng, lỵ, ung thư miệng và dạ dày, nhiễm khuẩn toàn thân, bệnh dịch tả và làm thuốc long đờm Ở Trung Quốc, Lào và Campuchia, thân rễ được uống chống co giật, gây trung tiện và long đờm, trị lỵ, trị viêm phế quản, và dùng ngoài trị thấp khớp Ở Thái Lan, thân rễ được dùng trị nhiều bệnh, làm thuốc lọc máu, trị khó tiêu, dụng dập, tiêu chảy, nhiễm khuẩn uốn ván, sốt rét mãn tính, bệnh tê phù, ghẻ cóc, đau dạ dày, bệnh dịch tả, ngứa, nấm da, bệnh da, chốc lở, mày đay, đau răng, trị giun, chống co thắt, gây trung tiện, đầy hơi Ở Philippin, thân rễ được dùng gây trung tiện, kích thích, và nước sắc lá dùng làm nước tắm trị thấp khớp Ở Indonesia, thân rễ nạo nhỏ trộn với ít muối uống lúc đói trị lách to, và nước ngâm thân rễ uống trị bệnh phong Ở Malaysia, hạt được dùng trị cơn đau bụng, tiêu chảy, nôn và bệnh herpes, nước hãm lá dùng cho phụ nữ uống sau khi đẻ Trong y học dân gian Ấn Độ, thân rễ dùng trị đầy hơi, khó tiêu, thấp khớp và bệnh viêm xổ, đặc biệt trong viêm xổ phế quản, và cùng với hồ tiêu và gừng trị sốt Cao lá dùng bôi trị ngứa và bệnh dị ứng da Thân rễ riềng nếp là thuốc kích dục của người Ả Rập Xê Út, phối hợp với ba dược liệu khác chữa viêm khớp dạng thấp ở Cô Oét

- Tác dụng ngừa ung thư:

Một nghiên cứu tại trường Dược, ĐH Kangwon National University, Chunchon (Nam Hàn) đã ghi nhận các flavonoids trong Riềng nhất là galangin có những hoạt tính chống oxy hóa và thu nhặt các gốc tự do gây hại cho tế bào, do đó có thể ngừa tác hại của các chất gây ung thư

Hoạt chất 1’- acetoxychavicol acetat có tác dụng chống ung thư mạnh in vitro và in vivo, chống u báng Sarcoma 180 ở chuột nhắt trắng, ức chế phát triển u ruột kết gây bởi azoxymethan ở tế bào người, ức chế sự gây ung thư nội sinh gan chuột cống trắng Những hoạt chất khác có khả năng chống ung thư là 1’- acetoxy – eugenol – trans - cinnamat và ethy 4 – methoxy – trans - cinnamat Cao methanol thân rễ ức chế mạnh tác dụng gây đột biến của 3 – amino - 1,4 – dimethy - 5H pyrido [4,3- β] indol ở Samonella typhimurium

Trong thử nghiệm in vitro và vivo, tinh dầu từ thân rễ riềng nếp tươi và khô đều biểu lộ hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng động vật nguyên sinh, trừ sâu và long đờm mạnh Cao nước, cồn hoặc ete thân rễ có hoạt tính kháng khuẩn mạnh trên Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcu shemolytcus và Pseudomonas aeruginosa Cao cồn và cloroform có hoạt tính kháng nấm trên Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Epidermophyton floccosum, Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes, T concentrium, T rubrum, Aspergillus niger, Penicillium expansum và Rhizopus stolonifer, với nồng độ tối thiểu ức chế là

Tinh dầu từ thân rễ có hoạt tính kìm trực khuẩn lao với nồng độ 25μg/ml

Trong thử nghiệm in vitro, cao thân rễ có tác dụng ổn định màng hồng cầu cừu chống lại tác động của môi trường nhược trương và nhiệt Màng

SVTH có khả năng tuần hoàn lại màng tế bào nhờ hồng cầu giống màng thể tiêu bào Glucocorticoid và các thuốc giống aspirin giúp ổn định thể tiêu bào, đóng vai trò quan trọng trong cơ chế chống viêm chính của SVTH.

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM

Vi nấm thử nghiệm

Nấm da là loại nấm ưa keratin, gây sang thương ở da, tóc và móng, có đặc điểm không qua khỏi lớp da do đó ít gây bệnh nội tạng

Nấm da thuộc nhóm nấm sợi, sinh sản vô tính Các tế bào sinh sản vô tính gồm: bào tử đính nhỏ, bào tử đính lớn

Nấm da được phân loại dựa trên hình dạng và số lượng bào tử đính lớn, gồm 3 chi: Microsporum, Trichophyton và Epidermophyton

B ả ng 1 1: Phân lo ạ i n ấ m da d ự a trên đặc điể m c ủ a bào t ử đính lớ n Đặc điểm bào tử đính lớn Microsporum Trichophyton Epidermophyton

Số lượng Rất nhiều Hiếm Nhiều

Bề dày vách tế bào Dày Mỏng Trung bình

Bề mặt vách tế bào Xù xì, có gai Nhẵn Nhẵn

Cách đính vào sợi tơ nấm Từng cái Từng cái Chùm 2-3 cái

Bào tử đính nhỏ Thường rất ít Rất nhiều, hình tròn hay bầu dục, 2-3 àm

Những sợi tơ nấm khác Sợi tơ nấm hình vợt, hình xoắn (thường ít)

Rất ít sợi tơ nấm xoắn hình sừng nai

Nơi ký sinh Da, tóc, lông Da, tóc, lông, móng Da, móng

Với ánh sáng đèn Wood cho hiện tượng huỳnh quang

Thường dương tính (trừ M gypseum)

Hình 1.2 Microsporum canis Hình 1.3 T mentagrophytes Hình 1.4 E floccosum

Khoảng 10% dân số thế giới mắc bệnh nấm da, nhiều loại nấm da gặp ở khắp nơi trên thế giới như T rubrum, M canis, M gypseum, E flocosum Một số loài giới hạn vài nơi như T soundanense, T schoeleinii chỉ gặp ở Châu Phi

Khoảng 58% nấm da là T rubrum, 27% là T mentagrophytes, 7% là T verrucosum, 3% là T tonsunrans Khoảng 1% còn lại là E flocosum, M audouinii, M canis, M equinum, M nanum, M versicolor, T equinum, T rabitschekii và T violaceum

Về mặt dịch tễ học, nấm da được chia thành 3 nhóm:

- Nhóm ưa người (anthropophylic): nhóm này chỉ ký sinh trên người, lây lan từ người sang người bằng 2 cách

Trực tiếp khi tiếp xúc giữa người có bệnh và người không có bệnh Gián tiếp qua các vật dụng như quần áo, khăn, nón, chiếu

Ví dụ: T rubrum, E flocosum, T tonsunrans, T schoenleinii , T violaceum, M audouinii

- Nhóm ưa thú (zoophilie): thường gặp ở chó, mèo, trâu, bò, ngựa lây nhiễm sang người do tiếp xúc với thú vật bị bệnh

Ví dụ: M canis truyền từ chó, mèo sang người

T mentagrophytes truyền từ ngựa hoặc các loài gặm nhấm sang người

T verrucosum truyền từ trâu, bò sang người

T equinum truyền từ ngựa sang người

- Nhóm ưa đất (geophylic): gồm những nấm sống trong đất và nhiễm sang người do những sang thương trên da M gypseum, T ajelloi có thể gây bệnh da ở những người làm vườn

Nơi nào trên cơ thể có keratin thì đều có thể bị nấm da ký sinh vì chúng có khả năng làm tan rã keratin để lấy nitrogen làm chất dinh dưỡng Bệnh nấm da rất đa dạng, gồm có: bệnh nấm tóc, bệnh ở da nhẵn và ở nếp da, bệnh nấm móng

Nấm da sống ký sinh ở phần da chứa keratin thuộc lớp ngoài cùng của da và các phần phụ như tóc, móng Do vi nấm có enzym keratinase phân giải được keratin nên có thể xâm nhập và phát triển ở lớp sừng của da Nấm da thường không xâm nhập vào lớp da sâu, nhưng có thể xâm nhập vào nang lông gây viêm nang và áp xe quanh nang lông Trong một vài trường hợp, khi ký chủ suy giảm miễn dịch, vi nấm có thể xâm nhập vào lớp da sâu, phát triển và gây u hạt viêm, được gọi là nấm da sâu

Bệnh nấm da biểu hiện được dấu hiệu lâm sàng, tùy thuộc bởi các yếu tố như loài gây bệnh, số lượng vi nấm nhiễm, vị trí nhiễm và tình trạng miễn dịch của ký chủ Có nhiều cách phân loại các dạng lâm sàng của bệnh nấm da, nhưng hiện nay phân loại thông thường nhất là dựa vào vị trí nhiễm nấm

Bệnh ở lớp sừng của da

Bệnh ở da nhẵn (Tinea corporis)

Thương tổn có hình vòng lan rộng, bờ hơi gồ cao có vẩy và có những mụn rộp, ở giữa có màu lọt giống như da lành Kích thước và hình dạng của thương tổn tùy thuộc vào mức độ viêm, M canis gây nhiều hơn T rubrum

Hình 1.5 Hắc lào trên da Vẩy rồng (tinea imbrucata, tolelau)

Bệnh nấm Tinea corporis (nấm da) khởi phát từ một điểm, dần lan rộng khắp cơ thể, trừ mặt và đầu trong trường hợp bệnh kéo dài Da không bị viêm nhưng tróc vảy theo nhiều vòng đồng tâm Tác nhân gây bệnh là nấm T concentrium, thường gặp ở Nam Mỹ, Châu Phi và Đông Nam Á Tại Việt Nam, bệnh phổ biến ở các vùng dân tộc thiểu số và rất khó điều trị.

Bệnh ít thường gặp ở vùng khí hậu nóng ẩm, chủ yếu ở nam giới Vùng da nhiễm nấm nỗi mụn, ban đỏ, bờ bong vẩy Thương tổn từ vùng bẹn nhưng lan xuống mặt trong đùi, rất ngứa và có thể gây viêm nang lông Thương tổn đối xứng 2 bên bẹn và lan xuống đùi do E floccosum gây ra, nếu do T rubrum và

T mentagrophytes thì hai mảng ở bẹn sẽ không đối xứng và lan rộng ra mông hoặc lên thân mình

Bệnh nấm chân (tinea pedis, athlete’s foot )

Tác nhân gây bệnh thường là T rubrum và T mentagrophytes và R interdigitale , E floccosum

Thông thường kẽ chân tróc vảy nhẹ, chảy nước và ngứa Bệnh do T mentagrophytes, thương tổn có thể ở kẽ chân , nổi mụn nước ở lòng bàn chân

Bệnh nấm móng (tinea unguum, onychomycosis)

Bệnh thường gặp ở xứ nóng, chiếm khoảng 3% dân số, chủ yếu ở người lớn Móng chân dễ bị nhiễm hơn móng tay Có hai dạng móng nhiễm nấm da thường gặp:

Bệnh bắt đầu từ bờ, hai rìa móng Móng thường dày và cong, vi nấm xâm nhập từ dưới móng (T.rubrum)

Nấm móng cũng có thể do sự nhiễm nấm từ mặt trên móng (nấm móng trắng ở mặt trên ), vi nấm gây bệnh thường là T mentagrophytes và R interdugitale Ở Việt Nam, vi nấm gây nhiễm thường gặp là T rubrum , T mentagrophytes và E Floccosum

Trên lâm sàng, nấm móng được chia làm 4 thể:

Nấm dưới móng ở ngọn và 2 bên móng: có 3 đặc điểm chính là dày sừng ở dưới móng, tiêu móng gây tách móng ra khỏi giường móng và viêm da quanh móng Nguyên nhân thường gặp nhất là do nấm Trichophyton rubrum

Nấm bề mặt móng: gây rối loạn màu sắc của móng (thường có màu trắng và đôi khi màu đen), nguyên nhân thường gặp là do nấm Trichophyton mentagrophytes và T Interdigitale

Nấm dưới móng ở gốc móng và viêm quanh móng: thường gặp ở móng tay, gây ra chủ yếu do nấm Candida

Nấm móng có teo móng: thường có tổn thương tất cả các thành phần của móng và có xu hướng lan ra tất cả các móng

Bệnh nấm tóc (tinea capitis, scalp ringworm)

Còn gọi là bệnh chốc đầu, là bệnh của trẻ em, bệnh thường lây từ trẻ này sang trẻ khác hay từ thú sang trẻ Vi nấm xâm nhập vào tóc theo ba kiểu Các dấu hiệu lâm sàng của bệnh thay đổi tùy theo kiểu xâm nhập.

Một số thử nghiệm hoạt tính kháng nấm

Dựa vào sự khuếch tán chất thử vào môi trường, nếu chất thử có tác dụng sẽ ức chế sự phát triển của vi nấm hoặc vi khuẩn thì xung quanh đĩa giấy tẩm chất thử, vi nấm và vi khuẩn không phát triển Mức độ ức chế của chất thử đối với vi sinh vật so với mẫu chứng sẽ cho biết mức độ hoạt tính của chất thử Do đó phương pháp này có thể áp dụng để định tính và bán định lượng hoạt tính của chất thử

Chất thử được hòa tan trong dung môi dễ bay hơi, được tẩm lên đĩa giấy trắng một lượng xác định

Mỗi đĩa petri thử nghiệm (Ф = 100 mm) được cho chính xác 20 ml môi trường

Dung dịch dịch treo vi nấm được chế bằng dung dịch nước muối sinh lý có chứa chất hoạt động bề mặt Tween 80 ở nồng độ 0,05% Quá trình chuẩn bị gồm có các bước điều chỉnh mật độ vi nấm đến 106 tế bào trong 1 ml, tương ứng với giá trị quang trắc (OD) từ 0,08 đến 0,12.

Dùng tăm bông vô trùng tẩm dịch treo vi nấm và trải đều lên bề mặt thạch Đĩa giấy đã tẩm chất thử phải được cho bay hơi dung môi hoàn toàn, sau đó, đặt đĩa giấy lên bề mặt đĩa thạch

Kết quả được đọc sau thời gian quy định với từng loại vi sinh vật

Hình 1 6: Phương pháp khuếch tán qua đĩa giấy A: Trước khi ủ

B: Sau khi ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp

1: Hoạt tính mạnh 3: Hoạt tính yếu 2,4,5,6: Không có hoạt tính

Chất thử được pha loãng thành một dãy nồng độ từ cao đến thấp trong môi trường đã cấy nấm Độ đục của mẫu thử được xác định bằng mắt thường hoặc bằng quang phổ kế, thường được dùng làm điểm dừng khi đọc kết quả Ở những nồng độ chất thử có tác dụng ức chế vi nấm, các ống thử trong suốt, khi chất thử không có tác dụng, vi nấm phát triển làm môi trường trở nên đục

Kết quả xác định được bằng phương pháp pha loãng mang ý nghĩa định lượng Mức độ ức chế của chất thử nghiệm được xác định qua nồng độ tối thiểu ức chế phát triển vi nấm của chất thử (MIC: minimum inhibited concentration) Trị số MIC càng thấp, chất thử càng có tác dụng mạnh

Các phương pháp pha loãng hiện đang được sử dụng:

- Phương pháp pha loãng (macrodilution) và phương pháp vi pha loãng (microdilution) theo NCCLS M27-A2 (2002) dùng cho nấm men

- Phương pháp pha loãng dùng cho nấm mốc NCCLS M38 (2002) Phương pháp chuẩn của NCCLS có thể được biến đổi để phù hợp với các đặc điểm phát triển riêng biệt cho từng loại vi nấm khác nhau hoặc dễ thực hiện hơn, kinh tế hơn, thuận tiện hơn, nhanh hơn…với điều kiện phương pháp biến đổi cho kết quả phù hợp với phương pháp chuẩn Có sự liên thông kết quả giữa các phòng thí nghiệm, được nhiều phòng thí nghiệm sử dụng

1.2.2.3 xác định hoạt tính kháng nấm ex – vivo [13, 14]

Khi nghiên cứu một chất kháng nấm đưa vào sử dụng, khó khăn nhất của các nhà nghiên cứu là không có sự tương đồng giữa tác động in vitro và hiệu quả điều trị lâm sàng, hoặc khó khăn trong việc tiên lượng nồng độ thử nghiệm in vivo từ kết quả in vitro Vì vậy, việc sử dụng các môi trường thử nghiệm tạo được sự phát triển của vi nấm giống như in vivo để thử hoạt tính sinh học của các hợp chất kháng nấm mới đang được các nhà nghiên cứu quan tâm Hướng nghiên cứu hiện nay là sử dụng mô tế bào người để nuôi cấy vi nấm in vitro, ví dụ như da, móng, tóc….Vi nấm khi được nuôi trên

SVTH: Trịnh Thị Thanh Trâm 13 các mô này phát triển như khi gây bệnh Do đó, việc khảo sát tác dụng của các chất kháng nấm sẽ cho kết quả phù hợp với thực tế điều trị hơn kết quả in vitro

Chuẩn bị mô nuôi cấy

Các mô được lựa chọn để gây nhiễm thường là những mô mà vi nấm gây bệnh trên người bình thường như tế bào niêm mạc, da, móng, tóc…Đối với nấm da, vi nấm gây bệnh ở da, móng, tóc một số tác giả đã sử dụng các cơ quan chứa keratin của cơ thể người như móng làm cơ chất gây nhiễm

Các vi nấm thử nghiệm là những vi nấm gây bệnh phổ biến trên da và móng

Trychophyton mentagrophytes được nuôi cấy trên môi trường BHI để chuyển sang dạng sinh bào tử gây bệnh trước khi gây nhiễm Lượng vi nấm khi gây nhiễm thay đổi trong từng thí ngiệm tuy nhiên trong khoảng 10 4 CFU/ml đối với nấm da Dịch treo vi nấm được cấy trực tiếp lên mô thử nghiệm.

Một số thuốc điều trị nấm da và niêm mạc

Hiện nay, thuốc đang được sử dụng phổ biến để trị các bệnh ở da và niêm mạc là các azol, gần đây trên thị trường có thêm terbinafine (Lamisil ) ở các dạng viên uống và kem để trị các bệnh nấm da, đặc biệt là nấm móng do nấm da

Các azol kháng nấm gồm imidazol và triazol có cùng phổ kháng nấm và cơ chế tác động Tuy nhiên các triazol chuyển hóa chậm hơn, ít tác động trên sterol của người hơn imidazol

Thuộc nhóm imidazol gồm có: keteconazol, clotrimazol, miconnazol…

Thuộc nhóm triazol gồm có: itraconazol, fluconazol,…

Các thuốc này có sinh khả dụng đường uống tốt (cần acid dịch vị bình thường), phân phối hầu hết các mô, thấm vào dịch não tủy kém (trừ fluconazol) Các azol đều được chuyển hóa qua gan

Nấm men như Candida spp., Cryptococcus neoformans và Malassezia furfur Nấm cơ hội: Aspergillus, Mucor

Nấm lưỡng hình gây bệnh phù tạng: Sporothix schenckii, Hstoplasma capsulatum, Blastimyces

Tất cả vi nấm ngoài da

Ngăn tổng hợp ergosterol và các lipid khác của màng tế bào nấm do ức chế enzyme 14α-demethylase (thuộc hệ Cyt P450) làm rối loạn chức năng màng thay đổi tính thấm của màng tế bào và ức chế nấm tăng trưởng

Buồn nôn, ói mửa, ban đỏ, đôi khi tổn thương chức năng gan Đau đầu, chống mặt, buồn ngủ Ức chế Cyt P450 nên ức chế tổng hợp steroid thượng thận và androgen gây vú to ở đàn ông Đối với các azol tác động tại chỗ có thể gây: ngứa, ban đỏ, kích thích tại chỗ

Các azol làm tăng nồng độ một số thuốc chuyển hóa qua Cyt P450: phenytoin, cyclosporine, thuốc hạ đường huyết đường uống thuốc chống đông Đặc biệt gây tăng nồng độ astermizol và terfenadin gây loạn nhịp tim đe dọa tính mạng

Rifampin làm tăng nồng độ của fluconazol và itraconazol

Các azol dùng ngoài: thuốc bôi tại chỗ thường thuộc nhóm imidazol, gồm có :

Clotrimazol: trị nấm Candida miệng, Candida âm đạo, nấm da

Miconazol: trị nấm da (da đùi, da thân), Candida âm đạo và âm hộ

Ketoconazol : trị nhiễm nấm Candida mạn (da, niêm mạc, miệng – hầu, âm đạo, lang ben, nấm da)

Fluconazol: hấp thu tốt qua đường tiêu hóa, không bị ảnh hưởng bởi thức ăn và acid dạ dày Thuốc có tác dụng tốt với hầu hết các chủng Candida kể cả nhiểm nấm ở giai đoạn cuối của bệnh nhân AIDS Tuy nhiên hiện nay nhiều chủng Candida trở nên đề kháng với fluconazol Khi dùng thuốc cũng có thể gặp tăng men gan, buồn nôn, đau bụng,…

Itraconazol: hoạt tính kháng nấm giống ketoconazol Thuốc lựa chọn trị nhiễm Blastomyces, Sporothrix và nhiễm nấm sợi màu (chrimoblastomycois ) dưới da Thuốc thay thế trị nhiễm Aspergillus lan tỏa và toàn thân.Trị nhiễm nấm ở sâu như nhiễm Cocidioides, Cryptococcus, Histoplasma và trị vi nấm ngoài da Tác dụng phụ: buồn nôn, tiêu chảy, tăng triglyceride huyết, giảm K+ huyết Itraconazol không ảnh hưởng đến tổng hợp steroid, tương tác với thuốc chuyển hóa qua gan kém hơn ketoconazol

Ngoài ra còn dùng terconazol, saperconazol,…

Các thuốc trong nhóm azol uống thường có độc tính cao trên gan, thận, gây nổi mẫn ngứa, tương tác với nhiều thuốc,…

⮚ Ưu điểm của nhóm azol: là các chất tổng hợp có hoạt tính kháng nấm tốt, hoạt phổ rộng kháng nấm da, nấm mốc và nấm men

⮚ Nhược điểm: chỉ kiềm nấm và hiện nay có một số chủng nấm đã đề kháng với các thuốc đang sử dụng

Là allylamin tổng hợp Chất diệt nấm do ức chế enzyme squalen epoxidase gây tích tụ squalen và can thiệp tổng hợp ergosterol Tích tụ ở keratin, rất hiệu quả để trị nấm móng

Tác dụng phụ: rối loạn tiêu hóa, ban đỏ, nhức đầu, rối loạn vị giác terbinafine không ức chế Cyt P450 nên không gây tương tác với các thuốc khác được chuyển hóa qua enzyme này

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

VẬT LIỆU

Nấm da

Các chủng nấm da T mentagrophytes, T rubrum và M gypseum được cung cấp từ bộ môn Vi Sinh – Ký Sinh Trùng trường ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh.

Chất thử kháng nấm

Cao Riềng (dầu Riềng) nếp, cao Bông Móng Tay (cao BMT) được cung cấp từ bộ môn Vi Sinh – Ký Sinh Trùng, khoa Dược, ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh Terbinafine (độ ẩm 0,06%), nhà sản xuất Hetew labs – India, nhà cung cấp Steda IE

Tinh dầu Tràm Trà Úc (TTO): công ty cổ phần Dược phẩm 3 tháng 2.

Môi trường

Brain Heart Infusion Agar (thạch BHI)

Nước muối sinh lý chứa 0.05% Tween 80

Sabouraud Dextrose Broth bổ sung 0,2% agar và 0,1% Tween 80

Thiết bị và dụng cụ

Tủ cấy vô trùng Máy vortex Máy đo OD Micropipette, Micropipette nhiều kênh Đĩa giấy kháng sinh trắng

Bản plate Buồng đếm hồng cầu.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Xác định hoạt tính kháng nấm

2.2.1.1 Chuẩn bị vi nấm thử nghiệm

Nấm da được cấy trên môi trường thạch nghiêng SDA, ủ ở nhiệt độ phòng trong 07 ngày

Chuẩn bị dịch treo vi nấm trong nước muối sinh lý chứa 0,05% Tween

80, vortex trong khoảng 20 - 30 giây, điều chỉnh mật độ vi nấm đến 10 6 tế bào trong 1 ml, tương ứng với giá trị OD ≈ 0,08 – 0,12 ở bước sóng 530 nm

2.2.1.2 Xác định nồng độ tối thiểu ức chế sự phát triển của nấm da (MIC) bằng phương pháp pha loãng [2, 18]

Môi trường thử: SDB Chủng nấm da thử nghiệm: T mentagrophytes, T rubrum, M gypseum

Mật độ nấm thử nghiệm: 10 4 CFU/ml

Chất thử được hòa tan trong DMSO đạt nồng độ cao gấp 100 lần nồng độ thử nghiệm cao nhất Pha loãng trong môi trường sao cho nồng độ DMSO cuối cùng nhỏ hơn 1% (là nồng độ không ức chế sự phát triển của vi nấm) Ủ ở nhiệt độ phòng trong 07 ngày Đọc kết quả bằng mắt thường MIC là nồng độ tối thiểu ức chế sự phát triển của vi nấm Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần, MIC trung bình của thí nghiệm được tính là trung bình nhân của mỗi MIC mỗi lần thử nghiệm

Hình 2 1: Quy trình thực hiện MIC bằng phương pháp pha loãng

Khảo sát hiệu quả phối hợp của các chất kháng nấm

2.2.2.1 Xác định phối hợp giữa các hợp chất kháng nấm bằng phương pháp khuếch tán: [2, 16]

Môi trường thử nghiệm: SDA bổ sung 0.1% Tween 80 (SDA - T) được chuẩn bị sẵn trong ống nghiệm (20 ml môi trường/ống nghiệm)

Vi nấm thử nghiệm: T mentagrophytes, T rubrum và M gypseum

- Tinh dầu Tràm Trà Úc (TTO): được hòa tan trong DMSO sau đó được bổ sung trực tiếp vào môi trường SDA – T đã chuẩn bị trước ở nồng độ từ: 1/4 đến 1/64 MIC

- Cao Riềng được pha loóng trong cồn 96 0 với nồng độ 0,1 àl/10 àl

- Cao Bông Móng Tay được pha loãng trong DMSO và cồn 96 0 với nồng độ 25 àg/10 àl

- Terbinafine được pha loóng trong DMSO với nồng độ 0,008 àg/10 àl Trải huyền dịch nấm có nồng độ 10 6 CFU/ml lên bề mặt môi trường đã chuẩn bị trong hộp petri vô trùng Đĩa giấy: chất thử sau pha loãng được tẩm vào đĩa giấy với nồng độ 10 àl/đĩa giấy

- Đối với nấm T mentagrophytes, M gypseum

+ Cao Riềng: 0,1 àl/đĩa giấy

+ Cao Bụng Múng Tay: 25 àg/đĩa giấy

+ Cao Riềng: 0,05 àl/đĩa giấy

+ Cao Bụng Múng Tay: 12,5 àg/đĩa giấy

Mỗi hộp petri được đặt 2 đĩa giấy có vị trí cách nhau lớn hơn hoặc bằng bán kính vòng kháng nấm của mỗi chất, mỗi đĩa có tẩm 1 nồng độ dung dịch thuốc thử khác nhau tùy thuộc vào từng chất Ủ ở nhiệt độ phòng và đọc kết quả sau 07 ngày

Quan sát kích thước và sự tương tác giữa 2 vòng kháng Đánh giá hiệu quả của các phối hợp kháng nấm

2.2.2.2 Xác định tỉ lệ phối hợp giữa các hợp chất kháng nấm bằng phương pháp loãng theo bàn cờ [11]

Môi trường thử nghiệm: SDB bổ sung 2 g agar trong 1 lít môi trường và 0,1% Tween 80

Chủng vi nấm đã chuẩn bị (OD ≈ 0,08 – 0,12 ở bước sóng 530 nm) được pha loãng tiếp tục trong môi trường thử nghiệm sao cho nồng độ vi nấm đạt

Hai chất nghiên cứu sẽ được pha loãng liên tục 2 lần trong môi trường thành 2 dãy có nồng độ từ cao đến thấp trong khoảng 1/8 – 4 x MIC của từng chất trong bản nhựa 96 giếng Do đó, trong mỗi bản nhựa sẽ có 63 tỉ lệ phối hợp khác nhau giữa 2 chất thử nghiệm

- Cột 11: chứng âm, các giếng ở cột này chỉ chứa môi trường thử, không chứa chất thử và không chứa nấm

- Cột 12: chứng dương, các giếng ở cột này chứa môi trường thử và vi nấm, không chứa chất thử

- Chất thử A được pha loãng liên tục 2 lần trong môi trường theo chiều ngang

- Chất thử B được pha loãng liên tục 2 lần trong môi trường theo chiều dọc

- Cỏc giếng nằm trong dóy từ A2 đến A10 chứa 50 àl mụi trường, 50 àl chất thử A và 100 àl dịch nấm đó pha loóng, khụng chứa chất thử B

- Cỏc giếng nằm trong dóy từ B1 đến H1 chứa 50 àl mụi trường, 50 àl chất thử B và 100 àl dịch nấm đó pha loóng, khụng chứa chất thử A

- Cỏc giếng từ B2 đến H10 chứa 50 àl chất thử A - 50 àl chất thử B với cỏc nồng độ tương ứng và 100 àl dịch nấm đó pha loóng

Sau khi ủ 07 ngày ở nhiệt độ phòng, tiến hành xác định các giá trị sau: MIC của từng chất riêng biệt

MIC của các phối hợp

Hệ số FIC (Fractional Inhibitory Concentration) thường được sử dụng để xác định kiểu tương tác giữa các chất

MIC A/PH: MIC của chất A trong phối hợp MIC A: MIC của chất A

MIC B/PH: MIC của chất B trong phối hợp MIC B: MIC của chất B

FIC ≤ 0,5 : hiệp lực bội tăng (synergistic) FIC ≤ 1 : cộng lực (additive)

1 < FIC ≤ 2 : tác động riêng rẽ (indifferent) FIC > 2 : đối kháng (antagonistic)

Sơ đồ 1: Sơ đồ bản nhựa 96 giếng

Xác định hoạt tính kháng nấm ex vivo trên mô hình móng nhiễm

Nấm da T mentagrophytes được hoạt hóa trên môi trường thạch nghiêng BHI, ủ ở nhiệt độ phòng trong 14 ngày

Móng tay được sử dụng phải được cắt từ người tình nguyện không sử dụng sơn móng tay hoặc các chất đánh bóng khác, đồng thời không mắc các bệnh về móng Móng tay sẽ được bảo quản trong lọ bijou 8 ml, dán nhãn đầy đủ Trước khi sử dụng, móng tay được cắt thành từng mảnh 3 x 3 mm, rửa sạch bằng ethanol 70%, vortex ba lần, mỗi lần một phút và nước muối sinh lý vô trùng, vortex hai lần, mỗi lần một phút Sau khi rửa sạch, móng tay được để khô trong tủ cấy ở nhiệt độ phòng để sẵn sàng sử dụng.

Dãy nồng độ của các chất kháng nấm:

- Tinh dầu tràm trà Úc (TTO): 4% - 0,25%

Chất kháng nấm được hòa tan trong môi trường PEG 300 : cồn tuyệt đối (75:25) rồi được pha loãng vào môi trường thạch SDA bổ sung 0,1% Tween

80 thành dãy nồng độ thử nghiệm Mỗi nồng độ được chuẩn bị 1 đĩa, 1 đĩa chứng với môi trường không có chất thử

Móng tay sau khi xử lý được đặt phần lưng móng lên bề mặt đĩa thạch chứa chất thử (3 móng/đĩa/nồng độ chất thử)

Nấm da sau khi hoạt hóa 14 ngày sẽ được kiểm tra khả năng sinh bào tử gây bệnh Bào tử nấm được pha loãng trong nước muối sinh lý có bổ sung 0,05% Tween 80 để đạt nồng độ 10 7 CFU/ml (đếm bằng buồng đếm hồng cầu) Pha loãng dịch treo nấm trong môi trường thạch nước để đạt nồng độ 10 4 CFU/ml

Cắt thạch chứa nấm đường kính 2 mm đặt lên thành móng

Dùng parafilm dán xung quanh mép đĩa, ủ ở nhiệt độ phòng Sau 07 ngày, quan sát sự phát triển của nấm trên móng bằng mắt thường và kính hiển vi quang học (vật kính 4 và vật kính 10) Xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi nấm của phối hợp và các chất thử riêng rẽ ex vivo

KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM

Kết quả khảo sát khả năng kháng nấm của tinh dầu Tràm Trà Úc

Bảng 3 1 : K ế t qu ả xác đị nh n ồng độ ứ c ch ế t ố i thi ể u vi n ấ m (MIC)

Nồng độ tinh dầu Tràm Trà Úc (TTO) àl/ml MIC àl/ml

Chú thích: (+) nấm mọc (-) nấm không mọc

Nhận xét: Dựa vào bảng kết quả 3.1 cho thấy nồng độ tối thiểu kháng nấm của tinh dầu Tràm Trà Úc trên các chủng nấm da khảo sát nằm trong khoảng 2,5 - 5 àl/ml

3.1.2 Kết quả khảo sát hiệu quả phối hợp của các chất kháng nấm

Phương pháp sử dụng: kết hợp phương pháp pha loãng và phương pháp khuếch tán

Tinh dầu TTO được hòa tan trong môi trường ở nồng độ từ 1/4 MIC đến 1/64 MIC

Cỏc đĩa giấy tẩm cao riềng (10 àl/đĩa) và cao BMT (25 àg/đĩa) được đặt trên mặt thạch đã có TTO và đã trãi vi nấm

Thực hiện song song với hộp petri chỉ đặt các đĩa giấy tẩm DR và BMT cùng nồng độ nhưng không chứa TTO Đọc kết quả bằng cách đo kích thước và quan sát vòng kháng nấm

3.1.2.1 Khảo sát hiệu quả phối hợp giữa cao riềng và các chất kháng nấm trên T mentagrophytes

B ả ng 3 2: K ế t qu ả xác đị nh ph ố i h ợ p gi ữ a TTO – cao ri ề ng – Cao BMT b ằ ng phương pháp khuế ch tán ch ủ ng n ấ m da T mentagrophytes

Nồng độ TTO (àl/ml) Chất thử Đường kính vòng kháng nấm (mm)

Chú thích: (-) nấm không mọc Những nồng độ có chữ cái giống nhau không khác biệt ở độ tin cậy 95%

Các chữ cái có cùng chữ số được so sánh với nhau

Hình 3 1: Phối hợp kháng nấm T mentagrophytes của cao BMT – cao riềng

Nhận xét: Dựa vào bảng kết quả ở bảng 3.2 cho thấy đường kính vòng kháng nấm của cao riềng khi có TTO rộng hơn khi không có TTO Bắt đầu từ nồng độ 0,08 àl/ml cao riềng, sự khỏc biệt về đường kớnh vũng khỏng nấm ở môi trường không bổ sung TTO so với môi trường có TTO đã có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% (phụ lục 1) Kết quả này cho thấy có sự cộng hợp kháng

T mentagrophytes giữa TTO và cao riềng

Trong bảng số liệu còn cho thấy đường kính vòng kháng nấm T mentagrophytes của cao BMT tăng nhẹ khi tăng dần nồng độ TTO được bổ sung vào môi trường Theo kết quả thống kờ ở phụ lục 2, khi trong mụi trường chứa 0,08 àl/ml TTO, đường kính vòng kháng không khác biệt có ý nghĩa ở độ tin cậy 95% so với khi khụng bổ sung TTO (6 mm), tuy nhiờn khi tăng TTO lờn 0,156 àl/ml (1/32 MIC) và 0,313 àl/ml (1/16 MIC) thỡ kớch thước vũng khỏng nấm tăng lờn cú ý nghĩa (7,7 mm và 8,3 mm) Như vậy, có sự phối hợp kháng T mentagrophytes giữa cao BMT và TTO

Hình 3.1 minh họa cầu nối giữa hai vòng kháng nấm của cao riềng và cao BMT, chứng tỏ sự cộng hợp kháng nấm T mentagrophytes giữa hai loại thảo dược này.

Kết quả này cần được khảo sát tiếp tục bằng phương pháp bàn cờ để hoàn thiện hơn

B ả ng 3 3: K ế t qu ả xác đị nh ph ố i h ợ p gi ữ a TTO – cao ri ề ng – terbinafine b ằ ng phương pháp khuế ch tán ch ủ ng n ấ m da T mentagrophytes

Các chữ cái có cùng chữ số được so sánh với nhau

Hình 3 2: Phối hợp kháng nấm T mentagrophytes của terbinafine – Cao riềng

Nhận xét: Tương tự kết quả ở bảng 3.2., theo kết quả ở bảng 3.3 và phụ lục 3 cho thấy đường kính vòng kháng nấm của cao riềng tăng đáng kể và khác biệt có ý nghĩa thống kê khi bổ sung TTO vào môi trường ở các nồng độ khác nhau Điều này cho thấy có thể có sự cộng hợp kháng T mentagrophtes giữa TTO và cao riềng

Kết quả nghiên cứu cho thấy dầu tràm trà (TTO) không có tác dụng hiệp đồng kháng nấm với terbinafine trên chủng nấm Trichophyton mentagrophytes Dựa trên quan sát ở phụ lục 4, ta thấy đường kính vòng kháng nấm của terbinafine hầu như không thay đổi khi bổ sung TTO vào môi trường nuôi cấy của nấm, cho thấy không có sự tương tác hiệp đồng giữa hai hợp chất này trong việc ức chế nấm.

Dựa vào hình 3.2 cho thấy không có cầu nối giữa 2 vòng kháng nấm dầu Riềng và Terbinafine, kết quả này chỉ ra rằng không có sự cộng hợp kháng T mentagrophytes giữa cao riềngvà terbinafine

3.1.2.2 Khảo sát hiệu quả phối hợp giữa cao riềng và các chất kháng nấm trên T rubrum

B ả ng 3 4: K ế t qu ả xác đị nh ph ố i h ợ p gi ữ a TTO – cao ri ề ng – cao BMT b ằ ng phương pháp khuế ch tán ch ủ ng n ấ m da T rubrum

Nồng độ TTO (àl/ml)

Chất thử Đường kính vòng kháng nấm (mm)

Các chữ cái có cùng chữ số sẽ được so sánh với nhau

Hình 3 3:Phối hợp kháng nấm T rubrum giữa của cao riềng– cao BMT cao riềng cao BMT

Nhận xét: Dựa vào bảng kết quả 3.4 cho thấy đường kính vòng kháng nấm của cao riềng khi có TTO rộng hơn khi không có TTO, sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê ở độ tin cậy 95% (phụ lục 5) Khi trong môi trường không bổ sung TTO thì vòng kháng nấm của cao riềngchỉ đạt 19,2 mm, khi TTO được bổ sung vào mụi trường với nồng độ 0,08 àl/ml (1/32 MIC), 0,156 àl/ml (1/16 MIC), 0,313 àl/ml (1/8 MIC) thỡ kớch thước vũng khỏng nấm của cao riềngtăng tương ứng 23,7 mm, 32,2 mm và 46,7 mm Kết quả này cho thấy có sự cộng hợp kháng T rubrum giữa TTO và cao riềng

Trong bảng số liệu còn cho thấy đường kính vòng kháng nấm T rubrum của cao BMT khi có TTO rộng hơn không có TTO, sự khác biệt có ý nghĩa ở độ tin cậy 95% (phụ lục 6) Như vậy, có sự phối hợp kháng T rubrum giữa cao BMT và

Dựa vào hình 3.3 cho thấy có cầu nối giữa 2 vòng kháng nấm của cao riềng và cao BMT, kết quả này cho thấy có sự phối hợp kháng T rubrum giữa cao riềngvà cao BMT

B ả ng 3 5: K ế t qu ả xác đị nh ph ố i h ợ p gi ữ a TTO – cao ri ề ng – terbinafine b ằ ng phương pháp khuế ch tán ch ủ ng n ấ m da T rubrum

Hình 3 4:Phối hợp kháng nấm T rubrum giữa của cao riềng – terbinafine terbinafine cao riềng

Nhận xét: Tương tự bảng 3.4., bảng kết quả 3.5 cho thấy đường kính vòng kháng nấm của cao riềng khi có TTO rộng hơn khi không có TTO, sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê ở độ tin cậy 95% (phụ lục 7) Khi trong môi trường không bổ sung TTO thì vòng kháng nấm của cao riềng chỉ đạt 20,8 mm, khi TTO được bổ sung vào mụi trường với nồng độ 0,08 àl/ml (1/32 MIC), 0,156 àl/ml (1/16 MIC), 0,313 àl/ml (1/8 MIC) thỡ kớch thước vũng khỏng nấm của cao riềng tăng tương ứng 32,5 mm, 35,2 mm và 49,3 mm Kết quả này cho thấy có sự cộng hợp kháng T rubrum giữa TTO và cao riềng

Trong bảng số liệu còn cho thấy đường kính vòng kháng nấm T rubrum của terbinafine khi có TTO rộng hơn khi không có TTO chỉ bắt đầu từ nồng độ TTO ở mức 0,156 àl/ml, sự khỏc biệt cú ý nghĩa ở độ tin cậy 95% (phụ lục 8), cú thể có sự phối hợp kháng T rubrum giữa Terbinafine và TTO

Dựa vào hình 3.3 cho thấy cầu nối giữa 2 vòng kháng nấm của cao riềng và terbinafine không rõ rệt, vì vậy sự phối hợp kháng T rubrum giữa cao riềng và terbinafine cần được khảo sát tiếp tục bằng phương pháp bàn cờ

3.1.2.3 Khảo sát hiệu quả phối hợp giữa cao riềng và các chất kháng nấm trên M gypseum

B ả ng 3 6: K ế t qu ả xác đị nh ph ố i h ợ p gi ữ a TTO – cao ri ề ng – cao BMT b ằ ng phương pháp khuế ch tán ch ủ ng n ấ m da M gypseum

Nồng độ TTO (àl/ml)

Chất thử Đường kính vòng kháng nấm (mm)

Hình 3 5:Phối hợp kháng nấm M gypseum của BMT – cao riềng cao riềng

Theo bảng kết quả 3.6, khi nồng độ tinh dầu tràm trà (TTO) trong môi trường nuôi cấy tăng từ 0,08 µl/ml (1/64 MIC), đường kính vòng kháng nấm của cao riềng tăng lên đáng kể so với nhóm đối chứng không có TTO Sự khác biệt này được chứng minh là có ý nghĩa thống kê ở độ tin cậy 95% (Phụ lục 9).

Kết quả kháo sát tác động của chất kháng nấm lên T.mentagrophytes trên mô hình móng nhiễm

T.mentagrophytes trên mô hình móng nhiễm

B ả ng 3 15: Tác độ ng ứ c ch ế s ự phát tri ể n c ủ a T mentagrophytes khi ti ế p xúc v ớ i ch ấ t th ử

Chất kháng nấm Nồng độ bổ sung vào môi trường (%)

Chú thích: + có sự phát triển của vi nấm; - không có sự phát triển của vi nấm

Hình 3.7:Tác động ức chế sự phát triển của T.mentagrophytes khi tiếp xúc với chất thử (quan sát bằng mắt thường) A: cao riềng ở nồng độ 0,25%

C: phối hợp cao riềng – TTO ở nồng độ 0,25%

Từ kết quả bảng 3.15 và hình 3.7 cho thấy nồng độ phối hợp ở 0,25% vẫn ức chế sự phát triển của vi nấm thử nghiệm.

THẢO LUẬN KẾT QUẢ

3.2.1 Trong sàng lọc hiêu quả phối hợp giữa các chất kháng nấm với nhau, chúng tôi đã kết hợp giữa phương pháp pha loãng và phương pháp khuếch tán Cách này đã khắc phục được nhược điểm của các chất bay hơi như tinh dầu tràm trà Úc và có thể khảo sát đồng thời hiệu quả phối hợp giữa 1 tinh dầu và nhiều chất kháng nấm khác dựa và sự chênh lệch về đường kính vòng kháng nấm giữa các chất thử khi có tinh dầu và không có tinh dầu trong môi trường Đồng thời, có thể khảo sát

SVTH: Trịnh Thị Thanh Trâm 48 hiệu quả cộng hợp giữa các chất thử theo phương pháp khuếch tán dựa vào cầu nối giữa 2 vòng kháng nấm Kết quả có được từ sự kết hợp giữa phương pháp pha loãng và phương pháp khuếch tán đã được xác nhận qua phương pháp pha loãng theo hình bàn cờ (checkerboard method) như sau:

- Phương pháp pha loãng phối hợp với phương pháp khuếch tán đã sàng lọc được cặp phối hợp cao riềng và TTO

- Phương pháp khuếch tán (sự giao nhau giữa hai vòng kháng nấm) đã sàng lọc được cặp phối hợp cao riềng và cao BMT

- Hai cặp phối hợp này đã được xác nhận cho hiệu quả cộng lực theo phương pháp pha loãng theo hình bàn cờ

3.2.2 Thân rễ Riềng nếp đã được sử dụng theo kinh nghiệm dân gian để trị hắc lào, lang ben có hiệu quả Cao riềng chiết xuất từ thân rễ riềng nếp đã được chứng minh cho tác động kháng nấm da tốt, tuy nhiên do cao riềng có bản chất nóng, dùng ở nồng độ cao có thể gây đỏ da Để khắc phục nhược điểm trên, cần nghiên cứu phối hợp cao riềng và một số chất kháng nấm khác nhằm tăng tác động và giảm liều sử dụng và giảm tác dụng ngoài ý gây đỏ da, nóng da của cao riềng

Bằng phương pháp pha loãng theo hình bàn cờ, chúng tôi đã sơ bộ tìm được 2 phối hợp giữa cao riềng và TTO, cao riềng và cao BMT, cả hai phối hợp đều cho hiệu quả cộng lực kháng các chủng nấm da khảo sát, đồng thời giảm được liều tác động của cao riềng từ 1/2 đến 1/4 nồng độ sử dụng riêng rẽ với các tỷ lệ phối hợp đã xác định sẽ là tiền đề để xác định liều sử dụng của các phối hợp này qua mô hình xác định hiệu quả chất kháng nấm ex vivo

Trong nghiên cứu trên mô hình móng nhiễm, việc kết hợp các thành phần chiết xuất từ cao riêng và tinh dầu tràm trà (TTO) ở nồng độ 0,25% đã cho thấy hiệu quả trong việc ức chế sự phát triển của T mentagrophytes.

ĐỀ NGHỊ

Nếu được phép chúng tôi đề nghị được tiếp tục nghiên cứu các nội dung sau:

- Tiếp tục lặp lại thí nghiệm nhiều hơn để có kết quả chính xác nhất

- Thực hiện các thí nghiệm khảo sát khả năng phối hợp nhiều thành phần của dầu Riềng với các hợp chất khác nhằm tìm ra những phối hợp cộng lực và hiệp lực tốt nhất

- Khảo sát hoạt tính ex vivo trên chủng nấm da khác

- Thử tính kích ứng da nhằm áp dụng công thức phối hợp vào chế phẩm dùng ngoài trị nấm

Tiêu đề	Khảo Sát Hoạt Tính Kháng Nấm Da Của Cao Riềng Nếp Ở Dạng Phối Hợp
Tác giả	Trịnh Thị Thanh Trâm
Người hướng dẫn	PGS.TS. Nguyễn Đinh Nga
Trường học	Trường Đại Học Mở Tp.HCM
Chuyên ngành	Công Nghệ Sinh Học
Thể loại	Khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2013
Thành phố	Tp. Hồ Chí Minh

Định dạng
Số trang	73
Dung lượng	1,36 MB