Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa của Fucoidan khối lượng phân tử thấp chế tạo bằng phương pháp chiếu xạ

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA FUCOIDAN KHỐI LƯỢNG PHÂN TỬ THẤP CHÉ TẠO BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ Sinh viên thực : Nguyễn Hoàng 1511537705 MSSV : GVHD : PGS.TS Lê Quang Luân ThS Trần Lệ Trúc Hà TP HCM, 2020 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC iỉ TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC BẢNG BIẾU viii DANH MỤC • CHỮ VIẾT TẮT ix ĐẶT VẤN ĐỀ X CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 12 1.1 Giới thiệu rong nâu 12 1.1.1 Hình thái 12 1.1.2 Phân bố Việt Nam giới 13 1.1.3 Thành phần hóa học rong nâu 14 1.2 Fucoidan 15 1.2.1 Khái quát fucoidan 15 1.2.2 Tác dụng sinh học fucoidan 16 1.3 Khái quát chung gốc tự do, oxy hóa chất chống oxy hóa 19 1.3.1 Gốc tự 19 1.3.1.1 Khái niệm 19 1.3.1.2 Nguồn gốc phát sinh gốc tự thể .19 1.3.2 Sự oxy hóa .20 1.3.3 Chất chống oxy hóa 20 ii 1.4 Phương pháp tách chiết fucoidan từ rong nâu 20 1.5 Một số phương pháp cắt mạch ííicoidan 21 1.5.1 Cắt mạch phương pháp sinh học 21 1.5.2 Cắt mạch phương pháp hóa học 21 1.5.3 cắt mạch phương pháp vật lý .22 1.6 Phương pháp xác định hoạt tính íìicoidan 22 1.7 Tình hình nghiên cứu nước nước 23 1.7.1 Nghiên cứu nước 23 1.7.2 Nghiên cứu nước 24 CHƯƠNG NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨƯ 25 2.1 Nơi thực 25 2.2 Nội dung nghiên cứu 25 2.3 Hóa chất thiết bị 25 2.3.1 Nguyên vật liệu 25 2.3.2 Thiết bị 25 2.4 Phương pháp nghiên cứu 26 2.4.1 Quy trình tách chiết fucoidan 26 2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng cùa loại dung mơi q trình tách chiết fucoidan 26 2.4.2.1 Tách chiết fucoidan nước 26 2.4.2.2 Tách chiết fucoidan nước cóhồ trợ đánhsóng siêu âm 27 2.4.2.3 Tách chiết fucoidan HC1 27 2.4.3 Tinh fucoidan xác định hiệusuất táchchiết 27 2.5 Che tạo fucoidan Mw thấp phương pháp chiếu xạ 28 2.6 Xác định đặc trưng cấu trúc fucoidan Mw thấp .28 2.7 Xác định hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan Mw thấp 28 iii CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Khảo sát ảnh hưởng loại dung mơi q trình tách chiết fucoidan 30 3.2 Sự suy giảm Mw cùa fiicoidan 33 3.3 Phân tích đặc trưng cấu trúc fucoidan 34 3.4 Hoạt tính kháng oxy hóa íìicoidan Mxvkhác điều kiện in vitro 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC 43 IV TÓM TẤT Fucoidan biết đến polysaccharide tư nhiên với nhiều hoạt tính sinh học cao có giá trị Khóa luận “Khảo sát hoạt tính kháng oxy fucoidan khối lượng phân tử thấp chế tạo bang phương pháp chiếu xạ” thực từ tháng 03 năm 2020 tới tháng 09 năm 2020 phịng Cơng nghệ Sinh học Vật liệu Nano, Trung tâm Công nghệ Sinh học Tp Hồ Chí Minh với mục tiêu chế tạo fucoidan phương pháp chiếu xạ khào sát khả kháng oxy hóa Đe tài bao gồm ba nội dung: Khảo sát ảnh hưởng dung mơi lên quy trình tách chiết fucoidan; nghiên cứu chế tạo fucoidan Mw thấp phương pháp chiếu xạ; Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan Nhùng kết đạt tháng khảo sát nghiên cứu: Fucoidan tách chiết thành công từ rong nâu với hiệu suất thu nhận từ tách chiết nước có hồ trợ sóng siêu âm đạt 4,31%; tách chiết HC1 đạt 4,04%; tách chiết nước đạt 3,56%; Fucoidan ban đầu 426,5 kDa giảm dần gia tăng liều xạ từ - 20 kGy; đạt 426,5 xuống 25,2 kDa; Hoạt tính bắt gốc tự DPPH fucoidan Mw~ 25,2 kDa đạt 74,65% nong độ 1000 pg/mL V DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 3.1 Mầu rong nâu 30 Hình a) Hồn hợp rong trước tách chiết; b) Hồn hợp rong sau tách chiết 30 Hình 3 Ca-alginate nghiệm thức 31 Hình Fucoidan tách chiết nghiệm thức 31 Hình Sự suy giảm Mw cùa íiicoidan sau chiếu xạ 33 Hình Pho IR fucoidan tách chiết nghiệm thứckhác 34 Hình Pho IR fucoidan liều xạ khác 35 Hình Hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan nồng độ 600ppm, ởdải liều xạ 36 Hình Hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan Mw 25,2 kDa 36 vii DANH MỤC BẢNG BIÉU Bảng Hiệu suất thu nhận fucoidan nghiệm thức 32 Bảng Hiệu suất thu nhận alginate fucoidan nghiệm thức 32 viii DANH MỤC CHỮ VIÉT TẮT FTIR Fourier-transform infrared spectroscopy DPPH 1,1- diphenyl-2-picryl-hydrazyl ABTS 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid TPC Total plate count HCL Axit clohydric CaCl2- Canxi clorua GPC Gel Permeation Chromatography NaOH Sodium hydroxide Natri hydroxit Eton Ethanol NK Natural killer cell AOAC Association of Official Analytical Chemists B Bcell receptor ABTS+ 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid) DNA Deoxyribonucleic acid UV-VIS Ultraviolet-Visible SSA Sóng siêu âm IX ĐẶT VẤN ĐÈ Tính cấp thiết đề tài Việt Nam trung tâm Đơng Nam Á, có tổng chiều dài bờ biến khoảng 3260 km, với diện tích mặt nước rộng 1.000.000 km2 Bên cạnh Việt Nam quốc gia có tính đa dạng sinh học cao đặc biệt sinh vật biển rong Trong vùng biển Khánh Hịa tỉnh có diện tích rong nâu lớn nhất, tổng diện tích rong lên tới 2.000.000 m2, trừ lượng khai thác với 11.000 rong tươi/nãm, tập trung nhiều vùng Hòn Chồng, Bãi Tiên, bán đảo Cam Ranh, Hòn Tre số đảo khác Trong hai vùng Hịn Chồng Bãi Tiên hai nơi có điều kiện thuận lợi cho rong mọc với mật độ dày đặc, sản lượng trung bình cao lên tới 5,5 kg/m2 Thêm vào đó, Fucoidan loại polysaccharide tư nhiên Mvv chứa nhiều rong nâu Nhờ đa dạng cấu trúc mà fucoidan sở hừu nhiều hoạt tính sinh học có giá trị, số nghiên cứu khoa học khẳng định khả ngăn chặn hình thành cục máu đơng íìicoidan ngồi cịn kháng khuẩn, kháng virus, chống nghẽn tĩnh mạch, chống ung thư, chống viêm khớp, chống viêm nhiễm, giảm mỡ máu, hạ cholesterol, tăng cường miễn dịch.v v với tiềm ứng dụng lớn lĩnh vực mỹ phẩm, thực phàm chức dược phấm Việc nghiên cứu thành phần hóa học, cấu trúc hoạt tính sinh học fucoidan từ rong nâu có vai trị quan trọng có nhiều rong biển, với khả kích thích sản sinh tế bào miễn dịch, giúp cho có khả chong lại tác nhân có hại nấm, ký sinh trùng tế bào ung thư Tuy nhiên, việc tách chiết fucoidan với khối lương phân tử cao Một số phương pháp không thân thiên với môi tồn dư hóa chất sau tách chiết, hay vấn đề tinh fucoidan sản phẩm, hay làm gia tăng hoạt tính sinh học fucoidan cách cắt mạch fucoidan để tạo fucoidan có Mwthap Chiếu xạ phương pháp hiệu để cắt mạch polysaccharide tự nhiên che tạo sản phẩm có Mw thấp với ưu điểm kiểm sốt hiệu suất cắt mạch, q trình chế tạo an tồn thân thiện với mơi trường Từ tơi thực đề tài “Khảo sát hoạt tính kháng oxy íìicoidan khối lượng phân tử thấp chế tạo phương pháp chiếu xạ” nhằm tìm phương X pháp tách chiết cho hiệu suất thu nhận fucoidan cao, khảo sát gia tăng hoạt tính sinh học cách chế tạo fucoidan Mw thấp Mục tiêu cũa đề tài - Tách chiết fucoidan nguyên liệu từ rong nâu; - Chế tạo íùcoidan Mw thấp phương pháp chiếu xạ; - Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan XI Chương Kết thảo luận 3.3 Phân tích đặc trưng cấu trúc fucoidan Phổ FTIR 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Số sóng (cin-1) Hình Phố IR fucoidan tách chiết nghiệm thức khác Sau chế tạo fiicoidan Mw thấp, tiếp đến thực phân tích đặc trưng cấu trúc fucoidan chiếu xạ nghiệm thức phô hồng ngoại (FTIR) tiến hành Ket từ hình 3.6 cho thấy, vị trí nhóm sulfate gắn vào fucoidan xác định phồ IR đỉnh hấp thu 1232 cm'1 (S=0) hấp thụ 3473 cm'1 nhóm 0-H, dải hấp thụ đặc trưng cho sulfate ester Dải hấp thụ 1644 cm-1 xác nhận có mặt acid uronic Dải hấp thụ 840 cm’1 khẳng định có mặt nhóm sulfate vị trí C-2 và/hoặc C-3 và/hoặc C6 vịng pyranose Điều cho thấy khơng có thay đoi cấu trúc fucoidan tách chiết phương pháp chiết nước, chiết nước có hồ trợ sóng siêu âm chiết HC1 34 Chương Kết thảo luận 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Số sóng (cm -1) Hình Phổ IR fucoidan liều xạ khác Bên cạnh đó, kết phân tích hồng ngoại hình 3.7 cho thấy chế tạo fucoidan Mw thấp phương pháp chiếu xạ không làm thay đồi đặc trưng cấu trúc fucoidan Tuy nhiên cường độ peak đặc trưng có suy giảm so với đối chứng nguyên nhân fucoidan bị cắt mạch phương pháp xạ làm suy giảm khối lượng phân tử fucoidan Ket phù họp với nghiên cứu Bùi Văn Nguyên cộng sự35 35 Chương Ket thảo luận 3.4 Hoạt tính kháng oxy hóa ciía fucoidan Mw khác điều kiện in vitro Hình Hoạt tính kháng oxy hóa cùa fucoidan nồng độ 600 ppm, dải liều xạ Ket từ hình 3.8 cho thấy khả bắt gốc tự fucoidan nồng độ 600 ppm theo dải liều xạ từ - 20 kGy tương ứng với Mw ~ 426,5; 104,7; 50,8; 28,5 25,2 kDa đạt từ 43,63; 49,42; 51,52; 52,51; 55,62% Khả kháng oxy hóa fucoidan tỉ lệ nghịch Mwhay khả bắt góc tự cao Mw thấp Ket phù hợp với nghiên cứu Lei Wang cộng sự36 sử dụng phương pháp kháng oxy hóa phần nghiên cứu Hình Hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan Mw 25,2 kDa 36 Chương Ket thảo luận Kết từ hình 3.9, cho thấy hoạt tính bắt gốc tự 1000 ppm đạt 74,65% nồng độ: 200; 400; 600 800 ppm khả bắt góc tự đạt từ 28,04; 46,52; 55,62 62,78% Như khả kháng oxy hóa cùa fucoidan có khả kháng cao tối đa 74,65% nồng độ 1000 ppm Ket phù hợp với nghiên cứu phù họp với nghiên cứu Micheline C.R.S cộng sự37 tác giả có sử dụng liều xạ nội dung nghiên cứu Như vậy, việc sử dụng phương pháp chiếu xạ để cắt mạch fucoidan xem phương pháp hiệu quả, thân thiện với mơi trường Bên cạnh đó, fucoidan Mw thấp chế phương pháp cắt mạch xạ có triển vọng lớn loại thực phàm chức hồ trợ điều trị bệnh ung thư, máu, 37 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ Ket luận Chế tạo thành công fucoidan từ rong nâu với hiệu suất thu nhận cao 4,31 % tách chiết nuớc có hồ trọ đánh sóng siêu âm; Khảo sát cắt mạch vói Mw cùa fucoidan thành cơng vói 25,2kDa phương pháp chiếu xạ, Mw ~ 426,5 kDa dải liều xạ - 20 kGy; Hoạt tính bắt gốc tự DPPH fucoidan Mw~ 25,2 kDa đạt 74,65% nồng độ 1000 pg/mL Đề nghị Cần thử nghiệp tế bào động vật, thực vật đặc biệt tế bào ung thư đem lại nhiều tỉm y học phương tây riêng phương đơng nói chung cải thiện song tốt đẹp 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phạm Hoàng Hộ Rong biển Việt Nam - Phần III Phaeophyceae Sài Gòn: NXB Trung tâm học liệu Sài Gòn; 1969 Nguyễn Hừu Đại Rong Mơ (Sargassaceae) Việt Nam: Nguồn lợi sử dụng NXB Nông nghiệp TP Hồ Chí Minh; 1997 Nguyễn Hữu Dinh, Huỳnh Quang Năng Năm loài thuộc chi rong Mơ - Sargassum ven biển Việt Nam Tạp Sinh học 2001 ;23( 1): 1-10 Nguyễn Hữu Đĩnh, Trần Ngọc Bút, Nguyền Văn Tiến Rong biển miền Bắc Việt Nam Hà Nội: Nhà XB KHKT; 1993 Trần Đình Toại, Châu Văn Minh Tiềm rong biển Việt Nam Hà Nội: NXBKHKT; 2004 Bùi Minh Lý, Lê Như Hậu Đảnh giả trạng Nghiên cứu giải pháp bảo vệ nguồn lợi rong Mơ (Sargassum) Khảnh Hòa Khánh Hòa: Đe tài cấp tỉnh Khánh Hòa; 2010 Nguyễn Duy Nhứt Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tỉnh sinh học polysacarit từ so loài rong nâu tỉnh Khảnh Hòa Hà Nội: Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, Viện Hóa học; 2008 Trần Thị Luyến, Đồ Minh Phụng, Nguyễn Anh Tuấn, Ngô Đăng Nghĩa Chế biến rong biển Thành phố Hồ Chí Minh: Nxb Nông nghiệp; 2004 Kylin H Zur biochemie der Meersalgen, z Physiol Chem 1913;83:171 -197 10 Bilan MI, Grachev AA, Shashkov AS, et al Preliminary investigation of a highly sulfated galactofucan fraction isolated from the brown alga Sargassum polycystum Carbohydr Res 2013/08//2013;377:48-57 11 Li B, Lu F, Wei X, Zhao R Fucoidan: Structure and Bioactivity Molecules (Basel, Switzerland) 02/01 2008;13:1671-1695 39 12 Phạm Đức Thịnh Nghiên cứu phân tích thành phần, cẩu trúc hóa học cùa fucoidan có hoạt tính sinh học từ số lồi rong nâu Vịnh Nha Trang Hà Nội, Viện Hóa học; 2015 13 Trần Đình Toại, Nguyền Văn Năm Fucoidan- polysaccharide chiết từ rong Nâu, sản phẩm có hoạt tính sinh học cao, ứng dụng y học nuôi trồng thủy sản Tạp Khoa học Công nghệ 2007;44( l):39-46 14 Aisa Y, Miyakawa Y, Nakazato T, et al Fucoidan induces apoptosis of human HS-sultan cells accompanied by activation of caspase-3 and down-regulation of ERK pathways American journal of hematology Jan 2005;78( ):7-14 15 Zhuang c, Itoh H, Mizuno T, Ito H Antitumor active fucoidan from the brown seaweed, umitoranoo (Sargassum thunbergii) Bioscience, biotechnology, and biochemistry Apr 1995;59(4):563-567 16 Koyanagi s, Tanigawa N, Nakagawa H, Soeda s, Shimeno H Oversulfation of fucoidan enhances its anti-angiogenic and antitumor activities Biochemical pharmacology Jan 15 2003;65(2): 173-179 17 Ponce NMA, Pujol CA, Damonte EB, et al Fucoidans from the brown seaweed Adenocystis utricularis: extraction methods, antiviral activity and structural studies Carbohydr Res 2003/01/20/ 2003;338(2): 153-165 18 Lee J-B, Hayashi K, Hashimoto M, Nakano T, Hayashi T Novel Antiviral Fucoidan from Sporophyll of Undaria pinnatifida (Mekabu) Chemical & pharmaceutical bulletin 10/01 2004;52:1091-1094 19 Hemmingson JA, Falshaw R, Furneaux RH, Thompson K Structure and antiviral activity of the galactofucan sunphates extracted from Undaria pinnatifida (Phaeophyta) J Appl Phycol 2006;18:185-193 20 Mandal p, Mateu CG, Chattopadhyay K, Pujol CA, Damonte EB, Ray B Structural features and antiviral activity of sulphated fucans from the brown seaweed Cystoseira indica Antiviral 2007; 18(3): 153-162 40 chemistry & chemotherapy 21 Riou D, Colliec-Jouault s, Sei D, et al Antitumor and antiproliferative effects of a fucan extracted from Ascophyllum nodosum against a non-small-cell bronchopulmonary carcinoma line Anticancer research 05/01 1996; 16:12131218 22 Hô Đức Cường Nghiên cứu cẩu trúc khảo sát hoạt tỉnh sinh học fucoidan aginate từ hai loài rong nâu Sargassum henslowianun Sargassum swartzii Việt Nam Hà Nội, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội,; 2014 23 Verdrengh M, Harris H, Tarkowski A Role of selectins in experimental Staphylococcus aureus-induced arthritis European journal of immunology 06/01 2000;30:1606-1613 24 Saito A, Yoneda M, Yokohama s, Okada M, Haneda M, Nakamura K Fucoidan prevents concanavalin A-induced liver injury through induction of endogenous IL-10 in mice Hepatology Research 2006/07/01/2006;35(3): 190-198 25 Kawano N, Egashira Y, Sanada H Effect of dietary fiber in edible seaweeds on the development of D-galactosamine-induced hepatopathy in rats Journal of nutritional science and vitaminology Oct 2007;53(5):446-450 26 Hayashi K, Nakano T, Hashimoto M, Kanekiyo K, Hayashi T Defensive effects of a fucoidan from brown alga Undaria pinnatifida against herpes simplex virus infection International immunopharmacology Jan 2008;8(l): 109-116 27 Black WAP, Dewar ET, Woodward FN Manufacture of algal chemicals IV— Laboratory-scale isolation of fucoidin from brown marine algae Journal of the Science of Food and Agriculture 1952/03/01 1952;3(3): 122-129 28 Duarte MER, Cardoso MA, Noseda MD, Cerezo AS Structural studies on fucoidans from the brown seaweed Sargassum stenophyllum Carbohydr Res 2001/07/19/ 2001 ;333(4):281 -293 29 Swanson AK, Druehl LD Induction, exudation and the uv protective role of kelp phlorotannins Aquatic Botany 2002/07/01/ 2002;73(3):241-253 41 30 Nguyền D Nhứt, Bùi M Lý, Thành T T Thủy, Nguyễn M Cường, Trần V Sung Nghiên cứu fucoidan có hoạt tính gây độc tế bào tách từ rong nâu Sargasum swartzii phương pháp phổ khối nhiều lần Tạp Hóa học 2009;47(3):300307 31 Thanh TT, Tran VT, Yuguchi Y, Bui LM, Nguyen TT Structure of fucoidan from brown seaweed Turbinaria omata as studied by electrospray ionization mass spectrometry (ESIMS) and small angle X-ray scattering (SAXS) techniques Marine drugs Jul 12 2013;l 1(7):2431-2443 32 Duy N, Phu D, Anh N, Hien N Synergistic degradation to prepare oligochitosan by y-irradiation of chitosan solution in the presence of hydrogen peroxide Radiation Physics and Chemistry - RADIATPHYS CHEM 07/01 2011 ;80:848853 33 Le Quang L, Ha V, Uyen p, Trang L, Hien N Preparation of Oligoalginate Plant Growth Promoter by gamma Irradiation of Alginate Solution Containing Hydrogen Peroxide Journal of agricultural and food chemistry 02/22 2012;60:1737-1741 34 Lê Quang Luân, Nguyễn Thanh Vũ, Trần Lệ Trúc Hà Nghiên cứu chế tạo chất tăng trưởng thực vật Oligopeptin phương pháp chiếu xạ vỏ bưởi Tạp Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam 2019;6( 103): 109-114 35 Bùi Văn Nguyên, Bùi Minh Lý, Nguyền Quyết Chiến Nghiên cứu đặc điểm cấu trúc hoạt tỉnh sinh học fucoidan từ số loài rong nâu Việt Nam Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 2018 36 Lei Wang, Thilina u Jayawardena, Hye-Won Yang, Hyo Geun Lee, et al Isolation, Characterization, and Antioxidant Activity Evaluation of a Fucoidan from an Enzymatic Digest of the Edible Seaweed, Hizikia fusiforme May 2020; 9(5):363 37 Micheline Cristiane Rocha de Souza , Cybelle Teixeira Marques ,Celina Maria Guerra Dore, et al Antioxidant activities of sulfated polysaccharides from brown and red seaweeds Apr 2007; 19(2): 153-160 42 PHỤ LỤC ONEWAY rong aginate fucoidan BY pp /MISSING ANALYSIS Oneway Notes Output Created 24-SEP-2020 16:49:24 Comments Active Dataset DataSetl Filter Weight Split File N of Rows in Working Data Input File Definition of Missing Missing Value Handling User-defined missing values are treated as missing Statistics for each analysis Cases Used are based on cases with no missing data for any variable in the analysis ONEWAY rong aginate Syntax fucoidan BY pp /MISSING ANALYSIS Resources Processor Time 00:00:00.02 Elapsed Time 00:00:00.11 ANOVA rong aginate fucoidan Sum of Squares df Mean Square Between Groups 000 000 Within Groups 000 000 Total 000 Between Groups 118 059 Within Groups 1.118 186 Total 1.237 Between Groups 873 436 Within Groups 089 015 Total 962 ONEWAY rong aginate fucoidan BY pp /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY 43 F Sig .318 739 29.304 001 /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA (0.05) Oneway Notes Output Created 24-SEP-2020 16:51:07 Comments Active Dataset DataSet Filter Weight Split File N of Rows in Working Data Input File Missing Value Handling Definition of Missing User-defined missing values are treated as missing Statistics for each analysis Cases Used are based on cases with no missing data for any variable in the analysis ONEWAY rong aginate Syntax fucoidan BY pp /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCANLSD ALPHA(0.05) Resources Processor Time 00:00:00.03 Elapsed Time 00:00:00.19 Warnings All absolute deviations are constant within each cell Levene F statistics cannot be computed 44 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Rong (gam) Aginate (%) Fucoidan (%) std std Lower N Mean Deviation Error Bound Upper Bound Dung môi 100.000 00000 00000 100.0000 100.0000 Hỗ trợ siêu âm 100.000 00000 00000 100.0000 100.0000 HCI 100.000 00000 00000 100.0000 100.0000 Total 100.000 00000 00000 100.0000 100.0000 Dung môi 3.5367 36088 20835 2.6402 4.4331 Hỗ trợ siêu âm 3.7467 37434 21613 2.8167 4.6766 HCI 3.4800 53731 31021 2.1453 4.8147 Total 3.5878 39315 13105 3.2856 3.8900 Dung môi 3.5567 16743 09667 3.1407 3.9726 Hỗ trợ siêu âm 4.3100 12490 07211 3.9997 4.6203 HCI 4.0367 03215 01856 3.9568 4.1165 Total 3.9678 34676 11559 3.7012 4.2343 ANOVA rong aginate fucoidan Sum of Squares df Mean Square Between Groups 000 000 Within Groups 000 000 Total 000 Between Groups 118 059 Within Groups 1.118 186 Total 1.237 Between Groups 873 436 Within Groups 089 015 Total 962 Aginate Subset for alpha = 0.05 Duncana pp N HCI 3.4800 Dung môi 3.5367 Hỗ trợ siêu âm 3.7467 491 Sig 45 F Sig .318 739 29.304 001 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons 95% Dependent LSD Difference (I- Interval (J)pp J) Std Error Sig Lower Bound Dung môi Hỗ trợ siêu âm -.21000 35247 573 -1.0725 HCI 05667 35247 878 -.8058 Dung môi 21000 35247 573 -.6525 HCL 26667 35247 478 -.5958 Dung môi -.05667 35247 878 -.9191 Hỗ trợ siêu âm -.26667 35247 478 -1.1291 Hỗ trợ siêu âm -.75333’ 09963 000 -.9971 HCI -.48000’ 09963 003 -.7238 Dung môi 75333’ 09963 000 5096 HCI 27333’ 09963 034 0296 Dung môi 48000’ 09963 003 2362 Hỗ trợ siêu âm -.27333’ 09963 034 -.5171 Hỗ trợ siêu âm HCI Fucoidan LSD Confidence (1) pp Variable Aginate Mean Dung môi Hỗ trợ siêu âm HCI Homogeneous Subsets Fucoidan Subset for alpha = 0.05 Duncana pp N Dung môi 3.5567 HCI Hỗ trợ siêu âm Sig 4.0367 4.3100 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 46 Đối chứng fucoidan 200 400 600 800 1000 0.496 0.369 0.359 0.338 0.319 0.301 0.496 0.373 0.352 0.335 0.318 0.298 0.491 0.37 0.352 0.331 0.319 0.297 TB 0.494333 0.370667 0.354333 0.334667 0.318667 0.298667 DC 0.016 0.034 0.056 0.077 0.105 OD 0.494333 0.354667 0.320333 0.278667 0.241667 0.193667 H 28.25354 35.19892 43.62778 51.11261 60.82266 kGy 200 400 600 800 1000 0.492 0.361 0.345 0.315 0.309 0.289 0.487 0.364 0.348 0.314 0.304 0.289 0.49 0.364 0.344 0.315 0.307 0.285 TB 0.489667 0.363 0.345667 0.314667 0.306667 0.287667 DC 0.000 0.015 0.062 0.067 0.089 0.101 OD 0.489667 0.348 0.283667 0.247667 0.217667 0.186667 H 28.93125 42.06943 49.42138 55.54799 61.87883 lOkGy 200 400 600 800 1000 0.492 0.361 0.337 0.312 0.307 0.281 0.495 0.358 0.339 0.316 0.305 0.283 0.496 0.357 0.34 0.316 0.307 0.284 TB 0.494333 0.358667 0.338667 0.314667 0.306333 0.282667 DC 0.000 0.011 0.052 0.075 0.117 0.117 OD 0.494333 0.347667 0.286667 0.239667 0.189333 0.165667 H 29.66959 42.00944 51.51719 61.69926 66.48685 47 15kGy 200 400 600 800 1000 0.489 0.357 0.334 0.309 0.3 0.28 0.495 0.354 0.332 0.31 0.301 0.275 0.492 0.352 0.33 0.307 0.303 0.279 TB 0.492 0.354333 0.332 0.308667 0.301333 0.278 DC 0.000 0.007 0.047 0.075 0.115 0.120 OD 0.492 0.347333 0.285 0.233667 0.186333 0.158 H 29.40379 42.07317 52.50678 62.12737 67.88618 20kGy 200 400 600 800 1000 0.475 0.351 0.329 0.311 0.301 0.287 0.47 0.352 0.327 0.315 0.305 0.284 0.471 0.349 0.325 0.317 0.304 0.284 TB 0.472 0.350667 0.327 0.314333 0.303333 0.285 DC 0.000 0.011 0.013 0.017 0.018 0.026 OD 0.472 0.339667 0.314 0.297333 0.285333 0.259 H 28.03672 46.51619 55.62633 62.78027 74.64953 48 ... tài ? ?Khảo sát hoạt tính kháng oxy íìicoidan khối lượng phân tử thấp chế tạo phương pháp chiếu xạ? ?? nhằm tìm phương X pháp tách chiết cho hiệu suất thu nhận fucoidan cao, khảo sát gia tăng hoạt tính. .. học cách chế tạo fucoidan Mw thấp Mục tiêu cũa đề tài - Tách chiết fucoidan nguyên liệu từ rong nâu; - Chế tạo íùcoidan Mw thấp phương pháp chiếu xạ; - Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa fucoidan. .. tiêu chế tạo fucoidan phương pháp chiếu xạ khào sát khả kháng oxy hóa Đe tài bao gồm ba nội dung: Khảo sát ảnh hưởng dung mơi lên quy trình tách chiết fucoidan; nghiên cứu chế tạo fucoidan Mw thấp