(TIỂU LUẬN) bào CHẾ và KHẢO sát HOẠT TÍNH KHÁNG OXY hóa của hệ VI hạt từ FIBROIN tơ tằm CHỨA DỊCH CHIẾT HOA sài đất BA THÙY (wedelia trilobata l )

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN -  - HUỲNH QUỐC CƯỜNG BÀO CHẾ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA CỦA HỆ VI HẠT TỪ FIBROIN TƠ TẰM CHỨA DỊCH CHIẾT HOA SÀI ĐẤT BA THÙY (Wedelia trilobata L.) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: HÓA DƯỢC Cần Thơ, 2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC -  - HUỲNH QUỐC CƯỜNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: HÓA DƯỢC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS PHẠM DUY TOÀN Cần Thơ, 2022 NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn: TS Phạm Duy Toàn Đề tài: Bào chế khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa hệ vi hạt từ fibroin tơ tằm chứa dịch chiết hoa Sài đất ba thùy (Wedelia trilobata L.) 3.Sinh viên thực hiện: Huỳnh Quốc Cường Lớp: Hóa dược 4.Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN:  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên thực đề tài: d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng năm 2022 Cán hướng dẫn NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán hướng dẫn: TS Phạm Duy Toàn Đề tài: Bào chế khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa hệ vi hạt từ fibroin tơ tằm chứa dịch chiết hoa Sài đất ba thùy (Wedelia trilobata L.) 3.Sinh viên thực hiện: Huỳnh Quốc Cường Lớp: Hóa dược 4.Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN:  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên thực đề tài: d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng năm 2022 Cán phản biện LỜI CẢM ƠN Trân trọng biết ơn! Trong suốt trình học tập, rèn luyện thực đề tài luận văn, em nhận nhiều giúp đỡ từ quý thầy Bộ mơn Hóa, gia đình bạn bè Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt đến gia đình, ba mẹ tạo điều kiện thuận lợi nhất, động viên quan tâm em giúp em vượt qua khó khăn để hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp ngày hôm Với lòng biết ơn sâu sắc em xin chân thành cảm ơn thầy TS Phạm Duy Tồn tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện thuận lợi để giúp em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô khoa Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện thuận lợi suốt trình làm luận văn Anh Triệu Phú Hậu, chị Nguyễn Ngọc Yến hỗ trợ em sử dụng thiết bị, máy móc kinh nghiệm q báu để em hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp Cảm ơn em Hồ Tuấn Kiệt, Nguyễn Thanh Lịch Nguyễn Thị Trúc Phương phụ giúp anh thời gian qua để anh hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin cảm ơn quý thầy, cô Hội đồng chấm luận văn dành thời gian đọc đưa lời nhận xét quý báu giúp em hoàn thiện luận văn Mặc dù em cố gắng nỗ lực hoàn thành luận văn cách thật tốt, lực thời gian có hạn nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Rất mong nhận thơng cảm, bảo đóng góp ý kiến từ quý thầy cô, bạn bè để giúp em hiểu rõ vấn đề đồng thời rút kinh nghiệm quý giá cho đề tài nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày … tháng năm 2022 Sinh viên Huỳnh Quốc Cường i TĨM TẮT Wedelia trilobata L., lồi cỏ dại phổ biến Việt Nam, biết đến nguồn dược liệu tốt sử dụng rộng rãi y học dân gian Việt Nam Tuy nhiên, nghiên cứu hạn chế Wedelia trilobata L báo cáo Việt Nam Vì vậy, nghiên cứu nhằm xác định thành phần hóa học định lượng hàm lượng polyphenol nó, đánh giá khả tải hợp chất polyphenol từ chiết xuất hoa Wedelia trilobata L vào vi hạt tơ tằm khảo sát hoạt tính chống oxy hóa chúng phương pháp DPPH Cuối cùng, kết chứng minh diện alkaloid, flavonoid, saponin, glycoside axit hữu chiết xuất hoa thực vật Hàm lượng polyphenol chất chiết xuất cao vừa phải, với 33,47; 46,47; 24,45 mg GAE/g DPW cho chất chiết xuất MeOH, EtOH 60% EtOH 96% tương ứng Sau chiết xuất, dịch chiết nạp vào vi hạt fibroin cách đồng ngưng tụ Từ hình dáng vật lý, đặc tính hạt dựa phổ IR hoạt động làm gốc tự hệ thống vi hạt, nghiên cứu nạp thành công hợp chất Wedelia trilobata L vào vi hạt fibroin Sử dụng phương pháp DLS, kích thước hạt xác định 0,659 – 8,460 µm Hiệu suất trình nạp polyphenol vào vi hạt cao (trên 65%), kiểm sốt q trình giải phóng polyphenol hệ thống đệm pH 7,4 Hơn nữa, chất chiết xuất có hoạt tính chống oxy hóa cao với IC 50 8,67; 7,98; 10,70 µg/mL chiết xuất MeOH, EtOH 60% EtOH 96%, so với axit ascorbic, 4,31 µg/mL Các vi hạt sau nạp chất chiết xuất bảo toàn khả làm gốc tự chiết xuất, tương ứng với cấu hình giải phóng chúng Hơn nữa, việc giải phóng liên tục polyphenol từ vi hạt fibroin vừa có lợi mặt bảo vệ polyphenol khỏi bị phân huỷ tác nhân môi trường, vừa ứng dụng tiềm để giải phóng có kiểm sốt thuốc bao bọc Từ khóa: Kháng oxy hóa, Sài đất ba thùy, DPPH, tơ tằm, fibroin ii ABSTRACT Wedelia trilobata L., a common weed species in Vietnam, has been known to be a good source of medicinal herbs and widely used in Vietnamese folk medicine However, limited studies on Wedelia trilobata L have been reported in Vietnam Thus, this study aimed to determine the plant chemical composition and quantify its polyphenol content, as well as evaluate the ability to load polyphenol compounds from the Wedelia trilobata L flower extract into silk fibroin microparticles and investigate their antioxidant activity by DPPH method To this end, the results demonstrated the presences of alkaloids, flavonoids, saponins, glycosides, and organic acids in the plant flower extract The polyphenol content in the extracts were moderately high, with 33.47, 46.47, and 24.45 mg GAE/g DPW for MeOH, EtOH 60%, and EtOH 96% extracts, respectively After extraction, the extract was loaded onto the fibroin microparticles by cocondensation From the physical appearance, the particle properties based on the IR spectrum, and the activity of the microparticle systems, this study successfully loaded the Wedelia trilobata L compounds into fibroin microparticles Utilizing the DLS method, the particle size was determined to be 0.659 – 8.460 µm The entrapment efficiency of polyphenol loading into microparticles was high (over 65%), and it was possible to control the polyphenol release process in the pH 7.4 buffer system Moreover, the extracts had very high antioxidant activity with IC 50 of 8.67, 7.98, and 10.70 µg/mL for MeOH, 60% EtOH, and EtOH 96% extract, in comparison with ascorbic acid, at 4.31 µg/mL The microparticles after loading the extract also preserved the extract scavenging ability in a timely manner, corresponding to their release profiles Furthermore, the sustained release of polyphenols from the fibroin microparticles is both beneficial in terms of protecting the polyphenols from degradation by environmental agents, and is also a potential application for controlled-release the encapsulated drugs Keywords: Wedelia trilobata L., silk, fibroin, antioxidant, DPPH iii CAM KẾT KẾT QUẢ Tôi xin cam kết tồn nội dung, số liệu trình bày luận văn cơng trình nghiên cứu tơi theo hướng dẫn TS Phạm Duy Tồn kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác Cần Thơ, ngày tháng năm 2022 Sinh viên cam kết Huỳnh Quốc Cường iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT ABSTRACT CAM KẾT KẾT QUẢ MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG DANH SÁCH HÌNH DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu 1.5 Nội dung phương pháp nghiên cứu 1.6 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.6.1 Ý nghĩa khoa học 1.6.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan Sài đất 2.1.1 Tên gọi 2.1.2 Phân loại thực vật 2.1.3 Nguồn gốc, phân bố sinh thái 2.1.4 Đặc điểm thực vật học 2.1.5 Các nghiên cứu dược tính Sài đất 2.1.5.1 Công dụng theo kinh nghiệm dân gian Sài đất ba thùy 2.1.5.2 Hoạt tính sinh học Sài đất ba thùy công bố 2.1.6 Thành phần hóa học 2.2 Tổng quan polyphenol 2.2.1 Sơ lược polyphenol 2.2.2 Vai trò polyphenol điều trị bệnh 2.3 Tổng quan gốc tự chất kháng oxy hóa 2.3.1 Sơ lược gốc tự tác hại 2.3.2 Sơ lược chất kháng oxy hóa 2.3.3 Một số mơ hình khảo sát khả kháng oxy hóa 2.3.3.1 Thử nghiệm khử sắt FRAP 2.3.3.2 Thử nghiệm DPPH .+ 2.3.3.3 Thử nghiệm ABTS 2.3.3.4 Thử nghiệm ức chế xanthin oxidase v 2.4 Tổng quan tơ tằm 25 2.4.1 Nguồn gốc cấu trúc tơ tằm 25 2.4.2 Tính chất fibroin tơ tằm 27 2.4.3 Một số dạng cấu trúc ứng dụng fibroin 29 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 3.1 Phương tiện nghiên cứu 35 3.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 35 3.1.2 Dụng cụ thiết bị 35 3.1.3 Hoá chất 35 3.2 Phương pháp nghiên cứu 35 3.2.1 Thu xử lý mẫu 35 3.2.2 Xác định độ ẩm dược liệu 36 3.2.3 Điều chế cao chiết 36 3.3 Chiết xuất fibroin từ kén tằm 37 3.4 Phương pháp định tính thành phần hóa học 38 3.4.1 Chuẩn bị dịch chiết 38 3.4.2 Khảo sát diện nhóm hợp chất có loại cao chiết 38 3.4.2.1 Khảo sát diện alkaloid 38 3.4.2.2 Khảo sát diện flavonoid 38 3.4.2.3 Khảo sát diện saponin 38 3.4.2.4 Khảo sát diện chất khử 39 3.4.2.5 Khảo sát diện acid hữu 39 3.5 Định lượng polyphenol phương pháp đo quang 39 3.5.1 Nguyên tắc 39 3.5.2 Chuẩn bị hóa chất 39 3.5.3 Tiến hành thí nghiệm 40 3.5.3.1 Xây dựng đường chuẩn 40 3.5.3.2 Xác định hàm lượng polyphenol 40 3.6 Phương pháp bào chế hệ vi hạt fibroin 40 3.6.1 Bào chế hệ vi hạt fibroin trống (FMPs-Blank) 40 3.6.2 Bào chết hệ vi hạt fibroin tải dịch chiết (FMPs-WT) .40 3.7 Phương pháp xác định số tính chất lý hóa hệ vi hạt 41 3.7.1 Xác định hàm lượng polyphenol tải vào hạt khả tải hệ vi hạt 41 3.7.2 Đo kích thước hệ vi hạt 41 3.7.3 Xác định khả giải phóng polyphenol hệ vi hạt 41 3.7.4 Đánh giá tương tác hệ vi hạt hợp chất dịch chiết 42 3.8 Khảo sát khả quét gốc tự DPPH cao chiết hệ vi hạt 42 3.8.1 Nguyên tắc 42 3.8.2 Chuẩn bị hóa chất 43 vi Hình 2.3 Đường chuẩn kháng oxy hóa cao chiết EtOH 60% từ hoa Sài đất ba thùy Hình 2.4 Đường chuẩn kháng oxy hóa cao chiết EtOH 96% từ hoa Sài đất ba thùy 103 PHỤ LỤC E: PHỔ FT-IR E1 Phổ FT-IR bột fibroin tơ tằm hệ vi hạt blank E1.1 Bột fibroin tơ tằm 104 E1.2 Hệ vi hạt blank 105 E2 Phổ FT-IR cao chiết hệ vi hạt tải dịch chiết MeOH E2.1 Phổ FT-IR cao chiết 106 E2.2 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTMeOH 1% 107 E2.3 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTMeOH 2% 108 E2.4 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTMeOH 3% 109 E3 Phổ FT-IR cao chiết hệ vi hạt tải dịch chiết EtOH 60% E3.1 Phổ FT-IR cao chiết 110 E3.2 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTEtOH 60% 1% 111 E3.4 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTEtOH 60% 2% 112 E3.5 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTEtOH 60% 3% 113 E4 Phổ FT-IR cao chiết hệ vi hạt tải dịch chiết EtOH 96% E4.1 Phổ FT-IR cao chiết 114 E4.2 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTEtOH 96% 1% 115 E4.3 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTEtOH 96% 2% 116 E4.4 Phổ FT-IR hệ vi hạt FMPs-WTEtOH 96% 3% 117 ... fibroin tải dịch chiết từ hoa Sài đất ba thùy Do đó, đề tài ? ?Bào chế khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa hệ vi hạt từ fibroin tơ tằm chứa dịch chiết hoa Sài đất ba thùy (Wedelia trilobata L. )? ?? thực... Toàn Đề tài: Bào chế khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa hệ vi hạt từ fibroin tơ tằm chứa dịch chiết hoa Sài đất ba thùy (Wedelia trilobata L. ) 3.Sinh vi? ?n thực hiện: Huỳnh Quốc Cường L? ??p: Hóa dược... Toàn Đề tài: Bào chế khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa hệ vi hạt từ fibroin tơ tằm chứa dịch chiết hoa Sài đất ba thùy (Wedelia trilobata L. ) 3.Sinh vi? ?n thực hiện: Huỳnh Quốc Cường L? ??p: Hóa dược