Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của chế phẩm Nano vàng-CM-chitosan chế tạo bằng phương pháp chiếu xạ.pdf

ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TĨT NGHIỆP NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CHÉ PHẨM NANO VÀNG/CM-CHITOSAN CHÉ TẠO BẰNG PHƯONG PHÁP CHIẾU XẠ Sinh viên thực : Trần Nhật Hào MSSV : 1511543094 GVHD : PGS.TS Lê Quang Luân ThS Trần Lệ Trúc Hà TP.HCM, 2019 ĐẠI HOC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYEN TAT THANH THỤC HỌC - THỤC HÀNH - THỤC DANH - THỤC NGHIỆP KHOA CỒNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CHẾ PHẨM NANO VÀNG/CM-CHITOSAN CHÉ TẠO BẰNG PHƯONG PHÁP CHIẾU XẠ Sinh viên thực : Trần Nhật Hào MSSV : 1511543094 GVHD : PGS TS Lê Quang Luân ThS Trần Lệ Trúc Hà TP HCM, 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TẤT THÀNH KHOA CỊNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỊA XÀ HƠI CHÙ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc - -oOo - NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên: Trần Nhật Hào MSSV: 1511543094 Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Lớp: 15DSH1B Đầu đề luận văn: Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan chế phẩm nano vàng/CM-Chitosan chế tạo phuoìig pháp chiếu xạ Mục tiêu: Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa in vitro tác dụng bảo vệ gan chế phẩm nano vàng chế tạo phương pháp chiếu xạ mơ hình chuột thí nghiệm Nội dung: - Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro nano vàng - Khảo sát khả bảo vệ gan nano vàng chuột thí nghiệm Thời gian thực hiện: tháng 11/2018 đến tháng 7/2019 Người hướng dẫn chính: PGS.TS Lê Quang Luân Người hướng dẫn phụ: ThS Trần Lệ Trúc Hà Nội dung yêu cầu KLTN thông qua Bộ môn TP HCM, ngày thảng năm 20 Bộ MÔN (Ký ghi rõ họ tên) CÁN Bộ HƯỚNG DẢN (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực hồn thành khóa luận tơi nhận nhiều giúp đỡ Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đen: Ban Giám hiệu Trường Đại học Nguyễn Tất Thành, khoa Công nghệ Sinh học tất Thầy Cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học tập trường Trung tâm Công nghệ Sinh Tp.HCM học hồ trợ tồn kinh phí máy móc, trang thiết bị để tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Thầy PSG.TS Lê Quang Luân hết lòng giúp đỡ, chì bảo định hướng cho tơi suốt q trình thực khóa luận Cơ ThS Trần Lệ Trúc Hà trường Đại học Nguyễn Tất Thành Các anh chị phịng Cơng nghệ Sinh học Vật liệu Nano Đồng gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, gia đình, bạn bè đà động viên giúp đỡ tơi suốt trình học tập nghiên cứu Trần Nhật Hào Khoa Công nghệ Sinh học Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii TÓM TẮT V SUMMARY vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC • BẢNG BIẾU .ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT X ĐẶT VẤN ĐÈ xi CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan vật liệu nano vàng 1.2 Tính chất nano vàng 1.2.1 Sự phát huỳnh quang 1.2.2 Hiệu ứng cộng hưởng Plasmon bề mặt 1.2 Chế tạo nano vàng phương pháp chiếu xạ 1.2.1 Chế tạo nano vàng phương pháp chiếu xạ 1.2.2 Carboxymethyl chitosan (CM-chitosan) 1.3 ứng dụng cùa nano vàng 1.3.1 Trong y học 1.3.2 Hoạt tính kháng oxy hóa cùa nano vàng 1.3.3 Nhận biết tế bào ung thư 10 1.3.4 Phát ung thư qua thở 10 1.3.5 Tăng độ tương phản ảnh chụp thiết bị Micro CT X quang 10 1.4 Gan tổn thương gan 11 ii 1.4.1 Gan vấn đề thường gặp 11 1.4.2 Xét nghiệm chẩn đoán tổn thương gan 12 1.5 Tình hình nghiên cứu 13 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 14 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúu 16 2.1 Nơi thực 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Thiết bị vật liệu nghiên cứu 16 2.3.2 Nội dung 1: Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro nano vàng 17 2.3.3 Nội dung 2: Khảo sát khả bảo vệ gan nano vàng chuột thí nghiệm 18 2.3.4 Phương pháp xừ lý số liệu 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Hoạt tính kháng oxy hóa in vitro nano vàng 21 3.1.1 Hoạt tính chống oxy hóa chế phẩm nano vàng theo kích thước hạt nano vàng 21 3.1.2 Hoạt tính chống oxy hóa chế phẩm nano vàng theo nong độ .22 3.1.3 Hoạt tính chống oxy hóa cùa chế phẩm nano vàng theo thời gian 24 3.2 Khả bảo vệ gan cùa chế phẩm AuNPs/CM-chitosan điều kiện in vivo.28 3.2.1 Ảnh hưởng chế phẩm AuNPs/CM-chitosan lên số men gan AST máu chuột gây tôn thương gan 28 3.2.2 Ánh hưởng chế phàm AuNPs/CM-chitosan lên số men gan AST máu chuột gây tôn thương gan 30 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 iii TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 37 IV TÓM TẤT Đe tài “Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan chế phẩm nano vàng/CM-chitosan chế tạo bang phương pháp chiếu xạ” thực từ tháng 11/2018 đen tháng 07/2019 Phịng Vật liệu Nano, Trung tâm Cơng nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Viện sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Tp HCM Đe tài thực với mục tiêu xác định hoạt tính chống oxy hóa tác dụng bảo vệ gan mơ hình chuột thí nghiệm chế pham nano vàng/CM-chitosan có kích thước hạt trung bình khoảng 5,2 - 10,5 nm Xác định hoạt tính chống oxy hóa chế phẩm nồng độ (0,00625; 0,0125; 0,025; 0,05; 0,075; 0,125 0,25 mM) kích thước hạt khác xác định phương pháp bắt gốc tự ABTS*+ Ket cho thấy nồng độ vàng nano cao hoạt tính chống oxy hóa xảy nhanh, nồng độ 0,025 1Ĩ1M hoạt tính chống oxy hóa đạt hiệu cao (100%) thời gian ngắn (1 giờ) Hoạt tính bảo vệ gan chế phẩm AuNPs (có kích thước hạt ~ 7,3 nm) khảo sát chuột nhắt dòng Swiss có trọng lượng trung bình ~ 30 g/con gây độc gan bang acetaminophen với liều uống từ 0,5 đến mg/con sử dụng mơ hình chuột Ket phân tích cho thấy so ALT (Alanine-aminotransferase) AST (Aspartate­ aminotransferase) máu chuột có xu hướng giảm dần (ALT giảm từ 57,7 đến 69,3% AST giảm từ 57,6 đến 66,5% so với đối chứng) tăng nồng độ AuNPs nghiệm thức cho chuột uống mg AuNPs phát có số ALT thấp máu với 38,00 U/L giảm 69% so với chuột gây độc gan cho uống nước cất (đối chứng âm) 19,7% so với chuột cho uống chất chống oxy hóa silymarin (đối chứng dương) nồng độ Trong đó, chế phẩm AuNPs có tác dụng làm giảm so AST máu chuột xuống mức thấp khoảng 115,30 Ư/L (giảm 66% so với chuột gây độc gan cho uống nước cất) V SUMMARY The topic "Study on the hepatoprotective effects of gold nanoparticles/CM- chitosan prepared by gamma Co-60 irradiation" was conducted at the Bio-materials and Nano technology Department at Biotechnology Center of Ho Chi Minh City from November 2018 to July 2019 and Institute of Malariology, Parasitology and Entomology in Ho Chi Minh City The topic was carried out with the aim of determining the antioxidant activity and the hepatoprotective effects in mice of gold nanoparticles/CM-chitosan prepared by irradiation method with average particle size of about 5,2 -10,5 nm Antioxidant activity of AuNPs with different sizes and concentrations from 0,00625 to 0,25 mM was investigated free radical ABTS* method Results showed that the higher the concentration of nano gold, the stronger the antioxidant activity was attained At the concentration 0,025 mM AuNPs, the hightest antioxidant activity occurred (100%) in a short time Futhermore, the smaller AuNPs size and the higher the antioxidant activity occured, in particularly for the diameter of gold nanoparticles increases from 5,2 to 10,5 nm, the antioxidant activity decreases from 91,7% to 51,04% at the concentration of 0,075 IĨ1M The hepatoprotective activity of AuNPs was tested in acetaminophen induced hepatotoxic mice with an average body weight of ~ 30 g/head by orally administration at daily doses 0,5 - mg/head The ALT (Alanine-aminotransferase) and AST (Aspartate-aminotransferase) indexes in blood of tested mice were decreased (ALT decreased from 57,72 to 69,30% and AST decreased from 57,60 to 66,52% compared with control) by the increase administered AuNPs concentration In the group of mice administered with mg AuNPs, the ALT level in the blood was lowest with 38,00 U/L (reduced 69% compared to mice induced hepatotoxic and supplied with only distilled water, and 19,96% compared to mice administered by silymarin at the same concentration In addition, the supplemented with this AuNPs also strongly reduced AST index in tested mice with 115,3 U/L (decreasing 66% compared to that in blood of mice induced hepatotoxic and supplied with only distilled water) VI DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Dạng sản pham nano vàng sản xuất giới với kích thước khác có màu sắc khác tuỳ thuộc kích thước hạt Hình 1.2 Cơ chế phát huỳnh quang Hình 1.3 Quá trình tổng họp nano vàng Hình 1.4 Cấu hình cùa O-Carboxymethyl chitosan Hình 1.5 Mơ gan bình thường (a) Mơ gan bị viêm (b) - Nhuộm H-E .13 Hình 2.1 Chuột nhắt trắng dòng Swiss khỏe mạnh (trọng lượng ~ 30 ± g/con) .19 Hình 2.2 Lấy máu xét nghiệm 20 Hình 3.1 Đồ thị the hoạt tính kháng oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khác nồng độ khác phản ứng 21 Hình 3.2 Hoạt tính chong oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm nồng độ khác 22 Hình 3.3 Hoạt tính chống oxy hóa acid ascorbic nồng độ (mM) khác 23 Hình 3.4 Hoạt tính chống oxy hóa cùa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm acid ascorbic nong độ 0,00625 mM theo thời gian phản ứng 24 Hình 3.5 Hoạt tính chống oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm acid ascorbic nong độ 0,0125 mM theo thời gian phản ứng 25 Hình 3.6 Hoạt tính chống oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm acid ascorbic nồng độ 0,025 mM theo thời gian phản ứng.25 Hình 3.7 Hoạt tính chống oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm acid ascorbic nong độ 0,05 mM theo thời gian phản ứng 26 Hình 3.8 Hoạt tính chống oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm acid ascorbic nồng độ 0,075 mM theo thời gian phản ứng.26 Hình 3.9 Hoạt tính chống oxy hóa AuNPs/CM-chitosan có kích thước hạt khoảng nm acid ascorbic nong độ 0,125 mM theo thời gian phản ứng .27 vii ... văn: Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan chế phẩm nano vàng/CM-Chitosan chế tạo phuoìig pháp chiếu xạ Mục tiêu: Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa in vitro tác dụng bảo vệ gan chế phẩm nano vàng chế tạo. .. sở chúng tơi thực đề tài: ? ?Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan chế phẩm nano vàng/CM-Chitosan chế tạo bang phương pháp chiếu xạ” nhằm đánh giá tác dụng bảo vệ gan chế pham nano vàng Mục tiêu: Đánh giá... nano vàng có tần số cộng hưởng dải ánh sáng nhìn thấy6 Chương Tổng quan tài liệu 1.2 Chế tạo nano vàng phương pháp chiếu xạ 1.2.1 Chế tạo nano vàng bang phương pháp chiếu xạ Phương pháp chế tạo