Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan, lợi mật và độc tính cấp của bài thuốc dân gian “Bàn tay ma” vùng Tây Bắc

Nhiều bài thuốc dân gian đã được sử dụng để điều trị các bệnh về gan mật tại Việt Nam. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá tác dụng bảo vệ gan, lợi mật và độc tính cấp của cao chiết nước của bài thuốc dân gian vùng Tây Bắc gồm ba thành phần là: Bàn tay ma (Heliciopsis terminalis Kurz.), Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) và Cà gai leo (Solanum procumbens Lour.).

Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN, LỢI MẬT VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA BÀI THUỐC DÂN GIAN “BÀN TAY MA” VÙNG TÂY BẮC Bùi Thanh Tùng1*, Dương Thị Duyên1, Hoàng Thị Thúy1, Hồ Thị Hằng1, Đồng Thị Nhâm1, Phạm Thanh Hải1, Phạm Hùng Việt2 Khoa Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội Trường Đại học Khoa học tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội * Tác giả liên lạc: tungasia82@gmail.com TÓM TẮT Nhiều thuốc dân gian sử dụng để điều trị bệnh gan mật Việt Nam Trong nghiên cứu này, đánh giá tác dụng bảo vệ gan, lợi mật độc tính cấp cao chiết nước thuốc dân gian vùng Tây Bắc gồm ba thành phần là: Bàn tay ma (Heliciopsis terminalis Kurz.), Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) Cà gai leo (Solanum procumbens Lour.) Kết nghiên cứu cho thấy cao chiết nước thuốc dân gian với liều 648 mg/kg 1296 mg/kg có tác dụng bảo vệ gan mơ hình chuột bị tổn thương gan paracetamol liều 400 mg/kg thể trọng qua việc vừa làm giảm hoạt độ enzym AST ALT, giảm số viêm malonyl dialdehyde (MDA), TNF-α IFN-γ, vừa làm giảm tổn thương đại phẫu vi phẫu gan so với nhóm chứng bệnh Bài thuốc cịn cho thấy tác dụng lợi mật uống cao thuốc lượng mật tiết tăng Từ khóa: Bảo vệ gan, lợi mật, độc tính cấp, Bàn tay ma, Giảo cổ lam, Cà gai leo HEPATOPROTECTIVE, CHOLERETIC EFFECTS AND ACUTE TOXICITY OF THE HERBAL FORMULATION “GHOST HAND” (“BAN TAY MA”) COLLECTED IN THE NORTHWEST REGION Bui Thanh Tung1*, Duong Thi Duyen1, Hoang Thi Thuy1, Ho Thi Hang1, Dong Thi Nham1, Pham Thanh Hai1*, Pham Hung Viet2 School of Medicine and Pharmacy – VNU Ha Noi University of Science – VNU Ha Noi * Corresponding Author: tungasia82@gmail.com ABSTRACT In traditional medicine, many medicinal remedies have been used been used for treatment of liver disease In this study, we investigated the hepatoprotective, choleretic effect and the acute toxicity of aqueous extract of the herbal formulation containing Heliciopsis terminalis Kurz., Gynostemma pentaphyllum Thunb and Solanum procumbens Lour Our results showed that the herbal formulation at dose of 648 mg/kg and 1296 mg/kg has strong hepatoprotective in mice model injured by paracetamol 400mg/kg bw by decreasing enzymes Alanin Amino Transferase (ALT) and Aspartate Amino Transferase (AST), malonyl dialdehyde (MDA), TNF-α IFN-γ; significantly reducing macroscopic and microscopic lesions in liver compared with the control group The study also demonstrated that the herbal formulation had choleretic effect by increasing bile secretion and did not show the acute toxicity Keywords: Hepatoprotective, choleretic effect, acute toxicity, Heliciopsis terminalis Kurz., Gynostemma pentaphyllum Thunb, Solanum procumbens Lour 35 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 ĐẶT VẤN ĐỀ Gan quan lớn đảm nhận chức vô quan trọng thể như: chuyển hóa thức ăn thành chất cần thiết cho sống; sản xuất nhiều chất quan trọng cần cho hoạt động sống; giải độc tiết chất độc thể Bên cạnh đó, gan tạo mật, chất dịch cần thiết cho tiêu hóa Hiện tỷ lệ người mắc bệnh gan mật ngày gia tăng mức độ nghiêm trọng bệnh tăng lên đáng kể Y học cổ truyền từ lâu sử dụng loại thảo dược với mục đích: kích thích tiêu hóa thơng qua tác dụng tăng hoạt tính men tụy Bạch truật, Phục linh, Trần bì… bảo vệ tế bào gan: Sài hồ, Đương quy, Đại táo, Glycyrrhizine Cam thảo; điều hòa chức miễn dịch: Sài hồ, Đảng sâm, Bạch truật, Bạch thược Trong chương trình nghiên cứu thuốc dân gian có tác dụng điều trị bệnh gan mật, sàng lọc 150 thuốc dân gian vùng Tây Bắc có tác dụng bảo vệ gan lợi mật Trong thuốc sàng lọc, có thuốc dân gian gồm thành phần là: Bàn tay ma (Heliciopsis terminalis Kurz.), Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) Cà gai leo (Solanum procumbens Lour.) (nguồn: ông lang Nguyễn Quyết Thắng - Hội YHCT Bắc Kạn) cho kết khả quan nguồn dược liệu dễ kiếm theo thống kê chữa bệnh cho số lượng lớn bệnh nhân Tuy nhiên, chứng khoa học chứng minh tác dụng thuốc chưa tiến hành Do đó, nghiên cứu này, đánh giá tác dụng bảo vệ gan lợi mật thuốc dân gian Kỷ yếu khoa học Nguyên liệu Các mẫu nghiên cứu gồm bàn tay ma, giảo cổ lam, cà gai leo thu hái từ huyện Bạch Thông, tỉnh Bắc Kạn, định danh PGS.TS Trần Văn Ơn, Đại học Dược Hà Nội Cao đặc chiết nước thuốc điều chế sau: Gộp dịch lần chiết nước dược liệu khô với tỷ lệ (30 g bàn tay ma, g giảo cổ lam, 10g thân cà gai leo), lọc lấy phần dịch lọc Cô quay chân không để loại nước đến khối lượng rắn không đổi thu cao chiết nước với hiệu suất khoảng 6% Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng swiss, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 25.0 ± 2.0 gam để nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp Động vật nuôi thích nghi điều kiện đầy đủ thức ăn nước uống phịng thí nghiệm từ - ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu Khoa Y Dược, ĐHQG Hà Nội Hóa chất: Paracetamol (A7085 – Sigma Aldrich) dạng bột tinh khiết; Silymarin; Formol; Kít định lượng ALT, AST hãng Human (Đức) Dụng cụ nghiên cứu: Máy định lượng sinh hóa bán tự động HumaLyzer 2000 (Đức), dụng cụ thí nghiệm thông thường Khoa Y Dược, ĐHQG Hà Nội Phương pháp nghiên cứu Phương pháp thử tác dụng bảo vệ gan thuốc: Chuột nhắt trắng chủng swiss chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Chuột uống nước/thuốc liên tục ngày Ngày thứ 8, sau uống thuốc giờ, chuột nhịn đói từ 16-18h, gây tổn thương gan từ lơ 2-5 paracetamol (PAR) liều 400mg/kg với thể tích uống 0,2 ml/10g Sau gây độc 48 giờ, chuột lấy máu động mạch cảnh để định lượng AST, ALT quan sát mô bệnh NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học học (đại thể vi thể) Gan chuột thí C(+)): Chuột uống PAR mà khơng có nghiệm sau mổ cố định điều trị formol 10%, xử lí nhuộm Lơ (Silymarin): Chuột cho Hematoxylin-Eosin thực uống silymarin 70mg/kg + PAR môn Y Dược học sở, Khoa Y Lô (BT-L1): Chuột cho uống Dược, ĐHQG HN cao chiết thuốc - liều + PAR Lô (chứng sinh học, C(-)): Chuột Lô (BT-L2): Chuột cho uống cho uống nước cất cao chiết thuốc - liều + PAR Lô (chứng bệnh, mơ hình viêm gan, Các liều tính sau: Bảng Liều thuốc nghiên cứu dựa quy đổi từ liều dùng người Liều chuột nhắt 25g Liều Liều Liều quy đổi Dược liệu khô (mg), tương chuột nhắt 25g người chuột (mg/ngày/người) đương với liều (mg) (gấp đôi (mg/kg/ngày) (mg/kg/ngày) sử dụng liều 1) người 270 (tương ứng 540 (tương ứng 45000 900 10800 16,2mg cao 32,4mg cao chiết) chiết) Phương pháp nghiên cứu số marker sinh học phân tử liên quan đến trình viêm thuốc: Chuột chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con: Lô (chứng sinh học, C(-)): chuột cho uống nước cất Lô (chứng bệnh, mơ hình viêm gan, C(+)): Chuột cho uống PAR mà khơng có điều trị Lơ (Silymarin): Chuột cho uống silymarin 70mg/kg + PAR Lô (BT-L2): Chuột cho uống cao chiết thuốc - liều + PAR Chuột uống nước/thuốc thử liên tục ngày Ngày thứ 8, sau uống thuốc giờ, chuột nhịn đói 16 18 trước đó, gây tổn thương gan chuột lô từ lô đến lô uống PAR liều 400mg/kg với thể tích 0.2ml/10g 48 sau gây độc paracetamol, giết chuột, lấy gan, bỏ vào nitrogen lỏng bảo quản -80oC Mô gan cân đồng hệ đệm lạnh Nonidet-P40 (NP40) gồm (150 mM sodium chloride, 1.0% Triton X-100, 50 mM Tris, pH = 8.0) Sau đó, ly tâm điều kiện (12000g, 4oC) 15 phút thu lấy phần dịch phía bảo quản nhiệt độ -80oC đến phân tích Xác định hàm lượng MDA Khả ức chế q trình peroxy hóa lipid chất đánh giá thông qua việc xác định hàm lượng malonyl dialdehyde (MDA) - sản phẩm q trình oxy hóa lipid màng tế bào Định lượng nồng độ TNF-alpha, INFgamma phương pháp ELISA Phương pháp dựa nguyên tắc kháng nguyên hòa tan dung dịch đệm thích hợp phủ lên bề mặt plastic (như polystyrene) Nghiên cứu tác dụng lợi mật thuốc mơ hình in vivo: Tiến hành: Dùng 30 chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Theo phương pháp Rudi + Lô thử 1: chuột uống cao nước liều thứ 37 Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học + Lô thử 2: chuột uống cao nước liều xác định liều thấp gây chết 100% chuột liều cao không gây chết + Lô (đối chứng sinh lý): chuột uống chuột (gây chết 0% chuột) Lô thử NaCl 0,9% uống thuốc với mức liều tăng dần Chuột lô uống mẫu thử theo đến khoảng 80000 mg cao/kg với liều qui định ngày liên tục, thể tích uống 1,2 ml Nước cất thuốc ngày thứ sau uống thuốc 30 phút thử đưa thẳng vào dày chuột tiến hành gây mê ether ethylic kim cong đầu tù Theo dõi tình mổ bụng để thắt ống dẫn mật khâu trạng chung chuột, trình diễn thành bụng lại, sau 30 phút bóc tách túi biến bắt đầu có dấu hiệu nhiễm độc mật, thấm qua giấy lọc, cân (như co giật, kích động, run rẩy, lờ m1 (mg) đờ,…) số lượng chuột chết Rạch túi mật cho mật chảy hết vòng 72 sau uống thuốc thấm dịch mật lại vào giấy lọc Xử lý số liệu cân lại khối lượng túi mật m2 Số liệu nghiên cứu xử lý thống kê (mg) theo phương pháp t-test test “trướcKhối lượng mật m = m1- sau” Số liệu biểu diễn dạng m2 (mg) X ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa Lượng sinh mật lơ thử tăng so p