Tổng hợp và khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn của các dẫn chất chalcon dị vòng

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - VÕ THỊ ANH THƯ TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM, KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC DẪN CHẤT CHALCON DỊ VỊNG CHUN NGÀNH: CƠNG NGHỆ HĨA HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 08 năm 2010 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI KHOA DƯỢC - TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN THÀNH ĐẠO TS TỐNG THANH DANH Cán chấm nhận xét 1: PGS TSKH NGUYỄN CÔNG HÀO Cán chấm nhận xét 2: PGS TS PHAN THANH SƠN NAM Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 11 tháng 08 năm 2010 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: PGS TSKH Nguyễn Công Hào PGS TS Phan Thanh Sơn Nam TS Tống Thanh Danh TS Lê Thị Hồng Nhan TS Nguyễn Thị Phương Phong Chủ tịch Ủy viên + Thư ký Ủy viên Ủy viên Ủy viên Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Bộ mơn quản lí chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Bộ mơn quản lí chun ngành TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc Tp.HCM, ngày tháng năm 2010 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: VÕ THỊ ANH THƯ Phái: nữ Ngày tháng năm sinh: 03/07/1981 Nơi sinh: Long An Chun ngành: CƠNG NGHỆ HĨA HỮU CƠ MSHV : 00508407 I TÊN ĐỀ TÀI Tổng hợp khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn dẫn chất chalcon dị vòng II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG  Tổng hợp dẫn chất chalcon dị vịng  Khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn dẫn chất chalcon dị vòng III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: V HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS TRẦN THÀNH ĐẠO TS TỐNG THANH DANH CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH Lời cảm ơn Em xin kính gửi đến thầy PGS TS Trần Thành Đạo thầy TS Tống Thanh Danh lịng kính trọng sâu sắc lời cảm ơn chân thành Thầy tận tình hướng dẫn, quan tâm, động viên tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cám ơn thầy phản biện PGS TSKH Nguyễn Công Hào thầy PGS TS Phan Thanh Sơn Nam tất thầy cô hội đồng bảo vệ luận văn thạc sĩ K2008 dành thời gian quý báu để xem xét, góp ý nhận xét cho khóa luận em hồn chỉnh Tôi xin chân thành cám ơn tất thầy khoa Hóa, trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM truyền đạt kiến thức cho thời gian qua Tôi xin chân thành cám ơn tất thầy Bộ mơn Hóa Dược, Bộ mơn Ký Sinh Trùng giúp đỡ, tạo điều kiện cho hồn thành khóa luận Xin chân thành cám ơn tất bạn sinh viên trường Dược giúp đỡ, động viên tơi lúc khó khăn Cám ơn gia đình, bạn bè động viên, hỗ trợ tơi hồn thành luận văn i TÓM TẮT Đặt vấn đề: dẫn chất chalcon đặc biệt chalcon dị vòng quan tâm nghiên cứu tác nhân kháng vi sinh vật tiềm Mục tiêu: sàng lọc dẫn chất chalcon dị vịng có tác dụng kháng vi sinh vật phát triễn thành thuốc điều trị nhiễm khuẩn, nấm Phương pháp: phản ứng ngưng tụ Claisen Schmidt dùng tổng hợp chalcon Phương pháp vi pha loãng giếng 96 giếng dùng để đánh giá tác dụng kháng vi sinh vật chalcon dị vòng Kết quả: 21 dẫn chất dị vòng (pyridinyl chalcon, furfuranyl chalcon thiophenyl chalcon) tổng hợp khảo sát tác động kháng vi khuẩn S.aureus, MRSA, P.aeruginosa, E Coli, nấm C.albicans, nấm da M.gypseum T.mentagrophytes Các dẫn chất có nhóm hydroxy vịng B cho thấy tác dụng mạnh Kết luận: nhóm chất chalcon dị vòng, đặc biệt 2-hydroxy chalcon, 3-hydroxy chalcon nhóm tiềm để phát triển kháng vi sinh vật ABSTRACT Background: chalcones especially heterocyclic chalcones recently have reported as potential antibacterial agents Objectives: to screen for new like chalcone compounds named heterocyclic containing at least one heterocyclic ring instead of benzene in typical chalcone which may show inhibition against microbial germs Methods: Claisen Schmidt reaction is applied for synthesis of heterocyclic chalcone, and their antimicrobial activity is measured by micro-dilute method in 96 well plates Results: 21 new heterocyclic chalcones (pyridinyl chalcone, furfuranyl chalcone and thiophenyl chalcone) were obtained with good yields and the results of antimicrobaterial activities on S.aureus, MRSA, P.aeruginosa, E Coli, C.albicans, M.gypseum, T.mentagrophytes showed that 2-hydroxy chalcones and 3-hydroxy chalcones are stronger than those of other tested heterocyclic chalcones Conclusions: 2-hydroxy chalcones, 3-hydroxy chalcones shows significant activity ii MỤC LỤC TÓM TẮT i ABSTRACT i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC SƠ ĐỒ viii MỞ ĐẦU xix TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ FLAVONOID 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Phân loại 1.1.4 Ứng dụng 1.2 GIỚI THIỆU VỀ CHALCON 1.2.1 Cấu trúc 1.2.2 Phân bố 1.2.3 Ứng dụng 1.2.3.1 Chalcon nguyên liệu tổng hợp dẫn chất dị vòng 1.2.3.2 Tác dụng sinh học chalcon 1.2.4 Tổng hợp chalcon 11 1.2.4.1 Tổng hợp chalcon dựa vào phản ứng Friedel-Crafts 11 1.2.4.2 Tổng hợp chalcon dựa vào phản ứng Suzuki 11 1.2.4.3 Tổng hợp chalcon dựa vào phản ứng Heck .12 1.2.4.4 Tổng hợp chalcon dựa vào phản ứng ngưng tụ Claisen-Schmidt 12 1.3 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM, KHÁNG KHUẨN .14 1.3.1 Vi nấm thử nghiệm 14 iii 1.3.1.1 Nấm men Candida 14 1.3.1.2 Nấm da 15 1.3.1.3 Một số thử nghiệm hoạt tính kháng nấm 21 1.3.2 Vi khuẩn thử nghiệm 23 1.3.2.1 Tụ cầu khuẩn Staphylococcus 23 1.3.2.2 Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) 25 1.3.2.3 Pseudomonas aeruginosa .27 1.3.2.4 Escherichia Coli .28 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM .29 2.1 ĐỐI TƯỢNG .29 2.2 NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ 30 2.2.1 Nguyên liệu 30 2.2.1.1 Nguyên liệu tổng hợp 30 2.2.1.2 Nguyên liệu kiểm nghiệm 31 2.2.1.3 Nguyên liệu thử vi sinh 31 2.2.2 Trang thiết bị 33 2.2.2.1 Trang thiết bị dùng tổng hợp 33 2.2.2.2 Trang thiết bị dùng kiểm nghiệm 33 2.2.2.3 Trang thiết bị dùng thử vi sinh .33 2.3 PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 33 2.3.1 Phương pháp tổng hợp 33 2.3.2 Phương pháp tinh chế 35 2.3.3 Phương pháp kiểm nghiệm 35 2.3.3.1 Xác định nhiệt độ nóng chảy 35 2.3.3.2 Sắc ký lớp mỏng 35 2.3.3.3 Phương pháp quang phổ .36 2.3.4 Phương pháp thử vi sinh 37 iv 2.3.4.1 Khảo sát hoạt tính kháng nấm 37 2.3.4.2 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn .39 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN .41 3.1 KẾT QUẢ 41 3.1.1 Tổng hợp dẫn chất chalcon 41 3.1.1.1 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(3-nitrophenyl)-2-propen-1-on (T1) 41 3.1.1.2 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(3-nitrophenyl)-2-propen-1-on (T2) .42 3.1.1.3 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(3-nitrophenyl)-2-propen-1-on (T3) 43 3.1.1.4 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(4-dimethylaminophenyl)-2-propen-1-on (T4) 44 3.1.1.5 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(4-dimethylaminophenyl)-2-propen-1-on (T5) 45 3.1.1.6 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(4-dimethylaminophenyl)-2-propen-1-on (T6)46 3.1.1.7 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-2-propen-1-on (T7) .47 3.1.1.8 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-2-propen-1-on (T8) .48 3.1.1.9 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-2-propen-1-on (T9) 49 3.1.1.10 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-2-propen-1-on (T10)50 3.1.1.11 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-2-propen-1-on (T11) 51 3.1.1.12 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(3,4,5-trimethoxyphenyl) -2-propen-1-on (T12) 52 3.1.1.13 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(2-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T13) 53 3.1.1.14 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(2-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T14) 54 3.1.1.15 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(2-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T15) 55 3.1.1.16 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(3-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T16) 56 3.1.1.17 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(3-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T17) 57 3.1.1.18 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(3-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T18) 58 3.1.1.19 Tổng hợp 1-(pyridin-2-yl)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T19) 59 3.1.1.20 Tổng hợp 1-(furan-2-yl)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T20) 60 3.1.1.21 Tổng hợp 1-(thiophen-2-yl)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-propen-1-on (T21) 61 3.1.2 Khảo sát hoạt tính kháng nấm 62 3.1.3 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn 64 3.2 BÀN LUẬN 65 v 3.2.1 Phương pháp tổng hợp 65 3.2.2 Kết kháng nấm .65 3.2.3 Kết kháng khuẩn 66 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 68 4.1 KẾT LUẬN 68 4.2 ĐỀ NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO .71 PHỤC LỤC vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT C : Candida CFU : Coloni Forming Unit DMSO : Dimethylsulfoxid DPPH : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl E : Escherichia IR : Infrared MHA : Mueller-Hinton Agar MIC : Minimum Inhibitory Concentration MRSA : Methicillin Resistant Staphylococcus aureus NCCLS : National Committee for Clinical Laboratory Standards NMR : Nuclear Magnetic Resonance P : Pseudomonas R : Rhodolorula SAU : Staphylococcus aureus S : Staphylococcus Strep : Streptococcus STT : Số thứ tự TSA : Tryptic Soy Agar TSB : Tryptic Soy Broth UV : Ultra Violet d : doublet m : multiplet s : singlet t : triplet PHỤ LỤC 49 PHỔ H - NMR (DMSO-d6) CỦA T7 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO,  ppm): 8,800 (m, 1H, H6’); 8,130 (d, J = 16 Hz; 1H, H); 8,094 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H3’); 8,049 (m, 1H, H4’); ); 7,821 (d, J = 16 Hz, 1H, H); 7,680 (m, 1H, H5’); 7,402 (d, J = Hz, 1H, H2); 7,379 (d, J = 1,5 Hz, 1H, H6); 7,043 (d, J = Hz, 1H, H5); 3,839 (s, 6H, 2x-OCH3) PHỤ LỤC 50 PHỔ H - NMR (DMSO-d6) CỦA T8 4' 5' 3' O O OCH OCH Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO,  ppm): 8,046 (d, J = Hz, 1H, H5’); 7,774 (d, J = Hz; 1H, H3’); 7,700 (d, J = 15,5 Hz, 1H, H ); 7,564 (d, J = 16 Hz, 1H, H); 7,471 (s, 1H, H2); 7,374 (m, 1H, H6); 7,024(d, J = 8,5 Hz, 1H, H5); 6,785 (m, 1H, H4’); 3,835 (s, 6H, 2x-OCH3) PHỤ LỤC 51 PHỔ H - NMR (DMSO-d6) CỦA T9 5' 3' 4' S O OCH OCH Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO,  ppm): 8,322 (m, 1H, H5’); 8,037 (m, 1H, H3’); 7,751 (d, J = 15,5 Hz, 1H, H); 7,685 (d, J = 15,5 Hz, 1H, H); 7,524 (s, 1H, H2); 7,400 (m, 1H, H6); 7,317 (m, 1H, H4’); 7,028 (d, J = 8,5Hz, 1H, H5); 3,835 (s, 6H, 2x-OCH3) PHỤ LỤC 52 PHỔ H-NMR (CHCl3-d1) CỦA T10 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CHCl3-d1,  ppm): 8,76-8,75 (m, 1H, H6’); 8,20 (s, 1H, H3’); 8,17 (d, J = 16 Hz, 1H, H ); 7,89 (t, 1H, H4’); 7,87 (d, J = 16 Hz, 1H, H); 7,51-7,48 (m, 1H, H5’); 6,96 (s, 2H, H2 H6); 3,94 (s, 6H, x -OCH3); 3,91 (s, 3H, -OCH3) PHỤ LỤC 53 PHỔ H-NMR (CHCl3-d1) CỦA T11 4' 5' 3' O O OCH OCH OCH Phổ 1H-NMR (500 MHz, CHCl3-d1,  ppm): 7,80 (d, J = 16 Hz, 1H, H); 7,66 (d, J = Hz, 1H, H5’); 7,34 (d, J = 16 Hz, 1H, H); 7,34 (d, J = 3,5 Hz, 1H, H3’); 6,88 (s, 2H, H2 H6); 6,61-6,60 (m, 1H, H4’); 3,93 (s, 6H, x -OCH3); 3,90 (s, 3H, -OCH3) PHỤ LỤC 54 PHỔ H-NMR (CHCl3-d1) CỦA T12 4' 5' 3' S O OCH OCH OCH Phổ 1H-NMR (500 MHz, CHCl3-d1,  ppm): 7,88-7,87 (m, 1H, H5’); 7,77 (d, J = 15,5 Hz, 1H, H ); 7,69 (d, J = Hz, Hz, 1H, H3’); 7,30 (d, J = 15 Hz, 1H, H); 7,19 (t, 1H, H4’); 6,87 (s, 2H, H2 H6); 3,93 (s, 6H, x -OCH3); 3,91 (s, 3H, -OCH3) PHỤ LỤC 55 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T13 4' 5' 6' 3' N O OH Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 10,32 (s, 1H, -OH); 8,79 (m, 1H, H6’); 8,30 (d, J=16, 1H, Hβ); 8,10 (d, J=1Hz, 6,5Hz, 1H, H3’); 8,08 (m, 1H, H4’); 8,04 (m, 1H, H5’); 7,70 (d, J=1Hz, 7,5Hz, 1H, H3); 7,67 (d, J=15Hz, 1H, Hα); 7,29 (m, 1H, H4); 6,96 (d, J=1Hz, 8Hz, 1H, H6); 6,90 (t, 1H, H5) PHỤ LỤC 56 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T14 5' 3' 4' O O OH Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 10,24 (s, 1H, -OH); 8,03 (d, J=15,5, 1H, Hβ); 8,03 (d, J=1Hz, 7,5Hz, 1H, H5’); 7,797,77 (d, J=1,5Hz, 6Hz), 1H, H6); 7,67 (d, J=3,5Hz, 1H, H3’); 7,64 (d, J=16Hz, 1H, Hα); 7,27 (m, 1H, H4); 6,93 (d, J=0,5Hz, 8Hz, 1H, H3); 6,87 (t, 1H, H4’); 6,76 (m, 1H, H5) PHỤ LỤC 57 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T15 4' 5' 3' S O OH Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 10,30 (s, 1H, -OH); 8,20 (d, J=1Hz, 3Hz, 1H, H5’); 8,04 (d, J=16Hz, 1H, Hβ); 8,03 (d, 1H, H6); 7,86 (d, J=1,5Hz, 8Hz, 1H, H3); 7,77 (d, J= 15,5Hz, 1H, Hα); 7,26-7,30 (m, 2H, H4, H5); 6,94 (d, J=1Hz, 4Hz, H3); 6,88 (t, 1H, H4’) PHỤ LỤC 58 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T16 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 9,70 (s, 1H, OH); 8,80 (d, J=4,5Hz, 1H, H6’); 8,19 (d, J=16,5Hz, 1H, Hβ); 8,10 (d, J=8Hz, 1H, H3’); 8,05 (t, 1H, H4’); 7,75 (d, J=16Hz, 1H, Hα); 7,69 (m, 1H, H5’); 7,27 (t, 1H, H5); 7,23 (d, J=8Hz, 1H, H6); 7,18 (s, 1H, H2); 6,88 (d, J= 1Hz, 7,5Hz, 1H, H4) PHỤ LỤC 59 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T17 5' 3' 4' O OH O Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 9,61 (s, 1H, -OH); 8,05 (d, 1H, H5’); 7,79 (d, 1H, H3’); 7,65 (d, J=16Hz, 1H, Hβ); 7,58 (d, J=16Hz, 1H, Hα); 7,25 (t, 1H, H4’); 7,25 (t, 1H, H5); 7,19 (s, 1H, H2); 6,87 (m, 1H, H6); 6,78 (m, 1H, H4) PHỤ LỤC 60 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T18 4' 5' 3' S OH O Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 9,62 (s, 1H, -OH); 8,31 (d, J=4Hz, 1H, H5’); 8,05 (d, J=5Hz, 1H, H3’); 7,77 (d, J=15,5Hz, 1H, Hβ); 7,63 (d, J=16Hz, 1H, Hα); 7,31 (t, 1H, H4’); 7,30 (d, 1H, H6); 7,27 (t, 1H, H5); 7,23 (s, 1H, H2); 6,87 (m, 1H, H4) PHỤ LỤC 61 PHỔ H-NMR (DMSO-d6) CỦA T19 4' 5' 6' 3' OH N O Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 10,12 (s, 1H, -OH); 8,77 (d, J=5,5Hz, 1H, H6’); 8,08 (d, J=16Hz, 1H, Hβ); 8,03 (m, 2H, H3’, H4’); 7,77 (d, J=16Hz, 1H, Hα); 7,71 (m, 1H, H5’); 7,69 (d, 2H, H2, H6); 6,84 (d, 2H, H3, H5) PHỤ LỤC 62 PHỔ H - NMR (DMSO-d6) CỦA T20 5' 3' 4' OH O O Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 10,091 (s, 1H, -OH); 8,026 (s, 1H, H5’); 7,724 (s, 1H, H3’); 7,711(d, J = 7,5 Hz, 2H, H2 H6); 7,669 (d, J = 17 Hz, 1H, H ); 7,484 (d, J = 16,5 Hz, 1H, H); 6,838 (m, 2H, H3 H5); 6,762 (m, 1H, H4’) PHỤ LỤC 63 PHỔ H - NMR (DMSO-d6) CỦA T21 5' 3' 4' OH S O Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 10,094 (s, 1H, -OH); 8,253 (m, 1H, H5’); 8,014 (m, 1H, H3’); 7,731(m, 2H, H2, H6); 7,656 (s, 2H, H, H); 6,834 (m, 2H, H3,H5) ... TÀI Tổng hợp khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn dẫn chất chalcon dị vòng II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG  Tổng hợp dẫn chất chalcon dị vòng  Khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn dẫn chất chalcon. .. Hoạt tính kháng khuẩn dẫn chất chalcon Bảng 1.2 Hoạt tính kháng nấm dẫn chất chalcon Bảng 1.3 Hoạt tính kháng khuẩn số quinolinyl chalcon dẫn chất Bảng 1.4 Hoạt tính kháng nấm số quinolinyl chalcon. .. vi sinh Khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn bao gồm hai bước sàng lọc chất có hoạt tính xác định MIC chất có hoạt tính Có nhiều phương pháp để khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn đề